组胺的测定

组胺的测定

一、组胺的简介

组织胺(Histamine)是一种活性胺化合物，化学式是C5H9N3,分子量是111。是广泛存在于动植物体内的一种生物胺，是由组氨酸脱羧而形成的，通常贮存于组织的肥大细胞中。在体内，组胺是一种重要的化学递质，当机体受到某种刺激引发抗原-抗体反应时，引起肥大细胞的细胞膜通透性改变，释放出组胺，与组胺受体作用产生病理生理效应。

组胺合成过程主要发生在肥大细胞、嗜碱细胞、肺部、皮肤和胃肠粘膜中，和储存组胺的组织相一致。

在肥大细胞中，组胺作为无活性的复合物储存在颗粒中，这一复合物是由组胺和多聚硫化阴离子、肝磷脂和一种阴离子蛋白所组成。如果不被储存，将迅速被胺氧化酶灭活。

二、组胺的功能

组胺存在于肥大细胞内，亦存在于肺、肝及胃的粘膜组织内。它在过敏与发炎的调节上扮演一个很重要角色。组织胺属于一种化学讯息，亦是胺能神经传递素,参与中枢与周边的多重生理功能。在中枢系统，组胺是由特定的神经所合成例如位在下丘脑后部的结节-乳头核,神经细胞多向延伸至大脑其他区域与脊椎，因此暗示组织胺可能参与睡眠，荷尔蒙的分泌，体温调节，食欲与记忆形成等功能，另外还位于网状结构与端脑；在周边部分，组胺主要储存在肥大细胞,嗜碱粒细胞和肠嗜铬细胞,可引起痒、打喷嚏、流鼻水等现象，此外组胺结合到血管平滑肌上的接受器(H1R)导致血管扩张因而产生局部水肿，组胺会使肺的气管平滑肌收缩引起呼吸道狭窄进而呼吸困难，肠道平滑肌收缩降低血压以及增加心跳(tachycardia)等多项生理反应。

三、组胺的性状

组胺为广泛存在于人体组织的自身活性物质。组织中的组胺主要含于肥大细胞及嗜碱细胞中。因此，含有较多肥大细胞的皮肤、支气管粘膜和肠粘膜中组胺浓度较高，脑脊液中也有较高浓度。肥大细胞颗粒中的组胺常与蛋白质结合，物理或化学等刺激能使肥大细胞脱颗粒，导致组胺释放。组胺与靶细胞上特异受体结合，产生生物效应；如小动脉、小静脉和毛细血管舒张，引起血压下降甚至休克；增加心率和心肌收缩力，抑制房室传导；兴奋平滑肌，引起支气管痉挛，胃肠绞痛；刺激胃壁细胞，引起胃酸分泌。组胺受体有H1、H2、H3亚型。组胺的临床应用已逐渐减少，但其受体阻断药在临床上却有重大价值。

四、组胺的测定

（一）、分光光度法

一、原理

样品中的组胺用三氯醋酸提取，再;对氨基苯磺酸钠和亚硝酸钠反应生成红色化合物其吸光R与样品中组胺含量成正比。样品与标准比较定量。

二、仪器与试剂

仪器：721型分光光度计、电热恒温水浴箱

试剂：

1、1OOg/L三氯醋酸：称取100g三氯醋酸(分析纯)，用水溶解并定容至1000ml；

2、250g/L氢氧化钠：称取12.5g氢氧化钠(分析纯)，用水溶解并定容至50ml；

3、5g/L对氨基苯磺酸钠：称取O.5g对氨基苯碘酸钠(分析纯)，用0.1mol/L氢氧化钠溶解并定容至100m1。

4、5Og/L盐酸亚硝酸钠：称取5g亚硝酸钠(分析纯)用水溶解并定容至100ml，临用时与1mol/L的盐酸等量混合。

5、组胺标准储备液:准确称取在硫酸干燥器中干燥24h的盐酸组胺16.6mg(分析纯)，用水溶解并定容至100m1容量瓶中。该溶液每毫升含组胺100ug。

6、组胺标准使用液:准确吸取组胺标准储备液l0ml于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，该溶液每毫升含组胺为10ug。

三、样品处理

除去样品中的非可食部分，将样品捣碎、混匀，准确称取1-5g于50ml具塞三角瓶中(或50ml比色管)中，加人20m1三氯醋酸(100g/L),在600C水浴中浸提30min，过滤。残渣用水洗2次(每次加水l0ml)并过滤，合并滤液，用氢氧化钠溶液(250g/L)中和滤液至pH5.0，再用水定容至100m1。

四、标准曲线的制作与样品测定

1、标准曲线的制作

准确吸取标准使用液0, 0.5, 1.0. 2.0, 3.0, 4.0m1于lOml比色管中，各加水至5.OmI(相当于0. 5.0, 10.0,20.0, 30.0, 40.0 u g组胺)，各管分别加入5.0ml对氨基苯碘酸钠溶液和0.3m1盐酸亚硝酸钠溶液，混匀5min后以零管为参比，于450nm，1cm 比色杯测定吸光度值，并绘制标准曲线、

五、样品侧定

准确吸取1.0-5.0ml样品处理液于l0ml比色管中，以下按第四项中“加水至5.0ml~”进行；样品与标准比较定量。

六、结果计算

式中: X一样品中组胺含量，mg/1000g；A一测定时样液中组胺的质量，ug

W一样品质量，g；V一测定时取滤液的量，ml；V，一样品滤液总量，ml （二）、离子交换树脂法

一、原理

采用乙酸溶液为提取剂，调节pH后采用离子交换树脂分离组胺，用分光光度计定量测定组胺含量。

二、材料与方法

1、试剂与仪器

试剂：1、2 mol/L乙酸：正确称取36%乙酸333 g或99.7%乙酸120 g于量杯中，再称取40 g NaOH用600 mL蒸馏水溶解后，缓慢倒入称好的乙酸中，然后用25%氢氧化钠溶液滴定至pH4.60为止，最后用蒸馏水定容到1000 mL；0.2 mol/L乙酸；

2、0.4mol/L乙酸；

3、1 mol/L盐酸；

4、0.2 mol/L盐酸；

5、10%三氯乙酸；

6、偶氮试剂：甲液(0.25%对硝基苯胺)5 mL+乙液(0.5%亚硝酸钠)40 mL混合后立即使用；组胺标准溶液和磷酸组胺标准溶液

仪器： 722分光光度计，固相萃取小柱，OY-300型匀浆机，磁力搅拌器。

三、操作步骤

1、离子交换树脂柱的装填：

称取10 g CG-50离子交换树脂加50 mL蒸馏水静置20 h后，将蒸馏水倒掉，加入50 mL 1 mol/L盐酸用磁力搅拌机充分搅拌20 min。用蒸馏水将吸附器下半部装满，用吸管吸取搅拌好的树脂配制品，充填到吸附器连接处的中间位置，排出树脂间的空气，然后不断加入蒸馏水，直至流出的水pH值呈中性(6~7)为止，最后用50 mL 0.2 mol/L 的乙酸洗净。

2、样品预处理称取约10 g绞碎并混合均匀的样品，加入20 mL 10%三氯乙酸混匀后，用蒸馏水定容到50 mL，静置10 min后过滤，取滤液10 mL加入10%氢氧化钠溶液使滤液pH值呈中性(6~7)。再加入10 mL 0.4 mol/L乙酸得到约20 mL样品溶液A。若样品为液体，则吸取0.5 mL样品加4.5 mL蒸馏水和5 mL 0.4 mol/L乙酸即得到10mL样品溶液A。将样品溶液A全部倒入洗净的离子交换树脂柱中，当样品溶液A快流尽时，用0.2 mol/L乙酸继续洗净8次，每次10 mL(上一次10 mL乙酸快流尽后再加下一次的10 mL)，待80 mL的0.2 mol/L乙酸全部流尽时，加入8 mL的0.2 mol/L盐酸洗脱，洗脱液全部回收到10 mL的容量瓶。并用蒸馏水定容到10 mL，得到10 mL待检溶液B。四、分光光度计比色

吸取0.5 mL的待检溶液B(若试样是发酵产品，加入0.2 mL待检溶液)于10mL容量