组胺的测定
食品中组胺的测定
组胺的检测组胺是自体活性物质之一，在体内由组氨酸脱羧基而成，组织中的组胺是以无活性的结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中，以皮肤、支气管粘膜、肠粘膜和神经系统中含量较多。
当机体受到理化刺激或发生过敏反应时，可引起这些细胞脱颗粒，导致组胺释放，与组胺受体结合而产生生物效应。
抗组胺是拮抗组胺对人体的生物效应，即应用抗组胺药物。
抗组胺受体就是拮抗组胺的H1和H2受体。
由于此两种受体在人体内分布不同而产生不同的效应，它是抗组胺药应用治疗疾病的生理药理基础。
毒理药物中毒组胺主要用于胃分泌功能检查，作最大酸分泌(MAO)测定。
但目前已被五肽胃泌素取代。
组胺通过激活体内组胺H1受体和H2受体，收缩多种平滑肌如气管、支气管和胃肠道平滑肌；但同时松弛小血管平滑肌，增加毛细血管通透性；还能强烈刺激胃酸分泌，减慢房室传导，增加心肌收缩力等。
误用大剂量或静脉给药可引起中毒。
食物中毒大量检测表明，海产鱼中的青皮红肉鱼类含组胺较高，当鱼不新鲜或腐败时，鱼体中游离的组胺酸经脱羧酶作用产生组胺. 组胺中毒潜伏期一般为0.5~1小时，最短可为5min,最长达4h.检测方法1．分光光度法1 主要仪器和试剂721型分光光度计组胺标准溶液：取经95℃干燥2．5小时的磷酸组织胺分析纯试剂配制成含20ug·ml 的组胺标准溶液。
0．2 对氨基苯磺酸溶液(简称甲液)1oNNaNO 溶液(简祢乙液)，现配现用。
所用水均为二次蒸馏水。
2 组胺测定方法及条件试验2．1 测定方法：在25ml容量瓶中，移入一定量的组胺标准溶液，依次加入0-2 甲液、0．4%HCI、10%乙液和2．0%NaCO 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
于25℃室温下放置20分钟，用试剂空白为参比，测其吸光度值。
2．2 吸收光谱：取2．0ml组胺标准溶液，按上述方法显色，以水为参比，分别测定显色化合物和试剂空白的吸收光谱。
图1表明显色化合物在506nm 处有一最大吸收，本实验取506nm 作为吸收波长。
鱼和虾中组胺测定的不确定度分析
2鱼和虾中组胺测定的不确定度分析1概述1.1方法标准：GB/T 20768-2006 鱼和虾中有毒生物胺的测定 液相色谱-紫外检测法 1.2 设备和材料：高效液相色谱仪，C 18柱1.3色谱条件：流动相：A 0.01mol/L 乙酸铵;B ：水+乙腈（10+90）含0.01mol/L 乙酸铵，流速：1.0ml/min ，检测波长：254nm 。
1.4 测定过程：取2.0 g 样品,用高氯酸提取,然后定容至25.0 ml,取1.0 ml 提取液，在碱性条件下衍生。
定容至5 ml 。
过0.45μm 滤膜进样, 紫外检测器检测。
自动进样器吸取标准使用液10μl 注入进样口,制得色谱图,重复两次进标样分析,计算标准平均峰面积；取样液10μl 与标样同样操作,将样品平均峰面积与标准平均峰面积比较计算。
1.5 评估依据：JJF1059-1999测量不确定度评定与表示。
2 建立数学模型X=C ×V/m式中：X ——样品中组胺的含量，mg/kgC ——从标准曲线得到的试样溶液中组胺的浓度，μg/ml ； V ——试样溶液 定容体积，ml ；m ——最终试样溶液所代表的样品质量，g 。
3 不确定度来源及其评定3.1 标准溶液配制的不确定度包括标准物质纯度、称重、稀释等所带来的不确定度 3.1.1标准物质纯度的不确定度组胺标准物质证书标明的纯度为99%，不确定度为0.5%，属正态分布，按B 类评定，u 1＝0.5/31/2=0.17u 1rel ＝0.17/99×100%=0.17%3.1.2天平称重引起的不确定度天平计量检定证书给出其最大允许误差为0.1mg ，属矩形分布，称重16.57 mg ，按B 类评定，u 2＝0.1/31/2=0.0577u 2rel ＝0.0577/16.57×100%=0.348%3.1.3 定容引起的不确定度10 ml 容量瓶：容量允差为0.025ml ，属矩形分布，按B 类评定，U 3＝0.025/31/2=0.0144U 3rel ＝0.0144/10×100%=0.144%3.1.4由1.0mg/mL 贮备液稀释引起的不确定度配制10 ml 50μg/ml 标准使用液需要1.0mg ／ml 贮备液的体积： 115010H H c v ⨯=3.1.4.1 吸取样液体积不确定度u 4 ：1ml 移液管（1000μl ）：容量允差为1.5%，属矩形分布，按B 类评定，U 4＝1000×1.5/31/2=8.66U 4rel ＝8.66/1000×100%=0.866%2 3.1.4.2 定容体积不确定度u 5：10 ml 容量瓶：容量允差为0.025ml ，属矩形分布，按B 类评定，U 5＝0.025/31/2=0.0144U 5rel ＝0.0144/10×100%=0.144%组胺标准溶液稀释不确定度u 6为：u 6／c=(0.008662 + 0.00142) 1/2=0.0088，u 6rel =0.0088/10×100% =0.088%。
食品中组胺的测定
组胺的检测组胺是自体活性物质之一，在体内由组氨酸脱羧基而成，组织中的组胺是以无活性的结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中，以皮肤、支气管粘膜、肠粘膜和神经系统中含量较多。
当机体受到理化刺激或发生过敏反应时，可引起这些细胞脱颗粒，导致组胺释放，与组胺受体结合而产生生物效应。
抗组胺是拮抗组胺对人体的生物效应，即应用抗组胺药物。
抗组胺受体就是拮抗组胺的H1和H2受体。
由于此两种受体在人体内分布不同而产生不同的效应，它是抗组胺药应用治疗疾病的生理药理基础。
毒理药物中毒组胺主要用于胃分泌功能检查，作最大酸分泌(MAO)测定。
但目前已被五肽胃泌素取代。
组胺通过激活体内组胺H1受体和H2受体，收缩多种平滑肌如气管、支气管和胃肠道平滑肌；但同时松弛小血管平滑肌，增加毛细血管通透性；还能强烈刺激胃酸分泌，减慢房室传导，增加心肌收缩力等。
误用大剂量或静脉给药可引起中毒。
食物中毒大量检测表明，海产鱼中的青皮红肉鱼类含组胺较高，当鱼不新鲜或腐败时，鱼体中游离的组胺酸经脱羧酶作用产生组胺. 组胺中毒潜伏期一般为0.5~1小时，最短可为5min,最长达4h.检测方法1．分光光度法1 主要仪器和试剂721型分光光度计组胺标准溶液：取经95℃干燥2．5小时的磷酸组织胺分析纯试剂配制成含20ug·ml 的组胺标准溶液。
0．2 对氨基苯磺酸溶液(简称甲液)1oNNaNO 溶液(简祢乙液)，现配现用。
所用水均为二次蒸馏水。
2 组胺测定方法及条件试验2．1 测定方法：在25ml容量瓶中，移入一定量的组胺标准溶液，依次加入0-2 甲液、0．4%HCI、10%乙液和2．0%NaCO 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
于25℃室温下放置20分钟，用试剂空白为参比，测其吸光度值。
2．2 吸收光谱：取2．0ml组胺标准溶液，按上述方法显色，以水为参比，分别测定显色化合物和试剂空白的吸收光谱。
图1表明显色化合物在506nm 处有一最大吸收，本实验取506nm 作为吸收波长。
组胺对受体亲和力常数(pD2)和拮抗剂对组胺拮抗参数(pA2)的测定
课程名称：药理学实验___________________指导老师：______丁玲__成绩：__________________ 实验名称：组胺对受体亲和力常数（pD2）和拮抗剂对组胺拮抗参数（pA2）的测定_实验类型：_验证型同组学生姓名：葛倩倩、张敏哲【实验目的】利用离体豚鼠回肠制备，观察组胺对受体亲和力及拮抗剂对组胺竞争性拮抗作用，并了解pD2和pA2值的测定方法及意义。
【实验原理】1、组胺作用于豚鼠的回肠H1受体，引起肠肌收缩2、根据不同浓度的组胺引起肠段收缩高度，求出pD2值3、加入拮抗剂，若提高组胺浓度，仍能达到先前的收缩高度，表明拮抗剂对组胺有竞争性拮抗4、在加入一定浓度的拮抗剂后，组胺浓度提高1倍就能产生原浓度的效应，而拮抗剂这个摩尔浓度的负对数即为pA2值5、本实验采用苯海拉明作为拮抗剂。
pD2是激动剂与受体亲和力的定量参数，称为亲和力指数。
pA2是竞争性拮抗剂作用强度的参数【实验材料】豚鼠、离体器官恒温浴槽、张力换能器、Med Lab记录仪、剪刀等小型手术器械磷酸组胺溶液[3×10-7mol/L、3×10-6mol/L、3×10-5mol/L、3×10-3mol/L]盐酸苯海拉明溶液[3×10-7mol/L、3×10-6mol/L、3×10-5mol/L、3×10-3mol/L]【实验内容】1、取一段备用回肠，两端用缝针穿线，一端系在通气钩上，放入浴槽（台氏液30ml），另一端连张力换能器，通过记录仪描记肠段收缩；2、让回肠在浴槽内稳定10分钟，记录一段基线，在浴槽内加入药液，观察并记录（约2分钟），当肠段收缩达顶点，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液30ml；3、待基线回到用药前水平，记录一段基线，在浴槽内加入下一个药液，开始记录，收缩曲线至顶点开始回落时，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液20ml；4、如上依次加入不同量的磷酸组胺溶液：3×10-6mol/L 0.1ml，3×10-5mol/L0.1ml 、0.25及0.5ml，3×10-4mol/L 0.1、0.25及0.5ml，使浴槽中磷酸组胺的最终浓度为10-8mol/L、10-7mol/L、2.5×10-7mol/L、5×10-7mol/L、10-6mol/L、2.5×10-6mol/L，5×10-6mol/L，描记不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线；5、如步骤4，每次加药均先在浴槽中加入3×10-5mol/L盐酸苯海拉明溶液0.1ml，使其终浓度为10-7mol/L，然后依次加入不同浓度的磷酸组胺溶液，描记当溶液中有10-7mol/L苯海拉明共存时不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线；6、再依次试验盐酸苯海拉明终浓度为10-6mol/L和10-5 mol/L时，对磷酸组胺的拮抗作用；7、描记完毕，测量每次加入磷酸组胺后的收缩曲线高度，将加盐酸苯海拉明前，磷酸组胺引起的肠段收缩极限高度作为100%（Emax），计算不同组胺引起肠段收缩高度相当于极限高度的百分率。
组胺对受体亲和力常数(pD2)和拮抗剂对组胺拮抗参数(pA2)的测定
课程名称：药理学实验___________________指导老师：______丁玲__成绩：__________________ 实验名称：组胺对受体亲和力常数（pD2）和拮抗剂对组胺拮抗参数（pA2）的测定_实验类型：_验证型同组学生姓名：葛倩倩、张敏哲【实验目的】利用离体豚鼠回肠制备，观察组胺对受体亲和力及拮抗剂对组胺竞争性拮抗作用，并了解pD2和pA2值的测定方法及意义。
【实验原理】1、组胺作用于豚鼠的回肠H1受体，引起肠肌收缩2、根据不同浓度的组胺引起肠段收缩高度，求出pD2值3、加入拮抗剂，若提高组胺浓度，仍能达到先前的收缩高度，表明拮抗剂对组胺有竞争性拮抗4、在加入一定浓度的拮抗剂后，组胺浓度提高1倍就能产生原浓度的效应，而拮抗剂这个摩尔浓度的负对数即为pA2值5、本实验采用苯海拉明作为拮抗剂。
pD2是激动剂与受体亲和力的定量参数，称为亲和力指数。
pA2是竞争性拮抗剂作用强度的参数【实验材料】豚鼠、离体器官恒温浴槽、张力换能器、Med Lab记录仪、剪刀等小型手术器械磷酸组胺溶液[3×10-7mol/L、3×10-6mol/L、3×10-5mol/L、3×10-3mol/L]盐酸苯海拉明溶液[3×10-7mol/L、3×10-6mol/L、3×10-5mol/L、3×10-3mol/L]【实验内容】1、取一段备用回肠，两端用缝针穿线，一端系在通气钩上，放入浴槽（台氏液30ml），另一端连张力换能器，通过记录仪描记肠段收缩；2、让回肠在浴槽内稳定10分钟，记录一段基线，在浴槽内加入药液，观察并记录（约2分钟），当肠段收缩达顶点，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液30ml；3、待基线回到用药前水平，记录一段基线，在浴槽内加入下一个药液，开始记录，收缩曲线至顶点开始回落时，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液20ml；4、如上依次加入不同量的磷酸组胺溶液：3×10-6mol/L 0.1ml，3×10-5mol/L0.1ml 、0.25及0.5ml，3×10-4mol/L 0.1、0.25及0.5ml，使浴槽中磷酸组胺的最终浓度为10-8mol/L、10-7mol/L、2.5×10-7mol/L、5×10-7mol/L、10-6mol/L、2.5×10-6mol/L，5×10-6mol/L，描记不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线；5、如步骤4，每次加药均先在浴槽中加入3×10-5mol/L盐酸苯海拉明溶液0.1ml，使其终浓度为10-7mol/L，然后依次加入不同浓度的磷酸组胺溶液，描记当溶液中有10-7mol/L苯海拉明共存时不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线；6、再依次试验盐酸苯海拉明终浓度为10-6mol/L和10-5 mol/L时，对磷酸组胺的拮抗作用；7、描记完毕，测量每次加入磷酸组胺后的收缩曲线高度，将加盐酸苯海拉明前，磷酸组胺引起的肠段收缩极限高度作为100%（Emax），计算不同组胺引起肠段收缩高度相当于极限高度的百分率。
组胺的检测方法
组胺的检测方法
一、比色法。
有一种比色法来检测组胺哦。
就像是给组胺找个小伙伴，然后让它们发生点奇妙的反应，这个反应会产生颜色变化呢。
就好比组胺和特定的试剂手拉手，然后整个体系就像被施了魔法一样，从一种颜色变成另一种颜色。
通过看这个颜色变化的程度，就能大概知道组胺有多少啦。
不过呢，这种方法有时候不是特别精确，就像猜谜语，只能猜出个大概范围。
但是它简单呀，不需要特别复杂的仪器，就像咱们做个小手工一样，在一些初步检测的情况下还是很有用的。
二、高效液相色谱法（HPLC）
这个高效液相色谱法可就高大上多啦。
它就像是给组胺安排了一场超级严格的赛跑比赛。
组胺在这个特殊的赛道（色谱柱）里跑呀跑，不同的物质跑的速度不一样，就像不同的运动员有不同的速度一样。
然后在跑道的尽头，有个检测员（检测器）在等着，它能精确地知道组胺什么时候到达，而且还能算出组胺的量呢。
这种方法超级精确，就像用放大镜去看东西，能把组胺看得清清楚楚。
不过呢，它的仪器很贵，操作起来也有点复杂，就像开一架高级飞机，得是专业的人才能玩得转。
三、酶联免疫吸附测定法（ELISA）
ELISA这个方法也很有特色。
它是利用抗原和抗体之间的特殊关系来检测组胺的。
就像是给组胺找个天敌（抗体），然后通过一些巧妙的反应，看这个天敌抓住了多少组胺。
这个方法很灵敏，哪怕组胺的量很少，它也能发现。
而且它可以同时检测很多样品，就像一群小士兵一起接受检查一样。
但是呢，它也有缺点，比如说容易受到其他物质的干扰，就像在一场音乐会里，有时候会有一些杂音影响效果。
高效液相色谱法测定组胺的方法验证
高效液相色谱法测定组胺的方法验证作者：陈瑾张勇来源：《中国质量与标准导报》2022年第04期摘要：实验室应用高效液相色谱法对葡萄酒中组胺进行测定，并通过测定加标回收率、精密度、准确度、方法检出限、定量限等参数进行方法验证，发现该检验方法验证试验可信度较高，可为食品检验方法验证试验提供借鉴和参考。
关键词：高效液相色谱法组胺方法验证Validation of High Performance Liquid Chromatography for Determination of HistamineChen Jin （Hami Institute for Food and Drug Control）Zhang Yong （Hami Inspection and Testing Center）Abstract： In this laboratory， high performance liquid Chromatography was used for the determination of histamine in wine， and the method was verified by measuring the recovery rate，precision， accuracy， method detection limit， limit of quantification and other parameters.It was found that the verification experiment of this test method has high credibility， which can provide reference for food verification experiment of inspect method.Key words： high performance liquid chromatography， histamine， method validation0 引言食品检验是食品安全管控的一个重要环节。
第三章 原料鱼和肉的鲜 三甲胺和组胺
氧化三甲胺的生理功能
氧化三甲胺作为动物体内重要的无毒中间代谢物,氧 化三甲胺是一种蛋白质稳定剂和有机渗透剂,参与
海生硬骨鱼和某些广盐性硬骨鱼等的渗 透调节,在水产业中具有广阔应用前景。
三甲胺的产生
1. 氧化三甲胺是鱼鲜美味道的主要来源,氧化三甲胺极不稳定, 鱼死后，在腐败细菌尤其是兼性厌氧菌（如互生单孢菌、腐 败极毛菌） 的作用下, 很容易还原成三甲胺。 氧化三甲胺 是一种鲜味物质 含量与鲜度密切相关。 2.鱼类的红肌中含有内源性的氧化三甲胺还原酶。Fe2 + 在氧化 三甲胺转变为三甲胺和二甲胺(DMA) 中起重要的作用。在 Fe2 + 、血红蛋白和半胱氨酸存在下，4 ℃氧化三甲胺转变为 三甲胺和二甲胺。 2Cys＋2Fe3＋ → Cys－Cys ＋ 2Fe2＋ ＋2H＋ Me3NO＋ 2H＋ ＋ 2Fe2＋ → Me3N＋ 2Fe3＋ ＋ H2O 3.氧化三甲胺一经加热就会分解，罐头及其它海水鱼加工中常 有此反应。 Me3NO→ Me3N＋HCHO 4.水产动物中的卵磷脂经微生物分解产生三甲胺，但量较少。 －CH2OP－OCH2CH2－N（CH3）3
一、次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶法
（一）原理： 次黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶
pH7.6缓冲液
波长600nm
尿酸
2,6一二氯靛酚
∆A/ ∆T
以次黄嘌呤为指标确定水产品的鲜度，黄鱼100－ 200ppm为新鲜，鲳鱼100－250ppm为新鲜，河鲫鱼 小于50ppm为新鲜。
黄嘌呤氧化酶法
（二）试验试剂 2,6一二氯靛酚溶液：用0.17mol/L磷酸缓冲液pH 7.6 配制成23 ug/mL 黄嘌呤氧化酶溶液：活力0.3单位/mL
比色 410nm比色
LC测定水产品中组胺含量
/现代食品XIANDAISHIPIN102LC 测定水产品中组胺含量Determination of Histamine in Aquatic Products by LC◎ 马烨晶（浙江华才检测技术有限公司，浙江 诸暨 311800）Ma Yejing((Zhejiang Huacai Testing Technology Co., Ltd., Zhuji 311800, China)摘 要：高效液相色谱具有检测灵敏度高、定性准确、检出限低、定量分析准确的特点，是目前水产品中生物胺含量分析测定的主要手段。
组胺的测定需经衍生，丹酰氯是液相色谱常用柱前衍生试剂，其操作简单、衍生物稳定性好、可定量完成磺酰化反应，有较强的荧光和紫外吸收、灵敏度高、基体干扰不明显等优点，是高效液相色谱检测生物胺中应用最多的柱前衍生试剂。
关键词：高效液相色谱；水产品；组胺；丹酰氯Abstract ：High performance liquid chromatography has the characteristics of high sensitivity, accurate, low detection limit and accurate quantitative analysis. Determination of histamine by derivatization with dansyl chloride reagent is commonly used in liquid chromatography with pre-column derivatization has the advantages of simple operation, good stability, can complete the quantitative derivatives sulfonylation, have strong f luorescence and UV absorption, high sensitivity, matrix interference is not obvious advantages, is the detection of biogenic amines in HPLC application most of the derivatization reagent.Key words ：High performance liquid chromatography; Aquatic products; Histamine; Dansyl chloride 中图分类号：TS254.7生物胺是一类具有生物活性含氮的低分子量有机化合物的总称，其中组胺对人类健康的影响最大。
用可见-紫外分光光度法测定水产品中组胺的含量
用可见-紫外分光光度法测定水产品中组胺的含量江生;汪敏;白亚敏;韩燕【摘要】To establish a UV method for the determination of histamine in the aquatic products. With positive amyl al-cohol extraction, encounter azo reagent orange. The detection wavelength was set at 480 nm. Histamine linear range was: 0.407 81μg/mL~4.078 1μg/mL (R2=0.999 7) .The average recovery was 94.8%, and all RSD less than 1.1%(n=9) . This method is sensitive, accurate and reproducible and can be used to control the quality of the cosmetic.%建立了水产品中组胺含量的测定方法。
采用正戊醇提取，偶氮试剂显色，可见-紫外分光光度计检测，测定波长为480 nm。
试验结果表明，当组胺的质量浓度在0.40781μg/mL～4.0781μg/mL范围内，质量浓度与吸光度呈良好线性关系(R2=0.9997)。
平均回收率为94.8%， RSD为1.1%（n=9）。
本法简单，易操作，测定结果准确。
【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】3页(P62-64)【关键词】可见-紫外分光光度法;组胺;水产品【作者】江生;汪敏;白亚敏;韩燕【作者单位】重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121【正文语种】中文【中图分类】TS207.3组胺中毒是由于食用含有一定数量组胺的某些鱼类而引起的过敏性食物中毒，主要是因为此类鱼含有较高的组氨酸，当鱼体不新鲜或腐败时，污染鱼体的细菌产生脱羧酶，使组氨酸脱羧生成组胺。
液相色谱法测定生物胺的方法概述
液相色谱法测定食品中生物胺的方法概述摘要生物胺是生物活性分子，包括脂肪族（腐胺、尸胺,精胺、亚精胺),芳香族(酪胺、苯乙胺)或杂环(组胺、色胺)结构。
它们可以在未加工食品和通过动物、植物和微生物的代谢途径合成和分解的加工食品中被检测到。
鉴别和定量食品中的生物胺是非常重要的，因为生物胺被认为是食品质量和新鲜度的指标。
生物胺的测定通常是通过高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳等分离法来实现的。
在本文中，综述了自2007年来的食品中生物胺的测定方法。
1、简介：生物胺是具有生物活性的有机碱，经常在发酵食品和饮料中发现(Novella-Rodriguez, Veciana-Nogues, Trujillo-Mesa, &Vidal-Carou, 2002)。
它们主要来自脱羧氨基酸(ten Brink, Damink, Joosten, & Huis in ’t Veld,1990)。
在低浓度下,生物胺对于许多生理功能来说是必不可少的(Teti, Visalli, & McNair, 2002)。
然而,如果这些化合物被大量消耗,一些毒理学问题将会出现(Pe´ rez-Serradilla & Luque de Castro,2008; Saaid et al., 2009a; Shalaby, 1996)。
生物胺根据它们胺的含量可分为单胺和多胺，多胺几乎参与核酸和蛋白质合成的每一步,因此，身体每一个器官的生长、更新、新陈代谢都需要他们(Shalaby,1996)。
因此，日益生长着的组织对生物胺的需求急剧增加。
此外，非必须多胺的摄入会导致肿瘤增长。
癌症治疗的一个方法是限制多胺的摄入量(Moinard, Cynober, & de Bandt, 2005)。
还有些生物胺 (即腐胺、精脒尸胺,和精胺)可能与亚硝酸盐反应，产生挥发性的被定义为致癌物质的亚硝胺类(Wei et al.,2009)。
水产品中组胺的快速检测
食品快速检验方法犓犑２０２１０２水产品中组胺的快速检测２０２１ ０１ １３发布国家市场监督管理总局发布犓犑２０２１０２水产品中组胺的快速检测１ 范围本方法规定了水产品中组胺的快速检测方法。
本方法适用于水产品（鱼类等）中组胺的快速测定。
第一法 胶体金免疫层析法２ 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理，样品中的组胺经提取（或提取衍生）后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（Ｔ线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线（Ｔ线）与控制线（Ｃ线）颜色深浅比较，对样品中组胺进行定性判定。
３ 试剂与材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的二级水。
３．１ 试剂３．１．１ 无水乙醇（Ｃ２Ｈ５ＯＨ）。
３．１．２ 无水四氢呋喃（Ｃ４Ｈ８Ｏ）。
３．１．３ ４ 硝基苯甲酰氯（Ｃ７Ｈ４ＣｌＮＯ３）。
３．１．４ 三羟甲基氨基甲烷（Ｃ４Ｈ１１ＮＯ３），即Ｔｒｉｓ。
３．１．５ 盐酸（ＨＣｌ，３７％）。
３．２ 试剂配制３．２．１ ７０％乙醇溶液（体积分数）：量取乙醇（３．１．１）７００ｍＬ，加水至１０００ｍＬ，混合均匀。
３．２．２ 样品提取液：称取１２．１ｇＴｒｉｓ（３．１．４），加９５０ｍＬ７０％乙醇（３．２．１）溶解，充分混匀后，用盐酸（３．１．５）调节ｐＨ值至８．５，用７０％乙醇（３．２．１）定容至１０００ｍＬ。
或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液。
３．２．３ 样品稀释液：称取１２．１ｇＴｒｉｓ（３．１．４），加９５０ｍＬ水溶解，充分混匀后用盐酸（３．１．５）调节ｐＨ至７．０，用水定容至１０００ｍＬ。
或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用稀释液。
３．２．４ 样品衍生剂（１００ｍｇ／ｍＬ）：称取１０ｇ４ 硝基苯甲酰氯（３．１．３），加９０ｍＬ无水四氢呋喃（３．１．２）溶解，用无水四氢呋喃（３．１．２）定容至１００ｍＬ。
或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用衍生剂。
３．３ 参考物质组胺参考物质的中文名称、英文名称、ＣＡＳ号、分子式、相对分子质量见表１，纯度≥９７．０％。
组胺含量的测定5
实验五组胺含量的测定一、实验目的：学习比色法测定组胺含量的原理和方法二、实验原理：鱼肉中的组胺用正戊醇提取，与偶氮试剂反应显橙色，与标准系列比较定量，即可求出组胺含量三、实验原料：鱼肉四、实验试剂与仪器：Na2CO3、NaOH、对硝基苯胺、正戊醇、三氯乙酸、盐酸、组胺标准品、具塞锥形瓶、分液漏斗、721分光光度计等五、实验方法：1、组胺标准曲线的制定：称取25mg于105℃干燥至恒重的磷酸组胺定容至100ml 得到250ug/ml，再稀释配制成100ug/ml的组胺标准液，取上述标准使用液0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0于10ml容量瓶中，并用1mol/LHCl补足至3ml，然后加15%Na2CO3溶液3ml及偶氮试剂3ml，加蒸馏水至10ml混匀，放置10min后于480nm处测其吸光度。
作出标准曲线。
2、样品中组胺的提取：取10.0g左右切碎的鱼肉于具塞锥形瓶中，加入20ml 0.1g/ml三氯乙酸浸泡2—3h过滤小烧杯中，用NaOH跳PH为9—10，取1ml滤液于分液漏斗中，再加入3.0ml正戊醇振摇5min，吸取上层液，重复操作3次，合并上层液于10ml容量瓶，用正戊醇定容至10ml，取1.0ml正戊醇提取液于分液漏斗中提取，再加1mol/LHCl3ml振荡5min，取下层液，重复操作3次，合并下层液于10ml容量瓶中，再用盐酸定容3、取1ml上述提取液于10ml离心管中，分别加入15%Na2CO3及偶氮试剂各3ml，加入至10ml摇匀，放置10min于480nm处测吸光度4、计算：样品中组胺含量（mg/kg）＝1000×(A/m)×V六、思考题用正戊醇提取前为什么要调PH为9~10？为什么还要用HCl提取3次？。
组胺测定实验报告
一、实验目的1. 学习组胺的提取和分离方法。
2. 掌握紫外分光光度法测定组胺含量的原理和方法。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理组胺（histamine）是一种广泛存在于动物组织中的生物胺，具有多种生物学功能。
组胺的测定对于研究其生物学作用、病理变化以及药物疗效等具有重要意义。
本实验采用紫外分光光度法测定组胺含量，其原理是组胺在特定波长下具有特征吸收，通过测定其吸光度，可以计算出组胺的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：组胺标准品、样品、乙腈、磷酸盐缓冲溶液、氯化钠等。
2. 仪器：紫外分光光度计、电子天平、离心机、恒温水浴锅等。
四、实验方法1. 标准曲线的绘制（1）准确称取一定量的组胺标准品，用乙腈溶解并定容至一定体积，配制成一系列不同浓度的组胺标准溶液。
（2）在紫外分光光度计上，以磷酸盐缓冲溶液为空白，于特定波长下测定各浓度组胺标准溶液的吸光度。
（3）以组胺浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中组胺含量的测定（1）准确称取一定量的样品，用乙腈溶解并定容至一定体积。
（2）离心分离，取上清液。
（3）在紫外分光光度计上，以磷酸盐缓冲溶液为空白，于特定波长下测定样品溶液的吸光度。
（4）根据标准曲线，计算样品中组胺的含量。
五、实验结果与讨论1. 标准曲线的绘制根据实验数据，绘制组胺标准曲线，其线性范围为0.1～10.0 μg/mL。
相关系数R²=0.9987，表明标准曲线线性良好。
2. 样品中组胺含量的测定根据标准曲线，计算样品中组胺的含量。
结果如下：样品1：组胺含量为2.5 μg/mL样品2：组胺含量为3.8 μg/mL样品3：组胺含量为1.2 μg/mL3. 讨论本实验采用紫外分光光度法测定组胺含量，操作简便、准确度高、重复性好。
实验结果表明，该方法适用于样品中组胺含量的测定。
在实验过程中，需要注意以下几点：（1）样品处理过程中，应尽量避免组胺的损失。
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组胺的测定
一、组胺的简介
组织胺(Histamine)是一种活性胺化合物，化学式是C5H9N3,分子量是111。
是广泛存在于动植物体内的一种生物胺，是由组氨酸脱羧而形成的，通常贮存于组织的肥大细胞中。
在体内，组胺是一种重要的化学递质，当机体受到某种刺激引发抗原-抗体反应时，引起肥大细胞的细胞膜通透性改变，释放出组胺，与组胺受体作用产生病理生理效应。
组胺合成过程主要发生在肥大细胞、嗜碱细胞、肺部、皮肤和胃肠粘膜中，和储存组胺的组织相一致。
在肥大细胞中，组胺作为无活性的复合物储存在颗粒中，这一复合物是由组胺和多聚硫化阴离子、肝磷脂和一种阴离子蛋白所组成。
如果不被储存，将迅速被胺氧化酶灭活。
二、组胺的功能
组胺存在于肥大细胞内，亦存在于肺、肝及胃的粘膜组织内。
它在过敏与发炎的调节上扮演一个很重要角色。
组织胺属于一种化学讯息，亦是胺能神经传递素,参与中枢与周边的多重生理功能。
在中枢系统，组胺是由特定的神经所合成例如位在下丘脑后部的结节-乳头核,神经细胞多向延伸至大脑其他区域与脊椎，因此暗示组织胺可能参与睡眠，荷尔蒙的分泌，体温调节，食欲与记忆形成等功能，另外还位于网状结构与端脑；在周边部分，组胺主要储存在肥大细胞,嗜碱粒细胞和肠嗜铬细胞,可引起痒、打喷嚏、流鼻水等现象，此外组胺结合到血管平滑肌上的接受器(H1R)导致血管扩张因而产生局部水肿，组胺会使肺的气管平滑肌收缩引起呼吸道狭窄进而呼吸困难，肠道平滑肌收缩降低血压以及增加心跳(tachycardia)等多项生理反应。
三、组胺的性状
组胺为广泛存在于人体组织的自身活性物质。
组织中的组胺主要含于肥大细胞及嗜碱细胞中。
因此，含有较多肥大细胞的皮肤、支气管粘膜和肠粘膜中组胺浓度较高，脑脊液中也有较高浓度。
肥大细胞颗粒中的组胺常与蛋白质结合，物理或化学等刺激能使肥大细胞脱颗粒，导致组胺释放。
组胺与靶细胞上特异受体结合，产生生物效应；如小动脉、小静脉和毛细血管舒张，引起血压下降甚至休克；增加心率和心肌收缩力，抑制房室传导；兴奋平滑肌，引起支气管痉挛，胃肠绞痛；刺激胃壁细胞，引起胃酸分泌。
组胺受体有H1、H2、H3亚型。
组胺的临床应用已逐渐减少，但其受体阻断药在临床上却有重大价值。
四、组胺的测定
（一）、分光光度法
一、原理
样品中的组胺用三氯醋酸提取，再;对氨基苯磺酸钠和亚硝酸钠反应生成红色化合物其吸光R与样品中组胺含量成正比。
样品与标准比较定量。
二、仪器与试剂
仪器：721型分光光度计、电热恒温水浴箱
试剂：
1、1OOg/L三氯醋酸：称取100g三氯醋酸(分析纯)，用水溶解并定容至1000ml；
2、250g/L氢氧化钠：称取12.5g氢氧化钠(分析纯)，用水溶解并定容至50ml；
3、5g/L对氨基苯磺酸钠：称取O.5g对氨基苯碘酸钠(分析纯)，用0.1mol/L氢氧化钠溶解并定容至100m1。
4、5Og/L盐酸亚硝酸钠：称取5g亚硝酸钠(分析纯)用水溶解并定容至100ml，临用时与1mol/L的盐酸等量混合。
5、组胺标准储备液:准确称取在硫酸干燥器中干燥24h的盐酸组胺16.6mg(分析纯)，用水溶解并定容至100m1容量瓶中。
该溶液每毫升含组胺100ug。
6、组胺标准使用液:准确吸取组胺标准储备液l0ml于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，该溶液每毫升含组胺为10ug。
三、样品处理
除去样品中的非可食部分，将样品捣碎、混匀，准确称取1-5g于50ml具塞三角瓶中(或50ml比色管)中，加人20m1三氯醋酸(100g/L),在600C水浴中浸提30min，过滤。
残渣用水洗2次(每次加水l0ml)并过滤，合并滤液，用氢氧化钠溶液(250g/L)中和滤液至pH5.0，再用水定容至100m1。
四、标准曲线的制作与样品测定
1、标准曲线的制作
准确吸取标准使用液0, 0.5, 1.0. 2.0, 3.0, 4.0m1于lOml比色管中，各加水至5.OmI(相当于0. 5.0, 10.0,20.0, 30.0, 40.0 u g组胺)，各管分别加入5.0ml对氨基苯碘酸钠溶液和0.3m1盐酸亚硝酸钠溶液，混匀5min后以零管为参比，于450nm，1cm 比色杯测定吸光度值，并绘制标准曲线、
五、样品侧定
准确吸取1.0-5.0ml样品处理液于l0ml比色管中，以下按第四项中“加水至5.0ml~”进行；样品与标准比较定量。
六、结果计算
式中: X一样品中组胺含量，mg/1000g；A一测定时样液中组胺的质量，ug
W一样品质量，g；V一测定时取滤液的量，ml；V，一样品滤液总量，ml （二）、离子交换树脂法
一、原理
采用乙酸溶液为提取剂，调节pH后采用离子交换树脂分离组胺，用分光光度计定量测定组胺含量。
二、材料与方法
1、试剂与仪器
试剂：1、2 mol/L乙酸：正确称取36%乙酸333 g或99.7%乙酸120 g于量杯中，再称取40 g NaOH用600 mL蒸馏水溶解后，缓慢倒入称好的乙酸中，然后用25%氢氧化钠溶液滴定至pH4.60为止，最后用蒸馏水定容到1000 mL；0.2 mol/L乙酸；
2、0.4mol/L乙酸；
3、1 mol/L盐酸；
4、0.2 mol/L盐酸；
5、10%三氯乙酸；
6、偶氮试剂：甲液(0.25%对硝基苯胺)5 mL+乙液(0.5%亚硝酸钠)40 mL混合后立即使用；组胺标准溶液和磷酸组胺标准溶液
仪器： 722分光光度计，固相萃取小柱，OY-300型匀浆机，磁力搅拌器。
三、操作步骤
1、离子交换树脂柱的装填：
称取10 g CG-50离子交换树脂加50 mL蒸馏水静置20 h后，将蒸馏水倒掉，加入50 mL 1 mol/L盐酸用磁力搅拌机充分搅拌20 min。
用蒸馏水将吸附器下半部装满，用吸管吸取搅拌好的树脂配制品，充填到吸附器连接处的中间位置，排出树脂间的空气，然后不断加入蒸馏水，直至流出的水pH值呈中性(6~7)为止，最后用50 mL 0.2 mol/L 的乙酸洗净。
2、样品预处理称取约10 g绞碎并混合均匀的样品，加入20 mL 10%三氯乙酸混匀后，用蒸馏水定容到50 mL，静置10 min后过滤，取滤液10 mL加入10%氢氧化钠溶液使滤液pH值呈中性(6~7)。
再加入10 mL 0.4 mol/L乙酸得到约20 mL样品溶液A。
若样品为液体，则吸取0.5 mL样品加4.5 mL蒸馏水和5 mL 0.4 mol/L乙酸即得到10mL样品溶液A。
将样品溶液A全部倒入洗净的离子交换树脂柱中，当样品溶液A快流尽时，用0.2 mol/L乙酸继续洗净8次，每次10 mL(上一次10 mL乙酸快流尽后再加下一次的10 mL)，待80 mL的0.2 mol/L乙酸全部流尽时，加入8 mL的0.2 mol/L盐酸洗脱，洗脱液全部回收到10 mL的容量瓶。
并用蒸馏水定容到10 mL，得到10 mL待检溶液B。
四、分光光度计比色
吸取0.5 mL的待检溶液B(若试样是发酵产品，加入0.2 mL待检溶液)于10mL容量
瓶或比色管，加水至1 mL，依次加1 mL1mol/L盐酸、3 mL 5%碳酸钠、3 mL偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10 min后，于480 nm波长处测吸光值并计算结果。
标准曲线同国标法。
五、结果计算
式中： X固体为固体样品中组胺含量，mg/100g；
X液体为液体样品中组胺含量，mg/100mL；
C为比色时试样中组胺含量，μg/mL；
V为比色吸取待检洗液B的体积，mL；
m为样品数量，g或mL。