PCR实验室标准

P C R实验室基本要求

1.1.1P C R实验室基本要求

2.1P C R实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。只是使用实时荧光P C R仪、H I V病毒载量测定仪的P C R实验室�有上述前面三个区域即可。各区域应完全独立分隔�不应有任何的空气直通。

B a s e d o n t h e m e t h o d s u s e d b y P

C R l a b,t h e P C R l a b o r a t o r y c a n b e d i v i d e d i n t o t h r e e o r f o u r r o o m s o r a r e a s f o r(i)r e a g e n t p r e p a r a t i o n,(i i) s a m p l e p r e p a r a t i o n,(i i i)a m p l i f i c a t i o n a r e a,a n d(i v)p r o d u c t a n a l y s i s a r e a.I f t h e P C R l a b o r a t o r y o n l y u s e s r e a l-t i m e f l u o r e s c e n c e P C R

i n s t r u m e n t s a n d/o r i n s t r u m e n t s f o r H I V v i r u s l o a d,t h e P C R l a b m a y h a v e o n l y t h e f i r s t t h r e e r o o m s o r a r e a s(r e a g e n t p r e p a r a t i o n,s a m p l e

p r e p a r a t i o n,a m p l i f i c a t i o n).T h e r o o m s o r a r e a s o f t h e P C R l a b s h o u l d b e i n d e p e n d e n t l y s e p a r a t e d,a n d t h e r e i s n o a i r f l o w t h r o u g h t h e s e p a r a t e d r o o m s o r a r e a s.

2.2产物分析区或三个区域的最后一个区域�即扩增及产物分析区��空气流向应由室外向室内�可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。

F o r P C R p r o d u c t a n a l y s i s a r e a o r l a s t a r e a o f t h r e e a r e a s(a r e a f o r a m p l i f i c a t i o n a n d p r o d u c t a n a l y s i s),d i r e c t i o n o f a i r f l o w s h a l l b e f r o m o u t s i d e t o i n s i d e o f t h e a r e a b y s e t t i n g u p f u m e h o o d,e x h a u s t f a n o r o t h e r e x h a u s t s y s t e m i n t h e a r e a.

2.3P C R实验室各区域仪器设备配备通常如下�

T h e e q u i p m e n t c o n f i g u r a t i o n f o r P C R l a b s a r e a s f o l l o w s:

2.3.1试剂准备区:R e a g e n t p r e p a r a t i o n a r e a

仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。

T h e m a i n e q u i p m e n t h e r e s h o u l d b e:p i p e t t e,r e f r i g e r a t o r,b a l a n c e,l o w s p e e d c e n t r i f u g e,v o r t e x m i x e r,m o b i l e U V l a m p,e t c.I t c a n u s e L a m i n a r f l o w c a b i n e t f o r t h e r e a g e n t p r e p a r a t i o n.

2.3.2标本制备区s a m p l e p r e p a r a t i o n a r e a

仪器设备主要应有生物安全柜�最好为B2,可避免提取核酸在柜内反复循环�造成标本间交叉“污染”�出现假阳性结果。此外还应配备加样器、台式高速离

心机�冷冻及常温�、台式低速离心机、恒温设备�水浴和/或干浴仪�、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。

T h e m a i n e q u i p m e n t i s t h e b i o-s a f e t y c a b i n e t(t y p e B2i s b e t t e r,b e c a u s e i t c a n a v o i d r e c y c l i n g o f n u c l e i c a c i d c a b i n e t a n d c r o s s c o n t a m i n a t i o n o f s p e c i m e n s).B e s i d e s,i t s h a l l b e e q u i p p e d w i t h p i p e t t e s,c e n t r i f u g e t a b l e h i g h s p e e d(r e f r i g e r a t e d a n d n o r m a l t e m p e r a t u r e),c e n t r i f u g e t a b l e l o w s p e e d,c o n s t a n t t e m p e r a t u r e d e v i c e s(w a t e r b a t h o r d r y b a t h),r e f r i g e r a t o r,v o r t e x m i x e r a n d m o b i l e l a m p U V e t c.

2.3.3扩增区a m p l i f i c a t i o n a r e a

主要仪器就是核酸扩增热循环仪�P C R仪�实时荧光或普通的�。热循环仪的电源应专用�并配备一个稳压电源或U P S�以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。此外�根据工作需要�还可配备加样器、超净台等。

T h e m a i n e q u i p m e n t h e r e i s a t h e r m a l c y c l e r s y s t e m f o r n u c l e i c a c i d a m p l i f i c a t i o n(P C R,q u a n t i t a t i v e f l u o r e s c e n c e d e t e c t i o n o r c o m m o n).P o w e r f o r t h e t h e r m a l c y c l e r s h a l l b e p r o v i d e d w i t h a m a n o s t a t o r a U P S t o a v o i d t h e i n f l u e n c e o n P C R a m p l i f i c a t i o n a r o s e b y f l u c t u a t i o n o f

v o l t a g e.M o r e o v e r,d e p e n d i n g o n t h e w o r k d e m a n d,t h e a m p l i f i c a t i o n a r e a c o u l d b e e q u i p p e d w i t h p i p e t t e,u l t r a c l e a n c a b i n e t,e t c.

2.3.4产物分析区�P C R p r o d u c t a n a l y s i s a r e a

本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪�槽�、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、D N A测序仪、酶标仪和洗板机等。

T h e e q u i p m e n t h e r e m a y b e p i p e t t e,e l e c t r o p h o r e s i s s y s t e m c a p i l l a r y,

t r a n s b l o t s y s t e m,c h e s t/o v e n m o l e c u l e h y b r i d i z a t i o n,w a t e r b a t h,D N A s e q u e n c e r,m i c r o p l a t e-r e a d e r f o r E L I S A,m i c r o p l a t e w a s h e r a n d s o o n.

建议R e c o m m e n d a t i o n s

在理想情况下�P C R实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间。在缓冲间内�可设置正压�使室内空气不流向室外�室外空气不流向室内。

I n a n o p t i m a l s i t u a t i o n,f o r t h r e e r o o m s(r e a g e n t p r e p a r a t i o n,s a m p l e p r e p a r a t i o n,a m p l i f i c a t i o n)o f t h e P C R l a b o n e b u f f e r a r e a c o u l d b e

s e t u p.T h e p r e s s u r e i n t h e b u f f e r a r e a s h o u l d b e p o s i t i v e t o a s s u r e

t h e i n d o o r a i r c o u l d n o t f l o w t o o u t s i d e a n d t h e o u t s i d e a i r c o u l d n o t f l o w t o t h e i n s i d e.