食用菌实验-母种原种扩大培养
食用菌实验1
5、质量检验
对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量 鉴定，选优去劣，方可使用。 检验方法： ①外观鉴定
优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命 力强。
老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生 了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。
②显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水1滴，盖 上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。 ③菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培 养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就 是优良母种。 ④出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速 度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的 母种，即可供生产上使用。
营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→
塞上棉塞→捆扎→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→ 制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d）
（3） 作业
（1）每人制5支试管斜面。
（2）什么叫食用菌菌种？它又有哪些类型？ （3）食用菌菌种生产常用的设备和用具有哪些？ （4）写出食用菌的制种程序。 （5）常用的消毒药品有哪些？
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata
别名：猪苓花、猪灵芝。 特征：子实体丛生，肉质，味道鲜美，地下部分的菌核即是中药材的 猪苓，菌核不规则、块状，棕黑色至黑色。 药用功效：猪苓及猪苓多糖对肝炎、肺癌、食管癌、白血病、乳腺癌 及淋巴肉瘤有显著的治疗效果。
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
食用菌实验-母种原种扩大培养
实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。
三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先灭菌20分钟。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。
⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
原种30天左右长满。
作业：归纳原种和试管种的接种全过程。
实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
食用菌原种筛选与扩繁实验原理
食用菌原种筛选与扩繁实验原理食用菌原种筛选与扩繁实验原理「篇一」食用菌制种与栽培教案实验一食用菌形态结构的观察一、实验目的认识和掌握常见的栽培的食用菌形态特征二、实验原理常见的栽培的食用菌主要是担子亚门层菌纲和腹纲的一些种类，它们由双核菌丝分化形成子实体，子实体是有性孢子着生的器官，其孢子外生在担子上，并聚集成一层子实层，但它们的子实体形状因种类不同而有很大差别，是认识食用菌类别的主要标志。
三、实验器材1、新鲜的食用菌，浸、干制标本。
2、解剖刀。
四、实验方法识别香菇、双孢蘑菇、平菇、猴头、口蘑、木耳、竹荪、草菇、银耳、金针菇等形态特征。
取平菇、香菇，首先观察其子实体的组成部分及其形态特征。
再用解剖刀纵切子实体观察其菇盖组成。
菌肉的颜色、质地、菌褶形状和着生情况(离生、延生、直生、弯生)。
再观察其菌柄的组成，菌柄的质地，中空或中实。
五、作业绘制香菇子实体形态及纵剖面简图，并注明各部位名称。
实验二食用菌母种培养基的制备与灭菌一、实验目的1、掌握食用菌母种培养基的配制方法。
2、熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、基本原理培养基是按照食用菌生长发育所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。
其中含有碳源、氮源、矿质元素、生长因子和水分等物质。
由于食用菌在生长发育过程中，还必须在适宜的酸碱条件下，才能表现最大的生活力。
因此，对不同种类食用菌还须将培养基调节到一定的PH值范围。
食用菌的培养基可分为母种培养基、原种培养基和栽培种培养基。
对于母种培养基一般多采用固体培养基，因此需在培养基中加入一定量的凝固剂。
三、实验器材马铃薯(去皮)200g，琼脂16-18g，葡萄糖20g，大试管、棉塞、灭菌锅、漏斗、铁架台、胶管。
四、实验步骤1、选好马铃薯洗净去皮(挖去芽眼)，切成薄片，取200g放在铝锅中，加水1000mL，煮沸20分钟，双层纱布过滤，取滤液并补足水至1000mL，加琼脂，小火加热，玻璃棒搅拌至琼脂全部溶解，再加入葡萄糖使其溶化。
食用菌母种生产技术
食用菌母种生产技术食用菌母种生产技术母种生产主要包括培养基制备、纯种分离或转管扩大、培养等环节。
一、母种培养基制备1.母种培养基常用配方（1）PDA培养基：马铃薯(去皮，下同)200克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水l000毫升。
（2）加富PDA培养基①综合PDA培养基：马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B110毫克，琼脂18-20克，水1000毫升。
②蛋白胨－综合PDA培养基：在加富PDA培养基①中添加5克蛋白胨。
③麦麸－PDA培养基：在培养基（1）中添加100克麦麸。
④麦芽汁－PDA培养基：在培养基（1）中添加50克大麦芽。
（3）鲜蘑菇浸出液培养基：鲜蘑菇200-250克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水1000毫升。
将蘑菇切碎，煮30分钟，取其液汁。
（4）粪汁培养基：干马粪或牛粪150克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
将马粪或牛粪打碎，煮沸30分钟，取其溶液。
（5）完全培养基（CM）培养基：蛋白胨2克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.46克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，琼脂18-20克，水1000毫升。
2.母种培养基制作方法不同配方培养其制作方法基本相同，现以综合PDA培养基为例介绍其制作方法。
（1）培养基制作。
将土豆洗净、去皮、挖去芽眼及变青绿部分，称取200克，切成约长宽各2厘米厚3毫米左右的薄片，在1200毫升水煮沸10－15分钟，然后用4－6层纱布过滤，倒掉残渣并洗净铝锅。
将滤液倒入锅内，加清水补足 1000毫升，同时放入琼脂并重新开始加热，最好小火加热，不断搅拌至琼脂完全溶化，再用纱布过滤一次，补水至1000毫升。
最后依次将称好的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素加入，继续加热并搅拌至全部溶化，停止加热。
如果要加入蛋白胨需将蛋白胨用冷水溶化后加入，可以避免蛋白胨因结块而分散不均。
图3－11 试管分装（2）分装试管。
左手持3-4支试管，管口朝上，令下端整齐，上移试管至漏斗软管，插入试管内约3厘米。
食用菌的制种(母种的分离和培养)
食用菌的制种（母种的分离和培养）()---食用菌菌种质量的优劣，直接影响到栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种，才能获得优质高产的食用菌。
因此食用菌的制种，是生产中一项极其重要的工艺。
食用菌的菌种按培养阶段和来源的不同，可分母种、原种和栽培种三种。
从食用菌的孢子分离培养或从组织分离培养、基内菌丝分离培养所得到的第一代菌丝体，称为母种。
从母种扩大培养的菌丝体，称为原种。
从原种扩大培养直接用于生产上播种的菌丝体；称为栽培种。
一、母种的分离和培养（一）母种培养基的配制1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。
因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。
适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基马铃薯（去皮） 200克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（2）麦芽汁——葡萄糖——琼脂培养基干麦芽 250克琼脂 15～20克葡萄糖（或蔗糖） 10克水 1000毫升（3）胡萝卜——葡萄糖——琼脂培养基胡萝卜 100克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（4）蘑菇汁——葡萄糖一一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇 250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（5）蛋白胨——葡萄糖——琼脂培养基蛋白胨 2克葡萄糖 20克磷酸氢二钾 2克维生素B1（硫胺素） 0.5毫克磷酸二氢钾 0.5克琼脂 18克硫酸镁 0.5克水l000毫升2.母种培养基的制法兹以最常用的马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块，加水1000毫升，煮沸15～20 分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。
趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。
母种培养基的制作及试管菌种的扩制
一、实验目的
1. 了解食用菌母种培养基的配方 2. 熟练掌握母种培养基（PDA）的配制方法 3. 熟练掌握培养基的消毒灭菌技术。 4. 掌握试管菌种的扩制技术
母种培养基配方
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去 皮）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH 自然。
(三）高压灭菌
121℃高压灭菌30min后摆斜面。
(四）母种接种及试管菌种的扩制
1．将已灭菌的斜面培养基瓶移入事先消毒过 的超净工作台内，同时放入酒精灯、酒精棉 、接种铲等，紫外灭菌20～30min。
2.将母种管、用具及手进行酒精消毒。
3.按无菌操作方法进行接种，用接种铲取菌 种一块放入斜面培养基上，并使菌丝紧贴在 培养基上，塞上试管塞，贴上标签，注明菌 种名称和接种日期。
4.将称好的琼脂加入马铃薯汁中，在电炉上 用文火煮，直至琼脂完全融化（边煮边搅拌 ），再用四层湿纱布（需用热水浸湿后拧干 ）过滤。最后加入葡萄糖等可溶物，搅匀。
5.调节pH值：培养基的酸碱度是影响菌丝生长 的重要因素，因此培养基配好后应根据菌种对 pH值的要求进行调节。马铃薯蔗糖琼脂培养基 配好后，pH值一般为中性，所以不必调节。
4.放入28℃生化培养箱中培养。
注意事项：
PH调节时，应该注意的是培养基的酸碱度在 灭菌前不宜调至pH6.0以下，否则灭菌后培养 基不凝固。有些菇类的培养基要求在pH6.0以 下的，要待灭菌后在无菌条件下滴加盐酸或 乳酸等进行调节。
四、作业
1.试述母种培养基的配制过程。 2.简述培养基分装的要点。
铃薯综合培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g， 琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生B1 10mg，水1000ml。
食用菌菌种选择及菌种标准化生产技术
1. 菌种质量鉴定
• 菌种鉴定（6方面）：纯度、长势、菌龄、
均匀度、出菇快慢。
• 出菇试验是最可靠、最实际的方法。
• 产量高、品质好→优良菌种。
1. 母种的引进
• 引种要从有实力，信誉度高的科研单位引种。
• 必须做到：
• 一看试管和瓶上是否贴有标签；
• 二看标签上的菌种名称、菌种代号、接种时间是否
关部门检验的安全合格产品。 • 基本设施：配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施规模
要配套。冷却室、按种室、培养室和贮存室都要有调温设施。
（二）母种评价筛选与复壮
• • 1．菌种复壮的方法 菌种来源：试管斜面种或采用组织分离的试管斜面种。
•
•
评价筛选与复壮操作：
（1）从斜面种中挑取远离接种点下面的菌丝少许，接种到与试管培养基成分不 同的平板培养基中，每一平板可接3-4块。25℃恒温培养箱中培养5天后，观察菌 落形态。
• （4）栽培种生产场地的环境卫生及其他条件符合农业部
《食用菌菌种生产技术规程》要求。
3. 对食用菌菌种生产的规定
• 菌种生产经营许可证有效期为3年。 • 禁止无证或者未按许可证的规定生产经营菌种；禁止伪造、 涂改、买卖、租借《食用菌菌种生产经营许可证》。 • 菌种生产单位和个人应当按照农业部《食用菌菌种生产技 术规程》生产，并建立菌种生产档案，载明生产地点、时
•
（2）从形态圆形、规整，生长旺盛的菌落周边，在显微镜下应用显微操作器把 菌丝尖端切下（可用无菌小刀切取菌落边缘的菌丝尖端进行分离移植，也可用无 菌毛细管截取菌丝尖端单细胞进行纯种分离），转接到与平板培养基成分不同的
平板上。25℃条件下继续培养，采用相同操作，对菌种进一步挑选、脱毒、复壮。
实验四食用菌原种,栽培种的制备PPT课件
各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时， 应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调 节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产 上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将pH值 适当调高0.5~1。
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谢谢您的指导
THANK YOU FOR YOUR GUIDANCE.
感谢阅读！为了方便学习和使用，本文档的内容可以在下载后随意修改，调整和打印。欢迎下载！
汇报人：XXXX 日期：20XX年XX月XX日
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食用菌的制种程序
种菇
孢子分离 组织分离
接种→母种（一级） 接种→培→养原种（二级）
接种→培→养栽培种（三级）
经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。
一般1支试管菌种可繁殖4~6瓶原种，每瓶原种又 可扩大繁殖60~100瓶栽培种。
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原种和栽培种的生产，无论是培养基成分， 配稻草切成2cm长→发酵→＋蔗糖＋麸皮＋
过磷酸钙
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一、常用培养料的配方和配制方法
⑶木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等）
木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、 水适量。
⑷木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）
木屑50kg、麸皮15kg、黄豆粉1kg、蔗糖0.75kg、 MgSO4 0.25kg、水适量。
料
类，如：蘑菇、草菇；
棉籽壳——米糠培养料：多种菇类。
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一、常用培养料的配方和配制方法
⑴粪草培养基（适用于蘑菇）
稻草或麦杆20kg、粪肥（干）30kg、石膏500g、 水适量。
食用菌生产技术 菌种的扩大培养
（2）将转接后的原种及栽培种 置于培养箱或培养室中，调节 适宜温度，培养20～40天。
思考题
1、菌种扩大培养有何意义？ 2、扩大培养关键环节是什么？
培养基、酒精灯、接种环、大镊子、 接种箱、超净工作台等。
四、操作步骤
1、转管操作：无菌环境，用具严格消毒， 转管接种操作，每人4管；
2、母种转接原种操作：无菌操作； 3、原种转接栽培种操作：无菌操作；
4、培养管理：
（1）将转接后的试管母种贴标签， 置于恒温培养箱，调节适宜温度 （平菇22℃，香菇25℃），培养 7～10天；
信阳农专——应用真菌
菌种的扩大培养
主讲：王德芝
好树结好果 好种出好菇
一、实验目的
1、掌握无菌操作技术 2、学习接种方法 3、分离扩大培养菌种的方法
二、实验原理
母种经转管可以扩大数量 母种到原种可扩大6～10倍 原种到栽培种可扩60～80倍 经过三级可以扩大约360倍
ห้องสมุดไป่ตู้
三、实验器材
▪ 1、菌种：香菇或灵芝等试管母种； ▪ 2、试管斜面培养基、原种和栽培种
实验七 食用菌母种的扩大培养
实验七食用菌母种的扩大培养一、实验目的深入理解食用菌母种的含义、重要性和生产上的作用。
学会常用母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。
二、实验原理食用菌母种是指从大自然首次分离得到的纯菌丝体，多通过孢子分离法、组织分离法和菇木分离法获得纯菌丝体。
因其在试管里培养而成，并且是菌种生产的第一步骤，因此又被称为试管种或一级种。
纯菌丝体在试管斜面上再次扩大繁殖后，则形成再生母种。
它既可以繁殖原种，又适于菌种保藏。
母种的扩大培养是从一支母种转接、培养、扩繁成若干支母种的过程，整个过程期间，须在无菌环境条件下，进行母种菌的转接、培养与扩繁。
三、实验所需1. 菌种：平菇、杏鲍菇、金针菇、灰树花等。
2. 材料试剂：马铃薯、葡萄糖、琼脂、酵母膏、75%酒精等。
3. 仪器用具：天平、电炉、熬制锅、刀砧、小刀、玻棒、纱布、漏斗架、漏斗（套接橡胶管和）、止水夹、试管（18×180mm左右）、棉花、橡皮筋、牛皮纸（报纸）、棉线、铁筐、高压灭菌锅、超净工作台、酒精棉瓶、长柄镊子、接种具（钩、锄等）、酒精灯、火柴、垫架、标签、笔等。
四、实验内容（一）母种培养基配制（1）培养基配方常用培养基PDA：马铃薯（去皮去芽眼）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、酵母膏2.5g。
（2）培养基配制将马铃薯去皮洗净、挖去芽眼，称取200g，用刀砧切碎，放入熬制锅（内壁有容积刻度）中，加入清水，电炉加热煮沸后调小火力，维持约20min，煮至软而不烂为止。
用双层湿沙布过滤，得过滤薯液，再向过滤液中加入琼脂20g继续加热，待琼脂溶化后，添加葡萄糖20g及酵母膏2.5g，补足水分至1000ml，搅拌均匀煮沸溶化后准备装管。
（3）分装试管培养基配制后应趁热分装。
装入培养基占试管的1/4~2/5处，装管时控制好止水夹头，对培养基流向、流速、流量进行控制，勿使管内外壁沾上培养液，以免浸湿棉塞，易受杂菌污染。
第五节-食用菌菌种的扩繁与培养
第五节食用菌菌种的扩繁与培养引言：从外地购进或分离获得的母种数量有限，不能满足生产的需要时，要对初次获得的母种进行扩大繁殖，以增加母种数量。
一、菌种扩大把接种物移至培养基上，在菌种生产工艺上称接种。
在栽培工艺即生产中称播种。
条件：无菌操作（接种箱或超净工作台、酒精灯火焰周围10cm）1、母种扩接方法（超净工作台内接种，由试管到试管）将试管菌种接到新的试管斜面上扩大繁殖，称为继代培养，转管。
程序：P43（1）消毒手和菌种试管外壁。
（2）点燃酒精灯。
（3）用左手的大拇指和其他四指并握要转接的菌种和斜面培养基，在酒精灯附近拔掉棉塞。
（4）在酒精灯灼烧接种锄和试管口。
（5）冷却接种锄，取少量菌种（绿豆大小），至斜面培养基上。
（6）塞上棉塞，贴好标签。
整个过程要快速、准确、熟练。
1支→30支二、菌种的培养1、母种培养（1）适温培养在恒温箱（室）培养种块有萌发，并向培养基上蔓延后，将培养温度降低2～3℃，促使菌丝健壮生长。
（2）注意通风通风不足，菌丝生长缓慢，棉塞上易滋生霉菌。
（3）定期检查前几天，要逐管检查，以防掩盖杂菌。
发现污染，及时淘汰。
（4）详实记录记录菌株来源、转接时间、培养基种类、发菌的温湿度、菌丝生长情况，以及污染现象、数目。
液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。
若少量生产，可以用摇瓶培养法。
深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。
而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。
本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。
平菇：土豆100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片， pH值自然；1.液体菌种培养基配方(1)葡萄糖 3% 豆粉 2%玉米粉 1% 硫酸镁 0.05%磷酸二氢钾 0.1% 酵母粉 0.5%其余为水 pH 值自然本配方适用于多种食用菌的液体培养。
香菇菌种培养实验报告
一、实验目的1. 掌握香菇菌种分离、纯化及扩大培养的基本方法。
2. 了解香菇液体菌种培养基的配制及发酵条件。
3. 熟悉香菇菌种质量评价体系。
二、实验材料1. 供试菌株：香菇0912（河北工程大学园林与生态工程学院食用菌研究室保藏）2. 培养基：- 母种培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基- 原种培养基：锯木屑78%、米糠或麸皮20%、蔗糖1%、硫酸钙1%、水适量- 栽培种培养基：与原种培养基相同- 液体菌种培养基：葡萄糖2%、玉米粉2%、细木屑1.5%、豆粕1.2%，C/N比为23.6:13. 仪器与设备：- 灭菌锅、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台、显微镜、培养箱、摇床、电子天平、pH计等三、实验方法1. 母种制备：（1）将马铃薯去皮，切成小块，称取200g，加入1000mL蒸馏水，煮沸30分钟，过滤，制成马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
（2）将纯化后的香菇0912菌丝接种于母种培养基平板上，在24-26℃恒温培养箱中培养5-7天。
（3）挑取单菌落，转接至新的母种培养基平板上，重复培养2-3次，获得纯化后的母种。
2. 原种制备：（1）将锯木屑、米糠或麸皮、蔗糖、硫酸钙等原料按比例混合均匀，加水适量，搅拌均匀。
（2）将混合好的培养基装入750mL菌种瓶，封口，在1.5公斤压力下灭菌1小时。
（3）将纯化后的母种接种于原种培养基瓶中，24-26℃恒温培养箱中培养30-40天，至菌丝长满瓶。
3. 栽培种制备：（1）将原种培养基瓶中的菌丝接种于栽培种培养基瓶中，24-26℃恒温培养箱中培养30-40天，至菌丝长满瓶。
4. 液体菌种制备：（1）将优化后的液体菌种培养基按比例配制，分装于三角瓶中，封口，在1.5公斤压力下灭菌1小时。
（2）将纯化后的母种接种于液体菌种培养基中，24-26℃、120rpm摇床培养11天，至菌丝生长旺盛。
5. 菌种质量评价：（1）观察菌丝生长情况，记录菌丝颜色、生长速度、菌球密度等指标。
（2）测定菌丝干重，计算菌丝生物量。
实验四食用菌原种,栽培种的制备
五、杂菌检查（菌种检查）
接种后的原种，一般在 3d~5d 左右菌
丝恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，
如有污染及时剔除；如发现接种块无新
菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。
正常：菌丝白色
杂菌：黄、红、绿、黑
死菌：补种
作业
（1）每人制2袋原种； （2）培养基（料）配制原则主要有哪些？ （3）写出原种、栽培种的制作方法。
四、原种、栽培种的制作方法
按配方称取原料 → 拌料 → 调节含水量 65% 左 右→装袋→灭菌（1.5kg／cm2，1.5~2h）→冷 却 → 接种（接入黄豆大小一块菌种） → 培养
（ 25℃ ~27℃ ） → 菌丝长满瓶（袋） → 培养
7d~8d→扩大成栽培种。
含水量65%左右判断：用手紧握培养料，手指 缝中有水珠渗出，但不滴下。
三、培养基原料用途的几点说明
⑴米糠、麸皮作用
作用：补充氮源和维生素。
稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料， 含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。 麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。 米糠：含氮量比麸皮少。 用量：一般10%~20%，过多易引起污染。
三、培养基原料用途的几点说明
⑵加糖的作用
食用菌的制种程序
孢子分离 种菇 组织分离 接种→母种（一级） 接种→ →原种（二级） 接种→→栽培种（三级）
培养 培养
经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。
一般 1支试管菌种可繁殖 4~6瓶原种，每瓶原种又 可扩大繁殖60~100瓶栽培种。
原种和栽培种的生产，无论是培养基成分， 配制方法和灭菌方法基本上是相同的。 1 ）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作 种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直 接用于生产。（母种→原种） 2 ）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用 于生产。（原种→栽培种）
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。
菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。
一、菌种制作食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.制作母种（一级种）1.1菌种采集选择健壮无病虫害的食用菌子实体。
经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。
1.2母种培养基制作配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。
先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml 纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。
2.制作原种（二级种）将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph 值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。
食用菌栽培学实验---食用菌原种-栽培种扩大培养实验
食用菌原种-栽培种扩大培养实验一、目的要求了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤，并能熟练制备出我培用菌种。
了解和掌握几种简便、快捷的多孢子分离方法。
二、材料与用具(1)材料:平菇或香菇等子实体。
(2)用具:接种箱、解剖剪、解剖刀、镊子、180cm×180cm试管、250mL三角瓶、挂沟。
75%酒精、酒精棉球、无菌水、培养量、紫外灯及其他消毒剂。
三、内容与方法(一)组织分离(1)选择种菇在出姑场选择肉厚肥大、鲜嫩、出菇早、平菇或香菇等子实体做种。
(2)将种菇表面整理干净，放在接种箱(或无菌室内)进行表面消毒。
用镊子将种站放在培养皿内，用男镊于夹75%酒精棉球对种菇进行表面消毒(注意棉球含酒精不宜过多，否则酒精会渗人菇肉组织而导致分离失败)。
(3)用解剖刀成剪刀藏酒精进行火焰消毒，冷却后将已消毒的种菇纵切为二(也可用双手握住菌盖表面轻轻掰开)，然后在菌盖与菌柄交界处，切取内部菌肉组织0.3-0.5cm(如黄豆粒大小)，用接种针以无南操作方式移人斜面培养基表面中央位置，置25℃恒温箱中培养。
(4)如为中、小型子实体如金针菇等，可采用生长点组织分离法，即用长柄镊子快速击去菌盖，取下菌柄尖端的生长点，移入准备好的斜面培养基中即可。
(5)每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝转移至新的试管斜面。
若在组织块附近或其他地方出现其他颜色杂菌生长时应予以淘汰。
(二)多跑分离1.整菇插种法此法方便快捷，成功率高，是多孢子分离的主要方法，适合于大型子实体的孢子分离。
具体操作方法是在接种室此法方便快捷成功事高。
是多相子分离的主要方法，适合于大型子实体的有子分离。
具(箱)中，将经消毒处理的整菇体插人无菌收集器里，再将孢子收集种菇和支架，将培养盟盖好。
在无菌条件下，用技种环从采集的孢子中蘸取少量的孢子，在试管斜面培养基上成平板培养基上，轻轻划线，不要划破培养基表面，抽出接种环，烧管口，塞上棉案:置于适宜的温度下培养，每天检查，发现有杂菌污染的应及时挑拣出来，并检查孢子的萌发情况。
食用菌母种的制作培养
食用菌母种的制作培养用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1．培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升 PH值自然配方二合成培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升 PH值自然2．培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。
装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3．灭菌将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4．接种与培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。
原种的制作母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。
1．培养基配方配方一木屑麸皮培养基阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 水 65% PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳 90% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% PH值自然2．拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
实验室平菇栽培法 实验报告
实验报告实验名称实验室平菇栽培法班组姓名学号日期成绩教师签名一、实验目的1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。
2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。
3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。
4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。
5.培养学生自行设计出菇的方案。
二、基本原理1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。
平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。
本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。
2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。
干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般在160摄氏度持续1.5—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95以上.紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只适用于空气及物体表面的灭菌,有效距离为1.5—2米,以1.2米内为最好.3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。
母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。
5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。
原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。
食用菌栽培与加工 菌种扩大培养
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实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。
三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先灭菌20分钟。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。
⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
原种30天左右长满。
作业：归纳原种和试管种的接种全过程。
实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，电热恒温培养箱，接种钩，接种针，酒精灯，搪瓷杯，高锰酸钾，福尔马林，母种试管(18×180mm)，火柴，记号笔，钢笔，标签，工作记录本，250毫升磨口瓶，75％酒精及棉球、95％酒精，升汞。
斜面培养基，斜面母种。
四、实验步骤与方法1．无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2．接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先起动20分钟(或按说明书操作)。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
经瞬时灼烧后大部分杂菌可被杀死，即使有少数未死者，也被加热固定，不致脱落。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，将已长满菌丝培养基划成1平方厘米的方块，钩住接种块，或用接种环轻轻接触菌苔，挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
注意不要使菌苔碰到管壁，取出时，不可使环通过火焰。
悬空，迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，在斜面中部触一下，使菌块落在培养基上，注意环要平放，不要划破培养基，也不要使菌苔沾到管壁上。
⑥抽出接种环，将两支试管口同时在火焰上灼烧灭菌，烧灼棉塞，分别塞好棉塞。
注意不要用试管口去迎棉塞，以免试管在运动时纳入空气造成污染。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
接种完毕之后，必须马上贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期，以防混淆。
母种标签大小为3．5×2cm，原种为4×3 cm。
均应贴在正面偏上位置，不要影响对菌种的观察。
3．菌种培养接好种的试管，放在26--27℃条件下培养，每隔2天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
菌丝长满试管后要及时取出，放在常温下3～5天，就可作为接种试管母种或制作原种之用。
不立即使用的试管母种，放在4℃左右的条件下存放，每隔半年转管一次，可长期保存。
实验五原种接种与扩大培养•一、实验目的•通过对接种常规消毒、原种（二级种）接种和扩大培养，基本掌握原种接种操作技能。
并培养学生定期检查菌丝生长情况的观察能力和鉴别杂菌污染的形征识别能力。
•二、实验材料和用具•接种箱，接种钩，酒精灯，镊子，75％酒精棉球，高锰酸钾，火柴，标签，搪瓷杯，钢笔，塑料绳或皮筋，试管母种。
••三、实验步骤与方法．•1．接种操作过程•(1)无菌检查：接种以前首先检查菌种内或棉塞上有无霉孢子菌落及杂菌侵入所形成的拮抗线、湿斑。
有明显杂菌侵染或可疑的菌种，培养基开始干缩或在瓶壁上有大量黄褐色分泌物的菌种，培养基内菌丝生长稀疏或大多是细线状菌索的菌种，没有菌种标签的可疑菌种，均不能用于接种。
•(2)原种接种法：接种要求在无菌室内进行无菌操作。
接种时要求动作快而准确，以减少污染。
取斜面母种，用75％的酒精棉球擦拭外壁，拔去棉塞，在酒精灯火焰上灼烧管口。
用右手持接种锄(扒)，灼烧，放在试管内侧冷却，然后切取2．5平方厘米大小斜面菌种一块，通过酒精的火焰上方，送入菌种瓶内，固定在接种孔上。
注意试管口与瓶口都不离火焰一寸远。
菌种块用培养料盖一下更好。
每支斜面试管母种可接种3—5瓶原种。
•接种后，用酒精灯火焰烧灼瓶口、棉塞，然后将棉塞塞到瓶口上。
通过瓶壁观察，种块是否移动，若菌种块在接种穴内脱落或掉到接种穴内，应予调整或补接。
最后盖上聚丙烯或牛皮纸，结上塑料绳，即完成了接种过程。
立即盖好原种瓶，封好口。
•2．原种恒温培养•接种后的原种瓶，全部移放在23—25℃的培养室或恒温箱内培养。
培养期间应经常检查有无杂菌污染，如发现黄、绿、桔红、黑色杂菌时，要及时捡出清理。
尤其是塑料袋菌种，检查工作应自始至终进行。
培养室切忌阳光直射，但也不要完全黑暗，要有一定的散射光。
经过25～30天，待菌丝长满瓶底就可取作种子用。
生长好的原种菌丝洁白、粗壮、纯净，即可用来繁殖扩大栽培种。
•五、作业思考题•1．在接种过程中，如发现棉塞已湿，立即更换灭过菌的棉塞，为什么?•2．何谓倒置培养?倒置培养的优点是什么?请具体说明。
•3．一般来说，原种满瓶经过多少天最适用于扩大培养栽培种?栽培种满瓶后多少天最适用于播种?•4．你怎样鉴别菌种质量的优劣?•5．你用什么办法保藏原种?在10℃以下低温下，原种保藏时间一般是多少?在室温下保藏原种时间一般是多少?实验五母种接种扩大培养•一、实验目的•通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
••二、实验材料和用具•接种箱或超净工作台，电热恒温培养箱，接种钩，接种针，酒精灯，搪瓷杯，高锰酸钾，福尔马林，母种试管(18×180mm)，火柴，记号笔，钢笔，标签，工作记录本，250毫升磨口瓶，75％酒精及棉球、95％酒精，升汞。
•斜面培养基，斜面母种。
••三、实验步骤与方法•1．无菌测定•灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
•2．接种操作过程•无菌操作要点：•①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先起动20分钟(或按说明书操作)。
•②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
•③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
•④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
经瞬时灼烧后大部分杂菌可被杀死，即使有少数未死者，也被加热固定，不致脱落。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
•⑤用冷却的接种钩，将已长满菌丝培养基划成1平方厘米的方块，钩住接种块，或用接种环轻轻接触菌苔，挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
注意不要使菌苔碰到管壁，取出时，不可使环通过火焰。
悬空，迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，在斜面中部触一下，使菌块落在培养基上，注意环要平放，不要划破培养基，也不要使菌苔沾到管壁上。
•⑥抽出接种环，将两支试管口同时在火焰上灼烧灭菌，烧灼棉塞，分别塞好棉塞。
注意不要用试管口去迎棉塞，以免试管在运动时纳入空气造成污染。
•接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
•接种完毕之后，必须马上贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期，以防混淆。
母种标签大小为3．5×2cm，原种为4×3 cm。
均应贴在正面偏上位置，不要影响对菌种的观察。
•3．菌种培养•接好种的试管，放在26--27℃条件下培养，每隔2天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
菌丝长满试管后要及时取出，放在常温下3～5天，就可作为接种试管母种或制作原种之用。
不立即使用的试管母种，放在4℃左右的条件下存放，每隔两个月就转管一次，可长期保存。
•四、母种菌丝外观优劣鉴别•1．母种杂菌检查：保藏的母种在接种前应进行认真地检查是否有污染现象，斜面上有明显绿、黄、黑色等菌落，说明遭受霉菌污染；管口内的棉塞，由于吸潮生霉，只要轻微的振动，分生孢子很容易溅落到已经长好的斜面上，在低温保藏条件下受到抑制，很难发现。
将斜面放在向光处，从基背面观察，在气生菌丝下面有黄褐色圆形或不定型斑块，是混有细菌的表现。
已污染杂菌的母种不能用于扩大培养。
•2．常见母种菌丝的生长形态和培养特征•①香菇母种：菌丝洁白、细短、絮状、浓密均匀，整齐地生长，部分菌丝沿试管壁伸延，不产生色素。
一般12—14天可长满试管斜面。
•②木耳母种：菌丝白色，粗壮均匀，整齐致密，齐头生长，其中黑木耳可分泌褐色素，毛木耳可分泌紫褐色素。
一般10天可长满试管斜面。
•③平菇母种：菌丝洁白、浓密、粗壮、丰满，长势均一，爬试管壁力很强，不产生色素。