2008 纳豆菌高产培养基的成分优化
纳豆激酶产生菌的固体发酵参数优化
作者简介：周伏忠 （９ ５ ） 男 ， １６ 一 ， 河南浚 县人 ， 研究员 ， 硕士 ， 究方向为微生物发酵工程 ． 研
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９ ２— ３ —
河
南 科
学
第发酵 结束 后 ， 每 克 固体发 酵成 熟 物加 入质 量 分数 为 ０９％生 理盐 水 ５ｍＬ４℃浸 提 ４ｈ４５０ｒ ｉ 在 ． ， ， ０ ｍｎ离 ／ 心 ２ ｉ， ０ｍｎ 上清 液 即为 固体 发酵粗 酶溶 液 ．参照 文献 ［］ ３ 的方 法 制备 血纤 维 蛋 白平板 和尿 激 酶标 准 曲线 ． 用 微量 加样 器移 取 适量 （～ ０ ） 酶 液 点种 于纤 维 蛋 白平板 上 ， 好标 记 ，７℃保温 １ ， ５ １ Ｌ 粗 做 ３ ８ｈ 测量 透 明 圈直 径 ， 计算 溶解 圈面 积 ， 与标 准 曲线 比对 ， 算酶 活 力 ． 计
13培养基质量分数131种子培养基lb胰蛋白胨1酵母浸出物05nacl1ph70132固体发酵培养基根据本实验室液体发酵研究的结果007mgso实验方法21斜面培养将接种好的斜面于37恒温培养箱培养24h22种子培养在250ml三角瓶中装20ml种子培养基接种一环斜面菌种于37恒温摇床150rmin培养14h23固体发酵每250ml三角瓶固体发酵培养基中加入固体培养基20g其他组分的变化见各个实验组
Ｍｇ Ｏ，． ＫＨＰ ０２％ ＫＨ Ｏ ．其他 组 分见 各实验 组 ． Ｓ ４０４％ ２ Ｏ 和 ． ２Ｐ
２ 实验方法
２１ 斜 面培 养 ． 将 接种 好 的斜 面于 ３ 恒 温培 养箱 培养 ２ ． ７ｑ Ｃ ４ｈ ２２ 种 子培 养 ．
在 ２０ Ｌ ５ 三角瓶中装 ２ Ｌ种子培养基， ｍ ０ ｍ 接种一环斜面菌种， ３ 恒温摇床 １０ ／ ｉ 培养 １ ． 于 ７Ｃ ｑ ５ ｍｎ ｒ ４ ｈ ２３ 固体 发酵 ．
高产纳豆激酶地衣芽孢杆菌工程菌全合成培养基优化
高产纳豆激酶地衣芽孢杆菌工程菌全合成培养基优化赵新宇;陈杨阳;陈敬帮;蔡冬波;魏雪团【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2016(037)007【摘要】以产纳豆激酶的地衣芽孢杆菌基因工程菌BL10 (pP43SNT-SsacC)为出发菌株,开展其全合成培养基的发酵优化研究.通过单因素试验和正交试验优化了全合成培养基成分,获得了最优的培养基组成(g/L):葡萄糖30、NaNO330、谷氨酸钠20、柠檬酸钠15、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO4·3H2O 1.5、CaCl20.5,pH 7.2.在优化的全合成培养基中,纳豆激酶最高酶活力达到25.59 FU/mL,相比于初始培养基发酵活性(4.27 FU/mL),提高了5倍.对比分析了全合成培养基和半合成培养基的发酵产物,结果表明,全合成培养基可显著提高纳豆激酶的纯度,与半合成培养基相比,纳豆激酶比活力提高了2倍.本研究获得了纳豆激酶的全合成培养基成分,显著提高了纳豆激酶发酵活性,并进一步提高了纳豆激酶发酵纯度.【总页数】6页(P140-145)【作者】赵新宇;陈杨阳;陈敬帮;蔡冬波;魏雪团【作者单位】华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070;华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉 430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070【正文语种】中文【中图分类】Q812【相关文献】1.地衣芽胞杆菌工程菌高产纳豆激酶的发酵罐工艺优化及中试放大 [J], 祝亚娇;宋嘉宾;陈杨阳;孙炳刚;陈敬帮;魏雪团2.地衣芽孢杆菌YTDY_01高产芽孢的培养基优化 [J], 解顺昌[1,2];刘扬科;胡国春;成鹏;路广亮;李林;3.高产地衣芽孢杆菌LB8培养基的优化研究 [J], 张晓晴;闵钟熳4.产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌发酵条件的\r响应面优化 [J], 田莉;卢轶男;朱建;张佑红5.具群体感应淬灭作用地衣芽孢杆菌T-1株培养基及发酵条件的优化 [J], 童文涛; 陈彪; 彭孟凡; 赵祯; 肖翎; 宋增福; 张庆华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纳豆激酶高产菌株筛选及发酵条件优化
3.5.4
图 3 碳源对纳豆激酶活性的影响 Fig 3 The effect of nattokinase activity by carbon source
从图 3 可知，以甘油和蔗糖为碳源时，纳豆激酶 活性相对较高。同时考虑工业生产成本问题，故选用 蔗糖作为培养碳源。 3.5.2 氮源选择 由于本菌从大豆发酵制品中分离得到，所以选择 2 %的大豆、豆粕及蛋白酶处理的大豆及豆粕作为氮 源，24 h 后比较活性变化，结果见图 4。由结果可知， 用豆粕发酵时纳豆激酶活性相对较高。
图 6 初始 pH 对纳豆激酶活性的影响 Fig.6 The effect of nattokinase activity by pH
3.5.5 单因素正交实验 对碳源（蔗糖） 、氮源（豆粕） 、温度、起始 pH 4 四个因素，设计正交实验表 L9(3 )(见表 1)。 利用 DPS 数据处理软件对正交试验结果进行正 交试验方差分析，比较各列的极差 R 值，可以看出 RA>RB>RC>RD，即在实验所设定的各因素中，碳源对 纳豆激酶活性影响最大， 次是氮源和发酵温度， 而 pH 从而得到该 的影响较小， 最佳因素组合为 A2B2C2D2。 优化培养基（ZD）由 2 %蔗糖和 2 %豆粕组成，发酵 温度为 37 ℃，起始 pH 为 7.0。
Abstract: Fifteen Nattokinase-producing strains separated from Japanese food-natto were investigated in this study. The strain N-15 was selected from the examined striains for its high level of nattokinase-producing activity (900IU/mL). The fermention conditions of the strain N-15 for the nattokinase production were optimized by single factor and orthogonal tests. It was found that the optimal soybean residue content, sucrose content, incubation temperature and the original pH value were 20 %, 2 %, 37 ℃and 7.0, respectively. Under the optimized fermentation conditions, Nattokinase was produced with a high activity level of 1033 IU/mL. Key words: nattokinase; Bacillus natto; screened selection; optimization
纳豆芽孢杆菌流加培养的初步研究
纳豆芽孢杆菌流加培养的初步研究
杨旭;谷军;张晓彦
【期刊名称】《中国调味品》
【年(卷),期】2013(038)003
【摘要】目的:研究制作纳豆用芽孢杆菌液体深层发酵的优化方法,提高发酵水平,生产出含有较高活菌数的微生物菌剂产品.方法:采用L8(27)正交实验法优化芽孢杆菌的液体深层发酵培养基；通过不同的补料发酵方式,降低营养物质过浓产生的阻碍作用,提高发酵浓度和水平.结果:对纳豆芽孢杆菌的摇瓶发酵培养基进行了优化,优化后的培养基为葡萄糖3％、酵母粉1.5％、豆饼粉0.2％、氯化钠0.5％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％.通过2L发酵罐的补料发酵试验得出最佳的补料方式:液体深层发酵10 h以后开始补料,每15 min补一次,10 h补完,补料液的养分为葡萄糖和酵母粉含量为总发酵成分的33％.
【总页数】4页(P25-27,35)
【作者】杨旭;谷军;张晓彦
【作者单位】黑龙江省科学院微生物研究所,哈尔滨 150010
【正文语种】中文
【中图分类】TS264.2
【相关文献】
1.纳豆芽孢杆菌发酵液抑菌物质的提取与初步分析 [J], 陈茜;汪建明;胡可眉
2.基于DO-stat流加培养控制的海藻糖合成酶发酵条件研究 [J], 段莹莹;曹大鹏;
任峰;张曰辉;赵伟
3.红曲霉色素流加培养的初步研究 [J], 杨旭;曹岚;李旭
4.纳豆芽孢杆菌胞壁肽聚糖提取工艺优化及其结构初步鉴定 [J], 陈佳妮;黄占旺;王素贞;石福磊;黄永平
5.纳豆芽孢杆菌发酵厨余物的初步研究 [J], 谢晨晨;刘敬为;张怡;刘天美;刘朝阳;黄亮;童应凯
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犊牛饲用纳豆枯草芽孢杆菌液体培养条件的优化
★ 国 际科 技 合 作 重 点 项 目“ 牛奶 安 全 饲 用微 生 物及 其 人 工瘤 杆 菌对 增强 犊 牛机 体 免疫 和 促 进 胃肠 发育 具 有 良好
胃评 价 技 术研 究 ”２ ０ Ｄ Ａ ６０ ）和 国 家科 技 支撑 计 划 的 效 果 。 （０４ Ｆ ０７０ “ 刍、 水 产 等 动 物 配 合 饲 料 生 产 技 术 集 成 与 产 业 化 示 反
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《 同捌工业》２０ ・０８芷第 ２ 酋第 期
试
犊牛饲 用纳豆枯革 芽孢杆漕 臻嫱． 条 件 蘸 ． 养 的优 匕
邓 露芳 王加启 姜艳 美 卜登攀 魏 宏阳 周凌云 王金菌作 为犊 牛 直接 饲 用微 生物 对增 强犊 牛机 体 免 疫和 促 进 胃肠 发 育有
严 ３ ］ 。作 邓 露 芳 ， 国农 业科 学 院 北 京 畜牧 兽 医研 究 所 国家 动 物 营 从而 引起 犊 牛 胃肠疾 病 ， 重 时甚 至造 成 死亡 【 中
养学重点实验 室，０ ０４ 北京 。 １０ ９ ，
为 可 直 接 饲 用 微 生 物 ， 纳 豆 芽 孢 杆 菌 能 在 肠 道 内生
尚未 建立 完 全 ， 胃蛋 白酶产 生较 晚 ， 固体物 质 和非 对 乳 物 质 的消 化 能力 弱 ； 免疫 系统 功 能 不完 善 ， 胃及肠
对 细 菌 的抵抗 力 很 弱 ， 疾 病 的能 力 较差 ， 界 环境 抗 外 不 良 时 ， 被 大 肠 杆 菌 、 门 氏杆 菌等 病 原 菌 侵袭 ， 易 沙
益， 然而 以豆类物质 为发 酵底 物 的微 生 物制剂 不适 用于犊牛 。 本研 究 采用纳豆 枯草 芽孢杆 茵液体培养 方法 ， 对培 养条件 的 氮源 、 源、 茵量 、 液量 、 碳 接 装 转速 和 温度进 行 正 交试 验 ， 结果 表 明 ， 葡 萄糖 １ 在 ％、
纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基的优化_帅明
纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基的优化帅明黄占旺牛丽亚（江西农业大学食品科学与工程学院南昌330045）摘要为优化纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基，采用微生物固态发酵技术，以固态发酵后的活菌数、芽孢数、蛋白酶及α-淀粉酶活力为指标，对纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基组成及配比，添加碳源、氮源种类及浓度，培养基的含水量进行优化研究。
试验结果表明，在玉米粉与麦麸配比3∶7、葡萄糖2%、硝酸铵0.5%、水60%条件下发酵效果最好。
关键词纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基文章编号1009-7848（2009）01-0143-05纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto ）具有改善宿主肠道微生物菌群平衡的功能[1]，近年来被广泛用于食品行业和养殖业。
纳豆芽孢杆菌是从日本的发酵食品———纳豆中发现并分离出来的，属细菌科、芽孢杆菌属，其原始菌株与枯草芽孢杆菌相同，是枯草芽孢杆菌的一个亚种[2]。
纳豆芽孢杆菌具有溶血栓、降血压、抗肿瘤、抗菌、防止骨质疏松、调节肠道内环境等功能[3]，是近年来研究的热点。
目前的研究主要集中在纳豆激酶高产菌株的筛选、溶栓作用等方面，对其固态发酵技术的研究较少。
本文对纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基进行优化，为工业大规模生产提供理论和技术支持。
1材料与方法1.1材料1.1.1发酵培养基麦麸、玉米粉、豆渣、豆粕，购于农大农贸市场。
1.1.2菌种来源纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto ）B1由江西农业大学食品微生物实验室人员分离保存。
1.1.3菌种培养基[4]牛肉膏蛋白胨固体培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基。
1.1.4试剂葡萄糖、乳糖、蔗糖、棉子糖、尿素、硫酸铵、硝酸铵，均为分析纯试剂。
1.2仪器与设备754紫外-可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；SPX-150B 生化培养箱，上海跃进医疗器械厂；HZQ-F160全温振荡培养箱，哈尔滨东联电子技术公司；101A-4B 电热鼓风干燥箱，上海实验仪器总厂；LDZX-40B 自动立式电热压力蒸汽灭菌器，上海申安医疗器械厂；HH －2数显恒温水浴锅，国华电器有限公司。
一种纳豆菌培养基及其优化方法[发明专利]
![一种纳豆菌培养基及其优化方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3b7096c8bcd126fff6050bec.png)
专利名称：一种纳豆菌培养基及其优化方法专利类型：发明专利
发明人：王国栋,刘书梅,杜磊
申请号：CN201710586418.9
申请日：20170718
公开号：CN107129956A
公开日：
20170905
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及纳豆食品开发领域，特别是涉及一种纳豆菌培养基及其优化方法。
本发明提供了一种纳豆菌培养基的配方，由以下成分组成：4％蔗糖、3％酵母浸粉、5％菠萝皮汁、
0.2％MgSO、0.1％KHPO、0.2％KHPO。
本发明对目前培养效果较好的培养基进行优化，选择更为高效的常见碳源和氮源作为基础培养基中的碳源和氮源的替代物，添加常见的水果蔬菜汁作为纳豆菌的生长因子，采用单因素试验筛选出最适宜浓度的碳源、氮源、生长因子，利用正交试验进行进一步筛选，最终选出最适合纳豆菌生长、增菌效果最好的培养基。
申请人：安阳工学院
地址：455099 河南省安阳市黄河大道安阳工学院
国籍：CN
代理机构：北京权智天下知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：王新爱
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2008 纳豆菌高产培养基的成分优化
３．０
２．５
２．０
１％大 豆 蛋 白 胨
１．５
３％大 豆 蛋 白 胨
１．０
５％大 豆 蛋 白 胨
７％大 豆 蛋 白 胨 ０．５
０ ０ ６ １２ １８ ２４ ３０ ３６ 培 养 时 间／ｈ
图 ４ 氮源浓度对菌种生长的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
一般来说， Ｇ＋对镁离子的需要量比 Ｇ－ 大。本试 验菌株为革兰氏阳性菌（ Ｇ＋） ， 因此， ＭｇＳＯ４ 浓度是 影响菌种生长的因素之一。 ２．５．２ Ｋ２ＨＰＯ４ 和 ＫＨ２ＰＯ４ 浓度 将基础种子培养 基 中 的 ０．５％ ＮａＣｌ 用 不 同 浓 度 比 的 Ｋ２ＨＰＯ４ 和 ＫＨ２ＰＯ４ 代替， 其它 成 分 不 变 ， 接 种 培 养 ， 每 隔 ２ ｈ 测定其生物量并绘制生长曲线 （ 见图 ６） 。由图 ６ 可 知 ， Ｋ２ＨＰＯ４ 与 ＫＨ２ＰＯ４ 的 适 宜 浓 度 比 为 １∶１， 在 培 养 １２ ｈ 时 达 到 最 大 生 长 量 ， 其 ＯＤ６００ 值 为 ２．２２２， 明显优于其它浓度比的， 且提前 ２ ｈ 达到最 大生长量。
豆粕粉
硝酸铵 ０．５
０ ０ ４ ８ １２ １６ ２０ ２４ 培 养 时 间／ｈ
图 ２ 氮源种类对菌种生长的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ
生物量（ ＯＤ６００） 生物量（ ＯＤ６００）
２．３ 碳源浓度对菌种生长的影响 培 养 基 中 大 豆 蛋 白 胨 质 量 分 数 固 定 为 １％，
分不变， 接种培养， 每隔 ２ ｈ 测定生物量并绘制生 长曲线。由图 ２ 可知， 大豆蛋白胨作为种子培养基 的氮源优于其它种类的氮源。菌种对无机氮源利 用 速 度 较 慢 ， 对 豆 粕 粉 的 利 用 速 度 更 慢 ， 其 ＯＤ６００ 一直处于较低的水平。
纳豆激酶发酵培养基的优化
纳豆激酶发酵培养基的优化姓名: 黄江坤班级：制药132学号：201304040225纳豆激酶发酵培养基的优化一、菌种选择选用纳豆枯草杆菌为发酵菌种二、纳豆菌的特性纳豆菌，通常为（0.7-0.8）um×(2.0-3.0)um,革兰氏阳性。
生长在葡萄糖琼脂的细胞原生质染色均匀。
芽孢椭圆形或柱状，中生或偏中生，即使孢囊膨大，也不显著，有鞭毛，能运动。
生长温度最高为45-55℃，最低为5-20℃。
孢子耐热性强。
三、纳豆激酶基因的表达NK基因起始密码子为GTG,其上游1b7p处为核糖体结合位点AAAGGAG,SD序列上游为刀T含量高达2%的转录调控区域,1143bp的阅读框架编码29个氨基酸的信号肚,77个氨基酸的前导肽及275个氨基酸的成熟肽。
结构基因的3末端为连续3个终止密码子TAA、TAG、TAA,终止密码子之后一段序列可形成茎环结构,即因子非依赖性终止顺序。
NK的最初产物是381氨基酸的蛋白前体。
其中N端的1一23氨基酸残基是信号肽,24一106氨基酸残基是前导肽。
蛋白前体切除N 端的106个氨基酸残基成为275氨基酸残基的成熟纳豆激酶;而去掉信号肽的产物(含前导肽和成熟肽)称为纳豆激酶酶原。
信号肽包含一个带3个正电荷的亲水氮端以及一段不带电荷的疏水残基序列,其功能是使NK正常分泌出胞外,其切割位点位于Ala一Glu一Aal保守序列之后。
信号肽与成熟肽之间具有的前导肽具有帮助NK正常折叠形成活性构象的功能,目前己发现一些与NK基因同源的枯草杆菌素蛋白及链激酶有与此相似的前肽区域。
四、纳豆激酶的蛋白质结构及生化性质：纳豆激酶（NK）是一种丝氨酸蛋白酶，由275个氨基酸组成的单链多肽结构。
NK肽链无二硫键,活性中心在Asp32,His64和Ser221,与底物结合部位在Serl25,Lenl26和Glyl27处。
NK与大多数枯草杆菌蛋白酶在核苷酸序列上和肽链链氨基酸组成上具有高度同源性,它与B.subtilis1168产生的枯草杆菌蛋白酶E仅有13个核苷酸不同,在肽链组成上仅有2个氨基酸不同,它们成熟肽链一级结构的相同性为99.5%;纳豆激酶等电点为pH8.6,纳豆激酶在pH6.0一12.0范围内稳定,pH低于5.0则不稳定。
2008 纳豆菌的分离及其发酵条件的优化
将培养液稀释 25 倍后 ,以接种前培养基同样方法 稀释后为空白对照 ,用分光光度计读取 660 nm 处的 吸光值 OD660 。 11 51 2 样品成分分析
样品成分采用紫外扫描光谱法和高效液相色谱法 ( H PL C) [9 ] 分析测定 。 11 51 3 发酵液中样品含量的测定
用氨基酸分析仪分别测定发酵液水解前后谷氨酸 的含量 ,其差值即为γ2P GA 的含量 。水解条件为 :离 心除菌的上清液与 6 mol ·L - 1 HCl 按 1 ∶1 (体积比) 加入水解管中密封后于 110 ℃水解 12 h 。
增大 ,当蛋白胨浓度达到 40 g ·L - 1 后 ,γ2P GA 产量增 幅渐趋平缓 。从经济角度考虑 ,选择适宜蛋白胨浓度 为 40 g ·L - 1 。
mai丽等 :纳豆菌的分离及其发酵条件的优化/ 2008 年第 10 期
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液体发酵培养基 ( g ·L - 1 ) :大豆蛋白胨 30 ,葡萄 糖 40 ,谷氨酸钠 30 , NaCl 15 , K2 H PO4 21 0 , KH2 PO4 41 0 ,MgSO4 01 5 ,CaCl2 01 25 及少量生物素[8 ] 。
(1) 葡萄糖浓度的影响 其它条件相同 ,添加不同浓度的葡萄糖以考察其 对γ2P GA 产量的影响 。结果见图 2 。
纳豆激酶发酵条件的优化
纳豆激酶发酵条件的优化董超;李楠;程辉彩;张根伟;史延茂【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2009(030)001【摘要】利用Plackett-Burman方法对影响纳豆芽孢杆菌液体发酵的各因素进行评价,筛选出对产纳豆激酶有显著效应的主要因素是豆饼粉浓度.在此基础上, 用响应面分析法对发酵培养基中的豆饼粉浓度、CaCl2浓度、葡萄糖浓度进行优化.所得的最优培养基成分为葡萄糖1%、豆饼粉3%、KH2PO4 0.2%、K2HPO4·3H2O 0.26%、MgSO4·7H2O 0.1%、CaCl2 0.12%.拟合实验结果显示,纳豆激酶液体发酵液的酶活由初始培养条件的约1800U/ml提高到优化后的2226.06U/ml.【总页数】4页(P151-154)【作者】董超;李楠;程辉彩;张根伟;史延茂【作者单位】河北生生物研究所,河北,石家庄,050081;河北生生物研究所,河北,石家庄,050081;河北生生物研究所,河北,石家庄,050081;河北生生物研究所,河北,石家庄,050081;河北生生物研究所,河北,石家庄,050081【正文语种】中文【中图分类】Q946.5【相关文献】1.菜籽粕固态发酵产纳豆激酶条件的优化 [J], 廖杰琼;陈力力;杨伊磊;青文哲;康汝罄2.产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌发酵条件的\r响应面优化 [J], 田莉;卢轶男;朱建;张佑红3.纳豆激酶豆乳液体发酵条件优化 [J], 倪楠; 辛志宏; 许斌; 张丽静; 王艳; 江均平; 王凤忠; 李淑英4.低嘌呤、高纳豆激酶活性枯草芽孢杆菌SH21筛选及发酵条件优化 [J], 庞远祥;谢远红;金君华;刘慧;张红星5.浅析纳豆激酶固体发酵条件优化 [J], 臧学丽;李亚芹;曾凤英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纳豆菌的分离及其发酵条件的优化
１ 实验
１ １ 材 料 、 剂 与 仪 器 ． 试
（ 水蛭 的刺 细胞 ） 如 也能 合 成 Ｐ ｌ 。 ＧＡ ３ ＿ 棚 聚谷 氨 酸是一 种水 溶性 可 生物 降解 的高分 子 生
物 材料 ， 作 为药物 载体 、 释剂 、 湿剂 、 稠 剂 、 可 缓 保 增 苦 味掩盖 剂 、 防冻剂 、 物 絮凝 剂 、 金属 和 放 射 性 金属 生 重
中 图分 类 号 ： ３ Ｔ ９ Ｑ９９ Ｑ ２ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ ２ ５ ２ （ ０ ８ １ 一０ ６ 一Ｏ １７— ４５２０）Ｏ Ｏ８ ５
聚谷 氨 酸 （－ ＧＡ） 一 种 由 Ｄ 谷 氨 酸 和 Ｌ谷 ７Ｐ 是 一 ＿ 氨酸 通过 谷 氨酰 键 结合 而 成 的特 殊 阴离 子 聚合 物 ，
ＡＴＣ ９ ５ Ｅ Ｃ９ ４ ａ 、 Ｂ． ｕ ｔｌｓ Ｆ０３ ３ ］和 Ｂ． ｕ ｔｌ ｓｂ ｉ Ｉ ｉ ３ ５。 Ｅ ｓ ｂｉｉ ｓ
图
２８ ｏ ５ｏ０ Ｃ ０ ，Ｉ ． ｈ ０Ｖ． Ｎ １ 亏与生物 互程 ２
ｅ ｉｔｙ ＆ Ｂｉｅ ｇ ｎ ｅ ｉ ｇ ｍ ｓｒ ｏ ｎ ｉ ｒｎ
纳 豆 菌 的分 离及 其发 酵 条 件 的优 化
张艳丽 ， 高 华 ， 兹 东 ， 小 红 于 刘
（ 岛大学 医学 院药 学 系， 东 青 岛 ２ ６ ２ ） 青 山 ６ ０ １
液相 色谱 仪 ， ｅｋ ｎ６ ０ Ｂ ｃ ｍａ ３ ０型氨基 酸分 析 仪等 。
１ ２ 培 养 基 ．
Ｐ ＧＡ・ 仅发 生 于 荚膜 壁 中 ， 目前 仍 以 能将 Ｐ 故 ＧＡ分
泌 至 培养 基 中的 芽 孢 杆 菌 属 细 菌 （ 为 Ｇ 菌 ） 主 均 为 要 研 究对 象 ， 中研 究 较 为深 入 的 有 Ｂ １ ｈｎｆ ｒ ｓ 其 ． ｉ ｅ ｉｏｍｉ ｃ
发酵对食品中纳豆菌的培养和利用研究
发酵对食品中纳豆菌的培养和利用研究纳豆菌是一种常见的发酵菌，被广泛利用于食品生产中。
纳豆菌能够通过发酵作用将大豆中的蛋白质、淀粉和脂肪等转化为多种对人体有益的物质，如纳豆激活酶、有机酸、维生素等。
本文将探讨纳豆菌的培养和利用研究。
纳豆菌的培养是纳豆制作过程中的关键步骤之一。
通常情况下，纳豆菌的培养是通过将纳豆菌种子和大豆一起放入特定温度和湿度的环境中进行的。
这个环境需要提供适宜的温度、湿度和氧气浓度，以促进纳豆菌的繁殖和发酵过程。
纳豆菌在发酵过程中产生的纳豆激活酶是纳豆菌最具价值的产物之一。
纳豆激活酶具有活化人体纤溶酶原的作用，能够减少血栓形成的发生和预防动脉硬化。
因此，纳豆激活酶在医药领域具有广泛的应用前景。
研究人员通过对纳豆菌的培养条件进行控制和优化，以提高纳豆激活酶的产量和活性。
他们发现，温度、pH值、氧气浓度和培养基成分等因素对纳豆激活酶的产量和活性有着重要影响。
通过调节这些因素，可以有效地提高纳豆菌的培养效率和产酶能力。
此外，纳豆菌在发酵过程中还会产生多种有机酸，如乙酸、丙酸、醋酸等。
这些有机酸不仅可提供纳豆菌在发酵过程中所需的能量，还能赋予纳豆独特的风味和口感。
因此，研究人员也对纳豆菌的发酵过程进行了优化，以提高有机酸的产量。
他们发现，适宜的温度、湿度和氧气浓度以及合适的培养基成分都能够促进纳豆菌的酸化作用，从而提高有机酸的产量。
此外，纳豆菌还富含多种维生素和矿物质，如维生素B6、维生素B12、钙、铁等。
这些物质对人体健康具有重要作用，如维生素B6可以促进蛋白质和脂肪的代谢，维生素B12可以提高人体的免疫力，钙和铁对于维持骨骼和血液健康也非常重要。
因此，纳豆菌被广泛应用于食品和保健品生产中，以提供人体所需的重要营养物质。
总结来说，纳豆菌的培养和利用研究主要集中在提高纳豆菌的产酶能力和改善发酵过程的效果。
通过优化培养条件和酵素液的提取方法，可以提高纳豆激活酶和有机酸的产量。
此外，纳豆菌还富含多种有益于人体健康的物质，如维生素和矿物质，因此被广泛应用于食品和保健品生产中。
纳豆提取物对两株细菌的抑制作用及其培养条件的优化
纳豆提取物对两株细菌的抑制作用及其培养条件的优化
朱宇刚;耿广青;樊美珍
【摘要】为了寻找天然的生物防腐剂和微生态制剂,对纳豆提取物的抑菌作用及其培养条件进行了研究.结果显示:最佳培养条件是接种量6%、含水量60%、物料厚
度1.92 cm、后熟时间2 d;抑制金黄色葡萄球菌RCEFD91013的碳源、添加物、无机盐和发酵时间的最佳因素水平组合为葡萄糖6%、酵母粉1%、MgSO4 0.3%、发酵时间48 h;抑制大肠杆菌RCEF091056的最佳组合为麦芽糖4%、酵母粉
1.5%、MgSO4 0.3%、发酵时间48 h.纳豆提取物质在pH6～8有较好的酸碱稳
定性,在80℃以下都有良好的热稳定性.Zn2+、Cu2+、Fe3+和Ca2+对抑菌物质
抑菌效果有较大的影响.表明纳豆提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有一定的抑
制作用,纳豆提取物的稳定性较强.
【期刊名称】《热带作物学报》
【年(卷),期】2010(031)012
【总页数】6页(P2174-2179)
【关键词】纳豆菌;抑菌作用;固体发酵;发酵条件优化
【作者】朱宇刚;耿广青;樊美珍
【作者单位】安徽农业大学微生物防治省重点实验室,安徽合肥,230036;安徽农业
大学微生物防治省重点实验室,安徽合肥,230036;安徽农业大学微生物防治省重点
实验室,安徽合肥,230036
【正文语种】中文
【中图分类】Q93。
纳豆激酶产生菌的固体发酵参数优化
纳豆激酶产生菌的固体发酵参数优化周伏忠;贾蕴莉;陈国参;陈晓飞;赵艳玲【期刊名称】《河南科学》【年(卷),期】2008(26)8【摘要】对影响纳豆激酶产生茵固体发酵时产酶影响因子如碳源/氮源、含水量、温度、pH和培养时间等进行了优化.实验结果表明,菌株1适宜的固体发酵产酶培养基豆粕:麸皮比为3:1;菌株2适宜的固体发酵产酶培养基豆粕:麸皮比为1:1时产酶活性最高;菌株1适宜的培养基含水以50%最好,菌株2以70%最好;培养基初始pH均在7.0时酶活最高;发酵温度均以25℃最好,不易超过30℃;两个菌株的适宜发酵时间分别为36h(菌株1)和72 h(菌株2).在优化发酵条件下,两个菌株单位发酵物中纤溶酶平均酶活力可分别达到1 407.25 U/g(菌株1)和953 U/g(菌株2).【总页数】3页(P931-933)【作者】周伏忠;贾蕴莉;陈国参;陈晓飞;赵艳玲【作者单位】河南省微生物工程重点实验室,郑州,450008;河南省科学院,生物研究所有限责任公司,郑州,450008;河南省微生物工程重点实验室,郑州,450008;河南省科学院,生物研究所有限责任公司,郑州,450008;河南省微生物工程重点实验室,郑州,450008;河南省科学院,生物研究所有限责任公司,郑州,450008;河南省微生物工程重点实验室,郑州,450008;河南省科学院,生物研究所有限责任公司,郑州,450008【正文语种】中文【中图分类】Q939.9【相关文献】1.纳豆激酶固体发酵研究进展 [J], 臧学丽2.产纳豆激酶菌株液体及固体发酵工艺初步研究 [J], 明飞平;梁淑娃;夏枫耿;彭中健;谭颖嫦3.传统发酵豆制品中纳豆激酶产生菌的筛选及发酵培养基的优化 [J], 满丽莉;向殿军4.浅析纳豆激酶固体发酵条件优化 [J], 臧学丽;李亚芹;曾凤英5.纳豆激酶固态发酵的参数优化 [J], 周伏忠;陈晓飞;陈国参;谢宝恩;宁萌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纳豆激酶高产菌诱变选育及发酵工艺优化
纳豆激酶高产菌诱变选育及发酵工艺优化纳豆激酶是纳豆芽孢杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶,于日本纳豆食品中发现的。
经研究发现,纳豆激酶具有溶解血栓的功能,可作为治疗和预防血栓性疾病药物。
本研究是从日本进口纳豆食品中筛选到一株纳豆激酶活性高的菌株,采用紫外诱变筛选出突变株并提高酶活大小,并对突变株进行发酵工艺优化,为以后纳豆激酶工业化生产提供参考。
研究内容和结果如下:本试验使用酪蛋白平板初筛,纤维蛋白平板进行复筛,从日本北海道生产的纳豆食品最终筛选到了5株产纳豆激酶的菌株,其中菌株XD2的酶活最高,为989.3 U/mL。
对菌株进行16S rDNA分子鉴定,菌株XD2与枯草芽孢杆菌同源性达99%。
结合系统进化树确定菌株XD2是枯草芽孢杆菌。
以原始菌株XD2为出发菌株,通过紫外诱变,根据酶活大小筛选突变菌株。
确定了最佳紫外照射时间为150 s,致死率为84.09%。
在该条件下筛选到6株菌株,其中突变株XD7的酶活最高,达到1137.15 U/mL。
相比于原始菌株XD2,酶活提高了15%。
对其进行了5次传代,酶活变化不大,说明其遗传稳定性。
从发酵曲线看出纳豆激酶是生长关联性代谢产物,综合分析确定后续发酵时间为48 h。
以突变株XD7为生产菌株,对发酵培养基成分采用单因素试验考察了碳源、氮源、无机盐和表面活性剂,并设计正交试验进行优化,确定了发酵培养基最佳配方为:葡萄糖1.5%,大豆蛋白胨1%,十二水合磷酸氢二钠0.2%,磷酸二氢钠0.1%,无水硫酸镁0.1%,二水合氯化钙0.06%。
酶活达到1492 U/mL。
对发酵条件采用单因素试验考察了温度、初始pH、接种量和装液量,并设计响应面试验进行优化,确定了最佳的发酵条件:温度36.63℃,接种量2.36%,装液量46.71 mL,初始pH为7,转速150 r/min。
酶活达到1598.13 U/mL。
以突变株XD7为生产菌株,采用优化后的培养基和发酵条件,具有最高的产酶量,酶活达到1598.13 U/mL,相较于原始菌株XD2酶活989.3 U/mL,酶活总共提高了61.54%。
纳豆菌的分离及其发酵条件的优化
纳豆菌的分离及其发酵条件的优化张艳丽;高华;于兹东;刘小红【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2008(25)10【摘要】γ-聚谷氨酸是一种应用广泛且具有开发潜力的生物高分子材料,其分子结构变化较大且易与多糖和其它生物聚合物共同产生.从纳豆中分离得到一株γ-聚谷氨酸高产菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.确定优化的培养基组成(g·L-1)为:大豆蛋白胨40,葡萄糖50,谷氨酸钠40,氯化钠30,适量微量元素和生物素.优化的培养条件为:37℃、pH值7.0、装液量40 mL/250 mL、250 r·min-1摇床培养48 h.优化条件下γ-聚谷氨酸产量可达32.7 g·L-1.经紫外扫描和高效液相色谱分析,确定产物为谷氨酸单体组成的聚合物,不具备典型肽或蛋白质特征.【总页数】5页(P68-72)【作者】张艳丽;高华;于兹东;刘小红【作者单位】青岛大学医学院药学系,山东,青岛,266021;青岛大学医学院药学系,山东,青岛,266021;青岛大学医学院药学系,山东,青岛,266021;青岛大学医学院药学系,山东,青岛,266021【正文语种】中文【中图分类】Q939;TQ92【相关文献】1.用Box-Behnken设计优化纳豆菌NT-6菌株固态发酵生产抗菌脂肽条件 [J], 孙东方;汪文静;邓旗;王雅玲;孙力军2.纳豆菌的分离、鉴定及产蛋白酶液态发酵条件的优化 [J], 王素英;田立丹;沈亚薇;李枫3.纳豆菌DU115菌株发酵豆乳产酶条件的优化 [J], 刘新梅;高宇;董明盛4.纳豆菌发酵条件优化及纳豆产品的感官评价 [J], 朱俊雅;张公亮;刘兆芳;王梓旭;孙黎明;侯红漫5.纳豆菌的发酵条件优化及纳豆制备方法改良 [J], 韩烨;周志江;肖华志;王占忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纳豆菌体外抑制大肠杆菌的培养基优化
纳豆菌体外抑制大肠杆菌的培养基优化
张丽靖;陈志良;杨郁
【期刊名称】《生物技术》
【年(卷),期】2009(19)1
【摘要】目的:考察纳豆菌培养基组成对其增长倍数及抑菌效果的影响。
方法:将纳豆菌N7对大肠杆菌的体外抑制作用进行动力学分析,通过单因素试验及正交试验确定纳豆菌抑制大肠杆菌效果最佳的优化培养基。
结果:大肠杆菌培养24h时,纳豆菌上清液对其抑菌达到最强并趋于稳定。
获得纳豆菌优化培养基:乳糖2%,蛋白胨4%,Na2HPO40.2%,L-赖氨酸0.2%。
结论:纳豆菌对致病性大肠杆菌抑制作用较强,为其作为微生态制剂提供一定理论依据。
【总页数】3页(P40-42)
【关键词】纳豆菌;体外抑制;增长倍数;培养基优化
【作者】张丽靖;陈志良;杨郁
【作者单位】浙江大学宁波理工学院;浙江医药高等专科学校
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-335
【相关文献】
1.高产纳豆激酶地衣芽孢杆菌工程菌全合成培养基优化 [J], 赵新宇;陈杨阳;陈敬帮;蔡冬波;魏雪团
2.纳豆菌的抗菌作用及其培养基的优化 [J], 钟青萍;佘世望;梁胜媛
3.海绵放线菌发酵产物抑制大肠杆菌的发酵培养基优化 [J], 谢璐;林建木;叶茜;涂培友;孙妍
4.1株纳豆菌抑菌活性及其培养基优化 [J], 张丽靖;杨郁
5.传统发酵豆制品中纳豆激酶产生菌的筛选及发酵培养基的优化 [J], 满丽莉;向殿军
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高产脂肽优良纳豆菌的选育的开题报告
高产脂肽优良纳豆菌的选育的开题报告一、研究背景纳豆菌是一种含有丰富的蛋白质和氨基酸的发酵食品，其菌丝中含有大量活性脂肽，可以抑制多种细菌和病毒的生长，具有良好的保健作用。
在市场需求不断增大的情况下，如何选育高产脂肽优良纳豆菌，成为了当前研究的热点。
二、研究目的与意义本研究旨在选育高产脂肽优良纳豆菌，并探索其菌丝中活性脂肽的抑菌活性及保健作用，为纳豆菌产业的发展提供科学依据，同时有助于解决人们在保健方面的需求。
三、研究内容与方法1. 纳豆菌地方品种筛选及优化培养条件从不同地区采集纳豆菌样品，初步筛选出适应性强、产量高的地方品种，并通过改变培养条件，如pH、温度等，进一步优化产量。
2. 活性脂肽含量测定及抑菌活性测试采用最优培养条件培养纳豆菌，通过酸解提取方法测定其菌丝中活性脂肽的含量，并对其抑菌活性进行测试。
3. 纳豆菌保健功能评价采用小鼠体内实验和人体试验相结合的方法，评价纳豆菌菌丝中活性脂肽的保健功能。
四、预期成果1. 选育出高产脂肽优良纳豆菌品种。
2. 测定纳豆菌菌丝中活性脂肽的含量及其抑菌活性。
3. 对纳豆菌活性脂肽的保健功能进行评价，明确其在预防和治疗某些疾病方面的作用。
五、研究进度安排第一年：1. 纳豆菌地方品种筛选及优化培养条件，初步培育高产品种。
2. 测定初步培育的纳豆菌种菌丝中活性脂肽的含量及其抑菌活性。
第二年：1. 选育高产脂肽优良纳豆菌品种。
2. 测定高产品种菌丝中活性脂肽的含量及其抑菌活性。
第三年：1. 对纳豆菌活性脂肽的保健功能进行评价。
2. 撰写学位论文。
六、预期贡献本研究选育出高产脂肽优良纳豆菌品种并评价其保健功能，可为纳豆菌产业提供科学支撑。
同时，也可以为相关领域的研究人员提供丰富的研究素材，为保健食品的发展提供有益的启示。
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３．０
２．５
２．０
１％大 豆 蛋 白 胨
１．５
３％大 豆 蛋 白 胨
１．０
５％大 豆 蛋 白 胨
７％大 豆 蛋 白 胨 ０．５
０ ０ ６ １２ １８ ２４ ３０ ３６ 培 养 时 间／ｈ
图 ４ 氮源浓度对菌种生长的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ
０．５％， 大豆蛋白胨质量分数分别为 １％、３％、５％、 ７％， 接种培养， 每隔 ２ ｈ 测定生物量并绘制生长曲 线。由图 ４ 可知， 大豆蛋白胨的适宜质量分数为 ３％， 培养 １６ ｈ 时达到最大生长量， 即 ＯＤ６００ 为 ２．６７７。 １％、５％和 ７％的大豆蛋白胨分别在 １６、２０、２０ ｈ 达 到最大生长量， 且其最大生长量均小于 ３％的大豆 蛋白胨。使用 ３％的大豆蛋白胨， 可在较短的时间 内达到最大生长量， 缩短了生产周期， 提高了设备 利用率， 降低了生产成本。
关键词 纳豆菌 培养基 二次旋转正交试验 文章编号 １００９－ ７８４８（ ２００８） ０１－ ００３３－ ０５
１９０５ 年 Ｓｈｉｎ Ｓａｗａｍｕｒａ 将产生纳豆粘性物质 的一种菌作为独立的纳豆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔｔｏ） 提出。 纳豆菌的生产菌种是从日本的一种传统大豆发酵 食品— ——纳豆中提取出来的， 它是好氧的革兰氏 阳性菌［１］， 属细菌科、芽孢杆菌属， 是枯草芽孢杆菌 的一个亚种［２］。１９８７ 年， 日本的须见洋行从纳豆中 提取出具有溶血栓功能的物质， 将其定名为纳豆 激酶［３］。经试验验证其有溶纤效果［４］， 并有望成为新 一代抗栓药物［５］。目前， 对纳豆菌生长培养基的研 究报道很少。本文研究了纳豆菌生长培养基的成 分， 为优化纳豆激酶产酶条件奠定了良好的基础。
各因素对菌种生长的贡献率依次为 ｘ２＞ｘ１＞ｘ４＞ ｘ３＞ｘ５， 即各因素对菌种生长的影响依次为大豆蛋 白胨＞葡萄糖＞Ｋ２ＨＰＯ４＞ＭｇＳＯ４＞ＫＨ２ＰＯ４。
验证试验， 分别在基础种子培养基和优化培 养基中接种， 在相同条件下培养 １４ ｈ， 测定 ＯＤ６００。 优化前、后 ＯＤ６００ 值分别为 １．８６６ 和 ２．５４０， ＯＤ６００ 值 提高了 ０．６７４， 优于五元二次旋转正交设计（ １／２） 的 ３６ 组试验。
ＮａＣｌ ０．５％， 葡萄糖质量分数分别为 ２％、３％、４％、 ５％， 接种培养， 每隔 ２ ｈ 测定生物量并绘制生长曲 线。由图 ３ 可知， 葡萄糖的最适质量分数为 ２％， 菌 种的生长量处于较高的水平。以葡萄糖作碳源， 其 菌种生长的延滞期较短， 说明菌种对于葡萄糖的 利用速度较快。 ２．４ 氮源浓度对菌种生长的影响
由图 ５ 可知， ＭｇＳＯ４ 适宜的质量分数为 ０．１％， 且在培养 １８ ｈ 达到最大生长量， 即 ＯＤ６００ 为 ２．２２５。 ０．２％ ＭｇＳＯ４ 是 在 培 养 ２２ ｈ 时 达 到 最 大 生 长 量 ， ０．０５％ ＭｇＳＯ４ 是在培养 ２０ ｈ 时达到最大生长量， 其它均在 １８ ｈ 达到最大生长量， 但其 ＯＤ６００ 值均 小于 ０．１％ ＭｇＳＯ４ 的。
豆粕粉
硝酸铵 ０．５
０ ０ ４ ８ １２ １６ ２０ ２４ 培 养 时 间／ｈ
图 ２ 氮源种类对菌种生长的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ
生物量（ ＯＤ６００） 生物量（ ＯＤ６００）
２．３ 碳源浓度对菌种生长的影响 培 养 基 中 大 豆 蛋 白 胨 质 量 分 数 固 定 为 １％，
第８卷 第１期 ２００８ 年２月
中国食品学报
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｖｏｌ． ８ Ｎｏ． １ Ｆｅｂ． ２ ０ ０ ８
纳豆菌高产培养基的成分优化
张丽萍 １， ３ 满丽莉 ２ 马中苏 １ （ １ 吉林大学生物与农业工程学院 吉林长春 １３００２２ ２ 黑龙江农业经济职业学院 黑龙江牡丹江 １５７０００ ３ 黑龙江八一农垦大学
对回归方程求一阶偏导， 当到达局部最优点时， 导 数为零， 此计算点为驻点。经计算此驻点为极小 值， 而该方程的端点 ｆ（ ２， － ２， ２， － ２， ２） 为最大值。将 编码值换算成实际值时， 按 Ｚｊ＝Ｚ０ｊ＋ｘｊΔｊ 进行计算以 确定优化培养基成分， 即： 葡萄糖 ３％、大豆蛋白胨 ２％、ＭｇＳＯ４ ０．２％、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．１％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．２％。
收稿日期： ２００７－ ０２－ ２８ 基金项目： 黑龙江省教育厅科学技术研究项目（ Ｎｏ． １０５４１１５０） 作者简介： 张丽萍， 女， １９５７ 年出生， 博士生， 教授 通讯作者： 马中苏
度 计 （ Ｔ６ 新 世 纪 ） ， 北 京 普 析 通 用 仪 器 有 限 公 司 ； 超级洁净工作台（ ＢＣＮ－ １３６０） ， 哈尔滨市东联电子 技 术 开 发 有 限 公 司 ； 压 力 蒸 汽 灭 菌 锅 （ ＹＸＣＥ． ＳＧ４１．２８０Ａ） ， 上海医用核子仪器厂 ； ｐＨ 计 （ ＳＧ２） ， 上海梅特勒－ 托利多仪器有限公司。 １．３ 培养方法
ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ
第８卷 第１期
纳豆菌高产培养基的成分优化
３５
２．５ 离子组成对菌种生长的影响 ２．５．１ ＭｇＳＯ４ 质量分数 将基础种子培养基中的 ０．５％ ＮａＣｌ 用不同质量分数的 ＭｇＳＯ４ 替代， 其它 成分不变， 接种培养后每隔 ２ ｈ 测定生物量， 绘制 生长曲线。不同 ＭｇＳＯ４ 质量分数对菌种生长的影响 见图５。
一般来说， Ｇ＋对镁离子的需要量比 Ｇ－ 大。本试 验菌株为革兰氏阳性菌（ Ｇ＋） ， 因此， ＭｇＳＯ４ 浓度是 影响菌种生长的因素之一。 ２．５．２ Ｋ２ＨＰＯ４ 和 ＫＨ２ＰＯ４ 浓度 将基础种子培养 基 中 的 ０．５％ ＮａＣｌ 用 不 同 浓 度 比 的 Ｋ２ＨＰＯ４ 和 ＫＨ２ＰＯ４ 代替， 其它 成 分 不 变 ， 接 种 培 养 ， 每 隔 ２ ｈ 测定其生物量并绘制生长曲线 （ 见图 ６） 。由图 ６ 可 知 ， Ｋ２ＨＰＯ４ 与 ＫＨ２ＰＯ４ 的 适 宜 浓 度 比 为 １∶１， 在 培 养 １２ ｈ 时 达 到 最 大 生 长 量 ， 其 ＯＤ６００ 值 为 ２．２２２， 明显优于其它浓度比的， 且提前 ２ ｈ 达到最 大生长量。
１ 材料与方法
１．１ 材料 纳豆菌 Ｔ－ ３， 本研究室工作人员自行分离。 基础种子培养基： 牛 肉 膏 ０．３％、蛋 白 胨 １％、
ＮａＣｌ ０．５％， ｐＨ ７．２～７．４， １２１ ℃灭菌 ２０ ｍｉｎ。 １．２ 设备与仪器
恒温震荡培养箱（ ＨＧＣＥ－ Ｆ１６０） ， 哈尔滨市东 联电子技术开发有限公司； 电热恒温培养箱（ ＲＰ－ ９０８２） ， 上海森信实验仪器有限公司； 紫外分光光
分不变， 接种培养， 每隔 ２ ｈ 测定生物量并绘制生 长曲线。由图 ２ 可知， 大豆蛋白胨作为种子培养基 的氮源优于其它种类的氮源。菌种对无机氮源利 用 速 度 较 慢 ， 对 豆 粕 粉 的 利 用 速 度 更 慢 ， 其 ＯＤ６００ 一直处于较低的水平。
２．５
２．０
１．５
蛋白胨
大豆蛋白胨
１．０
优化培养： 在无菌条件下接种种子培养液至 装有一定量培养基的 ２５０ ｍＬ 三角瓶中， 恒温震荡 培养。 １．４ 生物量测定方法
发酵完成后， 取 １ ｍＬ 发酵液适当稀释， 以接 种前的培养基经同样方法稀释后作为空白， 用紫 外分光光度计测定菌液的 ＯＤ６００ｎｍ 值。
２ 结果与分析
２．１ 碳源种类对菌种生长的影响 将 基 础 种 子 培 养 基 中 ０．３％牛 肉 膏 更 换 为 同
ＫＨ２ＰＯ４ 的使用量采用五元二次旋转正交试验 （ １／ ２） 方法， 将单因素确定的适宜浓度作为零水平， 以 菌种培养 １４ ｈ 时的 ＯＤ６００ 为指标， 确定优化的培 养基组成。其因素水平编码及水平设置见表 １， 结 果见表 ２。
经双重显著性检验得到回归方程为： ｙ＝１．９８６＋０．０８２ｘ１－ ０．０４８ｘ２－ ０．０３８７ｘ４－ ０．０３９８ｘ５－ ０．０２１９ｘ２ｘ３－ ０．０２１５ｘ２ｘ５＋０．０２１１ｘ１２＋０．０２５６ｘ２２＋０．０３２６ ｘ３２＋ ０．０１９ｘ４２＋０．０１３８ｘ５２ 经 过 ２ 次 Ｆ 检 验 （ Ｐ＜０．０５） ， 该 方 程 拟 合 效 果 较好， 可作为优化模型。该方程局部最优点是最佳 的试验水平， 利用求偏导数的方法求解最优水平。
黑龙江大庆 １６３３１９）
摘要 为获得生长活力较强， 能够满足发酵生产纳豆激酶要求的菌种， 以 ＯＤ６００ 为评价指标， 采用测定菌种生长 曲线的方法优化培养基配比， 利用单因素试验确定适宜菌种生长的培养基成分， 并以得到的适宜条件作为五元 二次旋转正交设计的零水平进行系统优化。试验结果表明： 培养基成分的 最 优 组 合 为 葡 萄 糖 ３％、大 豆 蛋 白 胨 ２％、ＭｇＳＯ４ ０．２％、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．１％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．２％。在优化条件下， 菌种培养 １４ ｈ 后菌液的 ＯＤ６００ 值可达到 ２．５４０， 较 优化前提高了 ０．６７４。
３６
中国食品学报
第８卷 第１期
表 １ 二次旋转（ １／２） 正交试验因素水平编码及水平设置 Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒ－ ｌｅｖｅｌ ｃｏｄｅ ａｎｄ ｌｅｖｅｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄ ｏｒｄｅｒ ｒｅｖｏｌｖｉｎｇ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
培 养 基 中 葡 萄 糖 质 量 分 数 固 定 为 ２％ ， ＮａＣｌ
３．０
２．５
２．０
２％葡 萄 糖
３％葡 萄 糖
１．５
４％葡 萄 糖
５％葡 萄 糖 １．０
０．５
０ ０ ４ ８ １２ １６ ２０ ２４ 培 养 时 间／ｈ