植物生理实验希尔反应
希尔反应
植物生理学实验报告实验名称：离体叶绿体希尔反应的观察——染料还原法姓名：学号：系别：班级：实验日期：2012.12.05同组姓名：实验报告内容一、摘要实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象，由离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2,6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化，观察希尔反应。
在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管，在光下由蓝色变为绿色（由于叶绿体存在的原因）；暗处的试管仍为蓝色。
二、实验原理希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等）。
三、实验目的以菠菜叶片的离体叶绿体为实验对象，根据2,6 -二氯酚靛酚再光下从蓝色到无色的变化，观察离体叶绿体的希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。
四、实验器材和试剂实验材料：新鲜菠菜叶片实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、剪刀、移液管、试管等实验试剂：（1）叶绿体提取液（0.067mol/L磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3moi/L蔗糖+0.01mol/LKCl）；（2）0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067mol/L磷酸缓冲液+0.01%KCl）五、实验步骤1.离体叶绿体悬浮液的制备称取8g叶片，加10ml预冷提取液研磨，在研钵中捣碎30秒钟后继续加入15ml冷提取液；经过二层纱布过滤，去残渣，挤出滤液，置于离心管中。
以1000转/分离心3分钟；弃去沉淀(破碎的细胞或组织残渣)。
将上清液移至另一离心管中，再以3000转/分离心8分钟，弃去上清液，沉淀为破碎的叶绿体。
沉淀悬浮于20ml 的提取液中，此即为叶绿体悬浮液。
2.离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和2ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚，混匀。
一试管置于阳光下，另一试管置于黑暗处。
5min后在两试管中分别继续加入2ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚，置于与之前相同的环境中，10min后对比观察两试管颜色的不同。
叶绿体希尔反应实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解希尔反应的基本原理和过程。
2. 掌握希尔反应实验的操作步骤。
3. 通过观察希尔反应现象，加深对光合作用光反应过程的理解。
二、实验原理希尔反应（Hill reaction）是指在光照条件下，绿色植物的叶绿体裂解水，释放氧气并还原电子受体的反应。
该反应由英国科学家罗伯特·希尔发现，故称希尔反应。
希尔反应是光合作用光反应过程中的一个重要环节，其基本原理如下：1. 在光照条件下，叶绿体中的水分子被光能激发，分解为氧气、质子和电子。
2. 分解产生的氧气从叶绿体释放到外界。
3. 电子通过电子传递链传递，最终被还原为NADPH或NADH。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：菠菜叶、蒸馏水、2,6-二氯酚靛酚（2,6-DICP）、磷酸缓冲液、蔗糖、KCl、离心机、分光光度计、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等。
2. 实验试剂：提取液（0.067M磷酸缓冲液，pH 6.5，0.3M蔗糖，0.01M KCl）、0.1% 2,6-二氯酚靛酚（溶于0.067M磷酸缓冲液0.01%KCl）。
四、实验步骤1. 准备菠菜叶，洗净后放入研钵中。
2. 加入适量蒸馏水，用研杵充分研磨，制成菠菜叶匀浆。
3. 将菠菜叶匀浆用纱布过滤，收集滤液。
4. 将滤液倒入离心管中，以3000 r/min离心10分钟，弃去上清液。
5. 向离心管中加入适量提取液，用研杵充分研磨，制成叶绿体悬浮液。
6. 将叶绿体悬浮液倒入比色皿中，用分光光度计测定其OD值。
7. 将叶绿体悬浮液分为两组，分别置于光照和暗处。
8. 在光照组中，加入适量2,6-DICP溶液，观察颜色变化。
9. 在暗处组中，加入适量2,6-DICP溶液，观察颜色变化。
10. 记录两组实验结果。
五、实验结果与分析1. 光照组实验结果显示，加入2,6-DICP溶液后，叶绿体悬浮液由蓝色变为无色。
2. 暗处组实验结果显示，加入2,6-DICP溶液后，叶绿体悬浮液仍为蓝色。
叶绿体的提取和希尔反应活性检测
叶绿体的提取和希尔反应活性检测摘要：通过差速离心法从油菜和青菜中提取叶绿体，并使用显微镜测微尺测量叶绿体的大小。
同时，利用收集到的叶绿体作为实验材料，对希尔反应活性进行检测，结果表明：高温和药物制剂会使叶绿体失活或者活性大大降低，从而影响希尔反应。
关键词：；差速离心法；叶绿体；希尔反应前言：叶绿体是植物细胞中极为重要的一种细胞器，同时绿色植物通过叶绿体进行光合作用制造氧气，供人类呼吸，对人类也是至关重要，因此对叶绿体进行一系列的研究就显得很有必要。
在提取叶绿体的时候采用研磨方法使细胞破碎得到匀浆液，采用差速离心法分离到较纯的叶绿体，并用显微镜测微尺测量所得叶绿体的大小。
利用提取到的叶绿体进行对希尔反应活性的检测，主要是向光照后的叶绿体溶液中加入2,6-二氯靛酚（2，6-DICP），用分光光度计检测其OD值，通过观察单位时间内OD值的变化间接得出光合作用产物H的产量及叶绿体活性的大小，从而总结出影响希尔反应活性的因素。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1生物材料油菜，青菜1.1.2器材小塑料盆，研钵，漏斗，纱布，离心管，5ml移液管，大橡皮头，试管，试管架，载玻片，盖玻片，比色杯，离心机，天平，水浴锅，分光光度计，光照培养室，显微镜，显微镜测微尺1.1.3试剂石英砂，冰块，提取介质：0.5mol/L蔗糖、10mmol/L NaCl;10mmol/L 2,6-DICP 溶液;2%Triton X-100.1.2 方法1.2.1提取叶绿体（1）在两个小塑料盆中装上冰块，其中一只装半盆冰块，从冰箱中取出一个冷冻的研钵，将研钵放入这个小塑料盆的冰块中。
另一只小塑料盆装满冰块，将离心管插入其中预冷。
（2）称取青菜叶和油菜叶各5g，分别剪碎，分别放入两个研钵，加入10ml预冷的提取介质和少许石英砂，在冰浴中迅速研磨成细浆，补加5ml提取介质。
将四层纱布铺在漏斗上再分别将淹没的细浆进行过滤，滤液收集到预冷的离心管中各10ml.（3）室温下800rpm离心3min，离心后分别将上清液倒入另外预冷的离心管中。
《植物生理学》重点内容考试必考
《植物⽣理学》重点内容考试必考⽔势：⽔溶液的化学势与纯⽔的化学势之差，除以⽔的偏摩尔体积所得商。
质外体途径：指⽔分通过细胞壁、细胞间隙等没有细胞质部分的移动，阻⼒⼩，移动速度快。
共质体途径：指⽔分从⼀个细胞的细胞质经过胞间连丝，移动到另⼀个细胞的细胞质，形成⼀个细胞质的连续体，移动速度较慢。
渗透作⽤：⽔分从⽔势⾼的系统通过半透膜向⽔势低的系统移动的现象。
蒸腾作⽤：指⽔分以⽓体状态，通过植物体的表⾯（主要是叶⼦），从体内散失到体外的现象。
被动运输：转运过程顺电化学梯度进⾏，不需要代谢供给能量。
主动运输：转运过程逆电化学梯度进⾏，需要代谢供给能量。
质外体：植物体内原⽣质以外的部分，是离⼦可⾃由扩散的区域，主要包括细胞壁、细胞间隙、导管等部分，因此⼜叫外部空间或⾃由空间。
共质体：指细胞膜以内的原⽣质部分，各细胞间的原⽣质通过胞间连丝互相串连着，故称共质体，⼜称内部空间。
物质在共质体内的运输会受到原⽣质结构的阻碍，因此⼜称有阴空间。
原初反应：指光和作⽤中从叶绿素分⼦受光激发到引起第⼀个光化学反应为⽌的过程。
希尔反应：在光照下，离体叶绿体类囊体能将含有⾼铁的化合物还原为低铁化合物并释放氧。
光和链：在类囊体摸上的PSII和PSI之间⼏种排列紧密的电⼦传递体完成电⼦传递的总轨道。
光和磷酸化：是指在光合作⽤中由光驱动并贮存在跨类囊体膜的质⼦梯度的能量把ADP和磷酸合成为ATP的过程。
同化⼒：由于ATP和NADPH⽤于碳反应中CO2的同化，把这两种物质合称为同化⼒。
光呼吸：植物的绿⾊细胞依赖光照，吸收O2和放出CO2的过程。
希尔反应：离体叶绿体在光下所进⾏的分解⽔并放出氧⽓的反应。
有氧呼吸：指⽣活细胞在氧⽓的参与下，把某些有机物质彻底氧化分解，放出CO2并形成⽔，同时释放能量的过程。
⽆氧呼吸：指在⽆氧条件下，细胞把某些有机物分解成为不彻底的氧化产物，同时释放能量的过程。
呼吸链：呼吸代谢中间产物的电⼦和质⼦，沿着⼀系列有顺序的电⼦传递体组成的电⼦传递途径，传递到分⼦氧的总过程。
《植物生理学》名词解释
《植物生理学》名词解释1、春化作用：春化作用是指低温促进植物开花的作用。
2、水分临界期：水分临界期是指植物在生命周期中，对缺水最敏感、最易受害的时期。
3、光形态建成：光形态建成是指光控制植物生长、发育和分化的过程。
4、三重反应：用乙烯处理植物幼苗后，出现的抑制伸长生长、促进茎增粗、促进茎横向生长的现象称为三重反应。
5、末端氧化酶：末端氧化酶是指处于生物氧化反应的最末端，将底物脱下的H+或e-传递给O2，从而形成H20或H2O2的氧化酶。
6、临界日长：临界日长是指诱导长日植物开花所需的最短日照长度或诱导短日植物开花所需的最长日照长度。
7、临界夜长：临界夜长是指诱导短日植物开花所需的最短暗期或诱导长日植物开花所需的最长暗期。
8、感性运动：感性运动是指植物受无定向的外界刺激而引起的运动。
9、向性运动：向性运动是指植物受外界单方向刺激产生的生长性运动。
10、向光性：向光性是指植物向光照入射方向弯曲的反应。
11、自由水：自由水是指距离胶粒较远而可以自由流动的水，其含量制约植物的代谢强度。
12、束缚水:束缚水是指靠近胶粒而被胶粒所束缚不易自由流动的水。
13、溶液培养法：又名水培法，是指在含有全部或部分营养元素的溶液中栽培植物的方法。
14、荧光现象：荧光现象是指叶绿素溶液在透射光下呈绿色，在反射光下呈红色的现象。
15、同化能力：由于ATP和NADPH用于碳反应中CO2的同化，因此将这两种物质统称为同化能力。
16、光补偿点：光补偿点是指同一叶片在同一时间内光合作用吸收的CO2与呼吸作用放出的CO2相等时的外界光照强度。
17、光饱和点：在一定范围内，植物的光合作用强度随光照强度的上升而增加，当光照强度上升到某一数值之后，光合作用强度不再随光照强度的上升而增加，这个数值称为光饱和点。
18、CO2补偿点：CO2补偿点是指在一定的光照条件下，叶片进行光合作用所吸收的CO2量与叶片进行呼吸作用所释放的CO2量达到动态平衡时，外界环境中的CO2浓度。
潘瑞炽《植物生理学》第六版课后名词解释
《植物生理学》潘瑞炽第六版名词解释第一章水势：水溶液的化学势与纯水的化学势之差，除以水的偏摩尔体积所得的商。
渗透势：即溶质势，是由于溶质颗粒的存在，降低了水的自由能，因而其水势低于纯水水势的水势下降值。
压力势：细胞原生质体吸水膨胀，对细胞壁产生一种作用力相互作用的结果，是由于细胞壁的压力存在而增加的水势的值。
质外体途径：水分通过细胞壁、细胞间隙等没有细胞质部分的移动，阻力小，速度快。
共质体途径：水分从一个细胞的细胞质通过胞间连丝，移动到另一个细胞的细胞质，形成一个细胞质的连续体。
渗透作用：水分从水势高的系统通过半透膜向水势低的系统移动的现象。
根压：由于水势梯度引起水分进入中柱后产生的压力。
蒸腾作用：水分以气体状态，通过植物的表面，从体内散失到体外的现象。
蒸腾速率：植物在一定时间内单位面积蒸腾的水量。
蒸腾比率：光合同化每ｍｏｌ的ＣＯ２所需要蒸腾散失的水的摩尔数。
水分利用率：光合同化ＣＯ２的速率与同时蒸腾丢失水分速率的比值。
内聚力学说：水分具有较大内聚力足以抵抗张力，保证叶至根水柱不断来解释水分上升原因的学说。
水分临界期：植物对水分不足特别敏感的时期。
矿质营养：以氧化物形式存在于灰分中的元素，亦称灰分元素。
大量元素：指Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｓ、Ｓｉ七种元素，植物对这些元素需要量相对较大。
微量元素：指Ｍｏ、Ｆｅ、Ｂ、Ｍｎ、Ｎａ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｎｉ、Ｃｌ九种元素，植物需要的量极小。
溶液培养：在含有全部或部分营养元素的溶液中栽培植物的方法。
透性：让物质通过的性质。
选择透性：对各种物质的通过难易不一，有的容易通过，有的则不易或不能通过。
胞饮作用：细胞通过膜的内陷从外界直接摄取物质进入细胞的过程。
被动运输：载体顺着电化学梯度进行运输。
主动运输：载体逆着电化学梯度进行运输。
转运蛋白：能选择性地使非自由扩散的小分子透过质膜的运输蛋白。
离子通道：细胞膜中由通道蛋白构成的孔道，控制离子通过细胞膜。
载体：一类跨膜运输的内在蛋白，在跨膜区域不形成明显的孔道结构。
植物生理研究技术实验
植物生理研究技术实验报告实验二叶绿体的分离制备及希尔反应活力测定一、实验目的本实验学习分离制备叶绿体的技术方法，加深对希尔反应的理解及对光反应的认识。
二、实验原理英国生物化学家R．Hill(1937年)首先将离体叶绿体加入有适当氢受体(如草酸高铁钾盐、2，6一二氯酚靛酚、NAD+和NADP+)的水溶液中，照光后即有O2放出，这就是水的光解，即希尔反应。
制备离体叶绿体和测定希尔反应活力是研究叶绿体结构和光反应必不可少的。
叶绿体的分离采用离心分级分离，即利用叶绿体的直径和沉降系数与其他细胞器不同的特点，先用低速离心除去细胞碎片，后用高速离心沉降叶绿体。
希尔反应活力的测定是将叶绿体加入铁氰化钾，并照光，水被光解放氧，而溶液中的Fe(CN)63-被还原成Fe(CN)64+，后者可使FeCl3。
变成游离的Fe2+，而Fe2+又可与邻菲啰啉盐生成橙红色的络合物，并且Fe2+的浓度与颜色深浅呈线性关系，因而可比色测定。
其反应如下：三、实验材料、设备和试剂1．实验材料新鲜菠菜叶片2．设备(1)分光光度计(2)台式离心机(3)研钵(4)照光装置(5)试管(6)移液管(7)烧杯(8)纱布3．试剂(1)叶绿体提取液(STN)溶液：含有0.4mol·L-1蔗糖、0.05 mol·L-1HCI—Tris 缓冲液、0.01 mol·L-1NaCl，用HCl调pH至7.8，贮于冰箱预冷备用。
(2)希尔反应试剂：包括0.5 mol·L-1 Tris缓冲液(pH7．8)、0.05 mol·L-1 MgCl2溶液、0.1 mol·L-1NaCl溶液、0.01 mol·L-1K3Fe(CN)6溶液；上述4种溶液单独分装，不能混合。
(3)显色试剂：0.01 mol·L-1FeCl3溶液(用0.2 mol·L-1醋酸配制)、0.05 mol·L-1邻菲啰啉盐酸盐(C12H18N2·HCl·H2O)溶液(先用少量95%乙醇溶解，后用蒸馏水定容)。
2017四川农业大学考研——植物生理学 名词解释
学霸备考16年考研植物生理学考前冲刺——名词解释篇15年真题1.次级共运转（次级主动运输）：以质子动力作为驱动力的跨膜离子转运，使质膜两边的渗透能增加，该渗透能是离子或者中性分子跨膜转运的动力。
2.细胞的信号转导：偶联各种胞外刺激信号与其相应的生理反应之间的一系列分子反应。
3.希尔反应：离体叶绿体在光下所进行的分解水并放出氧气的反应。
4.渗透调节：植物细胞通过主动增加溶质降低渗透势，增强吸水和保水能力，以维持正常细胞膨压的作用。
5.交叉适应：植物经历了某种逆境之后，能提高对另一逆境的抵抗能力。
对不同逆境间的相互适应作用。
6.光饱和点：在一定范围内，光合速率随着光照强度的增加而加快，光合速率不再继续增加时的光照强度称为光饱和点。
7.光的形态建成：依赖光控制细胞的分化、结构和功能的改变，最终汇集成组织和器官的建成，就称为光形态建成。
8.极性运输：生长素只能从植物体形态学上端向下端运输，不能反之。
9.单盐毒害：植物培养在单种盐溶液中所引起的毒害现象。
10.水孔蛋白：存在于生物膜上的一类具有选择性、高效转运水分功能的内在蛋白。
14年真题1.乙烯的三重反应：乙烯使黄化豌豆下胚轴变矮变粗和横向生长。
2.细胞全能性：植物体的每一个生活细胞携带着一套完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。
3.临界日长：昼夜周期中，引起长日植物成花的最短日照长度或引起短日植物成花的最长日照长度。
4.花芽分化：叶芽的生理和组织状态向花芽的生理和组织状态转化的过程。
5.光合速率：指光照条件下，植物在单位时间单位叶面积吸收CO2的量（或释放O2的量）。
6.植物激素：在植物体内合成，并从产生之处运送到别处，对生长发育起显著作用的微量有机物。
7.光合单位：叶绿体中不是所有的叶绿素分子都直接参与光化学反应将光能转换为化学能。
大约300个叶绿素分子组成一个功能单位才能进行光子的吸收，该功能单位称为光合单位，它是进行光合作用的最小结构单位。
希尔反应的结论-概述说明以及解释
希尔反应的结论-概述说明以及解释1.引言1.1 概述希尔反应是指一种特定的化学反应，该反应以俄罗斯化学家希尔的名字命名。
它在化学领域具有重要的意义，并引起了广泛的研究和应用。
希尔反应是一种氮气化合物的合成反应，它通过在碱性条件下将亚硝基酚与芳香胺反应而得到。
希尔反应产生了一系列的氮气化合物，这些化合物对于药物合成、材料科学和生物化学等领域都具有重要的应用价值。
希尔反应的机理涉及多个步骤，包括氧化、偶合和还原等过程。
首先，亚硝基酚在碱性条件下被氧化为亚硝基芳香化合物。
随后，亚硝基芳香化合物会发生偶合反应，形成氮气化合物。
最后，通过还原反应，氮气化合物会被还原为相应的芳香胺。
这些步骤相互作用，最终完成了整个希尔反应过程。
希尔反应在医药领域具有广泛的应用。
许多药物的合成和改进都依赖于希尔反应。
例如，一些抗癌药物和抗生素的制备过程中，希尔反应被广泛用于构建氮气化合物骨架。
此外，希尔反应在材料科学领域也得到了广泛的应用。
通过希尔反应，可以制备出具有特殊性质的氮气化合物，从而用于制备特定的材料，如金属-有机骨架化合物和有机光电材料等。
此外，希尔反应还在生物化学研究中发挥重要作用，例如，通过希尔反应可以合成出具有特定生物活性的分子，用于药物研发和生物学研究等领域。
尽管希尔反应在各个领域具有广泛的应用，但也存在一些局限性。
首先，希尔反应的研究仍然面临着反应选择性和产率等方面的挑战。
其次，希尔反应的条件较为苛刻，需要较强的碱性条件和适当的温度控制，这限制了其在一些条件较为特殊的反应环境中的应用。
此外，希尔反应还受到一些基团不兼容性的限制，这限制了其反应底物的选择范围。
未来，希尔反应仍然具有很大的发展潜力。
随着化学合成方法的不断发展，人们对希尔反应的机理和条件有了更深入的理解，并且能够设计出更高效、更具选择性的希尔反应体系。
未来的研究可以进一步探索希尔反应的反应性质和应用范围，以应对当前的挑战，并为药物合成、材料科学和生物化学等领域的发展提供更多有益的贡献。
植物生理实验希尔反应
植物生理学实验希尔反应的观察和反应速率的测定摘要：本实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象，由离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2,6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化，观察希尔反应。
在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管，在光下由蓝色变为绿色（由于叶绿体存在的原因）；暗处的试管仍为蓝色。
一、实验原理与实验目的实验原理：希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁停化钾、苯醍、NADP+、草酸等）2H2O+2A 2AH2+O2希尔反应的测定的方法是（1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。
本实验中2,6 -氯酚靛酚还原后，溶液由兰色变为无色。
实验目的：观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。
二、实验材料和方法实验材料：菠菜实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖+ 0.01M KCl ）; （2）0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M磷酸缓冲液+0.01%KCl）三、实验步骤1. 离体叶绿体悬浮液的制备称取8克叶片，加10ml预冷提取液研磨，在研钵中捣碎30秒钟后，继续加入15ml冷提取液；经过二层纱布过滤，去残渣，挤出滤液，置于离心管中。
以1000转/分离心3分钟;弃去沉淀。
以3000转/分离心上层液,8分钟，弃去上清液，沉淀为破碎的叶绿体。
用20ml提取液悬浮沉淀，置于冰浴备用。
2. 离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。
一试管照光，另一试管置于黑暗。
5-10min后观察溶液颜色的变化。
四、实验结果与讨论实验结果：黑暗处的试管颜色未发生变化，一直都是蓝绿色；光照下的试管颜色明显变浅，由较深的蓝绿色变为浅绿色，证明希尔反应的存在，可见离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂。
希尔反应
实验17.希尔反应左哥一、实验目的：通过对希尔反应的观察，理解作为植物光合作用原料之一的水的作用和光反应实质，比较希尔反应与植物活体中得水的光解的异同。
二、实验原理：R．Hill（1937）发现离体叶绿体在提供特定氢受体（氧化剂）的条件下照光，使水分解放氧的现象，称希尔效应。
其氧化剂（2,6-D），成为希尔氧化剂。
希尔氧化剂采用2,6-D，氧化型的2,6-D呈蓝色（碱）或红色（酸），还原性的2,6-D无色。
三、材料和试剂材料：女贞叶片试剂：希尔反应提取液，0.1%2,6-D四、操作方法：1、叶绿体悬浮液制备：用天平称取10g*200ml，又加入希尔提取液，入豆浆机离心。
2、离体叶绿体对染料的还原作用：取小试管两支，加入2ml提取液，10滴2,6-D，一支照光，一支置于黑暗条件下，10min后，取出，比较两个处理的溶液颜色有何不同。
五、实验结果分析：照光的试管颜色有墨绿色变为浅绿色；无光照的试管仍为墨绿色；这是由于离体叶绿体在光照下分解放氧的现象，使得2,6-D被光合作用所产生的还原物还原成无色。
实验33.花青素的测定左哥一、实验目的：花青素是类黄酮类色素花色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要影响。
本实验学习花青素的提取及测定方法。
二、实验原理：花青素在酸性溶液中呈现红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。
花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm，摩尔消光系数4.62X104，故可用分光光度法测定其含量。
但是一些提取液中常含有叶绿素存在，干扰测定。
因此，需同时测定提取液在629nm和659nm 波长下的光密度值，并用Greesy公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。
三、试剂和材料1、材料：红花继木2、试剂：0.1mol/L的盐酸乙醇溶液四、实验步骤：1、花青素的提取：取2g红花继木，将材料放在三角瓶中，加入提取液10ml，放在60℃水浴中浸提1h,期间更换浸提液3次，最后将提取液装入25ml容量瓶中，用提取液定容至刻度备用。
叶绿体的分离制备及希尔反应活力鉴定
植物生理研究技术实验报告实验一叶绿体的分离制备及希尔反应活力测定同组人：实验日期：2013年 10 月 16 日姓名：学号：学院：农学与生物科技学院年级： 2013 级专业：实验二叶绿体的分离制备及希尔反应活力鉴定一、实验目的本实验学习分离制备叶绿体的技术方法，加深对希尔反应的理解及对光反应的认识。
二、实验原理英国生物化学家R.Hill(1937年)首先将离体叶绿体加入有适当氢受体（如草酸高铁钾盐、2，6-二氯酚靛酚、NAD+和NADP+）的水溶液中，照光后即有O2放出，这就是水的光解，即希尔反应。
制备离体叶绿体和测定希尔反应活力是研究叶绿体结构和光反应必不可少的。
叶绿体的分离采用离心分级分离，即利用叶绿体的直径和沉降系数与其他细胞器不同的特点，先用低速离心除去细胞碎片，采用高速离心沉降叶绿体。
希尔反应活力的测定是将叶绿体加入铁氰化钾，并照光，水被光解放氧，而溶液中的Fe(CN)-36被还原成Fe(CN)-46，后者可使FeCl3变成游离的Fe2+，而Fe2+又可与邻菲啰啉盐生成橙红色的络合物，并且Fe2+的浓度与颜色深浅呈线性关系，因而可比色测定。
其反应如下：4Fe(CN)-36+2H2O→4Fe(CN)-46+4H++O2Fe(CN)-46+Fe3+→Fe(CN)-36+Fe2+Fe2++邻菲啰啉→橙红色络合物三、实验材料、设备和试剂1.实验材料最常用的是新鲜菠菜叶片，也可用小麦、小稻等植物叶片。
2.设备⑴分光光度计⑵台式离心机⑶组织捣碎机⑷方形标本缸⑸照光装置（2只500W钨灯作为光源，方形标本缸内放一试管架，并加入适量的水）⑹试管⑺移液管⑻烧杯⑼纱布3.试剂（1）叶绿体提取液（STN）溶液：含有0.4mol·L-1蔗糖、0.05mol·L-1HCl-Tris缓冲液、0.01mol·L-1NaCl，用HCl调pH至7.8，贮于冰箱预冷备用。
（2）希尔反应试剂：包括0.5mol·L-1Tris缓冲液（pH7.8）、0.05mol·L-1MgCl2溶液、0.1mol·L-1NaCl溶液、0.01mol·L-1K3Fe(CN)6溶液；上述4种溶液单独分装，不能混合。
希尔反应方程式
希尔反应方程式希尔反应（Hill reaction）是指在光照条件下，绿色植物的叶绿体裂解水，释放氧气并还原电子受体的反应。
该反应由英国科学家罗伯特•希尔发现，故称“希尔反应”。
内容详见光学作用光学作用中，叶绿体在阳光的作用下，把经由气孔进入叶子内部的二氧化碳和由根部吸收的水转变成为葡萄糖，同时释放氧气：12H2O + 6CO2 + 阳光→(与叶绿素产生化学作用); C6H12O6 (葡萄糖) + 6O2 + 6H2O注意：上式中等号两边的水不能抵消，虽然在化学上式子显得很特别。
原因是左边的水，是植物吸收所得，而且用于制造氧气和提供电子和氢离子。
而右边的水分子的氧原子则是来自二氧化碳。
为了更清楚地表达这一原料产物起始过程，人们更习惯在等号左右两边都下写上水分子，或者在右边的水分子右上角打上星号。
12H2O + 阳光→12H2 + 6O2 [光反应] 12H2 (来自光反应) + 6CO2 →C6H12O6 (葡萄糖) + 6H2O [暗反应]植物的光合作用可分为光反应和暗反应两个步骤如下：光反应场所：类囊体影响因素：光强度，水分供给植物光合作用的两个吸收峰叶绿素a,b的吸收峰过程：叶绿体膜上的两套光合作用系统：光合作用系统一和光合作用系统二，（光合作用系统一比光合作用系统二要原始，但电子传递先在光合系统二开始，一二的命名则是按其发现顺序）在光照的情况下，分别吸收700nm和680nm波长的光子，作为能量，将从水分子光解过程中得到电子不断传递，其中还有细胞色素b6/f的参与，最后传递给辅酶NADP，通过铁氧还蛋白-NADP还原酶将NADP还原为NADPH。
而水光解所得的氢离子则因为顺浓度差通过类囊体膜上的蛋白质复合体从类囊体内向外移动到基质，势能降低，其间的势能用于合成ATP，以供暗反应所用。
而此时势能已降低的氢离子则被氢载体NADP带走。
一分子NADP可携带两个氢离子。
这个NADPH+H离子则在暗反应里面充当还原剂的作用。
希尔反应实验报告
1. 了解希尔反应的原理和过程；2. 观察希尔反应现象，掌握希尔反应的操作方法；3. 通过实验，验证希尔反应的发生。
二、实验原理希尔反应是指在光照条件下，绿色植物的叶绿体裂解水，释放氧气并还原电子受体的反应。
该反应由英国科学家罗伯特希尔发现，因此得名希尔反应。
实验中，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6-二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP、草酸等），使溶液由蓝色变为无色。
三、实验材料1. 实验材料：菠菜2. 实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等3. 实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5，0.3M 蔗糖，0.01M KCl）；（2）0.1% 2,6-二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液，0.01%KCl）四、实验步骤1. 离体叶绿体悬浮液的制备称取8克菠菜叶片，加10ml提取液，研磨，用纱布过滤，离心，取上清液即为叶绿体悬浮液。
2. 希尔反应实验（1）取3支试管，分别编号为1、2、3；（2）在试管1中加入2ml叶绿体悬浮液；（3）在试管2中加入2ml叶绿体悬浮液和2ml 2,6-二氯酚靛酚溶液；（4）将试管1和2置于光下，试管3置于暗处；（5）观察并记录试管中溶液颜色的变化。
1. 试管1（光下）：溶液由蓝色变为绿色，说明叶绿体在光下进行了希尔反应；2. 试管2（光下）：溶液由蓝色变为无色，说明2,6-二氯酚靛酚被还原；3. 试管3（暗处）：溶液颜色无变化，说明暗处没有希尔反应发生。
六、实验分析1. 希尔反应实验验证了叶绿体在光下能进行希尔反应，产生氧气和还原电子受体；2. 实验结果表明，2,6-二氯酚靛酚在光下被还原，溶液颜色由蓝色变为无色；3. 暗处没有希尔反应发生，说明希尔反应需要光照条件。
七、实验结论通过本次实验，我们成功观察到了希尔反应现象，验证了希尔反应的发生。
实验结果表明，叶绿体在光下能进行希尔反应，产生氧气和还原电子受体。
叶绿体希尔反应的原理
叶绿体希尔反应的原理
嘿，朋友们！今天咱来聊聊叶绿体希尔反应那神奇的原理呀！
你想象一下，叶绿体就像是一个超级工厂，而希尔反应呢，就是这个工厂里最重要的生产线之一！那到底是咋回事呢？
简单来说，希尔反应就好比一场激烈的接力赛！水就像是第一棒的运动员，它把电子传递出去，哇，这可太关键了！就好像接力赛中第一棒顺利交棒一样令人激动！这传递出去的电子啊，就像充满能量的小火苗，一路奔腾向前。
然后呢，各种酶啊、蛋白质啊，它们就像是赛道上的指引者和助力者，让电子能够顺畅地跑下去，这多了不起啊！难道不是吗？
比如说，在植物进行光合作用的时候，这个希尔反应就在默默发力呢！你看那茁壮成长的小草，那鲜艳的花朵，它们的美丽和生机可都离不开希尔反应在背后的辛勤工作呀！你说神奇不神奇？
再想想，要是没有希尔反应，那植物怎么能产生足够的氧气供我们呼吸呢？哎呀，那可真是不敢想啊！所以说，希尔反应真的太重要啦！
总之啊，叶绿体希尔反应就是这么神奇又有趣，它就像一个默默无闻的英雄，为了植物的生长和我们的生存一直在努力着！咱可得好好感谢它呢！。
植物生理实验希尔反应
植物生理学实验希尔反应的观察和反应速率的测定摘要：本实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象，由离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2,6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化，观察希尔反应。
在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管，在光下由蓝色变为绿色（由于叶绿体存在的原因）；暗处的试管仍为蓝色。
一、实验原理与实验目的实验原理：希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等）2H2O+2A →2AH2+O2希尔反应的测定的方法是（1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。
本实验中2,6 -氯酚靛酚还原后，溶液由兰色变为无色。
实验目的：观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。
二、实验材料和方法实验材料：菠菜实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖+ 0.01M KCl）；（2）0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液+0.01%KCl）三、实验步骤1.离体叶绿体悬浮液的制备称取8克叶片,加10ml预冷提取液研磨,在研钵中捣碎30秒钟后,继续加入15ml冷提取液; 经过二层纱布过滤,去残渣,挤出滤液,置于离心管中。
以1000转/分离心3分钟;弃去沉淀。
以3000转/分离心上层液,8分钟,弃去上清液,沉淀为破碎的叶绿体。
用20ml提取液悬浮沉淀,置于冰浴备用。
2.离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。
一试管照光，另一试管置于黑暗。
5-10min后观察溶液颜色的变化。
四、实验结果与讨论实验结果：黑暗处的试管颜色未发生变化，一直都是蓝绿色；光照下的试管颜色明显变浅，由较深的蓝绿色变为浅绿色，证明希尔反应的存在，可见离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂。
希尔反应和氢载体
希尔反应和氢载体（2014年浙江高考试题）（1）希尔反应模拟了叶绿体光合作用中阶段的部分变化。
氧化剂DCIP既可用于颜色反应，还可作为。
希尔反应活力可通过测定DCIP溶液的颜色变化得到，也可通过测定得到。
（注：希尔反应活力测定的基本原理：将叶绿体加入DCIP（二氯酚-淀粉）溶液并照光，水在光照下被分解，产生氧气等，而溶液中的DCIP被还原并发生颜色变化，这些变化可用仪器进行测定。
）答案：光反应氢载体氧气的释放速率答题情况：第二空的信息尽管试题中有呈现，但能得出此答案的在全省廖廖无几（阅卷老师的反馈），原因在于这术语平时很少接触到，本人查找高中教材和大学教材，还是有所呈现，特别是大学教材，其实是大学教材的一个植物生理实验。
浙科版教材必修1 P86：NADPH和NADH是同一类辅酶，都是氢的载体。
大学教材中的实验——离体叶绿体对染料的还原作用（希尔反应）里主要涉及到的知识就是染料利用二氯靛酚（DCPIP）验证希尔反应。
1．希尔反应的发现过程希尔反应是在离体叶绿体（实质是被膜破裂的匀浆）悬浮液中，加入适当的电子受体（如草酸铁），照光时可使水分解而释放氧气：4Fe3+＋２H2O→4Fe2+＋４Ｈ+＋Ｏ2最初他用离体的叶绿体加叶片提取液，测到有氧放出。
接着加上其他氧化剂如高铁氰化钾，能测到更多的氧，表明离体叶绿体能进行光合作用光反应。
但加二氧化碳却没有什么变化，表明离体叶绿体不能同化二氧化碳。
他解释说：“如果二氧化碳真起了作用，我可能就不再走下去了，这证明在光中产生的氧气是与一个氢受体或电子受体相对应的。
在光下进行的催化反应之一是草酸高铁钾到低价铁的还原。
如果叶绿体所表现的这个性能是光合作用一部分的话，似乎氧必然是从水中来的。
”由此，他预言：这种叶匀浆的铁-氧反应也许指示着一种与二氧化碳同化有关的机理。
希尔进一步研究证实，植物光合作用的光反应是氧分子的产生，而不是二氧化碳的还原，氧的产生是由于叶绿体以草酸铁作受氢体所致，其机理与完整细胞光合放氧过程相一致。
希尔(Hill)反应活力测定
叶绿体希尔（Hill）反应活力测定英国科学家罗伯特·希尔（R．Hill，1939）用光照射加有草酸高铁的叶绿素悬浊液时，发现Fe3＋还原成Fe2＋并放O2。
因此把在光照条件下，绿色植物的叶绿体裂解水，释放氧气并还原电子受体的反应称作希尔反应（Hill reaction）。
希尔反应的意义在于：证明了光合作用在叶绿体中进行；植物放出的氧是水在光下被分解和氧化，这种水的光氧化反应与CO2的还原可分开进行，因而划分出光反应和暗反应两个阶段；发现了光反应中有光诱导的电子传递和水的光解及O2释放；发现了水在光反应中起到的是供氢体和电子供体的双重作用。
叶绿体是植物进行光合作用的细胞器，依据分离所得叶绿体的结构完整程度，大致将它分成两类：被膜破碎的叶绿体（类囊体）具有光合电子传递、光合放氧和光合磷酸化的功能 被膜完整的叶绿体具有同化二氧化碳的完全的光合作用功能。
下面介绍类囊体的制备及其Hill反应活力测定。
（一）实验原理用STN（Sucrose,Tricine或Tris,NaCI）提取并经分级离心的叶绿体碎片，具有完整的类囊体，把其放入一定的反应介质中给予照光，能通过反应中心的电子传递进行希尔反应、放氧和光合磷酸化。
当用Fecy(Fe3+)作为电子受体时，它接受电子还原为Fe2+，而Fe2+可与邻菲啰啉（OP）反应生成红色的络合物，510nm 下的OD与Fe2+的浓度成正比，由此可测定希尔反应活力。
FecyFe3++ ADP+32Pi Fe2++ AT32P+H2O（四）实验步骤1. 配制STN研磨液取Tricine（或Tris,0.2mol/L, pH值7.4）10ml、Sucrose（1 mol/L）40ml、NaCl（0.1 mol/L）10ml，定容到100ml。
2. 希尔反应活动测定（1）将STN、研具、烧杯、离心管、纱布放入冰箱冰冻(约15分钟)。
（2）样品洗净后放入冰箱(4℃~8℃) 15-20min。
实验三 光合作用的希尔反应
【注意事项】
叶绿体提取：
在冰浴低温条件下操作， 上清液和沉淀的保留与否。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
希尔反应:
每管反应的总体积相同，且做好标记； 在反应时，所加溶液为提取液稀释的叶绿体悬浮液，与测
定叶绿体含量时用丙酮稀释不同；
光照条件下取放试管时，千万注意不能将水溅到灯泡上 （冷水溅到热的灯泡上会引起灯泡爆炸）。
【思考与作业】
Hill反应
取9支试管，包好黑纸并编号1-9，按下表所列试剂分别加入9支试管中。
试管号
提取液/mL
叶绿体/mL
DCMu/mL
2.6-D/mL
1 2 3 4和5
6和7 8和9
4.0 4.5 4.0 3.5
3.0 --
-0.5 1.0 0.5
1.0 1.0
-----3.0
1.0 --1.0
1.0 1.0
O
Cl Cl Cl
OH
Cl
2
N
＋ 2H2O
光 叶绿体
2
NH
＋ O2
OH 氧化型二氯靛氛
OH 还原型二氯靛氛
（蓝色）
（无色）
DCMU (二氯苯基二甲基脲，dichlorophenyl dimethylures,商品名为敌草隆，diuron)等除草剂是作用
于光合作用光系统II中质体醌QB结合部位 。它们竞争
植物生物学实验-植物生理部分
实验三 光合作用的希尔反应
【实验原理】
离体叶绿体加到具有适当氢受体（A）溶液中，光照后放出 氧气。 2H2O +2A
光 叶绿体
2AH2+O2
实验中用的氧化剂A是2,6－二氯靛酚（2,6-D），是一种蓝 色染料，接受电子和H+后被还原成无色。在光下，叶绿体 将2,6-D还原，从蓝色到无色。通过测定其光密度的变化， 可以得出叶绿体的还原能力。
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植物生理学实验
希尔反应的观察和反应速率的测定
摘要：
本实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象，由离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2,6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化，观察希尔反应。
在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管，在光下由蓝色变为绿色（由于叶绿体存在的原因）；暗处的试管仍为蓝色。
一、实验原理与实验目的
实验原理：
希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等）2H2O+2A →2AH2+O2
希尔反应的测定的方法是（1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。
本实验中2,6 -氯酚靛酚还原后，溶液由兰色变为无色。
实验目的：
观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。
二、实验材料和方法
实验材料：菠菜
实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等
实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖+ 0.01M KCl）；（2）0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液+0.01%KCl）
三、实验步骤
1.离体叶绿体悬浮液的制备
称取8克叶片,加10ml预冷提取液研磨,在研钵中捣碎30秒钟后,继续加入15ml冷提取液; 经过二层纱布过滤,去残渣,挤出滤液,置于离心管中。
以1000转/分离心3分钟;弃去沉淀。
以3000转/分离心上层液,8分钟,弃去上清液,沉淀为破碎的叶绿体。
用20ml提取液悬浮沉淀,置于冰浴备用。
2.离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用
取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。
一试管照光，另一试管置于黑暗。
5-10min后观察溶液颜色的变化。
四、实验结果与讨论
实验结果：
黑暗处的试管颜色未发生变化，一直都是蓝绿色；
光照下的试管颜色明显变浅，由较深的蓝绿色变为浅绿色，证明希尔反应的存在，可见离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂。
实验讨论：
1、离体叶绿体对染料的还原作用实验中,比较两个处理的溶液颜色有何不同,并解释实验结
果。
答：现象：两份叶绿体悬浮液，分别加入1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚后，一份在光照条件下，一份在黑暗条件下；在黑暗条件下的叶绿体悬浮液一直是蓝绿色的；而在光照条件下的叶绿体悬浮液在加入1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚后为蓝绿色，而放在光下一段时间后叶绿体悬浮液又慢慢变为原来的颜色，浅绿色。
原因：这是由于叶绿素在光照条件下被激活，而释放出电子，从而还原某些氧化剂。
2,6 -二氯酚靛酚本来是蓝色的，加入后使得叶绿素提取液变为蓝绿色，而2,6 -氯酚靛酚还原后，溶液变为无色，这时叶绿素提取液又变为原来的颜色，浅绿色。
参考文献：
王英典，刘宁. 植物生物学实验指导 . 北京：高等教育出版社.（第2版）。