Transwell实验技术(corning)
Transwell实验技术(corning)
传统Transwell通透性支持物
Transwell嵌套可以提供四种膜直径6.5mm（24孔板），12mm（12孔板），24mm(6孔 板)和75mm（100培养皿）。表4列出了这些尺寸可以提供的细胞生长面积。
相对于每个规格，都有几种类型的膜和大范围的孔径可选择。具有专利的中心悬挂设计可 以防止培养液由嵌套壁和孔壁之间通过毛细作用流失。悬挂设计使得嵌套与底部有1mm的 差距，这样可以保证在嵌套移走的时候，形成的单层细胞不会被破坏。在嵌套壁上的缺口 可保证与底部接触。
பைடு நூலகம்SnapwellTM嵌套
Snapwell嵌套 (U.S. Patent No. 5,272,083) 是经过改良的Transwell嵌套，包括12mm 的经组织 培养处理的聚碳酯膜或透明的聚酯膜，以及一个分离环。这些嵌套主要用于运输和电生理 研究。一旦细胞长满，分离环固定的膜可以拆卸，并垂直或水平放置，或置于Ussing培养 室中。Ussing培养室可以通过哈佛仪器公司购买：
HTS-96 系统是高通量药物转导 研究的理想工具
HTS Transwell系统为机械操作 而设计
05
如何使用Transwell® 通透性支持物
使用提示
1. 通透性支持物上的细胞形态和密度受滤膜孔径的影响。 2. 一些孔径大的膜可以容许细胞穿过。 3. 在通透性支持物上生长的细胞的贴附对于起始接种密度很敏感。初次使用应接种不同密
常规使用指南
1．使用时先将培养液加入多孔板的孔中，将嵌套放入，再将含细胞的培养液加入嵌套内 部，推荐使用的培养液体积列在表5中。
选择合适的Transwell® 膜和孔径
Transwell通透性支持物可以提供三种膜材料：聚碳酯（PC），聚酯（PET）和胶原包被的 聚四氟乙烯（PTFE）。表1提供了这些膜特性的更多信息。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
(完整版)transwell实验原理与步骤
一、Transwell小室制备1。
无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1：8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4 ℃风干。
如果需要在下室面铺FN 的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5 mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上.②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
另有tianjin_glioma 战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60—80 µl （注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好），置37 ℃ 30 min使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中,在上室加入300 µl预温的无血清培养基，室温下静置15－30 min，使基质胶再水化.再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24 h,进一步去除血清的影响.但这一步并不是必须的。
②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10×105，个人认为不要超过5×105.具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验,细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话,可能还没到检测的时间点,所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候,上室内还要有一定量的细胞存在.个人认为,对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
transwell实验原理与步骤
一、Tran swell 小室制备1. 无基质胶Tran swell 小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1:8 稀释液包被Tran swell小室底部膜的上室面， 4 C风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉，吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原(collagen )的话，一般配成0.5 mg/ml ，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 C, 30min。
另有tianjin_glioma 战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60- 80卩l (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37 C 30 min使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Tran swell 小室制备Chemicon 公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300卩1预温的无血清培养基，室温下静置15 - 30 min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12 - 24 h ,进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1 - 2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10 X10 5,个人认为不要超过 5 X105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
(完整版)Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
corning Transwell 孔径大小 选择指南
1．使用时先将培养液加入多孔板的孔中，将嵌套放入，再将含细胞的培养液加入嵌套内 部，推荐使用的培养液体积列在表5中。
总览
0.4 μm孔径聚碳酯膜的扫描电镜
PTFE膜的扫描电镜，显示孔径结构
在6孔板中的聚酯Transwell透明 嵌套显示膜的清晰度
12mm直径的Transwell嵌套带有 聚碳酯膜 02
细胞和组织培养技术在基础和应用生命科学领域的重要性日益提高。为尽可能的模拟体内 环境以培养某些特殊的细胞系，新的培养容器和细胞贴附的表面不断涌现。顺理成章的， 使用带有多微孔膜的通透性支持物培养这些细胞成为基本的方法。通透性支持物可以有效 改善极性细胞的培养，因为这些支持物允许细胞从其基底面和顶面分泌和吸收分子，从而 以更为自然的方式进行代谢。
75mm Transwell嵌套和100mm 培养皿
Snapwell嵌套设计与扩散或 Ussing培养室配套使用
03
总览
在Transwell聚碳酯膜上的巨噬 细胞的扫描电镜照片（由
B.Wetzel, S. Wahl, E. Westbrook 和L. Altma, NIH, Bethesda, MD 惠赠）
HTS-96 系统是高通量药物转导 研究的理想工具
HTS Transwell系统为机械操作 而设计
05
如何使用Transwell® 通透性支持物
使用提示
1. 通透性支持物上的细胞形态和密度受滤膜孔径的影响。 2. 一些孔径大的膜可以容许细胞穿过。 3. 在通透性支持物上生长的细胞的贴附对于起始接种密度很敏感。初次使用应接种不同密
HTS Transwell-96培养系统 (U.S. Patent No. 6,943,009) 包括以下几个部分：一个96孔嵌套 板，可以选择1.0或8.0um孔径的聚酯膜，或者0.4um, 3.0um, 5.0um孔径的聚碳酯膜；带有可 拆卸的培养液稳定装置的储液板用来加液或换液；检测使用的接收板（黑色或透明）；2 个盖子， 以防止挥发和污染。每个嵌套具有0.143 cm2 的生长面积。顶面及侧面的大开口便 于添加和取样。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。
常用0.4、3.0μm。
我们实验室用的是0.4μm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
Transwell原理
Transwelltrans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
transwell原理和技术
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
小室培养实验报告
一、实验目的本研究旨在通过Transwell小室共培养技术，观察细胞间的相互作用及其对细胞迁移能力的影响，为进一步研究细胞间的信号传导和肿瘤转移机制提供实验依据。
二、实验材料1. 细胞：人肝癌细胞系HepG2、人正常肝细胞系L022. Transwell小室：Corning公司产品，孔径为8.0 μm3. 培养基：DMEM培养基，含10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100 U/mL4. 其他试剂：胰蛋白酶、EDTA、无菌水、细胞计数板、酶标仪等三、实验方法1. 细胞培养：将HepG2和L02细胞分别接种于6孔板，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞贴壁后进行实验。
2. Transwell小室共培养：将Transwell小室置于6孔板中，在上室中加入1 mL 含10%胎牛血清的DMEM培养基，下室中加入2 mL含10%胎牛血清的DMEM培养基。
将HepG2细胞接种于上室，L02细胞接种于下室，共培养24小时。
3. 细胞迁移实验：将Transwell小室取出，用棉签轻轻刮去上室中的细胞，用1 mL PBS洗涤3次，然后用4%多聚甲醛固定30分钟。
将固定后的Transwell小室放入显微镜下观察，计算上室中迁移至下室的细胞数量。
4. 数据分析：采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，实验数据以均值±标准差表示，采用t检验进行组间比较。
四、实验结果1. HepG2细胞在Transwell小室共培养条件下，迁移至下室的细胞数量明显多于L02细胞，表明HepG2细胞具有较强的迁移能力。
2. 与单独培养的HepG2细胞相比，共培养后的HepG2细胞迁移至下室的细胞数量显著增加，表明L02细胞对HepG2细胞的迁移具有促进作用。
3. 共培养后的HepG2细胞中，与L02细胞直接接触的细胞数量明显多于未接触的细胞，表明细胞间的直接接触对HepG2细胞的迁移具有促进作用。
五、讨论本研究通过Transwell小室共培养技术，观察了HepG2和L02细胞间的相互作用及其对细胞迁移能力的影响。
transwell细胞迁移
迁移实验（cell migration assay）实验材料（1）Transwell小室，孔径8μm (Corning) ,细胞培养板24孔板 ,培养板应当与购买的Transwell 小室相配套（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养,PBS，2.5%FBS（3）固定液：4%多聚甲醛固定液或者甲醇（4）染色液：Giemsa染液或结晶紫染色（5）其他：小镊子，棉棒1材料准备：无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.2接种细胞①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。
细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；②24孔板下室一般加入600µl含2.5%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。
③种板，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
④培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。
24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
2.3染色计数①取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无菌的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适当风干。
② 0.1%结晶紫染色20 min，或Giemsa染色（5－10min，室温0.5h），用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。
③400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Transwell实验，也被称为细胞侵袭实验，是一种研究细胞迁移和侵袭能力的实验方法。
其基本原理是将小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液，并将研究的细胞种在上室内。
由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞生长、运动等。
在进行不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜的实验时，可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
在肿瘤细胞侵袭实验中，需在聚碳酸酯膜上侧铺一层基质胶，用以模仿细胞外基质。
肿瘤细胞必须分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质消化了才能进入下室（这与体内情况较为相似）。
最后通过计算进入下室的细胞量即可反应细胞的侵袭能力。
有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用明胶酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
Transwell实验的具体操作步骤如下：1.实验前的准备工作：需要提前一天将Matrigel胶（一种人工合成的细胞外基质）从冰箱中取出，放置在冰盒上融化。
同时，将24孔板、枪头、离心管等实验器材也放置在冰盒中预冷。
2.基质胶铺板：将融化好的Matrigel胶与无血清培养基按照1:8的比例混合，然后用预冷的枪头将混合液均匀铺设在Transwell小室的上室底部，注意要避免产生气泡。
铺好后将小室放入37℃的培养箱中孵育30分钟，使Matrigel胶凝固。
3.细胞处理：将需要研究的细胞进行传代或复苏，并用无血清培养基洗涤两次，然后用胰酶消化并计数。
4.接种细胞：将计数好的细胞用无血清培养基重悬，然后取适量细胞悬液加入到Transwell小室的上室中，注意要保证每个小室的细胞数量一致。
5.添加培养液：在上室和下室中分别添加适量的含血清培养基，上室的培养基中可以含有研究药物或其他处理因素。
6.培养细胞：将Transwell小室放入37℃的培养箱中培养24-48小时，具体时间可以根据研究目的和细胞类型进行调整。
Transwell实验原理与操作步骤
T r a n s w e l l实验原理与操作步骤Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membranefilters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有－μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择μm以下孔径。
细胞迁移实验技术之Transwell Assay
细胞迁移实验技术—Transwell AssayTranswell间接trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0 µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
Transwell小室结构示意图将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
Transwell Assay的应用：共培养体系：小于3.0 μm孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究的内容不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0 µm以下孔径。
常用0.4、3.0 µm。
在共培养过程中，将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
趋化性实验可用5.0、8.0、12.0 µm膜，具体选择哪种孔径根据细胞不同而定。
transwell实验
第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1．Transwelltrans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
Fig1但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有－μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面Fig2将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
Fig3应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：(1).共培养体系：小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择μm以下孔径。
transwell实验方法
Transwell实验方法概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeab le supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Tr answell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
学会这5步，轻松搞定transwell实验
学会这5步，轻松搞定transwell实验生物学霸丁香通出品轻松采购无忧科研做肿瘤研究的人，很少有不知道 transwell 实验的，它是用来研究肿瘤细胞的迁移侵袭转移情况的一种简便快捷的实验方法，还可以构建两种细胞的共培养体系以及趋化性试验。
今天咱们就来讲讲怎么做肿瘤细胞的侵袭转移实验。
Transwell 侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。
我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞就要分泌金属蛋白酶将基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了。
而迁移实验就是不铺胶直接让细胞穿过就行了。
Transwell 简易图以下学霸君来介绍侵袭实验步骤：实验前准备：transwell 小室（一般选用12um），24 孔板，基质胶（corning），细胞实验所需的基本的材料。
基质胶铺板用BD 公司的Matrigel 1：8 稀释（可以直接用无血清的培养基稀释），包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置37℃孵箱 1-4h 使Matrigel 聚合成凝胶（时间不宜太长，之前有人说在37 度孵箱过夜，反正元元师兄觉得不太可能）。
注意事项：1. 铺胶之前将枪头以及所用的耗材至于冰箱4 度当中，否则配胶的时候会直接凝固。
2. 铺胶的厚度自己摸索，25ul，40ul，100ul。
3. 注意铺胶过程不要产生气泡，铺胶均匀，否则影响实验结果。
4. 注意无菌操作。
2制作细胞悬液1. 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
2. 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用 PBS 洗 1－2 遍，这一步很必要，否则细胞表面覆有血清培养基，细胞没有迁移侵袭的动力），用无血清培养基重悬。
corning Transwell 孔径大小 选择指南
总览
表1.Transwell膜特征
特点
光学特性 细胞可见度 组织培养处理 膜厚度 Matrix/ECM 包被性 胶原处理 可提供孔径（um）
聚酯（PET） 透明 好 有 10um 有 无
0.4, 1.0, 3.0, 8.0
聚碳酯（PC） 半透明 较差 有 10um 有 无
0.4, 3.0, 5.0, 8.0
度保证最佳生长。 4. 在培养之前将通透性支持物在培养基中孵育可以改善细胞得贴附和分布。 5. 与塑料培养表面一样，细胞在通透性支持物上仍然需要细胞外支架的包被。 6. 透明的Transwell是带有透明的，经组织培养处理的聚酯膜，细胞在相差显微镜下很容易
被观察。 7. Transwell-COL带有PTFE膜，经过等摩尔数的I型和III型牛胎盘胶原处理。从而形成了覆
有关这些产品的详细信息可以在下面及订购信息中找到。
传统Transwell通透性支持物
Transwell嵌套可以提供四种膜直径6.5mm（24孔板），12mm（12孔板），24mm(6孔 板)和75mm（100培养皿）。表4列出了这些尺寸可以提供的细胞生长面积。
相对于每个规格，都有几种类型的膜和大范围的孔径可选择。具有专利的中心悬挂设计可 以防止培养液由嵌套壁和孔壁之间通过毛细作用流失。悬挂设计使得嵌套与底部有1mm的 差距，这样可以保证在嵌套移走的时候，形成的单层细胞不会被破坏。在嵌套壁上的缺口 可保证与底部接触。
Transwell实验步骤
Transwell实验步骤
Transwell实验步骤：
1.matrigel解冻，4°解冻。
（注意：matrigel很容易凝固，时刻放冰
上）
2.按无血清培养基：matrigel=7:1的比例混匀作为胶层（每个小室加
50ul）
3.用ep管混匀后以50ul每孔加入到小室中（从小室中间滴加进去铺
的更均匀），于37°放置30min左右
4.配置上下层工作液，上层（即小室中）200ul，下层500ul。
（上层
为细胞层，以无血清培养基配细胞液；下层为10%血清培养基。
上下层都应加药）注：细胞处理中在离心后需用pbs洗一遍，后用无血清培养基重悬计数。
5.待matrigel凝固后，取出并吸去上清没有凝固的培养基，注意不要
碰坏胶层。
6.将下层工作液加入下层24孔板中，放入小室，注意中间不要有气
泡，加入上层工作液，完成。
7.放置20h左右后取出（各细胞各异），吸去上层并用棉签轻轻擦拭
除去上层细胞，剪下小室底膜置于孔板中或载玻片上（底面朝上放置），加pbs洗一遍，吸去，加入快速瑞姬氏染料，吸去，用pbs 清洗，吸去。
8.观察（也可以在观察前用中性树胶固定）。
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总览
0.4 μm孔径聚碳酯膜的扫描电镜
PTFE膜的扫描电镜，显示孔径结构
在6孔板中的聚酯Transwell透明 嵌套显示膜的清晰度
12mm直径的Transwell嵌套带有 聚碳酯膜 02
细胞和组织培养技术在基础和应用生命科学领域的重要性日益提高。为尽可能的模拟体内 环境以培养某些特殊的细胞系，新的培养容器和细胞贴附的表面不断涌现。顺理成章的， 使用带有多微孔膜的通透性支持物培养这些细胞成为基本的方法。通透性支持物可以有效 改善极性细胞的培养，因为这些支持物允许细胞从其基底面和顶面分泌和吸收分子，从而 以更为自然的方式进行代谢。
常规使用指南
1．使用时先将培养液加入多孔板的孔中，将嵌套放入，再将含细胞的培养液加入嵌套内 部，推荐使用的培养液体积列在表5中。
推荐孔径 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 5.0, 8.0, 12.0um 3.0, 5.0, 8.0um 0.4, 1.0, 3.0um
0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um
12well
1.12 cm2
24mm 75mm
6well 100mm培养皿
4.67 cm2 44 cm2
*数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。
HTS Transwell系统
HTS Transwell系统是24个或96个独立Transwell嵌套通过一个坚固的，可以由机械臂操作的 支持物连接而成，从而可以作为一个单位来操作。这使得HTS Transwell系统成为自动操作 系统，高通量药物运输(Caco-2细胞)和毒性研究的理想工具。
选择孔径
在实验中使用Transwell®通透性支持物时选择合适的孔径也是十分重要的。表2总结了通透 性支持物的常规应用和推荐使用的孔径。最小孔径的Tanswell膜（0.1um）主要应用于药物 转导研究。细胞侵袭，趋化性和运动性研究通常采用3.0um或以上的孔径的Tranwell膜。 细胞从膜的孔中迁徙通过的能力与选用的细胞系及培养条件有关，同时也与孔径相关。小 于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过。对于一些要求严格的实验，康宁建议在实验中 选用一系列孔径作为对照来确定哪种尺寸最适合于你的细胞培养和特殊应用。还有一 个方 法就是参照已经发表的文献的推荐。若需更多的使用和应用信息， 请访问康宁网站上技术 信息部分的Transwell。
盖在滤膜纤维上的具有生物稳定性的胶原骨架。这些Transwell嵌套适用于需生物包被的 细胞培养。
实用小贴士
首先将培养液加入培养板，再 将含细胞的培养液加入 Transwell嵌套
Transwell®嵌套
上部空间
多孔膜 下部空间
嵌套的多孔底部使研究者可以从上层或下层接触到细胞，从而为体外的细胞运输和其他代谢活性研究提供通用的工具。
度保证最佳生长。 4. 在培养之前将通透性支持物在培养基中孵育可以改善细胞得贴附和分布。 5. 与塑料培养表面一样，细胞在通透性支持物上仍然需要细胞外支架的包被。 6. 透明的Transwell是带有透明的，经组织培养处理的聚酯膜，细胞在相差显微镜下很容易
被观察。 7. Transwell-COL带有PTFE膜，经过等摩尔数的I型和III型牛胎盘胶原处理。从而形成了覆
75mm Transwell嵌套和100mm 培养皿
Snapwell嵌套设计与扩散或 Ussing培养室配套使用
03
总览
在Transwell聚碳酯膜上的巨噬 细胞的扫描电镜照片（由
B.Wetzel, S. Wahl, E. Westbrook 和L. Altma, NIH, Bethesda, MD 惠赠）
聚四氟乙烯（PTFE） 湿润时透明 可见细胞轮廓 无 50um 有 有 0.4, 3.0
化学兼容性
所有的Transwell膜都适用于组织学固定剂，包括甲醇和甲醛。聚酯Transwell膜具有最佳 的全面化学适用性。这些膜（不包括聚苯乙烯）都耐受多种酒精，胺类，脂类，醚类，酮 类，石油类和其他溶剂包括卤化碳氢化合物和DMSO，但是不推荐使用强酸强碱。
HTS Transwell-96培养系统 (U.S. Patent No. 6,943,009) 包括以下几个部分：一个96孔嵌套 板，可以选择1.0或8.0um孔径的聚酯膜，或者0.4um, 3.0um, 5.0um孔径的聚碳酯膜；带有可 拆卸的培养液稳定装置的储液板用来加液或换液；检测使用的接收板（黑色或透明）；2 个盖子， 以防止挥发和污染。每个嵌套具有0.143 cm2 的生长面积。顶面及侧面的大开口便 于添加和取样。
HTS Transwell-24 培养系统可以提供处理过的0.4um孔径及3.0um孔径的聚碳酯膜，或0.4um 孔径的聚酯膜，具有对细胞贴附，生长和分化极佳的界面。一个一体化的储液板可以减少 在培养过程中的液体处理操作（培养液可以一次性快速换掉）。一旦细胞层长满，HTS Transwell-24 嵌套可以转移到一个普通的康宁®24孔培养板上进行实验。
总览
表1.Transwell膜特征
特点
光学特性 细胞可见度 组织培养处理 膜厚度 Matrix/ECM 包被性 胶原处理 可提供孔径（um）
聚酯（PET） 透明 好 有 10um 有 无
0.4, 1.0, 3.0, 8.0
聚碳酯（PC） 半透明 较差 有 10um 有 无
0.4, 3.0, 5.0, 8.0
滤膜作为细胞培养介质来源于Grobstein (Nature, 172:860-872; 1953)关于后肾滤膜诱导的研 究。经过长年对不同种类细胞的无数次应用，利用通透性支持物进行细胞培养被认为明显 优于坚固的，不可透过的细胞生长界面。对于表皮细胞和其他种类的细胞，利用通透性支 持物在体外培养使得细胞可以在更为自然的极性条件下生长和研究。同时提高了细胞的分 化水平，使得体外生长的细胞在形态和功能上更为接近体内的细胞。还可以进行运输，吸 收和分泌等细胞功能的研究，因为在通透性支持物上生长的细胞可以很方便且无干扰的接 近其基底面和顶面的细胞膜结构。使用通透性支持物进行细胞培养对于实验细胞学研究是 一个无可比拟的工具。
聚碳酯Transwell嵌套提供从0.1um到12.0um多种孔径。所有的膜都经过处理，使得细胞 更易贴附。
Transwell-COL嵌套湿润时透明的，胶原包被的PTFE膜，使得细胞更易贴附和伸展，同 时在培养的过程中可以观察。Transwell-COL含有牛胎盘中提取的等摩尔数混合I型和III 型胶原。不同于传统包被技术会形成密封的膜层，康宁专利包被技术使具有生物稳定 性的胶原包裹住滤膜的每一根纤维，从而保持了膜的多孔性。
孔密度
在三类膜中只有胶原包被的PTFE膜没有确定的孔密度，因为它具有是曲折孔道的膜。两 种具有额定孔密度的膜是聚酯膜和聚碳酯膜。聚酯Transwell膜的孔密度不像聚碳酯膜 那么高，但是它具有更好的光学清晰度，康宁聚酯膜和聚碳酯膜的额定孔密度详见表3。
选择合适的Transwell系统
Transwell通透性支持物有三种基本设计： 传统的Transwell平板嵌套在6, 12和24孔板及10cm培养皿中独立使用。 HTS Transwell-24和HTS Transwell-96 嵌套按特殊规格包装以方便操作和自动处理。 Snapwell嵌套在扩散或Ussing chambers 模型中使用。
无 1 x 105孔/cm2
*数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。
表4. Transwell 通透性支持物生长面积Fra bibliotek嵌套直径
多孔板和培养皿类型
嵌套膜生长面积
4.26mm
96 well
0.143 cm2
6.5mm
24well
0.33 cm2
12mm
HTS-96 系统是高通量药物转导 研究的理想工具
HTS Transwell系统为机械操作 而设计
05
如何使用Transwell® 通透性支持物
使用提示
1. 通透性支持物上的细胞形态和密度受滤膜孔径的影响。 2. 一些孔径大的膜可以容许细胞穿过。 3. 在通透性支持物上生长的细胞的贴附对于起始接种密度很敏感。初次使用应接种不同密
选择合适的Transwell® 膜和孔径
Transwell通透性支持物可以提供三种膜材料：聚碳酯（PC），聚酯（PET）和胶原包被的 聚四氟乙烯（PTFE）。表1提供了这些膜特性的更多信息。
聚酯Transwell-透明嵌套的特点是带有在显微镜下呈透明的膜。这些膜经过处理，可以 让细胞更好的贴附和生长。Transwell-透明嵌套使细胞在相差显微镜下更易观察，可以 估计细胞的生长状态和单层细胞的形成。
有关这些产品的详细信息可以在下面及订购信息中找到。
传统Transwell通透性支持物
Transwell嵌套可以提供四种膜直径6.5mm（24孔板），12mm（12孔板），24mm(6孔 板)和75mm（100培养皿）。表4列出了这些尺寸可以提供的细胞生长面积。
相对于每个规格，都有几种类型的膜和大范围的孔径可选择。具有专利的中心悬挂设计可 以防止培养液由嵌套壁和孔壁之间通过毛细作用流失。悬挂设计使得嵌套与底部有1mm的 差距，这样可以保证在嵌套移走的时候，形成的单层细胞不会被破坏。在嵌套壁上的缺口 可保证与底部接触。
04
总览
表3. Transwell® 聚酯膜和聚碳酯膜的额定孔密度
额定孔密度 孔径
聚酯膜
聚碳酯膜
0.4um 1.0um 3.0um 5.0um 8.0um
1 x 108孔/cm2 无
2 x 106孔/cm2 4 x 105孔/cm2 1 x 105孔/cm2