Chap4 药物的含量测定方法

第四章 药物的含量测定方法
药物的含量测定
定 义
是指测定药物中所含的主成分的量， 目的:判断药物的优劣。
化学分析法
重量分析 容量分析
含量测 定
可见紫外分光
仪器分析法
高效液相色谱法 气相色谱法
效价测定（生物学法）
适用于准确 度与精确度 要求较高的 样品测定
药物的含量测定 三种 分析 方法 光谱分 析法 特点

葡萄糖酸钙 富马酸亚铁 葡萄酸锑钠
EDTA配位滴定 邻二氮菲-硫酸铈滴定 间接碘量法
(二)、经水解后测定法
第二节 定量分析样品的前处理方法 1、碱水解法 适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不
牢固的药物。
CCl 3 C (CH 3 )2 OH 4 NaOH 回流 (CH 3 )2 CO 3NaCl HCOONa 2H2O
R x R xb Cx Cr Rr Rrb
(三)色谱分析法 1.HPLC
1.1 内标法
两步: (1)测f;
(2)测含量
(1)测f (用标准品与内标物)
A s / Cs 校正因子f A R / CR
As：内标物质峰面积或者峰高 AR: 对照品的峰面积或者峰高 Cs: 内标物质浓度 CR：对照品浓度
对照品 比较法 吸收系 数法
计算光 度法 (少用)
紫外可见分光度 法含量测定方法
1.对照品 比较法
分别配制供试品溶液和对照品溶液, 所用溶剂量两者相 同,在规定的波长下测定吸光度.按下式计算结果
Ax C R Cx AR C x 供试品溶液浓度 ; C R 对照品溶液浓度 ; Ax , AR 对应吸光度;
4 g/100ml） 解：C= m/V = 8.2×10- （
(E
1% 1cm ) 供=
A / CL = 0.580 / 8.2×10-4 = 707.3
（ E 1% ）供 1cm VitB12% = ———— = 707.3/715 = 98.93% 1% ） （ 标
E 1cm
(二)荧光分析法
特点： 灵敏度高，可达10-10～10-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定
a a 3 T =m× ×M=0.01667× ×137.14=3.429(mg/ml) b 2
b
滴定含量计算
取用 倍数 浓度校 正因数 滴定 度 消耗 体积
F=
实际C
规定C
浓度校 正因数
W测 = N F T V
例:VitC的含量测定:精密称取本品0.1332g,置锥形 瓶中,加稀醋酸与新沸过的冷蒸馏水的混合液 消耗 (1:10)110ml, 加淀粉批示液1ml,用碘滴定液 体积 (0.05014mol/L)滴定至蓝色,用去15.02ml,每1ml的 碘液(0.05mol/L)相当于8.806mg C6H8O6，计算本 品是否符合药典规定的含量限度。药典规定含 C6H8O6 不得低于99.0%。 滴定
例HPLC法测定磺胺嘧啶的含量
对照品+内标溶液配制：精密称取对照品50.0mg，置50ml量瓶 中，加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5ml,置25ml量瓶中, 精 密加内标溶液(0.20mg/ml)5ml,加流动相至刻度,摇匀。 供试品+内标溶液配制：精密称取本品50.5mg，照上法配制。 取上述两种溶液各10μl进样，测得对照品和内标峰分别为1350 和1040，供试品峰和内标峰分别为1313和1013。求SD的含量。 解：由于对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代 替浓度计算
A c( g / 100m l) 1% E1cm
本法紫外区须选用 石英比色皿，比色 皿一般为1cm，吸 光度在0.3~0.7之 间为宜，选用最大 吸收光波长。
紫外可见 分光度法
方法特 点与适 用范围
本法比较少应用于 原料药的含量测定， 可用于制剂的含量 测定，更多的应用 于生物制剂的定量 检查
As/Cs
Ar/mr
As/Cs
1040/0.20 1350/50.0
1013/0.20
=f=
Ax/mx
=f=
1313/mx
解之,得: mx=49.924(mg)
SD%=49.924/50.5=98.86%
2.外标法
Ax 含量(Cx)=CR × A R
(二 )
GC
内标法
A s / Cs 校正因子f A R / CR
需做空白试验的计算公式
W测= N F T （V-V0）
例:萘普生的含量测定：精密称取本品0.4960g，加甲醇 45ml溶解后，再加水15ml与酚酞指示剂3滴，用NaOH 滴定液（0.1078mol/L）滴定，同时用空白试验校正，求 萘普生百分含量。《中国药典》规定每1ml NaOH滴定 液（0.1mol/L）相当于23.03mgC14H14O3。按干燥品计算， 含C14H14O3不得少于98.5%。滴结果如下：V=19.85ml， V0=0.10ml，干燥失重=0.40%。
1
a 1 T =m× ×M=0.05× ×176.13=8.806(mg/ml) b 1
1
M=176.13
a T(mg / ml) m M b
示例二 异烟肼的滴定度 溴酸钾法测定异烟肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]， C溴酸钾=0.01667mol/L
3C6H7 N3O 2KBrO3 3C6H5 NO2 3N2 2KBr 3H2O
精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷， 用亚硝酸钠滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去 20.00ml。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于 17.92mg的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。
0.1010 17.92 20.00 0.1 100 99.72% 非那西丁% 0.3630 1000
度
计算步骤
0.1332样品中VitC含量(W测)
W测= N F T V 0.05014 = 1×———×8.806×10-3 ×15.02=0.13263(g) 0.05 VitC的百分含量(%) W测 0.13263 VitC% = W = 0.1332 样 =99.57%
又例
非那西丁含量测定
1.简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操 作简单，易于普及 2.灵敏度高：适用于低浓度试样分析 3.准确度较高：本法误差在2%~5%之间，适用 于对测定结果的准确度要求较高的样品 4.专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰， 但对结构相近的有关物质缺乏选择性。
紫外可见分光度 法含量测定方法
3种 方 法
将已知浓度的滴定液，由滴定管滴加到被 测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物 反应完全，然后根据滴定液消耗的浓度和 被消耗的体积，按化学计量关系式计算出 被测药物的含量。
特点
1.方法简便易行：仪器价廉易得，操作简便快速
2.方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少
3.测定结果准确：误差低于0.2% 4.方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用 于主成分含量较高的样品(如原料药)分析
(2)测含量(用样品与内标物)
含量(C x ) f
Ax
' ' AS / CS
As’：内标物质峰面积或者峰高 Ax: 供试品的峰面积或者峰高 Cs’: 内标物质浓度 f：校正因子
示例一
炔诺酮的含量测定
照高效液相色谱法(附录ⅤD测定) 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以甲醇-水(65:35)为流动相， 检测波长为244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算 不低于1500，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及 主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符 合要求。 内标溶液的制备 取黄体酮约25mg，精密称定， 置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。
二、光谱分析法
光谱分析法 药典 收载
红外分光 度法 火焰光度 法 紫外可见 分光度法 荧光分析 法
原子吸收分 光光度法
基于物质对紫外区 (200~400nm)和可见光 区(400~760nm)的单色 光辐射建立起来的光谱 分析法 紫外可 见分光 度法
基 础
朗伯-比尔定律
1 A lg Ecl T
第一节 定量分析方法 容量分析法有 关计算
T(滴定度):1ml滴定液(m mol/L)相当于被测药物的毫克数 例:用碘量法测定维生素C的含量 时，《中国药典》规定：每1ml碘 滴定液（0.05mol/L）相当于 8.806mg的维生素C（C2H8O6）
滴定度的 计算
aA bB cC dD
测定法 取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶 液2ml与内标溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录 色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量， 精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算， 即得。
As / A r 样品 测得量 W对照品 A s / A r 对照品
紫外可见分光度 法含量测定方法
2.吸收 系数法
吸收系数法:引入吸光系数 的含量计算方法
Cx
Ax
1% E1cm
100
药典 记载
（ E 含量% = ————— （ E 1% ）标
1cm
1% ）供 1cm
[例] 已知VitB12在361nm处的百分吸收系数为 207，现测得其水溶液的吸收度为0.414，吸收 池厚度为1cm，求其浓度。
简便快速、灵敏度 高，有一定的准确 度，但专属性稍差
适用于灵敏度 要求较高，样 本量较大的分 析项目
容量分 析法
色谱分 析法 特点
适用于专 属性和灵 敏度要求 较高的复 杂样品
Leabharlann Baidu
特点
操作简单、结果准 确，耐用性高，但 专属性差
灵敏度与专属性都高， 有一定的准确度，但结 果需要对照品
第一节 定量分析方法的分类与特点 容量分析法 定 义 亦称 滴定法
E 1cm
[例]用UV法测定对乙酰氨基酚的含量：精密称取本品 0.0410g，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml, 溶解后,加水于刻度,摇匀。精密量取5ml,置100ml量瓶 中, 加0.4%NaOH溶液10ml,溶解后,加水至刻度,摇匀。 在257nm处测得吸收度为0.580，按其百分吸收系数 715计算，求其百分含量。
含量(C x ) f
Ax
' ' AS / CS
第二节 定量分析样品的前处理方法 直接测定
配位滴定法 氧化还原滴定法
不经有 酸水解 机破坏 水解后测定 经还原分解后测定 经有机 破坏
碱水解
湿法破坏——凯氏定氮法
干法破坏
高温灼烧法 氧瓶燃烧法
第二节 定量分析样品的前处理方法 (一)、直接测定法 适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或某些CM键结合不牢固的有机金属药物。
用A算出（ E
1% 1cm）供 ，再用其与已知（
E
1% 1cm ）标
比值
解：C= m/V = 25×10-3/1000（g/ml）= 2.5×10- 3 （g/100ml） (E
1% 1cm ) 供=
A / CL = 0.507 / (2.5×10-3×1) = 202.8
（ E 1% ）供 1cm VitB12% = ———— = 202.8/207 = 97.97% 1% ） （ 标
解：C=
A
E
1% 1cm
0.414 = ———— = 0.00200( g/100ml 单位? ) L 207×1
[例]精密称取VitB12供试品25.0mg，加水溶解并稀释 制成1000mL，于1cm厚的吸收池中，在361nm处测 得吸收度为0.507，已知其百分吸收系数为207，求其 百分含量。
三氯叔丁醇 NaCl AgNO3 AgCl NaNO3
AgNO3 NH4 SCN AgSCN NH4 NO3
银量法 返滴定
2、酸水解法
十一烯酸锌 十一烯酸＋氯化锌
EDTA配位滴定
稀盐酸
第二节 定量分析样品的前处理方法
(三)、经还原分解后测定法 适用范围：碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。
滴定液 被测药物 滴定液 浓度 药物分 子量
a T(mg / ml) m M b
a T(mg / ml) m M b
示例一 计算VitC的滴定度T 碘量法测定VitC含量M(C6H6O6)=176.13， C(I2)=0.05mol/L m=0.05 mol/L
C6 H8O6 I 2 C6 H 6O 6 2HI