《微生物学实验》PPT课件
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微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色(共7张PPT)
微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色
二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
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二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
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动物微生物学实验PPT课件
培养结果分析包括培养基的选择、培养条件的控制、菌落形态观察等方面。通过对 这些方面的分析，可以初步判断微生物的种类和生长特性。
例如，在选择培养基时，可以选择适合某一类微生物生长的培养基，通过观察菌落 形态和颜色等特征，可以初步判断微生物的种类。
微生物分离结果分析
微生物分离是动物微生物学实验中的另 一个重要环节，通过分离可以得到较为 纯净的微生物样品，以便进行后续的实
验和分析。
分离结果的分析包括分离效率的评价、 分离得到的微生物种类的鉴定等方面。 通过对这些方面的分析，可以评估分离
方法的优劣和分离效果的好坏。
例如，在评价分离效率时，可以采用计 数法等方法对分离得到的微生物数量进 行统计，并与理论值进行比较，从而判
断分离效率的高低。
微生物鉴定结果分析
微生物鉴定是动物微生物学实验中的核心环节，通过鉴定可以确定微生物的种类和分类地位。
微生物分离
微生物分离是将混合菌样中的 不同微生物分离出来，获得纯 培养的过程。
分离方法包括划线分离、稀释 分离、选择性分离等，根据不 同微生物的特性选择合适的分 离方法。
分离过程中需注意无菌操作， 避免交叉污染，确保分离得到 的微生物纯度高、无杂菌。
微生物鉴定
微生物鉴定是通过观察微生物的 形态、染色、生化反应等特征， 对其种类进行鉴别和分类的过程。
培养基
选择性培养基、鉴别培养基等
实验器材
显微镜、接种环、培养皿、试 管等
04
试剂
染色剂、抗生素等
实验步骤
样本采集
采集动处理，如离心、过 滤等。
微生物分离
将处理后的样本接种于培养基上 ，进行微生物的分离。
结果分析
分析实验数据，得出结论。
例如，在选择培养基时，可以选择适合某一类微生物生长的培养基，通过观察菌落 形态和颜色等特征，可以初步判断微生物的种类。
微生物分离结果分析
微生物分离是动物微生物学实验中的另 一个重要环节，通过分离可以得到较为 纯净的微生物样品，以便进行后续的实
验和分析。
分离结果的分析包括分离效率的评价、 分离得到的微生物种类的鉴定等方面。 通过对这些方面的分析，可以评估分离
方法的优劣和分离效果的好坏。
例如，在评价分离效率时，可以采用计 数法等方法对分离得到的微生物数量进 行统计，并与理论值进行比较，从而判
断分离效率的高低。
微生物鉴定结果分析
微生物鉴定是动物微生物学实验中的核心环节，通过鉴定可以确定微生物的种类和分类地位。
微生物分离
微生物分离是将混合菌样中的 不同微生物分离出来，获得纯 培养的过程。
分离方法包括划线分离、稀释 分离、选择性分离等，根据不 同微生物的特性选择合适的分 离方法。
分离过程中需注意无菌操作， 避免交叉污染，确保分离得到 的微生物纯度高、无杂菌。
微生物鉴定
微生物鉴定是通过观察微生物的 形态、染色、生化反应等特征， 对其种类进行鉴别和分类的过程。
培养基
选择性培养基、鉴别培养基等
实验器材
显微镜、接种环、培养皿、试 管等
04
试剂
染色剂、抗生素等
实验步骤
样本采集
采集动处理，如离心、过 滤等。
微生物分离
将处理后的样本接种于培养基上 ，进行微生物的分离。
结果分析
分析实验数据，得出结论。
微生物学实验培养基制备和消毒灭菌22页PPT
马丁氏培养基的配方
KH2PO4
1g
MgSO4·7H2O 0.5g
蛋白胨
5g
葡萄糖
10 g
琼脂
15~20 g
水
1000 ml
pH
自然
临用时以无菌操作在 100 ml培养基中加入 l％
的链霉素0.3 ml，使其终浓度为 30μg/ml。
实验器材
➢ 溶液或试剂 KH2PO4，MgSO4·7H2O，蛋 白胨，葡萄糖，琼脂，链霉素（1％水溶 液）。 ➢ 仪器或其他用具 试管，三角烧瓶，烧 杯， 量筒，玻棒，天平，牛角匙，高蒸气灭菌 锅等。
5. 灭菌所需的时间到后，关闭煤气，让灭菌锅内温 度自然下降，当压力表降至“0时，打开排气阀， 旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
每组准备下列物品（灭菌）：
1.培养基一瓶（500ml三角瓶，内装200ml培养基） 2.无菌水一瓶（250ml三角瓶，内装90ml水） 3.试管6支（内装9ml水 ） 4.培养皿一包（9个） 5.移液管6支 6.玻璃刮刀一个
7．包扎
在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷 凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明 培养基名称、组别、配制日期。
8．灭菌
将上述培养基以 0.103 MPa 121℃， 20min高压蒸气灭菌。
二、马丁氏培养基的制备
基本原理：是一种用来分离真菌的选择性培养 基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、 MgSO4·7H2O、孟加拉红和链霉素等组成。 其中葡萄糖作为碳源，蛋白胨作为氮源， KH2PO4、MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生 物提供钾、磷、镁离子。这种培养基的特点是 培养基中加人的孟加拉红和链霉素能有效的抑 制细菌和放线菌的生长，而对真菌无抑制作用， 因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长， 从而达到分离真菌的目的。
微生物学实验 PPT课件
微生物学实验目录
实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二: 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 ---紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验
血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间 为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。 计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌 数。
死亡率测定的原理为： 美兰溶液是对细胞无毒性的、弱氧化性 的染液，其氧化态无色，还原态兰紫色。 活细胞具有还原能力，能将美兰溶液还 原为无色，而死细胞不具还原能力。
物镜(接物镜)
如何计算显微镜的放大倍数？
照明系统部分
光 源 ： 内光源与外光源 反光镜 ： 凹面镜与平面镜
聚光镜 ：
升高与降低聚光镜
光 圈 ： 放开与关闭光圈
如何调节观察视野的明暗度？
2.光学显微镜的使用
取镜
放镜
对光 放片
调焦(粗调焦和细调焦)
低倍镜的使用 高倍镜的使用
问题思考：对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？
二、实验用品
菌种：大肠杆菌斜面菌种； 八叠球菌斜面菌种 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； 碘液；95％乙醇 其它：显微镜；载玻片；接种环； 香柏油；酒精灯；擦镜纸
三、 基本原理：
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 Christain Gran 创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类 脂质含量高。
实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二: 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 ---紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验
血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间 为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。 计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌 数。
死亡率测定的原理为： 美兰溶液是对细胞无毒性的、弱氧化性 的染液，其氧化态无色，还原态兰紫色。 活细胞具有还原能力，能将美兰溶液还 原为无色，而死细胞不具还原能力。
物镜(接物镜)
如何计算显微镜的放大倍数？
照明系统部分
光 源 ： 内光源与外光源 反光镜 ： 凹面镜与平面镜
聚光镜 ：
升高与降低聚光镜
光 圈 ： 放开与关闭光圈
如何调节观察视野的明暗度？
2.光学显微镜的使用
取镜
放镜
对光 放片
调焦(粗调焦和细调焦)
低倍镜的使用 高倍镜的使用
问题思考：对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？
二、实验用品
菌种：大肠杆菌斜面菌种； 八叠球菌斜面菌种 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； 碘液；95％乙醇 其它：显微镜；载玻片；接种环； 香柏油；酒精灯；擦镜纸
三、 基本原理：
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 Christain Gran 创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类 脂质含量高。
微生物学课件ppt完整版
医院感染
分为内源性感染（由体内正常菌 群引起的感染）和外源性感染（ 由外界环境中的微生物引起的感
染）。
感染类型
局部感染局限于某一部位，而全 身感染则涉及多个器官和系统。
局部感染与全身感染
在医院等医疗机构内获得的感染 ，多由耐药菌引起，治疗难度较 大。
微生物感染的预防与治疗
预防措施
包括个人卫生、环境卫生、疫苗接种等，以 降低感染风险。
无菌操作
进行微生物实验时，要保 持无菌操作环境，避免杂 菌污染。
实验记录
详细记录实验过程和结果 ，包括培养基的配制、接 种方法、培养条件、观察 结果等。
实验后处理
实验结束后，要对实验器 材进行清洗和消毒处理， 保持实验室的整洁和卫生 。
2023
REPORTING
THANKS
感谢观看
食品工业
利用微生物发酵技术生产酒类、面 包、酸奶等食品。
03
02
农业应用
利用微生物制剂防治植物病害、促 进作物生长等。
生物能源
利用微生物发酵产生沼气、生物柴 油等可再生能源。
04
2023
PART 05
微生物的免疫与感染
REPORTING
微生物的免疫机制与特点
先天性免疫
通过遗传获得的非特异性免疫，包括皮肤、黏膜 屏障、吞噬细胞等。
病原学检查
通过直接涂片镜检、分离培养等方法确定病 原微生物种类。
免疫学检查
利用抗原抗体反应等免疫学原理检测病原微 生物及其产物。
2023
PART 06
微生物学实验技术与方法
REPORTING
微生物学实验室常用设备与器材
培养箱
提供适宜的温度和湿度条件， 用于培养微生物。
分为内源性感染（由体内正常菌 群引起的感染）和外源性感染（ 由外界环境中的微生物引起的感
染）。
感染类型
局部感染局限于某一部位，而全 身感染则涉及多个器官和系统。
局部感染与全身感染
在医院等医疗机构内获得的感染 ，多由耐药菌引起，治疗难度较 大。
微生物感染的预防与治疗
预防措施
包括个人卫生、环境卫生、疫苗接种等，以 降低感染风险。
无菌操作
进行微生物实验时，要保 持无菌操作环境，避免杂 菌污染。
实验记录
详细记录实验过程和结果 ，包括培养基的配制、接 种方法、培养条件、观察 结果等。
实验后处理
实验结束后，要对实验器 材进行清洗和消毒处理， 保持实验室的整洁和卫生 。
2023
REPORTING
THANKS
感谢观看
食品工业
利用微生物发酵技术生产酒类、面 包、酸奶等食品。
03
02
农业应用
利用微生物制剂防治植物病害、促 进作物生长等。
生物能源
利用微生物发酵产生沼气、生物柴 油等可再生能源。
04
2023
PART 05
微生物的免疫与感染
REPORTING
微生物的免疫机制与特点
先天性免疫
通过遗传获得的非特异性免疫，包括皮肤、黏膜 屏障、吞噬细胞等。
病原学检查
通过直接涂片镜检、分离培养等方法确定病 原微生物种类。
免疫学检查
利用抗原抗体反应等免疫学原理检测病原微 生物及其产物。
2023
PART 06
微生物学实验技术与方法
REPORTING
微生物学实验室常用设备与器材
培养箱
提供适宜的温度和湿度条件， 用于培养微生物。
医学微生物学微生物实验PPT免疫试验3
转化率﹦
转化的淋巴细胞数(过渡型、淋巴母细胞、有丝分裂相)
×100%
转化的+未转化的淋巴细胞数
正常成人转化率为：60%~80%，﹤50%视为降低
淋巴细胞转化实验
T细胞
PHA
刀豆素A (ConA） 美洲商陆（PWM）
淋巴母细胞
（体积增大，形态不整齐，核 大，松散，有核仁，胞浆变宽，
出现空泡）
Ag刺激T淋巴细胞转化各期形态
常用的丝裂原:
植物血凝素（PHA） 刀豆素A(ConA) 美洲商陆(PWM)
方法： 1.分离外周血淋巴细胞
方法：
2.将分离的血淋巴细胞+PHA→混匀，37℃孵育72
小时→低速离心取培养液涂片染色、镜检，分别
计数转化淋巴细胞（淋巴母细胞、过渡型母细胞
和核有丝分裂相细胞）和成熟的淋巴细胞，共计
数200个细胞。并计算转化率。
Ab 载 体
反应结果
有 不需要
无
凝 集 素
需要 （致敏颗粒）
肉眼可见 凝集块
有 无
需要
无
（致敏颗粒）
有
报告方 式
阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性
反应名称
支撑物的 特点
观察现象
意 义
双扩
琼脂凝胶
中不含抗 沉淀线
沉 对流电泳
体
定 性
淀
反
应
单扩
沉淀圈
琼脂凝胶
定
中含抗体
量
火箭电泳
沉淀峰
扩散条件 37℃~36h
2、毒素中和试验
细菌毒素与抗毒素中和试验。 常见用于诊断风湿病抗“O”试验。
原理：
乙型溶血性链球菌产生的溶血毒素“O” （SLO ）能 刺激机体产生抗O抗体（ASO），于感染后2～3周至病愈 后数月到一年可检出高于正常值的SLO抗体（1：400以 上）。SLO与相应抗体作用时会因毒性被中和而失去溶血 活性。因此，可通过该方法测定ASO。
微生物学实验课件-微生物数量的测定
4、加樣後靜止5min，將計數板置顯微鏡載物臺上，先用
低倍鏡找到計數區，然後換高倍鏡計數。（光不宜太強，
需要使用濾光片）
清洗時切勿用刷子等硬物，
也不可用酒精燈火焰烘烤
5、計數完畢，將血球計數板在水龍頭下流水沖洗乾淨，用
電吹風吹幹，鏡檢確認計數區無殘留菌體或其他沉澱。
6.作業：結果（填表） P55
光電比濁計數法 目的要求
Hawksley計菌器
❖❖計血數球室計的數刻板度是一一般塊有特兩製種的規載格玻：片一，種其是上一由個四大條方槽格構分成成三2個5個平中方 格每臺，個；而方中每格間個網較中共寬方分的格為平又九臺分個又成大被1方一6個格短小，橫方中槽格間隔；的成另大兩一方半種格，是即每一為一個計邊大數的方室平格。臺分成 1上6個各中列方有格一，個而方每格個網中。方格又分成25個小方格。 ❖無論是哪一種規格的計數板，每一個大方格中的小方格都是 400個。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為 lmm2，蓋上蓋玻片後，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm， 所以計數室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。
❖ 選擇波長：將靈敏度開關調至“1”檔（若零點調節器調不到 “0”時，需選用較高檔）。選擇合適的波長。
❖ 調零：將空白液倒入比色皿中（不少於3/4），用擦鏡紙擦 清外壁，放入樣品室內，光面對準光路。將吸光度設置為0％， 確認；將透光度設置為100％，確認。
❖ 測定：將樣品加入另一個比色皿，放入樣品室，讀取吸光度。 ❖ 關機：測定完畢，關上電源，取出比色皿洗淨，樣品室用軟
1、稀釋：將待測菌懸液用無菌生理鹽水適當稀釋。 2、測定：在560nm波長測定稀釋後菌懸液的吸光度。 3、計算：根據所測得的吸光值，從標準曲線查得每
毫升的含菌數，乘以稀釋倍數就得到原液中細菌數。 4、作業：繪製標準曲線，將比濁法所測結果同直接
最新微生物学基础实验PPT课件
实验完毕后的处理
1）观察完毕，关闭电源,下降载物台，将油镜头转出，将浸过液 体石蜡的镜头用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次至干净。注意擦镜 头时向一个方向擦拭。 2）观察完毕，擦净标本玻片上的石蜡油。 3）将各部分还原，将显微镜用专用套罩好，以免沾污灰尘。 4）观察完毕，将所观察的长有菌落的培养皿盖好放于以原处。。
微生物的形态观察(一)
注意事项
显微镜观察细菌涂片（细菌三型涂片、枯草杆菌涂片）
使用油镜： 低倍镜（10× ） （100× ）
高倍镜（40× ）
油镜
显微镜观察放线菌、曲霉示菌丝及孢子、匍枝根霉、
有隔菌丝与无隔菌丝等装片时：
低倍镜（10× ）
高倍镜（40× ）
用油镜观察时，观察完毕应将镜头、玻片标本上的液 体、实验原理、涂片观察结果绘图、菌落观察结果填 表。 观察平皿的培养基上生长的各种微生物的菌落，简单分类，详细 记录其特征填入下表。细菌、真菌、放线菌，以下以细菌为例记 录指标。
细菌、真菌、放线菌等菌落观察记录指标
（注意选取单个菌落，进行目测观察，描述菌落特征） 1）大小：大、中、小、针尖状，可用米尺测量菌落的直径（mm）. 2）颜色：黄、浅黄、乳白、灰白、红、粉红等。 3）干湿：干燥、湿润、粘稠。 4）质地：腊状、液滴状、皱褶状。 5）形态：圆形、不规则、同心圆状、丝状、假根状、棉絮状、网 状、疏松或紧密、同心轮纹、放线状的皱褶等。 6）表面：扁平扩展或蔓延生长、隆起、凹、凸、脐状、凸脐状、 乳头状、褶皱凸面。 7）透明：透明、半透明、不透明。 8）边缘：整齐、不整齐、圆锯齿状、裂叶、不定形、边缘波状。
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实验六
实验五 培养基的制备、 器具包扎和灭菌
编辑ppt
1
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
编辑ppt
2
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质 配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
编辑ppt
8
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可 溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O
等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
编辑ppt
16
高氏一号培养基
用于分离和培养放线菌，是一种合成培
养基。配方如下：
可溶性淀粉
20.0g
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl
1.0g 0.5g 0.5g 0.5g
FeSO4• 7H2O pH
0.01g 7.4~7.6
琼脂
20g
自来水
1000mL
灭菌： 1.05kg/cm2 30min
灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方 法。
干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器
加压蒸汽灭菌法其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大 气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到 0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气 阀。 4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C， 维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸 等物时，应适当降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。
剧用途可分为 1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求 加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使 其快速生长，便于分离 3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标 微生物得到富集，便于分离 4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。
编辑ppt
3
从培养基的物理状态可分为
编辑ppt
11
实验步骤
培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌
编辑ppt
12
培养基的配制方法和步骤
称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加
热溶解。 调pH值：用 NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补
5g
氯化钠
3g
琼脂
20g
自来水
1000mL
pH
7.0~7.2
灭菌
1.05kg/cm2，
25~30min
编辑ppt
15
马铃薯蔗糖琼脂培养基
用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养
基，其配方如下：
去皮马铃薯（或鲜豆芽） 200g
蔗糖
20g
自来水
1000mL
琼脂
20g
pH
自然
灭菌：（含蔗糖）1.05kg/cm2 20min
编辑ppt
7
间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天 蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。 在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基） 放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以 使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营 养体，以便下次蒸煮时杀灭。
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、 血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。
第2组 4号
200ml
第3组 8号
200ml
第4组 11号 200ml分装30支试管
第5组 9号
200ml
第6组 10号 200ml分装30支试管
第7组 13号 200ml分装30支试管
第8组 12号 200ml分装30支试管
第9组 2号
200ml
每组包扎平板1包，6个/包；包扎1ml吸管5根； 1瓶加玻珠无菌水45ml；9ml无菌水试管5根
思考题
固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问 题？
培养基中加琼脂的作用是什么？ 干热灭菌、高压蒸汽灭菌和间歇灭菌的场合有
水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何
种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养
24h，确定无菌生长，方可使用。
培养基的配制方法和步骤
编辑ppt
14
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
（用于分离和培养细菌，是一种天
然培养基）配方如下：
牛肉膏
3g
蛋白胨
1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂 的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固 剂而成的半固体状培养基。
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4
常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
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5
消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的 方法。
编辑ppt
17
制备无菌水
无菌水为下一次微生物分离实验中所需要 的材料。 250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来 水45mL，试管中装9.0mL自来水，塞上棉 塞，包扎、灭菌备用。
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18
物品的准备
三角烧瓶、试管、培养皿、吸管 等的包扎准备。
现场演示
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19
第1组 1号
200ml
实验五 培养基的制备、 器具包扎和灭菌
编辑ppt
1
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
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2
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质 配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
编辑ppt
8
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可 溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O
等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
编辑ppt
16
高氏一号培养基
用于分离和培养放线菌，是一种合成培
养基。配方如下：
可溶性淀粉
20.0g
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl
1.0g 0.5g 0.5g 0.5g
FeSO4• 7H2O pH
0.01g 7.4~7.6
琼脂
20g
自来水
1000mL
灭菌： 1.05kg/cm2 30min
灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方 法。
干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器
加压蒸汽灭菌法其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大 气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到 0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气 阀。 4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C， 维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸 等物时，应适当降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。
剧用途可分为 1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求 加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使 其快速生长，便于分离 3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标 微生物得到富集，便于分离 4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。
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3
从培养基的物理状态可分为
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11
实验步骤
培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌
编辑ppt
12
培养基的配制方法和步骤
称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加
热溶解。 调pH值：用 NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补
5g
氯化钠
3g
琼脂
20g
自来水
1000mL
pH
7.0~7.2
灭菌
1.05kg/cm2，
25~30min
编辑ppt
15
马铃薯蔗糖琼脂培养基
用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养
基，其配方如下：
去皮马铃薯（或鲜豆芽） 200g
蔗糖
20g
自来水
1000mL
琼脂
20g
pH
自然
灭菌：（含蔗糖）1.05kg/cm2 20min
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7
间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天 蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。 在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基） 放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以 使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营 养体，以便下次蒸煮时杀灭。
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、 血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。
第2组 4号
200ml
第3组 8号
200ml
第4组 11号 200ml分装30支试管
第5组 9号
200ml
第6组 10号 200ml分装30支试管
第7组 13号 200ml分装30支试管
第8组 12号 200ml分装30支试管
第9组 2号
200ml
每组包扎平板1包，6个/包；包扎1ml吸管5根； 1瓶加玻珠无菌水45ml；9ml无菌水试管5根
思考题
固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问 题？
培养基中加琼脂的作用是什么？ 干热灭菌、高压蒸汽灭菌和间歇灭菌的场合有
水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何
种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养
24h，确定无菌生长，方可使用。
培养基的配制方法和步骤
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14
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
（用于分离和培养细菌，是一种天
然培养基）配方如下：
牛肉膏
3g
蛋白胨
1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂 的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固 剂而成的半固体状培养基。
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4
常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
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5
消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的 方法。
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17
制备无菌水
无菌水为下一次微生物分离实验中所需要 的材料。 250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来 水45mL，试管中装9.0mL自来水，塞上棉 塞，包扎、灭菌备用。
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18
物品的准备
三角烧瓶、试管、培养皿、吸管 等的包扎准备。
现场演示
编辑ppt
19
第1组 1号
200ml