生活饮用水标准检验方法_微生物指标[1]

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检测方法:多管发酵法、 检测方法:多管发酵法、滤膜法 修订前 原理: 原理:用提高培养温度的方法将自 然环境中的大肠菌群与粪便中大肠 菌群区分开, 菌群区分开,在44.5℃仍能生长的 ℃ 大肠菌群,称为粪大肠菌群 称为粪大肠菌群。 大肠菌群 称为粪大肠菌群。 修订后 定义: 定义:用提高培养温度的方法将自 然环境中的大肠菌群与粪便中大肠 菌群区分开, 菌群区分开,在44.5℃仍能生长的 ℃ 大肠菌群,称为耐热大肠菌群。 大肠菌群 称为耐热大肠菌群。 称为耐热大肠菌群
能产生β-半乳糖苷酶的细菌群组分解 能产生 半乳糖苷酶的细菌群组分解ONPG使培养基呈黄色 半乳糖苷酶的细菌群组分解 使培养基呈黄色 酶底物法的主要特点: 酶底物法的主要特点: 优点: 优点: 可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌 检测时间较短,只需18-24h,最长需要 检测时间较短,只需 ,最长需要28h 无需确证试验 操作简单, 操作简单,对试验条件和人员要求低 缺点: 缺点: 检测成本高
水质常规指标及限值
修订前
微生物指标 细菌总数 限值 100 CFU/mL 微生物指标 菌落总数/( 菌落总数 (CFU/mL) )
修订后
限值 100
总大肠菌群
总大肠菌/(MPN/100mL或 总大肠菌 ( 或 每100mL水样中不得检出 CFU/100mL) 水样中不得检出 ) 不得检出 耐热大肠菌/( 耐热大肠菌 (MPN/100mL 每100mL水样中不得检出 或CFU/100mL) 水样中不得检出 ) 不得检出 在与水接触30min后应不 大肠埃希氏菌 后应不 大肠埃希氏菌/ 在与水接触 低于0.3mg/L,管梢末水不 (MPN/100mL或 或 低于 管梢末水不 CFU/100mL) ) 应低于0.5mg/L 应低于
修订后
限值 500
生活饮用水水质参考指标及限值
修订前
微生物指标 限值 微生物指标 肠球菌/( 肠球菌 (CFU/100mL) ) 产气荚膜梭状芽胞杆/( 产气荚膜梭状芽胞杆 (CFU/100mL) )
修订后
限值 0 0
一、菌落总数
修订前
修订后
细菌总数 菌落总数 原理: 定义: 原理:细菌总数是指水样在一定 定义:水样在营养琼脂上有氧条 件下 ℃培养 后 所得 水 条件下培养后(培养基成分、 条件下培养后(培养基成分、培 件下37℃培养48h后,所得1ml水 养温度和时间、pH、需氧性质等) 样所含菌落的总数。 养温度和时间、 、需氧性质等) 样所含菌落的总数。 所得1ml水样所含菌落的总数。按 所得 水样所含菌落的总数。 水样所含菌落的总数 本规范规定所得结果只包括一群 能在营养琼脂上发育的嗜中温的 需氧的细菌菌落总数 培养条件: ± ℃ 培养条件:36±1℃ 24h 36±1℃ 48h ± ℃
隐孢子虫生活周期 Cryptosporidium 隐孢子虫生活周期
Ⅰ型裂殖体 子孢子 滋养体
裂殖子
裂殖子
成熟卵囊
酶底物法
酶底物法定义:总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生 酶底物法定义:总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生β半乳糖苷酶的细菌群组, 半乳糖苷酶的细菌群组,该细菌群组能分解色原底物释放出色原体 使培养基呈现颜色变化,以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。 使培养基呈现颜色变化,以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。 培养基:MMO-MUG培养基(Minimal Medium ONPG-MUG)。 培养基: 培养基( ) 培养基 本方法可分为定性和定量。 本方法可分为定性和定量。 定量法: 管法 管法、 孔定量法 定量法:10管法、51孔定量法 培养条件: ± ℃ 培养条件: 36±1℃ 24h
四、大肠埃希氏菌
检测方法:多管发酵法、滤膜法、 检测方法:多管发酵法、滤膜法、酶底物法 大肠埃希氏菌多管发酵法定义: 大肠埃希氏菌多管发酵法定义:大肠埃希氏菌是指多管发酵法总大 肠菌群阳性,在含有荧光底物的培养基上44.5℃培养 产生β-葡萄 肠菌群阳性,在含有荧光底物的培养基上 ℃培养24h产生 葡萄 产生 糖酫酸酶,分解荧光底物释放出荧光产物, 糖酫酸酶,分解荧光底物释放出荧光产物,使培养基在紫外光下产生 特征性荧光的细菌,以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。 特征性荧光的细菌,以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。 培养基: 甲基伞形酮-β-D-葡萄糖酫酸苷)。 葡萄糖酫酸苷)。 培养基:EC-MUG(4-甲基伞形酮 ( 甲基伞形酮 葡萄糖酫酸苷 培养条件: 培养条件:44.5±0.5℃ 培养 ±2h。紫外灯:波长 ± ℃ 培养24± 。紫外灯:波长366nm,功率 ,功率6W 大肠杆菌能产生β-葡萄糖酫酸酶分解 葡萄糖酫酸酶分解MUG,菌落在 大肠杆菌能产生 葡萄糖酫酸酶分解 ,菌落在366nm紫外光下产 紫外光下产 生蓝色荧光 滤膜法定义:用滤膜法检测水样后, 滤膜法定义:用滤膜法检测水样后,将总大肠菌群阳性的滤膜 在含 有荧光底物的培养基上培养,能产生β-葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释 有荧光底物的培养基上培养,能产生 葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释 放出荧光产物,使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光, 放出荧光产物,使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光,以此来检测 水中大肠埃希氏菌的方法。 水中大肠埃希氏菌的方法。 培养基: 培养基:NA-MUG
多管发酵法原理: 多管发酵法原理 : 总大肠菌群系指一 群在37℃ 培养24h能发酵乳糖、 产酸 能发酵乳糖、 群在 ℃ 培养 能发酵乳糖 产气、 产气 、 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性 无芽胞杆菌。 无芽胞杆菌 。 该菌群主要来源于人畜 粪便,具有指示菌的一般特征, 粪便 , 具有指示菌的一般特征 , 故以 此作为粪便污染指标评价饮水的卫生 质量。 质量。
生活饮用水卫生标准GB5749-2006 生活饮用水卫生标准 生活饮用水标准检验方法GB5750-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标及微生物检验的介绍
广东省CDC微生物检验所 微生物检验所 广东省
严纪文
我国旧的饮用水水质标准是1985年颁布实施的 年颁布实施的GB5749我国旧的饮用水水质标准是 年颁布实施的 85,标准检验方法为 ,标准检验方法为GB5750-85。该标准与国外的饮用 。 水标准相比,主要差别在于微生物指标项目少, 水标准相比,主要差别在于微生物指标项目少,缺少有机 物和消毒副产物指标。 物和消毒副产物指标。微生物指标只有细菌总数和总大肠 菌群2项 不能确切的评价水质的卫生状况。 菌群 项,不能确切的评价水质的卫生状况。 修订后的标准,微生物学指标增加为 项 菌落总数、 修订后的标准,微生物学指标增加为6项:菌落总数、总 大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、 大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫和 隐孢子虫。 隐孢子虫。 同时在资料性附件中增加了肠球菌和产气荚膜梭状芽胞杆 菌。
二、总大肠菌群(埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷 总大肠菌群(埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、 伯氏菌属、肠杆菌属) 伯氏菌属、肠杆菌属) 除多管发酵法、滤膜法外, 除多管发酵法、滤膜法外,增加了酶底物检测方法
修订前 修订后 多管发酵法 总大肠菌群定义: 总大肠菌群定义:总大肠菌群指一群 能发酵乳糖、 在37℃ 培养 ℃ 培养24h能发酵乳糖、产酸产 能发酵乳糖 气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无 芽胞杆菌。 芽胞杆菌。
结果: 个 管中阳性管数为0时 结果: 个 管中阳性管数为0时 结果:5个10ml 管中阳性管数为 时, 结果:5个10ml 管中阳性管数为 时, MPN值为 (主要针对出厂自来水或 MPN值<2.2 值为0( 值为 值 需每天检验一次的水样) 需每天检验一次的水样)
滤膜法Βιβλιοθήκη Baidu
修订前 滤膜法原理:用孔径为 滤膜法原理:用孔径为0.45µm 的微孔滤膜过滤水样,细菌被截留 的微孔滤膜过滤水样 细菌被截留 在滤膜上,将滤膜贴在选择培养上 将滤膜贴在选择培养上, 在滤膜上 将滤膜贴在选择培养上 经培养后,计数生长在滤膜上的典 经培养后 计数生长在滤膜上的典 型大肠菌群菌落数。 型大肠菌群菌落数。 培养条件: ℃ 培养条件:37℃ 18-24h
修订后 滤膜法定义: 滤膜法定义:总大肠菌群滤膜法 是指用孔径为0.45µm的微孔滤 是指用孔径为 的微孔滤 膜过滤水样, 膜过滤水样 将滤膜贴在添加乳 糖的选择培养上, ℃ 培养24h, 糖的选择培养上 37℃ 培养 , 能形成特征菌落的需氧和兼性厌 氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检 测水中总大肠菌群的方法。 测水中总大肠菌群的方法。 培养条件: ℃ ± 培养条件:37℃ 24±2h
培养条件: ± ℃ 培养4h 培养条件:36±1℃ 培养 紫外灯:波长366nm,功率 紫外灯:波长 ,功率6W
酶底物法定义:在选择培养基上能产生 半乳糖苷酶分 酶底物法定义:在选择培养基上能产生β-半乳糖苷酶分 解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化,并能产 解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化, 葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物, 生β-葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物,使菌落 葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物 能够在紫外光下产生特征性荧光, 能够在紫外光下产生特征性荧光,以此技术来检测大肠埃 希氏菌的方法为大肠埃希氏菌酶底物法。 希氏菌的方法为大肠埃希氏菌酶底物法。 培养基:ONPG-MUG 培养基: 结果判定:水样变黄色同时在 结果判定:水样变黄色同时在366nm的紫外光下产生蓝色 的紫外光下产生蓝色 荧光为阳性。水样未变黄色而有蓝色荧光产生不能判定为 荧光为阳性。 阳性。 阳性。
粪大肠菌群
游离余氯
不得检出
水质非常规指标及限值
修订前
微生物指标 限值 微生物指标 贾第鞭毛虫/( 贾第鞭毛虫 (个/10L) ) 隐孢子虫/( 隐孢子虫 (个/10L) )
修订后
限值 <1 <1
小型集中式供水和分散式供水部分水质指标及限值
修订前
微生物指标 限值 微生物指标 菌落总数/( 菌落总数 (CFU/100mL) )
五、贾第鞭毛虫子和隐孢子虫 贾第鞭毛虫和隐孢子虫是一类寄生于人和动物体 内的肠道原虫,可致人兽共患病。 内的肠道原虫,可致人兽共患病。患此病的人和动物 从粪便中排出大量的卵(孢)囊污染环境,在地面水和 从粪便中排出大量的卵 孢 囊污染环境, 囊污染环境 防护差的地下水及处理不良的自来水中都可检出卵(孢 防护差的地下水及处理不良的自来水中都可检出卵 孢) 随着社会发展,优质供水势在必行。 囊。随着社会发展,优质供水势在必行。对一些潜在 的危险因素加以限制很有必要。在此基础上, 的危险因素加以限制很有必要。在此基础上,新标准 中增加了贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测方法。 中增加了贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测方法。
总大肠菌群三种方法的比较
多管发酵法 时间 验证试验 步骤 特殊设备 价格 24-72h 需要 较繁 显微镜 低
滤膜法 24-48h 需要 较简便 显微镜、 显微镜、过滤设备 低
酶底物法 24-28h 不需要 简便 压膜机 较高
三、耐热大肠菌群(埃希氏菌属、耐热克雷伯氏菌) 耐热大肠菌群(埃希氏菌属、耐热克雷伯氏菌)
Cryptosporidium
隐孢子虫
特点:单一细胞原生动物, 微小隐孢子虫、 特点:单一细胞原生动物,约3-7µm 。有微小隐孢子虫、 鼠隐孢子虫和贝氏隐孢子虫三种,寄生于人、 鼠隐孢子虫和贝氏隐孢子虫三种,寄生于人、牛等体内的 主要为微小隐孢子虫( parvum)。 主要为微小隐孢子虫(C.parvum)。 宿主:人类、鸟类、鼠类、爬行类、 宿主:人类、鸟类、鼠类、爬行类、鱼类 感染源:隐孢子虫主要寄生在被感染的动物体肠道内, 感染源:隐孢子虫主要寄生在被感染的动物体肠道内,卵 囊通过粪便排出体外污染环境。 囊通过粪便排出体外污染环境。 易感人群:免疫缺陷者(如爱滋患者)、儿童、老人、 )、儿童 易感人群:免疫缺陷者(如爱滋患者)、儿童、老人、医 务人员等 传播方式:以粪口途径为主, 传播方式:以粪-口,手-口途径为主,污染的水源和空气 均可传播。 均可传播。
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