氧化苦参碱提取工艺研究

苦参中氧化苦参碱的提取工艺研究

摘要目的：利用正交试验，确定最佳提取工艺，并考察阳离子交换树脂法精制苦参中氧化苦参碱的效果，且与其它大孔树脂法进行了比较。方法：采用HPLC法测定氧化苦参碱的含量。结果：确定最佳工艺，即用10倍量于药材的1%醋酸溶液提取，两小时三次，用001×4强酸型阳离子交换树脂法较大孔树脂法可更有效的保留有效成分、去除杂质。结论：优选得到的工艺简便易行。

关键词苦参；氧化苦参碱；正交试验；阳离子交换树脂

Study on different extraction process of oxymatrine in Radix

Sophora flavescens

Abstract Objective: To study the effect of cation exchange resin method in fefining of oxymatrine in Sophora flavescens, and to compare the results with that of macroporous resin. Orthogonal test was used to optimize the technology for extracting oxymatrine. Mehtods: HPLC was applied to analyze the content of oxymatrine in the samples. Results: The optimal extraction technology was as follows: the medicinal mateial was refluxed with 1% acetum for three times and each time was 2 hours. 001×4 cation exchange resin method was more effective than macroporous resin for refining oxymarine in Sophora flavescens. Conclusion: This optimized method is simple and efficient.

Key words Radix Sophora flavescens; oxymatrine; orthogonal test; cation exchange resin 苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Art.的干燥根，有清热燥湿，杀虫，利尿之功效。主要成分为氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱等多种生物碱类成分。现代研究表明，氧化苦参碱具有抗心律失常，抗癌及抗衰老等活性。目前，如何高效、快速提取、分离、纯化氧化苦参碱，满足其在医药、化妆品、植物生长调节剂等方面的不断增长的大量需求，研究不足，而且产品的纯度等方面均达不到要求，影响其药理活性的发挥和进一步的开发利用。本文以氧化苦参碱为考察对象，对苦参的不同提取工艺进行比较，优选出氧化苦参碱的最佳提取工艺。

1 实验材料及仪器

1.1 实验材料

苦参，购于河北省安国，氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所）；001

×4强酸型阳离子交换树脂、AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂（南开大学化工厂）；乙腈、无水乙醇为色谱纯；水为自制高纯水；其余试药均为分析纯。

1.2 仪器

高效液相色谱仪（Waters:510泵，2487紫外检测器）；JS-3030江申通用汉化色谱工作站（大连江申分离科学技术公司）；DRT-TM调温电热套（巩义市予华仪器有限公司）；Senco R 系列旋转蒸发仪；SHZ-IIIB型循环水真空泵（上海申生科技有限公司）。

2 实验方法及结果

2.1 色谱条件和系统适用性条件

以氨基键和硅胶为填充剂；柱温为30℃；流动相为乙腈:无水乙醇:3%磷酸（80:10:10）；检测波长为220nm。理论板数按氧化苦参碱计算应不低于2500。

2.2 标准溶液的制备

精密称取氧化苦参碱对照品5mg于50ml容量瓶中，用乙腈-无水乙醇（8:1）溶解并定容，混匀，即得标准溶液。

2.3 提取条件考察方案设计

考虑到提取溶媒、溶媒用量、提取时间、提取次数等因素对提取的影响，每个因素选择三个水平，以L9(34)正交表进行实验研究，从而优选最佳提取工艺。

表1 因素水平表

Table 1 Factors and levels of orthogonal test

水平提取溶媒（A）溶媒用量（B）提取时间（C）提取次数（D）

1 水 6 1 2

2 1%醋酸8 2 3

3 0.1%盐酸10 3 4

实验方法及结果：精密称取苦参药材100g，分别根据正交表的实验研究，制备苦参提取液，滤过，吸取滤液1mL，用甲醇稀释并定容至一定体积。按2.1项下条件测定氧化苦参碱的含量，并计算，结果见正交设计表。

表2 L9(34) 正交试验方案及结果

Table 2 The scheme and results of L9(34) orthogonal test

编号提取溶媒溶媒用量提取时间提取次数氧化苦参碱（g）

1 11110.81

2 1222 1.32

3 1333 1.83

4 2123 2.04

5 2231 2.01

6 2312 2.13

7 3132 1.46

8 3213 1.91

9 3321 1.75

K1 1.320 1.437 1.617 1.523

K2 2.060 1.747 1.703 1.700

K3 1.707 1.903 1.767 1.927

R 0.740 0.467 0.150 0.403

2.4 正交试验结果

正交试验结果见表2。由表2可得出，各因素作用主次为：A（提取溶媒）> D

（提取次数）> C（提取时间）>B（溶媒用量）。结果表明，A

2B

3

C

3

D

3

组合为最佳提

取路线，考虑到节约能源，选择A

2B

3

C

2

D

2

，即选定10倍量于药材的1%醋酸回流提

取3次，每次2h。

2.5 树脂吸附吸脱工艺筛选

2.5.1 树脂柱预处理

AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂用95%乙醇浸泡24h，充分溶胀，并用乙醇洗至流出液加等体积蒸馏水无白色混浊现象，再用蒸馏水洗至无醇味备用。

001×4强酸型阳离子交换树脂用蒸馏水浸泡24h，充分溶胀，并用蒸馏水洗至流出液澄清，用2倍树脂体积1NHCl 洗2h，水洗至中性，用2倍树脂体积1NNaOH 洗2h，最后用3倍树脂体积1NHCl洗3h，用蒸馏水洗至中性。

2.5.2 氧化苦参碱提取液的制备

取800g苦参粗粉，用8000mL1%醋酸回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤