第十四章 维生素类药物分析
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十四维生素类药物的分析VBPPT课件
1.原理
维生素B1在碱性溶液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，硫色素溶 于正丁醇（或异丁醇）中显蓝色荧光。
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CH3 N N
NH2 S CH2CH2OH
HCl
N
CH2 Cl-
CH3
NaOH
CH3
N
NH2 O
H SNa CH2CH2OH
C
N
N
CH2
CH3
-H2O
CH3 N N SNa CH2CH2OH
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三、含量测定
（三）硫色素荧光法（USP所采用的方法）
1.原理 维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，用异 丁醇提取后，在紫外光(λex365m)照射下呈现蓝色荧光 (λem435m)。通过与对照品比较荧光强度，即可求得 供试品含量。
ChP2015收载有维生素B1及其片剂和注射液。
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一、结构与性质
（一）结构
H3C
N
2 34
N1 6 5
NH2 S 21 5 N34
CH2
CH3
OH Cl , HCl
氨基嘧啶环
亚甲基
噻唑环
季铵
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一、结构与性质
（二）性质
1.溶解性 维生素B1为白色结晶或结晶性粉末，干燥品在 空气中迅速吸收4%的水分。本品在水中易溶，在乙醇中 微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性。
4.与生物碱沉淀试剂反应
分子中具有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），故可与某些生物碱沉淀试剂 （如碘化汞钾、三硝基酚、碘溶液、硅钨酸）反应生成组成恒定的沉淀， 可用于鉴别和含量测定。
维生素B1在碱性溶液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，硫色素溶 于正丁醇（或异丁醇）中显蓝色荧光。
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CH3 N N
NH2 S CH2CH2OH
HCl
N
CH2 Cl-
CH3
NaOH
CH3
N
NH2 O
H SNa CH2CH2OH
C
N
N
CH2
CH3
-H2O
CH3 N N SNa CH2CH2OH
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三、含量测定
（三）硫色素荧光法（USP所采用的方法）
1.原理 维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，用异 丁醇提取后，在紫外光(λex365m)照射下呈现蓝色荧光 (λem435m)。通过与对照品比较荧光强度，即可求得 供试品含量。
ChP2015收载有维生素B1及其片剂和注射液。
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一、结构与性质
（一）结构
H3C
N
2 34
N1 6 5
NH2 S 21 5 N34
CH2
CH3
OH Cl , HCl
氨基嘧啶环
亚甲基
噻唑环
季铵
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一、结构与性质
（二）性质
1.溶解性 维生素B1为白色结晶或结晶性粉末，干燥品在 空气中迅速吸收4%的水分。本品在水中易溶，在乙醇中 微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性。
4.与生物碱沉淀试剂反应
分子中具有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），故可与某些生物碱沉淀试剂 （如碘化汞钾、三硝基酚、碘溶液、硅钨酸）反应生成组成恒定的沉淀， 可用于鉴别和含量测定。
药物分析 第十四章 维生素类药物的分析
与氧化剂的反应鉴别试验鉴别试验ohohhoch一与agno反应一与agno反应去氢抗坏血酸黑色二与26二氯靛酚反应二与26二氯靛酚反应vitc氧化型玫瑰红色酸性还原型蓝色碱性clhoclclhoclclhoclohclhoclohcuvitc与碱性酒石酸铜反应与kmnomnkmnovitc三与其他氧化剂反应三与其他氧化剂反应砖红色沉淀试剂褪色磷钼酸与磷钼酸反应vitc四薄层色谱法四薄层色谱法五糖类反应五糖类反应hoohohohohchohchohohchchohohcocho3h50蓝色维生素c可在三氯醋酸或盐酸存在下水解脱羧生成戊糖再失水转化为糠醛加入吡咯加热至50产生蓝色001mollhclnmmax243585545cm五紫外光谱法五紫外光谱法bp2010杂质检查杂质检查一溶液的澄清度与颜色检查一溶液的澄清度与颜色检查内酯环水解糠醛缩合呈色高于或低于ph060空气光线温度维生素c脱羧控制有色杂质维生素c二铁铜离子二铁铜离子三草酸的检查三草酸的检查草酸与金属离子作用形成沉淀
均显蓝色斑点，维生素醇（ Rf= 0.1） 维生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 维生素棕榈酸酯（ Rf= 0.7）
杂质检查
酸值
取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中， 加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定 液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本 品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴 定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大 于2.0（附录VIIH）
杂质检查
过氧化值
取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振 摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟， 加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液 （0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果 用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液 （0.01mol/L）不得过1.5ml。
均显蓝色斑点，维生素醇（ Rf= 0.1） 维生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 维生素棕榈酸酯（ Rf= 0.7）
杂质检查
酸值
取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中， 加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定 液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本 品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴 定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大 于2.0（附录VIIH）
杂质检查
过氧化值
取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振 摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟， 加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液 （0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果 用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液 （0.01mol/L）不得过1.5ml。
药物分析维生素类药物的分析
在方法验证的基础上，可构建维生素类药物分析的评价指 标体系，包括定量限、检测限、回收率、重复性、稳定性 等指标，以全面评价分析方法的性能。
持续改进方向和目标设定
持续改进方向
针对维生素类药物分析过程中存在的问题和 不足，可进一步改进样品前处理方法、优化 分析条件、提高检测灵敏度等，以不断提高 分析结果的准确性和可靠性。
数据处理和结果表达技巧分享
数据处理
对HPLC和UV-Vis法得到的数据进行整理、归纳和统计 分析，包括峰面积、保留时间、浓度等参数的计算和 处理。
结果表达
将分析结果以图表形式呈现，如色谱图、标准曲线图、 含量分布图等，使结果更加直观、易于理解。同时，对 分析结果进行解释和说明，提出改进意见和建议。
在选择维生素类药物的标准品时，应确保其 纯度高、稳定性好，且具有代表性。同时， 应关注标准品的来源和溯源性。
使用注意事项
在使用标准品时，需按照规定的条件进行保 存和使用，避免污染和降解。此外，应定期 对标准品进行复验和更新。
检测方法验证及评价指标体系构建
要点一
检测方法验证
要点二
评价指标体系构建
为确保维生素类药物分析方法的准确性和可靠性，需进行 方法学验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度 等指标的考察。
质量控制体系建立及实施情况介绍
质量控制体系
为确保维生素类药物分析结果的准确性和可靠性，需建立全面的质量控制体系，包括样 品采集、前处理、分析测试、数据处理等各个环节。
实施情况
目前，质量控制体系已在多个实验室得到广泛应用，有效提高了维生素类药物分析的准 确性和一致性。
标准品选择与使用注意事项
标准品选择
通过对该维生素类药物的定性、定量分析，评估其质量 稳定性和一致性，为药物研发、生产和监管提供科学依 据。
药物分析笔记
目录第十四章维生素类药物分析 (1)第十五章.甾体激素类药物的分析 (6)第十七章.合成抗菌药物的分析 (10)第十二章.喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析 (13)第十六章.抗生素类药物的分析 (15)第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 (19)第九章.二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析 (22)第八章.对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析 (24)第七章.苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析 (27)第十章.巴比妥及苯并二氮卓类镇静催眠药物的分析 (30)第十一章.吩噻嗪类抗精神病药物的分析 (32)第十三章.莨菪烷类抗胆碱药物的分析 (33)第一章.药品质量研究的内容与药典概况 (35)第二章.药物鉴别试验 (38)第三章.药物的杂质检查 (41)第四章.药物的含量测定方法与验证 (45)第五章．体内药物分析 (49)第十八章.药物分析概论 (51)第十九章.中药及其制剂分析的概论 (53)第十四章维生素类药物分析○1维生素A一.结构与性质（一）结构1.维生素A结构为具有一个共轭多烯酸侧链的环乙烯2.天然维生素A主要是全反式维生素A3.VitA→VitA2（-2H），VitA1→VitA3（-H2O）（二）性质1.溶解性（与CHCl3，乙酸中微溶，在水中不溶）2.不稳定性（制成酯，凉暗处保存，充氮气或加入合适的抗氧剂以提高药物的稳定性）3.紫外吸收特性（具有共轭多烯的侧链结构，在325-328nm有最大吸收，可用于鉴别或含量测定）4.与三氯化锑呈色（VitA在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定蓝色，可用于鉴别或用比色法测量）二.鉴别试验（一）三氯化锑反应（Carr-Price反应）1.原理：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中即显蓝色，渐变成紫红色机制：行成不稳定的蓝色碳正离子（二）紫外吸收光谱维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶液在326nm的波长处有最大吸收峰。
当在盐酸催化下加热，生成脱水维生素A（vita3），最大吸收峰向长波长位移（红移），同时在350-390nm的波长间出现三个吸收峰。
药物分析-14维生素类药物的分析
§14 维生素类药物的分析·脂溶性维生素：VitA、D2、D3、E、K1等·水溶性维生素：VitB族（B1、B2、B6、B12）、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺一、维生素A中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。
（一）结构与性质1.具有一个共轭多烯侧链的环己烯·具有UV吸收·存在多种立体异构化合物2.不稳定性（1）易发生脱氢、脱水、聚合反应·脱氢维生素A（A2），脱水维生素A（A3）效价低于维生素A ·鲸醇（维生素A醇的二聚体）无生物活性（2）共轭多烯侧链易被氧化维生素A应凉暗处保存，充氮气或加抗氧剂★3.与三氯化锑发生呈色反应4.溶解性不溶于水，乙醇中微溶；易溶于有机溶剂和植物油等（二）鉴别试验1.三氯化锑反应条件: 无水（SbCl3水解），无醇（和碳正离子作用使其电荷消失）。
2.UV法（BP2003）VitA有一个吸收峰，盐酸催化下加热30s生成脱水VitA，有三个吸收峰，且红移（向长波长位移）。
3.TLC法·BP 对照品法（供试品与不同VitA酯类），显色剂：三氯化锑·USP 规定斑点颜色和Rf值，显色剂：磷钼酸（氧化剂）12（三）含量测定 ★1.三点校正法 （1）原理①杂质的吸收在310~340nm 波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；②物质对光的吸收具有加和性。
（2）波长的选择λ1为VitA 的λmax ；λ2、λ3为分别在λ1的两侧各选一点 ①等波长差法——VitA 醋酸酯nm 12340316328=∆λλλλ，、、)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）②等吸收比法——VitA 醇33431032576A A A == 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）（3）测定方法①直接测定法（等波长差法）——高纯度维生素A 醋酸酯 Ⅰ核对λmax/329~326max 328改用造化法与规定值比较求否是−→−−→−∈A A nm i λ Ⅱ计算吸收度比及比值差规定吸光度比值-328/A A iⅢ判断差值是否超过±0.02，确定用A 或A 校正%15%3)3%%,15(]%3,%3[32802.032832832802.0计算用改用皂化法＜或＞计算用计算用、计算无超过（校正）（校正）有超过A f f A f A f f A −−−−→−→-+→--∈→+-∈→−−−−→−±±)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）%100328328328⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm E lc AE cm ⨯=)%(%11（样品）·注意：（纯品）（样品）%11%11cm cm E E ≠，c 为混合样品的浓度。
维生素类药物的分析.ppt
感谢你的欣赏
3
第一节 维生素A的分析
全反式
R : -H -COCH3
维生素A醇 维生素A醋酸酯
-COC15H31 维生素A棕榈酸酯
2019-10-14
感谢你的欣赏
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一、结构与性质
（一）结构：具有共轭多烯侧链的环己烯
m ax 相对生物效价 顺反异构
维生素A
325.5
100%
全反式
新维生素Aa 328
(
纯
/
)
g）
3330000 1820
2019-10-14
感谢你的欣赏
23
A值的选择：
1、维生素A醋酸酯-第一法（等波长差法）
S 环己烷 9～15IU / ml 溶 液 分 别 于300、316、328、340、360nm 处 测Ai
• 判断 m ax 是否在326～329nm之间
环氧化物
VitA醛
感谢你的欣赏
VitA酸
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（二）性质
1.溶解性：易溶于有机溶剂和植物油等，不溶于水 2.不稳定性 3.紫外吸收特性 4.与三氯化锑呈色 V itA SbCl 3 蓝 色 紫 红
CHCl3
2019-10-14
感谢你的欣赏
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二、鉴别试验
（一）三氯化锑反应
V itA SbCl 3 蓝 色 紫 红
脂溶性
S
KO H /乙醇
皂
化
液植 Vit物A 醋 油酸 酯甘油
VitA 醇 和脂肪
酸
盐
水溶性
乙醚提取 除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、
药物分析课件维生素类药物的分析
生理作用
探讨维生素在维持人体正常功能中的重要作用， 以及补充维生素的好处。
过量症
讨论过量维生素摄入的潜在风险和对人体的不良 影响。
维生素类药物及其检测方法
1
水溶性维生素
维生素B1
使用法拉第反应法和HPLC法来分析维生素B1的含量。
维生素B2
应用荧光法和UV分光光度法测定维生素B2的浓度。
维生素B6
药物分析课件维生素类药 物的分析
通过本课件，我们将详细介绍维生素的概述、分类和药物分析方法，以及常 见问题和案例分析。欢迎来到维生素类药物的精彩世界！
维生素概述
定义及分类
解释维生素的定义和根据化学结构分类的方式， 以及它们在人体内的作用。
缺乏症
介绍维生素Байду номын сангаас乏症的症状并阐述如何通过补充维 生素预防和治疗。
使用滴定法和高效液相色谱法进行维生素B6的定量分析。
2
脂溶性维生素
维生素A
通过饱和点法和高效液相色谱法来检测和分析维生素A的含量。
维生素D
运用放射免疫分析法和高效液相色谱法测定维生素D的含量。
维生素E
利用紫外光谱法和高效液相色谱法对维生素E进行定量分析。
维生素K
使用光度法和类肝素血凝法来检测维生素K的浓度。
常见问题及案例分析
1 使用注意事项
2 滥用及危害
3 案例分析与解决方案
提醒使用维生素类药物时 需要注意的事项，如剂量、 途径和副作用。
阐述维生素类药物滥用的 危害和对人体的潜在风险， 以及怎样正确合理地使用。
分享一些关于维生素类药 物的典型案例，并提供解 决方案和建议。
维生素类药物分析
A3（ 2校 5 ） 正 A32510% 0 (P) A325
最大吸收波长是否在323～327之间
是 A300/A325是否≤ 0.73
否 色谱法纯化
是
否
A325校正A325100%
A325
A325校正 = 6.815A325-2.555A310-
A 325校正4.260A334 A 325
A 325校正
A3 2 8
A300/A325 ≤ 0.73
超
否
A A3（ 28校正 A3） 2810% 0
A3 2 8
32 8
±3% 之间：A328
-15%～-3%： A328校正
A325校 A正 325A325100% 色法谱 ±3% 之间：A325
<-15%或>+3%:皂化
<-3%或>+3%: A325校
法A328校正
＊相关物质—结构相似,维生素A最大吸收波长 附近也有吸收，对测定有影响。
＊Morton和Stubbs等人在1946年提出了三 点
校正法。
相关物质的吸收
＊a. 维生素A的衍生物（A2、A3） ＊ b. 维生素A的氧化产物 ＊ c. 合成时的中间体
＊ d. 鲸醇：维生素A醇的二聚体， 无生物活性
＊ e. 维生素A异构体 ＊ f. 稀释用油
练习题：维生素A醋酸酯胶丸的含量测定 已知：平均胶丸重为0.0815g 维生素A的标示量为10000IU/丸 取 样 ： 0.1279g→100ml ， 从 中 取 出 2ml →
25ml.
求：维生素A醋酸酯的标示百分含量。
首先计算吸收度比值和吸收度比值差。由结果 知，需计算校正吸收度。
维生素类药物的分析课件
• 测定对象：VA醇
4、测定方法 首先判断用哪个吸收度(A328 or A328(校正)）进行 含量计算。 第一法：供试液浓度为9～15IU/ml，溶剂为环 己烷，在300、316、328、340、360nm五个波 长处测定吸收度。 1）最大吸收波长在326～329nm之间，计算吸 收度比值Ai /A328，并与规定值相减，差值不超过 ±0.02，则用A328计算含量。
S
KOH /乙醇
皂化
液植Vit物A 醋油酸酯甘油 和Vit脂A 醇肪 酸
盐
乙醚提取除去植物油的干扰挥干乙醚 异丙醇
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、310、325、
334nm 处 测Ai
A325校正 6.815A325 2.555A310 4.260A334
f A325(校正) A325 100% A325
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵 碱)
1. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性 2. UV:246nm(盐酸液) 3. 硫色素反应
OHO 硫色素正丁醇 蓝色荧光
4. 碱性：嘧啶环 —— 伯氨，噻唑环 —— 季铵 ❖ 可与酸成盐 ❖ 与生物碱↓→↓ ❖ 含量测定 —— 非水碱量法
二、鉴别试验
1. 硫色素反应（维生素B1专属反应）
5、讨论 1）维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程
式法推导而来：维生素A醇的吸收度校正公式是用相似 三角形法推导而来。
2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定 。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此 ，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进 行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以 进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于 两份。
第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines
蓝色
CH2OH
N 50℃
-3H2OCH (CHOH)2 C H
O CHO
OH
O
N
N
H
糠醛
戊糖
鉴别 利用其还原性
硝酸银（银镜） 2.6-二氯靛酚(褪色） 高锰酸钾（褪色） 亚甲蓝（蓝色褪去） 磷钼酸（钼蓝） 斐林氏溶液（红色氧化亚铜）
（1）与硝酸银反应 本品→加水溶解→加硝酸银试液 →银黑色沉淀（ChP、BP采用）
第二法： a、λmax不在326～329nm b、校正与未校正吸收度比较<-15%、>+3%
样品：
醇制KOH/ Et2O/提取 挥散 残渣 溶于异丙醇中
9～15IU/ml
(一)紫外法（三点校正法）
①λmax323－327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A325≤0.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度≤土3% 以未校正吸收度计算 b、>土3%，以校正吸收度计算
第一节
维生素A的分析
（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色
①无水：三氯化锑水解、VA不溶 ②无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用
第一节
维生素A的分析
2.紫外法 本品加无水乙醇－盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA)
Vit B1
Thiamine Hydrochloride
CH3 N NH2 S CH2CH2OH
HCl
N
N
CH2 Cl-
CH3
NaOH
CH3
CH2OH
N 50℃
-3H2OCH (CHOH)2 C H
O CHO
OH
O
N
N
H
糠醛
戊糖
鉴别 利用其还原性
硝酸银（银镜） 2.6-二氯靛酚(褪色） 高锰酸钾（褪色） 亚甲蓝（蓝色褪去） 磷钼酸（钼蓝） 斐林氏溶液（红色氧化亚铜）
（1）与硝酸银反应 本品→加水溶解→加硝酸银试液 →银黑色沉淀（ChP、BP采用）
第二法： a、λmax不在326～329nm b、校正与未校正吸收度比较<-15%、>+3%
样品：
醇制KOH/ Et2O/提取 挥散 残渣 溶于异丙醇中
9～15IU/ml
(一)紫外法（三点校正法）
①λmax323－327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A325≤0.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度≤土3% 以未校正吸收度计算 b、>土3%，以校正吸收度计算
第一节
维生素A的分析
（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色
①无水：三氯化锑水解、VA不溶 ②无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用
第一节
维生素A的分析
2.紫外法 本品加无水乙醇－盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA)
Vit B1
Thiamine Hydrochloride
CH3 N NH2 S CH2CH2OH
HCl
N
N
CH2 Cl-
CH3
NaOH
CH3
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制剂中维生素A的含量测定。
Ch.P.（2010）规定维生素AD软胶囊、维生素AD滴 剂用该法测定含量。
RP-HPLC同时测定人血清中Vit A和Vit E含量
色谱条件
色谱柱：C18 流动相：甲醇-水 流速：1.2ml/min 检测波长与AUFS： 0～8min(330nm,0.25AUFS); 8min后(292nm,0.05AUFS) 内标：Vit A 酯
维生素A3 环氧化物 维生素A醛
维生素A酸
三点校正法（法定方法）
1. 原理：
（1）杂质的吸收在310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波
长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
2. 波长的选择：
（1） 1 VitA的max（328nm）
（2） 2 3
分别在1的两侧各选一点
△或有金属离子存在时氧化↑
环氧化物
VitA醛
VitA酸
二、鉴别试验
（一） 三氯化锑反应
VitA 蓝色 紫红
CHCl3
SbCl 3
条件 无水无醇
+
CH2
-
S b C l 5
-
S b C l 5 RCOO
紫红
（二） UV法
VitA 去水VitA
优点 简便 快速
λmax 618nm～620nm 呈色不稳定 （5 ~ 10s内） H 2O 水分干扰 SbCl 3 SbOCl 缺点 与标准曲线温差≤1℃ 专属性差 三氯化锑有腐蚀性
（三） HPLC
Ch.P.（2010）新增HPLC法作为维生素A的法定含
量测定方法。本法适用于维生素A醋酸酯原料及其
NaOH
N H 3C N
CH 2 NH 2 O
第十四章
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节
维生素类药物的分析
维生素A的分析 维生素B1的分析 维生素C的分析 维生素D的分析 维生素E的分析 复方制剂中多种维生素的分析
基本要求
一、掌握维生素A、维生素B1、维生素C、维生素E的化学 结构、理化性质以及分析方法间的关系，专属反应、主要
的含量测定方法与原理。 二、熟悉维生素A、维生素B1、维生素C、维生素E的有关
第一节 维生素A
主要的药理作用： 干眼病、角膜软化症、皮肤干燥、夜盲等 主要来源：
自然界：鲛类无海鱼肝脏中提取的脂肪油 目前主要采用人工合成。
一、结构与性质
9
8 7 6
5
4 3 2
1
具有共轭多烯侧链的环己烯 R:
-H
-COCH3 -COC15H31
维生素A醇
维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
（一）与CHCl3、乙醚、环己烷等互溶，乙醇
维生素A醋酸酯
S 9～15IU / ml 溶液 分别于300、 、 、 、 nm 处测Ai 316 328 340 360
环己烷
• 判断 max是否在326～329nm之间
max在326～329nm之间
是 否
• 求算 Ai / A328
改用第二法
并与规定值比较
Ai / A328
• 计算 A328（校正）
• 用A328计算
A328校正 3.522 A328 A316 A340
f
A 328(校正) A 328 A 328
100%
第二法
A 328校正
A 328
第二法
－15%
－3%
0
3%
讨论
1. VA 醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法 （即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式 是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导 而来。 2. 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进 行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品 应不得少于两份。
Vit A Vit E
第二节 维生素B1 HCl
H3C N N NH2 CH2 N
+
S
CH2CH2OH CH3
Cl-
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)
主要的药理作用：
维持糖代谢及神经传导，治疗多发性神经 炎、肠道疾病等
主要来源：
种子外皮及胚芽中，米糠、麦麸、黄豆、 酵母、瘦肉等
一、结构与性质
ChP2010
H 2O 环合
VitB1 硫色素 [O ] 蓝色荧光 荧光消失
OH
K 3 Fe（CN） 6
正丁醇
H
+
N H3C N
CH 2 NH 2 HCl
N S
CH 3 C 2 H 4 OH
1IU 0.344g维生素A醋酸酯
1 10 g 效价（IU / g） 2907000 0.344g
效价（IU / g） 2907000 换算因数＝ % 1530 E1cm(纯)
6
1900
1IU 0.300g维生素A醇
1 10 g 效价（IU / g） 3330000 0.300g
第一法
等波长差法
328 316 340 328
= 12nm
测定对象 VitA醋酸酯
第二法
等吸收比法
6 A1 A2 A3 7
1=325nm, 2=310nm, 3=334nm
测定对象
VitA醇
3. 测定法
（1）基本步骤: 第一步 A的选择
选择依据：
所选A值中杂质的干扰已基本消除
A 300 A 316 A 328 A 340 A 360 A 328 A 328 A 328 A 328 A 328
规定值
0.555 0.907
差值
1.000 0 0.811 0.299
• 判断差值是否超过规定值的 0.02 有一个以上 超过 0.02 无超过 0.02
△ 无水乙醇 HCl
λmax为326nm
λmax为350～390nm
一个吸收峰
三个吸收峰
↓
VitA
CH2
去水VitA（VitA3）
（三） TLC法 BP 对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、 含量测定
（一） UV法
维生素A2
立体异构体 氧化降解产物 合成中间体
效价（IU / g） 3330000 换算因数＝ % 1820 E1cm(纯)
6
1830
第四步：求标示量％
IU / 丸 标示量％＝ 100％ 标示量
IU / g 平均丸重 ＝ 100％ 标示量
A 换算因数 平均丸重 C 100％ 标示量
（2） 第一法 • 方法：
VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量 差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量 转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度， 摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中， 用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空 白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列 波长处测得吸收度为
A300 A316 A328 A340 A360
：0.374 ：0.592 ：0.663 ：0.553 ：0.228
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
：0.564 ：0.893 ：1.000 ：0.834 ：0.344
求本品中维生素A占标示量的百分含量？
（一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）UV
共轭双键
λmax = 246nm
（三） 硫色素反应
硫色素 蓝色荧光
OH O
正丁醇
（四）嘧啶环 —— 噻唑环 ——
与生物碱↓→↓ 呈氯化物的反应，
（五）氯化物特性 用于鉴别。
二、 鉴别试验
（一） 硫色素反应
NaOH
乙醚提取 挥干乙醚
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、 、 、 310 325 334nm 处测Ai
• 判断max是否在323～327nm之间
是 否
• 计算
A300
A325
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
• 判断 A300 /A325 是否大于0.73
是 否
• 计算A325(校正)
物质、检查方法与原理。
三、了解维生素D的性质和分析特点。
概 维生素：
述
是维持人体正常代谢机能所 必需的一类活性物质 。 人体不能合成维生素。
分类
按溶解度分
脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素发展史
公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 1905年-甲状腺肿大被碘治愈。 1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。
第二步
% 求 1cm ( 样 )
A % 1cm(样) C(%) l
注意： % ( 样 ) % ( 纯 ) 1cm 1cm C 为混合样品的浓度
Ch.P.（2010）规定维生素AD软胶囊、维生素AD滴 剂用该法测定含量。
RP-HPLC同时测定人血清中Vit A和Vit E含量
色谱条件
色谱柱：C18 流动相：甲醇-水 流速：1.2ml/min 检测波长与AUFS： 0～8min(330nm,0.25AUFS); 8min后(292nm,0.05AUFS) 内标：Vit A 酯
维生素A3 环氧化物 维生素A醛
维生素A酸
三点校正法（法定方法）
1. 原理：
（1）杂质的吸收在310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波
长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
2. 波长的选择：
（1） 1 VitA的max（328nm）
（2） 2 3
分别在1的两侧各选一点
△或有金属离子存在时氧化↑
环氧化物
VitA醛
VitA酸
二、鉴别试验
（一） 三氯化锑反应
VitA 蓝色 紫红
CHCl3
SbCl 3
条件 无水无醇
+
CH2
-
S b C l 5
-
S b C l 5 RCOO
紫红
（二） UV法
VitA 去水VitA
优点 简便 快速
λmax 618nm～620nm 呈色不稳定 （5 ~ 10s内） H 2O 水分干扰 SbCl 3 SbOCl 缺点 与标准曲线温差≤1℃ 专属性差 三氯化锑有腐蚀性
（三） HPLC
Ch.P.（2010）新增HPLC法作为维生素A的法定含
量测定方法。本法适用于维生素A醋酸酯原料及其
NaOH
N H 3C N
CH 2 NH 2 O
第十四章
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节
维生素类药物的分析
维生素A的分析 维生素B1的分析 维生素C的分析 维生素D的分析 维生素E的分析 复方制剂中多种维生素的分析
基本要求
一、掌握维生素A、维生素B1、维生素C、维生素E的化学 结构、理化性质以及分析方法间的关系，专属反应、主要
的含量测定方法与原理。 二、熟悉维生素A、维生素B1、维生素C、维生素E的有关
第一节 维生素A
主要的药理作用： 干眼病、角膜软化症、皮肤干燥、夜盲等 主要来源：
自然界：鲛类无海鱼肝脏中提取的脂肪油 目前主要采用人工合成。
一、结构与性质
9
8 7 6
5
4 3 2
1
具有共轭多烯侧链的环己烯 R:
-H
-COCH3 -COC15H31
维生素A醇
维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
（一）与CHCl3、乙醚、环己烷等互溶，乙醇
维生素A醋酸酯
S 9～15IU / ml 溶液 分别于300、 、 、 、 nm 处测Ai 316 328 340 360
环己烷
• 判断 max是否在326～329nm之间
max在326～329nm之间
是 否
• 求算 Ai / A328
改用第二法
并与规定值比较
Ai / A328
• 计算 A328（校正）
• 用A328计算
A328校正 3.522 A328 A316 A340
f
A 328(校正) A 328 A 328
100%
第二法
A 328校正
A 328
第二法
－15%
－3%
0
3%
讨论
1. VA 醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法 （即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式 是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导 而来。 2. 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进 行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品 应不得少于两份。
Vit A Vit E
第二节 维生素B1 HCl
H3C N N NH2 CH2 N
+
S
CH2CH2OH CH3
Cl-
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)
主要的药理作用：
维持糖代谢及神经传导，治疗多发性神经 炎、肠道疾病等
主要来源：
种子外皮及胚芽中，米糠、麦麸、黄豆、 酵母、瘦肉等
一、结构与性质
ChP2010
H 2O 环合
VitB1 硫色素 [O ] 蓝色荧光 荧光消失
OH
K 3 Fe（CN） 6
正丁醇
H
+
N H3C N
CH 2 NH 2 HCl
N S
CH 3 C 2 H 4 OH
1IU 0.344g维生素A醋酸酯
1 10 g 效价（IU / g） 2907000 0.344g
效价（IU / g） 2907000 换算因数＝ % 1530 E1cm(纯)
6
1900
1IU 0.300g维生素A醇
1 10 g 效价（IU / g） 3330000 0.300g
第一法
等波长差法
328 316 340 328
= 12nm
测定对象 VitA醋酸酯
第二法
等吸收比法
6 A1 A2 A3 7
1=325nm, 2=310nm, 3=334nm
测定对象
VitA醇
3. 测定法
（1）基本步骤: 第一步 A的选择
选择依据：
所选A值中杂质的干扰已基本消除
A 300 A 316 A 328 A 340 A 360 A 328 A 328 A 328 A 328 A 328
规定值
0.555 0.907
差值
1.000 0 0.811 0.299
• 判断差值是否超过规定值的 0.02 有一个以上 超过 0.02 无超过 0.02
△ 无水乙醇 HCl
λmax为326nm
λmax为350～390nm
一个吸收峰
三个吸收峰
↓
VitA
CH2
去水VitA（VitA3）
（三） TLC法 BP 对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、 含量测定
（一） UV法
维生素A2
立体异构体 氧化降解产物 合成中间体
效价（IU / g） 3330000 换算因数＝ % 1820 E1cm(纯)
6
1830
第四步：求标示量％
IU / 丸 标示量％＝ 100％ 标示量
IU / g 平均丸重 ＝ 100％ 标示量
A 换算因数 平均丸重 C 100％ 标示量
（2） 第一法 • 方法：
VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量 差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量 转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度， 摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中， 用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空 白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列 波长处测得吸收度为
A300 A316 A328 A340 A360
：0.374 ：0.592 ：0.663 ：0.553 ：0.228
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
：0.564 ：0.893 ：1.000 ：0.834 ：0.344
求本品中维生素A占标示量的百分含量？
（一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）UV
共轭双键
λmax = 246nm
（三） 硫色素反应
硫色素 蓝色荧光
OH O
正丁醇
（四）嘧啶环 —— 噻唑环 ——
与生物碱↓→↓ 呈氯化物的反应，
（五）氯化物特性 用于鉴别。
二、 鉴别试验
（一） 硫色素反应
NaOH
乙醚提取 挥干乙醚
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、 、 、 310 325 334nm 处测Ai
• 判断max是否在323～327nm之间
是 否
• 计算
A300
A325
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
• 判断 A300 /A325 是否大于0.73
是 否
• 计算A325(校正)
物质、检查方法与原理。
三、了解维生素D的性质和分析特点。
概 维生素：
述
是维持人体正常代谢机能所 必需的一类活性物质 。 人体不能合成维生素。
分类
按溶解度分
脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素发展史
公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 1905年-甲状腺肿大被碘治愈。 1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。
第二步
% 求 1cm ( 样 )
A % 1cm(样) C(%) l
注意： % ( 样 ) % ( 纯 ) 1cm 1cm C 为混合样品的浓度