标准葡萄糖DNS比色法测定.doc

标准准葡萄糖DNS比色法测定的方法
采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定水解液中还原糖含量，用752型分光光度计进行比色测定。

1葡萄糖DNS比色法的测定原理
3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被的还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。

2测试药品
（1）1mg/mL葡萄糖标准液
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
3测试方法
（1）葡萄糖标准曲线制作
①按下表制备9个试管。

②向9支试管中分别加入DNS试剂0.5ml，充分混合。

③将9支试管放入沸水浴中加热煮沸5min。

④将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。

⑤向各管中分别加入4mL蒸馏水，充分混合。

⑥以空白（1＃）管做对照，用分光光度计于540nm波长下分别测定各管溶液的OD值。

⑦以每管在540nm下的吸光值为纵坐标，每管所含的葡萄糖浓度为横坐标作图，即可得到一条通过零点的直线。

如果直线不通过零点则需重做。

标准葡萄糖曲线浓度的量取
Tab.2.2 Preparation on standard curve of glucose
试管编号标准葡萄糖溶液(mL) 蒸馏水(mL) 最终浓度(mg/mL)
1 0 0.5 0
2 0.05 0.45 0.1
3 0.1 0.
4 0.2
4 0.1
5 0.35 0.3
5 0.2 0.3 0.4
6 0.25 0.25 0.5
7 0.3 0.2 0.6
8 0.35 0.15 0.7 9
0.4
0.1
0.8
（2）测定步骤
①样品稀释。

②取2支试管，其中一支做对照，向样品试管中加入稀释后的样品溶液0.5mL ，空白不加。

③向两支试管中分别加入DNS 试剂0.5ml ，于沸水浴中加热5min ，然后冷却。

④完全冷却后向空白试管中加入蒸馏水4.5ml ，样品试管中加入蒸馏水4ml 。

⑤以空白为对照，测定溶液在540nm 下的OD 值。

（3）计算
%1009.0%⨯⨯⨯⨯=
纤维素和半纤维素质量
液体体积
稀释倍数还原糖浓度）还原糖得率（
（4）葡萄糖标准曲线
图葡萄糖标准曲线 Fig Standard curve of glucose
葡萄糖浓度与OD 值之间的相关关系可表示为式 回归方程：y=2.1511x-0.0896 相关系数：R 2=0.9921。