过氧化氢酶米氏常数的测定
过氧化氢酶米氏常数的测定
过氧化氢酶米氏常数的测定一、实验目的了解并掌握米氏常数的意义和测定方法二、实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2，未分解的H2O2用KMnO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。
2H2O2 = 2H2O + O22KMnO4 + 5H2O2 + 3H2SO4 = 2MnSO4 + K2SO4 + 5O2↑ + 8H2O本实验由马铃薯提供过氧化氢酶。
在保持恒定的条件下，用相同浓度的过氧化氢酶催化不同浓度的H2O2分解。
在一定限度内，酶促反应速度与H2O2浓度成正比。
用双倒数作图法(即以1/v对1/[S]作图)可求得过氧化氢酶的Km值。
三、实验器材锥形瓶(6个) 吸管、酸式滴定管四、实验试剂1、0.02mol/L 磷酸缓冲液(pH=7)2、0.004 mol/L KMnO4(需标定)3、0.05 mol/L H2O2(需标定)4、25% H2SO4五、实验操作1、酶液的提取：称取马铃薯（去皮）5克，加0.02mol/L 磷酸缓冲液10mL，再加少量海砂，研磨成匀浆，离心(3000r/ min，10min)，上清液即为酶液。
2、滴定：取干燥锥形瓶6只，按下表顺序加入试剂：先加好0.05mol/L H2O2及蒸馏水，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。
各瓶时间达5min时立即加2.0mL 25% H2SO4终止反应，充分混匀。
用0.004 mol/L KMnO4滴定各瓶中剩余的H2O2至微红色，记录消耗的KMnO4体积。
六、实验计算分别求出1─5瓶的底物浓度[S]和相应的反应速度v。
C1V110[S] =5 ∕2C2V2C1V1–v =式中 [S]：为底物物质的量浓度(mol/L)C1：为H2O2物质的的量浓度(mol/L)V1：为H2O2的体积(mL)10：反应的总体积v：反应速度(mmol/min)C2: KMnO4物质的量浓度(mol/L)V2：KMnO4的体积(mL)以1/v对1/[S]作图求出Km。
过氧化氢酶动力学常数测定
过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名: 赵家熙指导教师: 谭志文实验室: 6503 组员:?章恒炯 ? ? 成绩: 第三部分:实验记录与分析一、酶活力测定,一,原始数据1.样品原始质量:5.032g2.标定数据:,1,KMnO质量数及配制:158 4,2,NaCO质量数:134 224,3,标定数据:0.02mol/L,4,KMnO实际浓度:0.019mol/L 43.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液,ml,:实验,1,0.65实验,2,0.50对照,1,1.45对照,2,1.30,二,结果计算1(换算系数,1mL KMnO溶液相当于多少mg HO, 4221.72.样品酶活计算,每克鲜重样品1min内分解HO的毫克数表示:mg 22HO/g•min, 22().ABV,，，T171酶活(mgH2O2/g?min)= FWVt，，,A-B,=0.8 V=20.25 FW=5.032 V=2.5ml t=10min T1酶活(mgH2O2/g?min)=0.218二、动力学常数的测定,一,原始数据编号1 2 3 4 5 消耗的0.10 0.10 0.40 0.30 0.30 KMnO,mL, 4,二,求出各管反应前的底物浓度[S]和反应速度V 00编号1 2 3 4 50.005 0.0067 0.0082 0.0125 0.0250 [S],mol/L,00.0099 0.0124 0.0126 0.0221 0.0471 V,mmol/min,0,三,以1/V对1/[S]作图,用excel作图, 001/s 200 149.2 121.9 80 40 1/v 111.1 80.6 79.3 45.1 21.2,四,求出Km,mol/L,和Vmax,mmol/min,1K1m,，如,三,中图 vv[S]vmaxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时 y=1/Vmaxy=0时 x=-1/Km Km=0.35 Vmax=0.63第四部分:课后研讨题 1.总结本实验操作过程的注意事项。
过氧化氢酶米氏常数
过氧化氢酶米氏常数篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目2：过氧化氢酶活性和动力学常数的测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：5.032g2校准数据：（1）kmno4质量数及配制：158（2）na2c2o4质量数：134（3）标定数据：0.02mol/l（4）高锰酸钾的实际浓度：0.019mol/l3样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）0.65实验（2）0.50对照（1）1.45对照（2）1.30（二）结果计算1.换算系数（mgh2o2相当于1mlkmno4溶液的量）1.72.样品酶活性的计算（每克鲜重样品1min内分解的H2O2 mg，以mgh2o2/g？Min表示）(a?b)?vt?1.7fw?v1?t酶活(mgh2o2/gmin)=酶活性（mgh2o2/gmin）=0.218（a-b）=0.8vt=20.25fw=5.032v1=2.5mlt=10min二、动力学常数的测定（I）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[s]0和反应速度v0（三）以1/v0对1/[s]0作图（用excel作图）1/s1/v200111.1149.280.6121.979.3八千零四十五点一4021.2（四）计算km（mol/L）和Vmax（mmol/min）km11??vv[s]v如（三）中图麦克斯y=0.5572x+1.5829x=0时y=1/vmax当y=0时，x=-1/kmkm=0.35vmax=0.63第四部分：课后讨论问题1.总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和储存一般在0-4℃进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前，应检查滴定管是否泄漏，并在滴定过程中逐滴添加滴定管。
2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?1.温度过高或过低都会降低过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶动力学常数测定
过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名: 赵家熙指导教师: 谭志文实验室: 6503 组员:?章恒炯 ? ? 成绩: 第三部分:实验记录与分析一、酶活力测定,一,原始数据1.样品原始质量:5.032g2.标定数据:,1,KMnO质量数及配制:158 4,2,NaCO质量数:134 224,3,标定数据:0.02mol/L,4,KMnO实际浓度:0.019mol/L 43.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液,ml,:实验,1,0.65实验,2,0.50对照,1,1.45对照,2,1.30,二,结果计算1(换算系数,1mL KMnO溶液相当于多少mg HO, 4221.72.样品酶活计算,每克鲜重样品1min内分解HO的毫克数表示:mg 22HO/g•min, 22().ABV,，，T171酶活(mgH2O2/g?min)= FWVt，，,A-B,=0.8 V=20.25 FW=5.032 V=2.5ml t=10min T1酶活(mgH2O2/g?min)=0.218二、动力学常数的测定,一,原始数据编号1 2 3 4 5 消耗的0.10 0.10 0.40 0.30 0.30 KMnO,mL, 4,二,求出各管反应前的底物浓度[S]和反应速度V 00编号1 2 3 4 50.005 0.0067 0.0082 0.0125 0.0250 [S],mol/L,00.0099 0.0124 0.0126 0.0221 0.0471 V,mmol/min,0,三,以1/V对1/[S]作图,用excel作图, 001/s 200 149.2 121.9 80 40 1/v 111.1 80.6 79.3 45.1 21.2,四,求出Km,mol/L,和Vmax,mmol/min,1K1m,，如,三,中图 vv[S]vmaxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时 y=1/Vmaxy=0时 x=-1/Km Km=0.35 Vmax=0.63第四部分:课后研讨题 1.总结本实验操作过程的注意事项。
过氧化氢酶km值的测定实验报告
过氧化氢酶km值的测定实验报告过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶的Km值，来研究该酶对底物浓度的敏感程度，从而深入了解过氧化氢酶的催化特性。
首先，我们需要准备实验所需的材料和试剂，包括过氧化氢酶样品、过氧化氢底物溶液、缓冲液、吸光度计等。
接着，按照实验方案，我们将过氧化氢底物溶液分别配制成不同的浓度，然后将不同浓度的底物溶液与过氧化氢酶样品混合，反应一定时间后，利用吸光度计测定反应体系中过氧化氢的浓度。
通过对不同浓度底物下反应体系中过氧化氢浓度的测定，我们可以得到不同底物浓度下过氧化氢酶催化反应的速率。
在实验过程中，我们需要注意保持反应体系的温度稳定，避免温度对反应速率的影响。
此外，为了减小误差，我们需要进行多次重复实验，取平均值作为最终结果。
在实验结束后，我们将利用实验数据，通过线性回归分析，计算出过氧化氢酶的Km值。
通过本实验，我们可以得到不同底物浓度下过氧化氢酶的催化速率，进而绘制出酶的底物浓度与催化速率的曲线。
通过分析曲线斜率的变化，我们可以得到过氧化氢酶的Km值。
Km值表示酶与底物结合的紧密程度，Km值越小，表示酶对底物的亲和力越大，反之亦然。
在实验结果分析中，我们可以得出不同底物浓度下过氧化氢酶的Km值，从而揭示了过氧化氢酶对底物浓度的敏感程度。
这有助于我们更深入地了解过氧化氢酶的催化特性和底物结合机制。
同时，对于医学和生物工程领域，对过氧化氢酶的Km值的准确测定也具有重要的应用意义。
综上所述，通过本实验的Km值测定，我们可以更深入地了解过氧化氢酶的催化特性和底物结合机制，为相关领域的研究和应用提供重要的参考依据。
希望本实验能为相关领域的研究工作提供一定的帮助和启发。
过氧化氢酶米氏常数
过氧化氢酶米氏常数各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503 组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：158 （2）Na2C2O4质量数：134 （3）标定数据：/L（4）KMnO4实际浓度：/L3.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）实验（2）对照（1）对照（2）（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g?min）(A?B)?VT??V1?t酶活(mgH2O2/g·min)=酶活(mgH2O2/g·min)=（A-B）= VT====10min二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0（三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel 作图）1/s 1/v2008040（四）求出Km（mol/L）和Vmax （mmol/min）Km11?? vv[S]v如（三）中图maxmaxy=+ x=0时y=1/Vmaxy=0时x=-1/KmKm= Vmax=第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和存放一般在0-4℃下进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?1、温度，温度过高或者过低会降低过氧化氢酶的活性。
2、酸碱度，酸或碱浓度太高会使过氧化氢酶失活。
3.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?R(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3++OH－) R(Fe3+OH－)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O24.在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？终止反应,为下一步的滴定提供酸的环境。
过氧化氢酶米氏常数
[标签:标题]篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503 组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：5.032g2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：158 （2）Na2C2O4质量数：134 （3）标定数据：0.02mol/L （4）KMnO4实际浓度：0.019mol/L3.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）0.65实验（2）0.50 对照（1）1.45 对照（2）1.30（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）1.72.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g?min）(A?B)?VT?1.7FW?V1?t酶活(mgH2O2/g·min)=酶活(mgH2O2/g·min)=0.218（A-B）=0.8 VT=20.25FW=5.032V1=2.5mlt=10min二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0（三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel作图）1/s 1/v200 111.1149.2 80.6121.9 79.380 45.140 21.2（四）求出Km（mol/L）和Vmax（mmol/min）Km11?? vv[S]v如（三）中图maxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时y=1/Vmaxy=0时x=-1/KmKm=0.35 Vmax=0.63第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和存放一般在0-4℃下进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
《酶工程实验》word版
实验一过氧化氢酶米氏常数的测定一、目的了解米氏常数的意义，测定过氧化氢酶的米氏常数。
二、实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2，未分解的H2O2用KMNO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。
本实验以马铃薯提供过氧化氢酶，以1/ν~1/[S]作图求Km三、实验器材1.锥形瓶100～150ml（×6）。
2.吸管1.0ml（×2）、0.5ml（×2）、2.0ml（×2）、5ml（×2）、10.0ml（×1）。
3.温度计（0～100℃）。
4.微量滴定管5ml（×1）。
5.容量瓶1000ml（×1）。
四、实验试剂1、0.02mol/L磷酸缓冲液（Ph7.0）取磷酸二氢钾 0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液 29.1ml，用水稀释至100ml,即得。
2、酶液：称取马铃薯5g，加上述缓冲液10ml，匀浆，过滤。
3、0.02mol/L KMnO4：称取KMnO4（AR）3.2g，加蒸馏水1000ml，煮沸15min，2d后过滤，棕色瓶保存。
4、0.004mol/L KMnO4：准确称取恒重草酸钠0.2g，加250ml冷沸水及10ml浓硫酸，搅拌溶解，用0.02ml/L的KMnO4滴定至微红色，水浴，加热至65℃，继续滴定至溶液微红色并30s不褪，算出KMnO4的准确浓度稀释成0.004mol/L即可。
5、0.05 mol/L H2O2：取30% H2O223ml加入1000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度（约0.2mol/L），用标准KMnO4（0.004mol/L）标定其准确浓度，稀释成0.05mol/L（标定前稀释4倍，取2.0ml，加25% H2SO42.0ml，用0.004mol/LKMnO4滴定至微红色）。
6、25% H2SO4五、操作取锥形瓶6只，按下表顺序加入试剂：表一过氧化氢酶米氏常数的测定管号试剂0123450.05mol/L H2O2/ml蒸馏水/ml酶液/ml9.50.51.008.500.51.258.250.51.677.830.52.57.00.55.004.500.5先加好0.05mol/L H2O2及蒸馏水，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。
10 过氧化氢酶米氏常数的测定
本实验以鼠肝匀浆中的过氧化氢酶为例，测定其 Km值和Vm值。
过氧化氢酶
2H2O2
2H2O + O2
2KMnO4 + 5H2O2 + 3H2SO4
2MnSO4 + K2SO4 + 5O2↑ + 8H2O
过氧化氢酶催化H2O2分解成H2O和O2； 反应后剩余的H2O2用KMnO4在酸性溶液中滴定；
通过滴定KMnO4的消耗量求出反应前后H2O2的浓度差 即为反应速度v；
试剂 (ml)
0.04mol/L H2O2 H2O
肝匀浆液1:500
10％H2SO4
记录0.02mol/L KMnO4用量 底物浓度[S] (mmol/L) 反应速度v (mmol/10min) [S]/v (10min/L)
1号瓶 2号瓶 3号瓶 4号瓶 5号瓶
25
20
15
10
5
0
5
10
15
20
放入37℃水浴5分钟
v
Vmax[S] =K─m─+─[S─]
Vmax：最大反应速度 Km：米氏常数
初速率 v
80 Vm
60
Vm 40 2
动力学曲线
20
K
m
0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
底物浓度 [S]
Km值：可通过对米氏方 程 作 图 (V~[S] 图 ) 求 出 。 在数值上等于酶促反应 速度为最大速度一半时 的底物浓度值。单位是 mol/L(或mmol/L)。
0.01
0.015
0.0218 0.025
0.02 v/[S] (L/10min)
14
*Excel直线作图
食品酶学
第一部分 实验一、 原理1、过氧化氢酶米氏常数的测定：H 2O 2被过氧化氢酶分解出H 2O 和O 2，未分解的H 2O 2用KMnO 4在酸性环境中滴定，根据反映前后H 2O 2的浓度差可以求出反应速度。
本实验以马铃薯提供过氧化氢酶，以1/ν~1/[S]作图求Km2、黄素蛋白酶的定性试验：黄素蛋白酶是以黄素核莓酸（FMN 或FDA ）为辅基的脱氢酶类。
某些黄素蛋白酶还含有铁、铜或钼类金属离子。
分子中核黄素部分能与氢原子可逆地结合，从而引起递氢作用。
N N C NH CN O O CH 2(CHOH)3CH 2OH H 3C H 3C N H N CNH C H N O O CH 2(CHOH)3CH 2OH H 3C H 3C +2H -2H这类脱氢酶可以催化脱去底物分子中的氢氧或从还原态辅酶Ⅱ（NADH,H+及NADPH ，H+）上把氢传给氧。
在无氧条件下，可用甲烯蓝代替氧。
例如牛乳中的黄嘌呤氧化酶就是黄素蛋白酶的一种。
它能催化水合甲醛把氢交给甲烯蓝3、酵母蔗糖酶的部分纯化与酶活测定：酵母中含有丰富的蔗糖酶（EC3.2.1.26），本实验以酵母为原料，首先通过研磨法以及温度差破碎法破碎细胞的方式得到粗酶，之后先通过调节pH 到5.0杂蛋白的等电点，不影响酶活的情况下，使其凝聚沉淀，最后保温至最适温度反应后，通过测定没催化产物量来间接测定酶活。
细胞破碎方法有机械破碎法（通过机械运动所产生的剪切力的作用使细胞破碎的方法），物理破碎法（通过压力、温度、声波等各种物理因素的作用使组织细胞破碎的方法，常用的有温度差破碎法、压力差破碎法和超声波破碎法）和化学破碎法（通过各种化学试剂对细胞膜的作用使细胞破碎的方法）。
研磨法是利用研体、石磨、细菌磨、球磨等研磨器械所产生的剪切力将组织细胞破碎，必要时可以加入精制石英砂、小玻璃球、玻璃粉、氧化铝等作为助磨剂，以提高研磨效果。
研磨法设备简单、可以采用人工研磨液可以采用电动研磨。
过氧化氢酶的活力和动力学常数测定 - 生化实验技术
计算公式：标定的 KMnO4 C=0.2/V mol/L
（4）0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大约等于 17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至 1000ml，用标准0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性条 件下）进行标定；
（3）0.02mol/L高锰酸钾标准液配制：称取 KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水 配制成1000mL ，临用前用草酸钠标定。
高锰酸钾溶液标定：
取5mL0.1mol/L的草酸和3mL10% H2SO4溶液于锥形瓶中， 加热至（75～85）℃（见冒热气），趁热用KMnO4标准溶 液滴定，刚开始反应较慢，滴入一滴KMnO4标准溶液摇动， 待溶液褪色，再加第二滴KMnO4（此时生成的Mn2+起催化作 用）。随着反应速度的加快，滴定速度也可逐渐加快，但 滴定中始终不能过快，，不断摇动或搅拌。滴定至溶液呈 现微红色并持续半分钟不褪色即为终点。
R(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3++OH－) R(Fe3+OH－)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O2 总反应式：2 H2O2 过氧化氢酶 2H2O+O2
据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定 该酶活力大小。
在反应系统中加入过量的H2O2溶液，经酶促反 应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴 定多余的H2O2，即可求出消耗的H2O2的量。
实验二、过氧化氢酶的 活力和动力学常数测定
——高锰酸钾滴定法
过氧化氢酶米氏常数的测定
过氧化氢酶米氏常数的测定傅璐121140012一、实验目的1. 了解米氏常数的测定方法2. 学习提取生物组织中的酶二、实验原理1.米氏反应动力学米氏方程(Michaelis-Menten Equation):2.米氏常数的意义：①反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、底物浓度无关。
②米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。
其数值大小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。
③Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物就是该酶的最适底物。
3.米氏常数的求法：该方法的缺点是难以确定最大反应速度Vmax。
该作图法应用最广。
但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。
因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。
此法优点是横轴上点分布均匀，缺点是1/v会放大误差，同时对底物浓度的选择有要求。
[S]<<Km时图形近于水平线，[S]>>Km时直线将在原点附近与轴相交。
4.氧化酶：生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是消除体内自由基：①POD：过氧化物酶②SOD:超氧化物歧化酶③CAT：；过氧化氢酶5.过氧化氢酶的作用：植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。
过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。
氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶（catalase，CAT）可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。
6.过氧化氢酶活力的测定方法：①紫外吸收法：过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240nm）随反应时间而降低。
过氧化氢酶米氏常数的测定实验报告
过氧化氢酶米氏常数的测定实验报告1. 实验目的与背景哎呀，大家好！今天咱们来聊聊一个挺有趣的实验——过氧化氢酶的米氏常数测定。
别被这个名字吓到了，其实就是在研究一种酶的“工作效率”而已。
想象一下过氧化氢（H₂O₂）就像是个小小的坏蛋，它可不是什么好东西；而过氧化氢酶呢，就是那个专门来捉拿坏蛋的超级英雄。
这种酶存在于咱们的细胞里，帮忙把过氧化氢分解成水和氧气，保护我们的身体不被这些“坏蛋”害了。
米氏常数（Km）这东西呢，简单来说就是衡量酶对底物亲和力的一个参数。
如果Km值小，说明酶对底物的“喜欢”程度高，咱们的超级英雄很厉害；反之则说明这个超级英雄对底物的“兴趣”不大。
通过测定这个值，我们可以更好地理解这位超级英雄的“战斗力”，也能对相关的生物化学反应有个更清晰的认识。
2. 实验原理与方法2.1 实验原理好的，接下来咱们进入正题——实验原理。
首先，得了解酶催化的基本过程。
简单来说，酶会跟底物结合，形成一个“酶底物复合物”，然后催化底物转变为产物。
在这个过程中，酶的催化速率会受到底物浓度的影响。
米氏常数就是用来描述这种关系的一个参数。
咱们用的是过氧化氢酶，它催化的反应是这样的：2 H₂O₂ → 2 H₂O + O₂。
底物过氧化氢在反应过程中会被转化成水和氧气。
通过测定不同底物浓度下反应速率的变化，可以绘制出反应速率与底物浓度的关系图，从中找出米氏常数Km。
2.2 实验步骤接下来，就轮到实验步骤了。
首先，准备好过氧化氢酶和不同浓度的过氧化氢溶液。
每一种底物浓度都要做几个重复实验，以确保数据的可靠性。
接着，将过氧化氢酶加入到每种浓度的过氧化氢溶液中，开始反应。
然后，定期取样，测定反应产物的浓度。
这时，咱们就要用上光谱仪之类的仪器来检测氧气的产生情况，这可是个大工程，得小心翼翼地操作，别弄得一团糟。
3. 实验结果与讨论3.1 实验数据分析一切准备妥当，实验终于开始啦！拿到数据后，我们就可以用“米氏方程”来分析实验结果了。
生物化学过氧化氢酶Km值测定
思考题
酶米氏常数的测定会受到那 些实验条件的影响？
15
5、25% H2SO4
9
四、实验步骤 1、酶液的制备：
每组(共分6组)称取马铃薯5g， 加磷酸缓冲液 10mL，研钵匀浆， 滤纸过滤。
10
2、反应速度的测定：取干燥的50-100ml锥形瓶 6只，编号后按下表操作：
试剂（mL） 0
H2O2溶液/mL 0 蒸馏水/mL 9.5
1
2
3
4
5
1.00 1.25 1.67 2.50 5.00 8.50 8.25 7.83 7.00 4.50
3、0.004mol/L KMnO4：称取恒重草酸钠0.2 g，加
250mL冷沸水及10mL浓硫酸，用0.02mol/L
KMnO4 滴定至至微红色，加热至65 ℃，继续滴
定微红色30s不褪，算出KMnO4的准确浓度稀释成
0.004mol/L即可。
8
5Na2C2O4+2KMnO4+8H2SO4=10CO2↑+2Mn SO4+K2SO4+8H2O+5Na2SO4
过氧化氢酶米氏常数的测定
生物化学实验
1
一、实验目的
了解米氏常数的意义，测定过 氧化氢酶的米氏常数。 学习一种测定酶Km值的方法 熟悉和掌握过氧化氢酶活性的 测定原理和方法
2ห้องสมุดไป่ตู้
二、相关知识与原理 相关知识 米氏方程与米氏常数（Km值）
米氏方程
Ｖ ── ＝ Vmax[S] Km + [S]
Km值: 酶促反应速度为Vmax/2时的 底物浓度。单位是mol/L
酶液/mL
0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
[笔记]过氧化氢酶动力学常数测定
![[笔记]过氧化氢酶动力学常数测定](https://img.taocdn.com/s3/m/0899a2c7192e45361166f5a1.png)
[笔记]过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名: 赵家熙指导教师: 谭志文实验室: 6503组员:?章恒炯 ? ? 成绩:第三部分:实验记录与分析一、酶活力测定,一,原始数据1.样品原始质量:5.032g2.标定数据:,1,KMnO质量数及配制:158 4,2,NaCO质量数:134 224,3,标定数据:0.02mol/L,4,KMnO实际浓度:0.019mol/L 43.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液,ml,:实验,1,0.65实验,2,0.50对照,1,1.45对照,2,1.30,二,结果计算1(换算系数,1mL KMnO溶液相当于多少mg HO, 4221.72.样品酶活计算,每克鲜重样品1min内分解HO的毫克数表示:mg 22HO/g•min, 22().ABV,，，T171酶活(mgH2O2/g?min)= FWVt，，,A-B,=0.8 V=20.25 FW=5.032 V=2.5ml t=10min T1酶活(mgH2O2/g?min)=0.218二、动力学常数的测定,一,原始数据编号1 2 3 4 5 消耗的0.10 0.10 0.40 0.30 0.30 KMnO,mL, 4,二,求出各管反应前的底物浓度[S]和反应速度V 00编号1 2 3 4 50.005 0.0067 0.0082 0.0125 0.0250 [S],mol/L,00.0099 0.0124 0.0126 0.0221 0.0471 V,mmol/min,0,三,以1/V对1/[S]作图,用excel作图, 001/s 200 149.2 121.9 80 40 1/v 111.1 80.6 79.3 45.1 21.2,四,求出Km,mol/L,和Vmax,mmol/min,1K1m,，如,三,中图 vv[S]vmaxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时 y=1/Vmaxy=0时 x=-1/Km Km=0.35 Vmax=0.63第四部分:课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。
最新-过氧化氢酶米氏常数 精品
过氧化氢酶米氏常数篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1样品原始质量：50322标定数据：（1）4质量数及配制：158（2）224质量数：134（3）标定数据：002（4）4实际浓度：00193样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（）：实验（1）065实验（2）050对照（1）145对照（2）130（二）结果计算1．换算系数（14溶液相当于多少22）172样品酶活计算（每克鲜重样品1内分解22的毫克数表示：22?）(?)??17?1?酶活(22·)=酶活(22·)=0218（-）=08=2025=50321=25=10二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[]0和反应速度0（三）以10对1[]0作图（用作图）112001111149280612197938045140212（四）求出（）和（）11??[]如（三）中图=05572+15829=0时=1=0时=-1=035=063第四部分：课后研讨题1总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和存放一般在0-4℃下进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
2影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?1、温度，温度过高或者过低会降低过氧化氢酶的活性。
2、酸碱度，酸或碱浓度太高会使过氧化氢酶失活。
3过氧化氢酶与哪些生化过程有关?(2+)+22=(3++－)(3+－)2+22=(2+)2+22+24在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？终止反应,为下一步的滴定提供酸的环境。
5米氏方程中的有何实际应用？米氏常数是酶促反应速度为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度。
可用于判断反应级数；判断是否为不同种酶；判断酶的最适底物；确定酶活性测试时所需底物的浓度。
实验二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定
2.滴定
用0.02mol/L KMnＯ4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色
（在30s内不消失）为终点。
3.计算
酶活力用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示 酶活(mgH2O2/g· min)= ( A B ) VT 1.7 式中：
FW V 1 t
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
在反应系统中加入过量的H2O2溶液，经酶促反应后， 用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的 H2O2，即可求出消耗的H2O2的量。
5 H2O2 +2KMnO4+4H2SO4
=5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
底物浓度对酶促反应速度的影响
在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶促反 应的速度有很大的影响。 底物浓度很低时，酶促反应的速度（v）随底物浓度的增 加迅速增加；随着底物浓度继续增加，反应速度的增加开 始减慢；当底物浓度增加到一定值时，反应速度达到极限 值（Vmax）。 米氏方程表示底物浓度
酶活力测定为什么需在进程曲线的初速度时间范围内进行？
米氏方程中的Km有何意义及实际应用。 为了准确测得米氏常数值，实验过程需注意哪些问题？
查阅资料，设计应用紫外吸收法测定过氧化氢酶活力的实验。
大组总结交流（PPT）：
内容：实验内容，结果计算和分析，课后研讨题，实验体会等。
结果记录 与计算
结果记录 与计算
用双倒数法（以1/v对1/[S]作图） 计算Km和vmax
三、材料、试剂与器具 1.材料：新鲜马铃薯
2.试剂：
生化实验：实验六__过氧化氢酶米氏常数(Km)的测定-戴婷
③底物浓度［S］=②÷4 0.01
2 1.00 0.08
⑤剩余H2O2mmol=④ ×0.004×5/2
1.35 0.0135
3.70 0.037
⑥反应速度V=②一⑤
0.0265 0.043
⑦ ［S］/V= ③/ ⑥
0.377 0.465
3 1.50 0.12 0.03 6.40 0.064
哪些操作？
一、实验目的
掌握Km值的概念意义，作图求Km的常用方法。 掌握过氧化氢酶Km测定的原理及操作方法。
二、实验原理
过氧化氢酶(CAT)催化下列反应：
2H2O2→2H2O+O2↑ H2O2浓度可用KMnO4在硫酸存在下滴定测 知。
2KMnO4＋5H2O2＋3H2SO4 → K2SO4＋5O2↑＋8H2O
最后用0004mollkmno滴定各瓶至微红色记录kmnomol浓度加入的毫升数kmno0004moll消耗的kmno毫升数52反应中mol换算系数下面引用一次实验结果为例求过氧化氢酶的km值供计算参考
实验七 过氧化氢酶米氏常 数（Km）的测定
※反应速度与底物浓度关系：
米－曼氏方程式，米氏方程式
Ｖ ── ＝ Vmax[S] Km + [S]
（式中：5/2为KMnO4与H2O2反应中mol换 算系数）
2．求Km值： 下面引用一次实验结果为例，求过氧化
氢酶的Km值，供计算参考。 己知KMnO4为0.004mo1/L，标定出H2O2
浓度为0.08mol/L，列表计算如下：
计算程序 ①加人H2O2数
1 0.50
②加人H2O2mmol=①×0.08 0.04
最后用0.004mol/L KMnO4滴定各瓶至微 红色，记录KMnO4消耗量(ml)。
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过氧化氢酶米氏常数的测定
傅璐121140012
一、实验目的
1. 了解米氏常数的测定方法
2. 学习提取生物组织中的酶
二、实验原理
1.米氏反应动力学
(Michaelis-Menten Equation):
米氏方程
2.米氏常数的意义：
①反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、
底物浓度无关。
②米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。
其数值大
小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。
③Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物
就是该酶的最适底物。
3.米氏常数的求法：
该方法的缺点是难以确定最大
反应速度Vmax。
该作图法应用最广。
但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。
因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。
此法优点是横轴上点分布均匀，缺点是1/v会放大误差，同时对底物浓度的选择有要求。
[S]<<Km时图形近于水平线，[S]>>Km时直线将在原点附近与轴相交。
4.氧化酶：生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是消除体内自由基：
①POD：过氧化物酶
②SOD:超氧化物歧化酶
③CAT：；过氧化氢酶
5.过氧化氢酶的作用：
植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。
过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。
氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶（catalase，CAT）可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。
6.过氧化氢酶活力的测定方法：
①紫外吸收法：
过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240nm）随反应时间而降低。
根据测量吸光度的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
（以一分钟内A240nm下降0.1为一个单位）
②滴定法（高锰酸钾法、碘量法）
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
根据单位时间内消耗的过氧化氢的量即可测出过氧化氢酶活力大小。
7.实验中的反应：
H2O2被过氧化氢酶分解出H2O 和O2 , 未分解的H2O2 用KMnO4 在酸性环境中滴定, 根据反应前后的浓度差可以算出反应速度:
酶
2H2O2 −→2H2O + O2
2KMnO4+5H2O2+3H2SO4 −→2MnO4+K2SO4+8H2O+5O2
（本实验以马铃薯提供过氧化氢酶）
三、实验试剂
1. 0.02mol/L 磷酸缓冲溶液(pH=7.0): 实验室提供.
2. 酶液: 称取马铃薯5g, 加缓冲液10mL, 匀浆过滤.
3. 0.01mol/L 高锰酸钾.
4. 0.098mol/L H2O2.
5. 25%H2SO4.
四、实验操作
取6 只锥形瓶, 按下表的顺序加入试剂.
先加好过氧化氢和蒸馏水, 加酶液后立即混合, 依次记录各瓶的起始反应时间. 反映到达5min 立即加入2ml 25%硫酸终止反应, 充分混匀.。
用0.01mol/L 的KMnO4溶液滴定瓶中剩余的过氧化氢至微红色, 记录消耗的高锰酸钾体积.。
五、注意事项：
1.反应时间必须准确。
2.酶浓度须均一，若酶活力过大，应适当稀释。
3.滴定终点的判定。
六、实验结果：
过氧化氢浓度：0.098mol/L
称取马铃薯的质量：5.00g 序号 1 3 4 5
V （KMnO4）/ml 2.7 4.4 6.32 12.4
[S]/(mol/L) 0.0098 0.016368 0.0245 0.049
v/(mmol/min) 0.0061 0.010732 0.0174 0.036
1/[S] 102.0408 61.0948 40.8163 20.4082
1/v 163.9344 93.1793 57.4713 27.7778
米氏常数计算曲线y = 1.6828x - 8.7953R 2 = 0.998802040
60
801001201401601800204060801001201/[S]1/v 系列1线性 (系列1)
米氏常数Km= -0.1913
七、实验结果分析：
1.曲线上少一个点的原因：
用移液管移取序号为2的过氧化氢溶液（应为1.25ml）错误的移取了1.75ml，故在制图时将其舍去。
2.曲线线性较好（R²=0.9988）的原因：
本实验采取了两人分工的方法完成实验，控制反应结束及滴定分别由一人完成，所以标准都相同，从而在一定程度上提高了实验的准确性。
3.Km计算结果呈负值的原因：
Km呈负值（即整条直线都向下移动），亦即所有测定的v值都偏大。
由v=(c1*V1-2.5*c2*V2)/5，故推断最可能的原因是V2整体测量偏小，可能的操作失误是编号为0的空白对照组中高锰酸钾的滴加量偏高，从而使除去该点的整体的高锰酸钾量都偏小。