方法确认报告及原始记录空气微生物细菌总数

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北京大学环境工程实验室

检测方法确认报告

检测项目空气微生物细菌总数的测定

确认时间确认地点环境大楼222室

检测方法☑GB/T 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总数撞击法/自然沉降法

☑HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气中细菌总数的测定方法撞击法

方法类型☐非标准方法

☐超出预定范围使用的标准方法☑新增项目的标准方法

☐补充和修改过的标准方法

☐自编方法

方法验证形式☐使用国家有证标准物质进行确认☑与标准方法比较

☐不同人员或仪器比对

☐实验室间比对

方法实施细则空气微生物分析检测实施细则

方法验证结果符合标准要求，可在本实验室执行该标准。学术委员会意见

批准人签字：颁布实施日期：

北京大学环境工程实验室

检测方法确认原始记录表

年月日需确认的检测方法空气微生物细菌总数的测定

方法选用依据GB/T 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总数撞击法/自然沉降法

HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气

中细菌总数的测定方法撞击法

检测设备

采样用FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器；

生化培养箱培养

仪器主要工作参数FA-1型采样器采样流量min。生化培养箱温度设置36±1℃

原始记录：

1. 试剂制备

琼脂培养基

（1）成分：A 蛋白胨10g，B 牛肉膏3g，C 氯化钠5g；D琼脂10-20g；E 蒸馏水1000mL。

（2）制备方法：将上述成分ABCE（即琼脂先不加）按比例混匀（可适当加热），用40 g/L NaOH和1:10 （体积比）HCl调节pH到（尽量避免回调），分装于500玻璃三角瓶中，每瓶装250 mL，然后分别加对应的琼脂粉-5 g，用8层纱布包住瓶口加上牛皮纸（或报纸）后用橡皮筋封好。放入高压蒸气灭菌器中kPa（121℃，151 b）20 min高压灭菌，储存于于冷暗处备用。

灭菌铝箔，裁剪比平皿大一些的铝箔，然后灭菌，烘干备用。

琼脂平皿

配制灭菌后的琼脂培养基趁热（50℃-55℃）倾倒平皿，每皿24-30mL（不可超过，以免造成距离采样器吸气孔太近。），生化培养箱37℃倒置培养24h，观察有无杂菌生长，选取无杂菌生长平皿备用。

配置75%酒精一酒精壶。镊子棉球和棉棒若干。

2. 采样及培养步骤

撞击法

检测人检测日期

校验人校验日期

北京大学环境工程实验室

检测方法确认原始记录表

（撞击法）流量校准

主机插上电源（AC220V），按下“电源开关”，调节“流量调节”旋钮，使流量计转子稳定在min。

超净台杀菌：用75%的酒精把超净台实验操作台表面擦拭干净，开启紫外灯照射30min。使用棉球或棉棒粘取75％酒精擦拭六级撞击器。放置在超净台上晾干。

组装采样器

保证圆盘上孔眼通畅，然后按顺序将撞击器-培养皿-撞击器装配好；一手从上部按住撞击器，另一只手挂在三个弹簧挂上挂钩。固定在选取的采样点位置得三角架上。培养皿盖用灭菌铝箔包好，待采样完后盖培养皿上。

采样

连接好气路，取下顶盖。设置采样时间___5__min，使流量计转子稳定在min。

口自然沉降法

将营养琼脂培养基平皿置于采样点处，打开皿盖，暴露___/__分钟。

3培养步骤

采完样的培养皿，盖好盖子，倒置36±1℃培养48 h，菌落计数。

4.检测结果

撞击法报数结果按照CFU/m3为单位计数，

自然沉降法按CFU/皿为单位计数。

.空气中微生物数量：是以每立方米空气中所含粒子数量表示。

空气中微生物数量（cfu）/m³= 所有平皿菌落数（cfu）x 1000

（L/min）x采样时间（min）

各级计数结果见表____，第页。

测定结果见表____，第页。

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北京大学环境工程实验室检测方法确认原始记录表

表1细菌总数

样品编号

各级菌落形成单位(CFU) 总菌落数

（CFU）

采样体积

（m3）

细菌总数

（CFU/m3）1级2级3级4级5级6级

01 0 0 0 0 0 0 0 0

02 0 0 0 0 0 0 0 0

03 4 1 0 0 0 0 5 35

04 3 1 0 0 0 0 4 28

05 3 0 1 0 0 0 4 28

采样点位描述：

01,02为222室内超净台平面中央位置，撞击器直接放在桌面上，流量min，采时5min。

03,04,05为模拟采样，222室室内中央位置，距离桌面高1m，流量min，采时5min；室内温度22℃。相对湿度52% 。

注1.采样体积保留小数点后四位，细菌总数计算后取整。

注2.细菌总数报数时100以下报实数，大于等于100使用科学计数法记录。

检测人检测日期

校验人校验日期

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北京大学环境工程实验室

检测方法确认原始记录表

5结果分析

样品编号01,02 未检出空气细菌，间接说明了采样器消毒方式可行，以及

超净台内部空间洁净度达到要求。

03,04,05采样结果平行性较好，由于关门，关窗，几乎排除了空气流行性造

成的影响，说明采样条件稳定时数据差异不大，采样方法可行。

222室内细菌总数测定结果：35CFU/m3。

综上所述，GB/T 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总

数撞击法检测空气中细菌总数的方法本实验室可以复现。本实验室具有利用撞

击法开展检测空气中细菌总数的能力。

另外，比较发现，HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室

内空气中细菌总数的测定方法撞击法和GB/T 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总数撞击法/自然沉降法，二者在内容上并无实质的区别。故不另做实验进行方法确认。

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校验人校验日期

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