多糖的分离纯化及生理作用
生物活性多肽和多糖的分离纯化及其作用研究
生物活性多肽和多糖的分离纯化及其作用研究生物活性多肽和多糖是当前研究热点，多肽和多糖作为一类重要的生物活性物质，在医学、保健、食品等领域具有广泛的应用前景。
多肽和多糖的分离纯化及其作用研究对人类健康、环境保护和经济发展具有重要意义。
本文主要介绍多肽和多糖的分离纯化方法和作用研究进展。
一、多肽和多糖的特点多肽是由氨基酸组成的，相对分子量一般小于10000的生物大分子，具有生物活性。
多糖是一种高分子物质，由不同的单糖分子经糖苷键连接而成，常见的多糖有纤维素、壳聚糖、海藻酸等。
多肽和多糖具有广泛的作用机制，能刺激免疫系统、促进生长发育、改善血糖、血脂等生理指标，同时还具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
二、多肽和多糖的分离纯化方法1、超滤技术超滤技术利用过滤膜的分子筛选性，将大分子物质和小分子物质分离。
多肽和多糖多数具有分子量较小、分子量分布较窄的特点，适合采用超滤技术进行分离纯化。
超滤膜孔径大小和分离范围不同，选择适当的超滤膜孔径可以得到目标分子的高纯度分离物。
2、离子交换技术离子交换技术是利用离子交换基团将物质从混合溶液中选择性地吸附出来。
多肽和多糖具有不同的电荷性质，可以采用离子交换技术进行分离纯化。
根据目标物质的电荷性质和离子交换基团的性质选择适当的离子交换柱，可获得较高纯度的目标分子。
3、凝胶过滤技术凝胶过滤技术是利用不同孔径的凝胶微球分子筛选效应将不同分子量的物质分离开来。
多肽和多糖多为水溶性物质，适合采用凝胶过滤技术进行分离纯化。
选择适当的凝胶微球孔径和包涵量，可得到目标分子的高纯度分离物。
三、多肽和多糖的作用研究1、多肽的作用多肽在人体内具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降糖降脂等作用。
多肽医药涉及多种领域，如肿瘤、免疫、神经、内分泌、循环等。
多肽药物的研究涉及多个环节，如分离纯化、组合设计、药物动力学、药效评价等。
2、多糖的作用多糖在人体内具有多种生物作用，如抗氧化、免疫调节、抗菌、降压等。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖分离纯化
多糖分离纯化一、概述多糖是一类高分子化合物，具有复杂的结构和多样的功能，广泛存在于生物体内。
多糖的分离纯化是研究其结构和性质、开发应用的前提和基础。
本文将介绍多糖分离纯化的方法及其优缺点。
二、多糖分离纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的多糖分离纯化方法。
该方法基于不同多糖在不同浓度下溶解度不同的原理，通过控制溶液中某些成分（如盐类）浓度来使目标多糖沉淀。
该方法操作简单，但需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解，并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用固定在固相上带电基团与目标多糖间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团（如硫酸基、羧基等）的多糖。
该方法分离效果好，但需要对固相的选择和操作条件进行优化。
3. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法是一种利用多孔凝胶作为分离介质，目标多糖根据其大小在凝胶中进行分离的方法。
该方法适用于具有不同分子量的多糖，且操作简单、分离效果较好。
但由于凝胶孔径大小限制，对于较小或较大的多糖可能无法有效分离。
4. 亲和层析法亲和层析法是一种利用目标多糖与特定配体间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有特定结构或功能的多糖，如具有特异性结合蛋白质、抗原表位等。
该方法操作简单、分离效果较好，但需要对配体选择和操作条件进行优化。
5. 聚焦电泳法聚焦电泳法是一种利用电场作用将目标多糖在pH梯度中移动并实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有不同等电点或带电性质的多糖。
该方法分离效果好、可同时实现高效分离和纯化，但需要对pH梯度的选择和操作条件进行优化。
三、多糖分离纯化方法的优缺点1. 溶液沉淀法优点：操作简单，无需昂贵设备。
缺点：需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解，并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法优点：分离效果好，适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团（如硫酸基、羧基等）的多糖。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的分离和纯化
一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色，然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。
提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀，沉淀部分可反复多次离心沉淀，以除去部分水溶性色素等杂质。
1．除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质，常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。
前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖。
Sevag 法是经典的除蛋白质方法，复杂、费时，且样品损失较大。
冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果，从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价．认为三氯乙酸法最好，但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白，建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。
2．脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的去除方法。
常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。
D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色目的，而且可以进行多糖的分离。
H2 O2：是一种氧化脱色剂，浓度不宜过高，宜在低温下进行，否则引起多糖的降解。
对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素，即加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。
吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。
3．多糖的分级采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的，其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。
分级可以达到纯化的目的，可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。
(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离，常用的有两种方法，即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。
粗多糖和纯化多糖的功能
粗多糖和纯化多糖的功能多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于动植物和微生物中。
根据其分子结构、组成和来源，多糖可以分为粗多糖和纯化多糖。
粗多糖是从生物体中提取的未经纯化的多糖，而纯化多糖则是通过物理、化学或生物学方法对粗多糖进行分离纯化得到的多糖。
粗多糖和纯化多糖在功能上具有一定的差异，本文将分别介绍粗多糖和纯化多糖的功能。
一、粗多糖的功能1. 增强免疫力粗多糖具有增强免疫力的作用，可以激活免疫细胞，提高机体免疫力。
例如，从真菌中提取的灵芝多糖、香菇多糖等，具有明显的免疫调节作用。
研究发现，灵芝多糖可以增强巨噬细胞、淋巴细胞和自然杀伤细胞的活性，提高机体抗病毒、抗肿瘤的能力。
2. 抗氧化作用粗多糖具有较好的抗氧化作用，可以清除体内的自由基，防止自由基对细胞和组织的损伤。
例如，从植物中提取的枸杞多糖、银杏叶多糖等，具有较强的抗氧化活性。
这些多糖可以降低脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量，提高抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性，从而保护细胞免受氧化应激损伤。
3. 抗炎作用粗多糖具有抗炎作用，可以减轻炎症反应，保护受损组织。
例如，从海洋生物中提取的壳聚糖、海藻多糖等，具有抗炎活性。
这些多糖可以通过抑制炎症因子的产生，减轻炎症反应，从而保护受损组织。
4. 降血糖作用粗多糖具有降血糖作用，可以辅助治疗糖尿病。
例如，从植物中提取的苦瓜多糖、南瓜多糖等，具有明显的降血糖作用。
这些多糖可以通过提高胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌、抑制α-葡萄糖苷酶活性等途径，降低血糖水平。
5. 抗肿瘤作用粗多糖具有抗肿瘤作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
例如，从真菌中提取的虫草多糖、云芝多糖等，具有抗肿瘤活性。
这些多糖可以通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成等途径，发挥抗肿瘤作用。
二、纯化多糖的功能1. 更高的生物活性纯化多糖具有更高的生物活性，因为其纯度较高，杂质较少。
分离纯化多糖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习多糖的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握多糖的鉴定技术。
3. 了解多糖的化学性质和生物活性。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
本实验以某植物为原料，通过水提醇沉法提取多糖，采用离子交换层析和凝胶色谱法对多糖进行分离纯化，并对其结构进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：某植物、无水乙醇、蒸馏水、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G-250、氯化钡、明胶等。
2. 仪器：分析天平、电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、凝胶色谱仪、紫外-可见分光光度计、磁力搅拌器、离心机、层析柱等。
四、实验方法1. 多糖提取（1）将某植物样品干燥、粉碎，过60目筛。
（2）称取2g样品，加入50mL蒸馏水，在80℃水浴中提取2h。
（3）将提取液过滤，滤液浓缩至一定体积。
（4）加入无水乙醇，使溶液中多糖沉淀。
（5）离心分离，收集多糖沉淀。
2. 多糖分离纯化（1）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，加入一定量的氯化钠溶液，调节pH值至7.0。
（2）将溶液通过DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（3）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（4）离心分离，收集多糖沉淀。
（5）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，通过Sephadex G-100凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（6）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（7）离心分离，收集多糖沉淀。
3. 多糖鉴定（1）采用苯酚-硫酸法测定多糖的糖含量。
（2）采用考马斯亮蓝G-250法测定多糖的蛋白质含量。
（3）采用硫酸-咔唑法和氯化钡-明胶法测定多糖中的糖醛酸和硫酸基含量。
（4）采用高效液相色谱法测定多糖的分子量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取提取得到的粗多糖得率为5%。
08多糖的提取、分离纯化和结构分析
结构分析
一、前言
多糖和蛋白质、基因是生命科学的三大领域，是自 然界含量丰富的物质，也是与人类生活紧密相关的一类 生物高分子。大量研究表明，多糖具有其独特的生物活 性，是许多天然产物的主要活性成分，具有抗菌、抗病 毒、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老等功效。多糖的提取、分 离和纯化是研究多糖结构和活性的基础，只有得到相对
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
（1）甲基化分析方法：确定糖链中糖基间的连接位置常用 方法。该法首先将多糖链全甲基化，使所有的游离羟基变为
甲氧基。目前最常用的甲基化方法是改良Hakomori法。
Hakomori法先将样品溶于无水二甲基亚砜中，然后与 甲基亚磺酰甲基钠SMSM反应，使得多糖上游离羟基离子化 ，多糖成为阴离子后，易于CH3I反应，该法通常需重复数次 。以α-(1-4)葡聚糖为例说明甲基化过程。
包括离子交换色谱柱和凝胶柱色谱。
特点：分离效率高、设备简单、操作方便、条件温和 、不易造成物质变性等优点。 应用：物质分离纯化、分析鉴定最重要的方法之一； 分离/有机化合物及生物大分子不可缺少的手段。
多糖的结构分析
多糖的结构：
多糖的结构是其生物活性的基础，多糖的结构分析 在多糖的研究中具有非常重要的地位，是糖化学的核心 所在。 与蛋白质、核酸大分子相比，糖链的结构也包括一
端基法、HPLC、黏度法、凝胶色谱法和超滤法等，其中目
前公认较好的方法是高效凝胶渗透色谱（HPGPC）。 高效凝胶渗透色谱又称高效尺寸排阻色谱（ HPSEC） 、高效凝胶色谱，是一种高分子领域的高效分离分析技术， 是研究高分子的分子量及合成高分子分子量分布及与分子线 团尺寸相关的结构、反应、物性的最有效的手段之一。常用 的商品柱有Bondagel和TSK柱系。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究
红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究红枣作为一种常见的食材和药材，因其营养丰富和药用价值受到广泛关注。
红枣中含有丰富的营养成分和活性成分，其中红枣多糖是其主要活性组分之一。
红枣多糖具有多种功能，包括抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
因此，红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究具有重要的理论和应用价值。
红枣多糖的分离纯化是研究其结构和活性的基础。
目前，常用的纯化方法包括水提取、醇沉淀、膜分离、离子交换和凝胶过滤等。
这些方法能够有效地分离红枣多糖，并提供较高纯度的样品用于后续的研究。
分离纯化后的红枣多糖样品可以通过质谱、红外光谱、核磁共振等技术进行结构表征。
红枣多糖的结构表征是研究其活性功能的重要手段。
红枣多糖主要由单糖组成，其中主要成分是葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖等。
此外，红枣多糖还含有少量的灰氮和酸，这些成分对红枣多糖的活性和稳定性具有影响。
利用质谱和红外光谱等技术可以确定红枣多糖的分子量、化学结构和功能基团等信息。
红枣多糖的活性功能是研究者关注的焦点。
多糖作为一类天然产物，具有多种活性功能。
红枣多糖的抗氧化活性是其一大特点，可以清除自由基，提高机体的抗氧化能力。
红枣多糖还具有抗肿瘤活性，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
此外，红枣多糖还具有免疫调节作用，可以增强机体的免疫功能。
这些功能是红枣多糖应用于食品、保健品和药物的基础。
红枣多糖的应用潜力广阔。
红枣多糖作为一种天然产物，具有良好的生物相容性和安全性，因此在食品、保健品和药物等领域具有较大的应用潜力。
红枣多糖可以作为食品添加剂，用于提高食品的营养价值和功能性；可以作为保健品的活性成分，用于改善机体的免疫功能和抗老化能力；还可以作为药物的辅助治疗药物，用于改善肿瘤患者的治疗效果。
综上所述，红枣多糖的分离纯化、结构表征及活性功能研究对于充分发挥其营养和药用价值具有重要意义。
未来的研究可以进一步探索红枣多糖的结构与功能之间的关系，并开展红枣多糖的制备工艺和应用研究，以促进其在食品、保健品和药物等领域的应用综上所述，红枣多糖作为一种天然产物具有广泛的应用潜力。
多糖分离纯化方法具体解析
多糖分离纯化方法具体解析
多糖分离纯化方法有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。
多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。
在提取分离多糖的传统工艺，如水提醇析、薄膜浓缩法、冻干法等，均以子实体作为生产原料，但是工艺复杂、生产周期长、从而增大了生产成本，使工业化生产和大规模临床应用受到限制。
给客户带来诸多麻烦。
多糖分离纯化是研究多糖的基础。
近年来，分离纯化方法在传统的水提醇沉法的基础上经过改进，加上新的多糖分离分离方法如超临界流体萃取、超滤膜技术和离子交换色谱，新的分析方法如核磁共振及质谱等，使得对多糖的深人研究成为可能，也不断有新的多糖被发现。
多糖分离纯化过程通常不能完全除去杂质，故纯度不高。
采用超滤膜技术脱盐、分级和浓缩，收率高、多搪的生物活性破坏少，还无传统有机溶剂法的试剂残留问题，已普遍成为活性多糖研究的重要手段。
现代膜分离技术没有相变和常温操作，特别适用于生物活性物质的分离、浓缩与纯化。
超滤膜技术应用的缺点是必须知道目的多糖的相对分子质量才能选取有效超滤膜，否则须预选确定选膜，单采用一种膜分离效果有限。
超滤与微滤、纳滤、反渗透及电渗析等多种性能的膜技术进一步联用，取代能耗大、费用高、周期长且处理不彻底的传统工艺操作，将是多糖分离纯化工艺发展的新趋势。
多糖的分离纯化技术研究
多糖的分离纯化技术研究多糖是指由多个糖分子通过糖苷键连接而成的复杂碳水化合物。
在自然界中，多糖广泛存在于植物、动物和微生物中，具有多样的结构和功能。
多糖在药物、食品、生物材料和其他领域具有广泛的应用价值。
多糖的分离纯化技术是研究多糖物质的重要手段，可以用于糖的提取、纯化和结构分析等方面。
提取得到的多糖通常会存在杂质，如蛋白质、核酸和低分子量糖类等。
因此，在多糖提取后需要进行沉淀和溶解步骤。
沉淀可通过醇沉淀法、超声波沉淀法等实现。
沉淀后，可以用水或缓冲液将沉淀物溶解。
溶解后的多糖溶液中可能还有大量的杂质，因此需要进行过滤步骤。
常用的过滤方法有一次性小孔滤膜、膜过滤等。
过滤可以去除悬浮物和固体杂质，使溶液更加清澈。
多糖的纯化过程中，常用的技术包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、逆向高效液相色谱等。
离子交换色谱适用于多糖在质量和形态上具有一定差异的情况下。
凝胶过滤色谱利用多糖分子在凝胶孔中的大小分离纯化。
逆向高效液相色谱则是通过多糖在固定相和流动相中亲水性的差异实现分离。
分离纯化后的多糖需要进行结构分析。
常用的结构分析技术有核磁共振、质谱、红外光谱等。
核磁共振是一种常用的结构分析技术，可以通过分析多糖的碳谱和质子谱来确定其结构。
质谱则可以用于分析多糖的分子量和组成。
此外，还有一些新兴的多糖分离纯化技术，如亲和层析、超滤、逆流输送电泳、毛细管电泳等。
亲和层析通过多糖与相应亲和基团的专一结合来实现纯化。
超滤利用超滤膜分离多糖和小分子杂质。
逆流输送电泳和毛细管电泳则是利用电场在毛细管中与多糖分子大小和电荷性质有关的差异进行分离。
总之，多糖的分离纯化技术是多糖研究的重要手段，它可以用于提取、纯化和分析多糖物质。
研究和发展多糖分离纯化技术对于多糖的应用和进一步研究具有重要意义。
海参多糖的分离纯化方法及其主要生理作用
青岛农业大学本科生课程论文论文题目海参多糖的分离纯化方法及其主要生理作用学生专业班级应用化学2009级1班学生姓名（学号） XXXXXXXXX）指导教师 XXXXXX完成时间 2011年11月11日2011年11月11日海参多糖的分离纯化方法及其主要生理作用摘要：海参（sea cucumbers）是民间珍贵的药膳食品，海参体壁中含有的多糖成分具有抗肿瘤、抗血凝、抗放射、增强免疫力等多种生理功能。
本文介绍了海参多糖的提取、分离、纯化级纯度鉴定方面的相关技术，阐述了海参多糖生物活性及开发途径，并提出其研发方向。
关键词：海参多糖；分离纯化方法；生物活性一、海参多糖的分离提取与纯化海参多糖具有良好的保健功能，许多海参多糖的产品已作为保健食品进行开发。
以刺参为原料研制的海参口服液，认为其对机体的免疫调节和抗肿瘤的作用显著。
目前，海参多糖主要应用于保健品或化妆品 J，很少开发成药物，主要原因是海参多糖分离纯化技术难度大。
多糖是亲水性大分子物质，它的分离纯化方法有别于小分子物质，而且不同的多糖具有不同性质，必须采用不同的分离纯化方法。
1 海参多糖的分离提取方法多糖是极性大分子化合物，通常破碎后的原料常用水做溶剂来提取粗多糖，但海参多糖是含有糖胺聚糖的酸性粘多糖在热水中溶解度不大，通常采用碱提取法和酶解法。
（1）碱提取法一般使用稀NaOH溶液或KOH溶液进行提取，此法可以从组织中对海参多糖进行较完全的提取，但多糖分子有可能被碱进一步降解，因此在提取时所采用碱的浓度、碱解温度和时间都应优化筛选。
通常使用的稀碱溶液的浓度在5％一10％之间，温度保持在10℃以下，否则多糖容易发生降解反应。
（2）酶解法糖胺聚糖是通过共价键与蛋白聚糖的核心蛋白相接，并通过静电作用或立体化学效应和其他蛋白质发生专一性程度不一的结合，在制备GAG时常用降解蛋白的手段使与之结合的GAG键得以释放 J。
蛋白酶解法是目前GAG提取过程中使蛋白质与聚糖分离最为广泛应用的方法，酶解后用沉淀法可获得海参粗多糖。
多糖的分离纯化及药理作用
多糖的分离纯化及药理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、免疫调节及降血糖等多种生物活性。
1.板栗多糖的分离纯化及抗氧化活性研究1. 1板栗多糖的提取及纯化（1）板栗粗多糖的提取称取原料粉末50 g，加入去离子水1000 ml在100℃水浴中回流2h.先用纱布过滤，然后离心除去不溶物质。
将提取液减压浓缩至约200 ml然后将体积比为4: 1的三氯甲烷/正丁醇混合液等体积加入多糖溶液中。
振荡30 min后，静置，除去中间层变性蛋白质，并收集上层清液，重复以上操作3次去除蛋白。
向滤液中加入95%乙醇至含乙醇量达到80%，边加边搅拌，得灰白色絮状沉淀。
静置6h后，倾出上层清液，余下进行离心分离沉淀，回收上层乙醇溶液。
固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干即为粗多糖(CPS)。
（2）板栗粗多糖的纯化将二乙胺基乙基纤维素（DE-A E- 52)处理后填充3. 0 x 50 cm层析柱,用2倍量蒸馏水平衡。
取0. 5 g多糖用蒸馏水溶解后上样，蒸馏水洗脱后分别用0. 1. 0. 3. 0. 5 mol/ L氯化钠溶液梯度洗脱，洗脱液流速为60 ml/ h 分部收集，每管10 ml隔管取0. 2 ml洗脱液用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖的含量。
以480 nm处吸收值为纵坐，分部收集的管数为横坐标，做出多糖的洗脱曲线。
将柱层析分出的各个组分分别合并收集，减压浓缩至100 ~ 200 ml，自来水流水透析48 h,去离子水透析24 h,每4—6 h换一次水。
离心除去不溶性杂质后，用4倍体积的95%乙醇进行沉淀，固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干后得纯化多糖( CPS1)2胡萝卜多糖的分离纯化及抑制小鼠酒精肝损伤作用研究2.1胡萝卜粗多糖的制备（1）将胡萝卜洗净，切丝，于50℃烘干，粉碎。
食品中多糖的提取与功能研究
食品中多糖的提取与功能研究随着人们对健康意识的提升，食品中多糖的提取与功能研究逐渐成为热门话题。
多糖是一类由多个单糖分子组成的生物高分子物质，常见的多糖有葡萄糖、木糖、甘露糖等。
在食品中，多糖有着广泛的应用，具有重要的生理功能。
多糖的提取通常采用物理和化学方法。
物理方法包括高温、超声波、微波等，通过破坏细胞壁和纤维素结构来释放多糖。
化学方法则采用酸、碱、发酵等方式进行提取。
不同的提取方法对多糖的品质和功能有一定的影响，在提取过程中需要根据实际需求选取合适的方法。
食品中的多糖具有丰富的生理功能。
首先，多糖对人体免疫系统具有调节作用。
研究表明，多糖能够激活巨噬细胞和NK细胞等免疫细胞，增强机体的免疫力。
其次，多糖对心血管系统有保护作用。
多糖可以降低血脂、调节血压，减少动脉粥样硬化等疾病的发生。
此外，多糖还对消化系统有益，能够促进胃肠蠕动，增强消化功能。
此外，多糖还具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种功能，对人体健康非常有益。
食品中多糖的功能研究一直是科学家们的关注焦点。
科学家们通过对多糖进行分离纯化和鉴定结构，探索不同多糖结构与功能之间的关系。
例如，研究人员发现一种名为β-葡聚糖的多糖能够增强机体的免疫力，提高白细胞数量，增强抗病毒能力。
另外，多糖的分子量和空间结构也对其功能具有重要影响。
研究发现，分子量较大的多糖具有较好的抗氧化能力，能够清除自由基，减缓衰老过程。
多糖在食品工业中的应用也越来越广泛。
多糖可以用作食品的增稠剂、胶凝剂和增加口感的剂型。
在乳制品、糕点、饮料等食品中，多糖能够提高产品的质感和口感，增加食品的安全性和稳定性。
同时，多糖还可以用于保鲜和防腐，延长食品的保质期。
然而，多糖的应用还面临一些挑战。
首先，多糖的提取成本较高，限制了其在食品中的广泛应用。
其次，多糖的稳定性较差，容易受热和酸碱等外界环境影响而失去功能。
此外，多糖的口感和颜色等特性对食品的整体品质也有一定影响。
综上所述，食品中多糖的提取与功能研究具有重要的意义。
多糖的分离纯化及药理作用
多糖的分离纯化及药理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、免疫调节及降血糖等多种生物活性。
1.板栗多糖的分离纯化及抗氧化活性研究1. 1板栗多糖的提取及纯化（1）板栗粗多糖的提取称取原料粉末50 g，加入去离子水1000 ml在100℃水浴中回流2h.先用纱布过滤，然后离心除去不溶物质。
将提取液减压浓缩至约200 ml然后将体积比为4: 1的三氯甲烷/正丁醇混合液等体积加入多糖溶液中。
振荡30 min后，静置，除去中间层变性蛋白质，并收集上层清液，重复以上操作3次去除蛋白。
向滤液中加入95%乙醇至含乙醇量达到80%，边加边搅拌，得灰白色絮状沉淀。
静置6h后，倾出上层清液，余下进行离心分离沉淀，回收上层乙醇溶液。
固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干即为粗多糖(CPS)。
（2）板栗粗多糖的纯化将二乙胺基乙基纤维素（DE-A E- 52)处理后填充3. 0 x 50 cm层析柱,用2倍量蒸馏水平衡。
取0. 5 g多糖用蒸馏水溶解后上样，蒸馏水洗脱后分别用0. 1. 0. 3. 0. 5 mol/ L氯化钠溶液梯度洗脱，洗脱液流速为60 ml/ h分部收集，每管10 ml 隔管取0. 2 ml洗脱液用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖的含量。
以480 nm处吸收值为纵坐，分部收集的管数为横坐标，做出多糖的洗脱曲线。
将柱层析分出的各个组分分别合并收集，减压浓缩至100 ~ 200 ml，自来水流水透析48 h,去离子水透析24 h,每4—6 h换一次水。
离心除去不溶性杂质后，用4倍体积的95%乙醇进行沉淀，固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干后得纯化多糖( CPS1)2胡萝卜多糖的分离纯化及抑制小鼠酒精肝损伤作用研究2.1胡萝卜粗多糖的制备（1）将胡萝卜洗净，切丝，于50℃烘干，粉碎。
海参多糖的分离纯化方法及其主要生理作用
青岛农业大学本科生课程论文论文题目海参多糖的分离纯化方法及其主要生理作用学生专业班级应用化学2009级1班学生姓名（学号） XXXXXXXXX）指导教师 XXXXXX完成时间 2011年11月11日2011年11月11日海参多糖的分离纯化方法及其主要生理作用摘要：海参（sea cucumbers）是民间珍贵的药膳食品，海参体壁中含有的多糖成分具有抗肿瘤、抗血凝、抗放射、增强免疫力等多种生理功能。
本文介绍了海参多糖的提取、分离、纯化级纯度鉴定方面的相关技术，阐述了海参多糖生物活性及开发途径，并提出其研发方向。
关键词：海参多糖；分离纯化方法；生物活性一、海参多糖的分离提取与纯化海参多糖具有良好的保健功能，许多海参多糖的产品已作为保健食品进行开发。
以刺参为原料研制的海参口服液，认为其对机体的免疫调节和抗肿瘤的作用显著。
目前，海参多糖主要应用于保健品或化妆品 J，很少开发成药物，主要原因是海参多糖分离纯化技术难度大。
多糖是亲水性大分子物质，它的分离纯化方法有别于小分子物质，而且不同的多糖具有不同性质，必须采用不同的分离纯化方法。
1 海参多糖的分离提取方法多糖是极性大分子化合物，通常破碎后的原料常用水做溶剂来提取粗多糖，但海参多糖是含有糖胺聚糖的酸性粘多糖在热水中溶解度不大，通常采用碱提取法和酶解法。
（1）碱提取法一般使用稀NaOH溶液或KOH溶液进行提取，此法可以从组织中对海参多糖进行较完全的提取，但多糖分子有可能被碱进一步降解，因此在提取时所采用碱的浓度、碱解温度和时间都应优化筛选。
通常使用的稀碱溶液的浓度在5％一10％之间，温度保持在10℃以下，否则多糖容易发生降解反应。
（2）酶解法糖胺聚糖是通过共价键与蛋白聚糖的核心蛋白相接，并通过静电作用或立体化学效应和其他蛋白质发生专一性程度不一的结合，在制备GAG时常用降解蛋白的手段使与之结合的GAG键得以释放 J。
蛋白酶解法是目前GAG提取过程中使蛋白质与聚糖分离最为广泛应用的方法，酶解后用沉淀法可获得海参粗多糖。
多糖的分离纯化技术研究
参考文献
[1] 王涛,赵谋明. 多糖的研究进展[J]. 现代食品科技. 2007(01) [2]吴凤瑶,杜仲争.蛹虫草多糖的分子结构及生物活性研究.江
苏科技大学.2011(04) [3] 申利红,王建森,李雅,张大海,朱廷春. 植物多糖的研究及应
从图中可以看到
四种粗多糖都有两个洗脱峰，第一个峰 是穿透峰，为蒸馏水洗脱的多糖组分，为 不带电荷的中性多糖；第二个峰即主峰则 为 NaCl 溶液洗脱的带负电荷的酸性多糖组 分。
分别收集这 4 个主峰部分的洗脱溶液， 透析后冻干得到乳白色絮状的 4 种蛹虫草 酸性多糖组分，将进一步用 Sephadex G100 凝胶柱纯化。
多糖的分类
• 按来源可分为动物多糖、植物多糖、微生 物多糖和藻类多糖；
• 按酸碱性可分为酸性多糖、中性多糖及碱 性多糖；
• 按溶解性可分水溶性多糖、水不溶性多糖、 酸性多糖和碱性多糖等；
• 按组成成分可分为均多糖和杂多糖。
多糖的功能与应用
• 多糖具有显著的药效功能, 如增强免疫功能、 抗肿瘤、 降血糖、 抗衰老、 抗病毒作用等， 广泛应用于制药领域。 除此，还在食品、石油和化工等多个领域 应用广泛，比如制成保鲜剂、胶凝剂、成 膜剂、乳化剂。
氯化钙法 配制质量浓度为1%的粗多糖溶液，调节pH值为 8一9，加热至85℃，加氯化钠使其浓度为5%， 搅拌，冷却，离心。
盐酸法 配制质量浓度为l%的粗多糖溶液，向溶液中逐滴 加入 2mol.l一1的盐酸溶液，调pH值为3，4oC放 置12h，离心。
分离与纯化
1、DEAE-52 离子交换柱层析
将提取得到的蛹虫草粗多糖分别配制成 浓度为 10 mg/mL 溶液后用 DEAE-52 阴离 子交换柱进行层析，依次用蒸馏水、0.1 mol/L、0.2 mol/L 和 0.3 mol/L NaCl 溶液洗 脱，用苯酚-硫酸法跟踪检测，得到 4 种粗 多糖的洗脱曲线见图 2.2。
多糖的分离纯化及生理作用
多糖的分离纯化及生理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成作用等多种生物活性。
多糖的提取和纯化1. 多糖的提取1.1 热水浸提法：其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）,干燥后可得粉末状的粗多糖。
1.2 微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）。
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多糖的分离纯化及生理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成作用等多种生物活性。
多糖的提取和纯化1. 多糖的提取1.1 热水浸提法：其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）,干燥后可得粉末状的粗多糖。
1.2 微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）。
1.3 超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
超声波辅助法与常规提取法相比，具有提取时间短、产率高、无需加热等优点[17]。
1.4 索氏提取法：将植物粉末置于索氏提取器中，加入石油醚，60℃-90℃条件下提取至无色（一般为6小时）。
过滤，滤渣挥发干燥完溶媒后加入80%乙醇，再提取6小时，过滤，滤渣乙醇挥发干燥后加蒸馏水。
回流提取2次，趁热过滤，滤液减压浓缩，再除蛋白，醇沉，除色素。
60℃干燥，称重。
1.5 醇提法：先后将90%和50%乙醇加入植物粉末中，振荡充分再抽滤。
滤液中加入足量无水乙醇，至于4℃冰箱中过夜。
减压抽滤，再除去色素，得多糖粗品，在60℃通风干燥箱中干燥，再置干燥皿中恒重保存。
醇提法方法简单，易于操作，但提取率较低，乙醇使用量大，不宜大规模提取使用。
2.多糖的纯化方法纯化是将多糖混合物分离为单一多糖的过程，纯化的方法主要有以下几种：2.1 分部沉淀法根据各种多糖在不同浓度的低级醇或丙酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，经反复溶解与沉淀后，直到测得的物理常数恒定（最常用的是比旋光度测定或电泳检查）。
这种方法适合于分离各种溶解度相差较大的多糖。
为了多糖的稳定，常在pH7进行，唯酸性多糖在pH7时－COOH是以－COO` 离子形式存在的，需在pH2－4进行分离，为了防止苷键水解，操作宜迅速。
此外也可将多糖制成各种衍生物如甲醚化物、乙酰化物等，然后将多糖衍生物溶于醇中，最后加入乙醚等极性更小的溶剂进行分级沉淀分离。
2.2 盐析法在天然产物的水提液中，加入无机盐，使其达到一定浓度或饱和，促使有效成分在水中溶解度降低沉淀析出，与其它水溶性较大的杂质分离。
常做盐析的无机盐的有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
2.3 季铵盐沉淀法季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于酸性多糖的分离。
通常季胺盐及其氢氧化物并不与中性多糖产生沉淀，但当溶液的PH增高或加入硼砂缓冲液使糖的酸度增高时，也会与中性多糖形成沉淀。
常用的季铵盐有十六烷基三甲胺的溴化物（CTAB）及其氢氧化物（cetyl trimethyl ammonium hydroxide，CTA－OH）和十六烷基吡啶（cetylpyridinm hydroride，CP－OH）。
CTAB或CP－OH的浓度一般为1％－10％（W/V）的多糖溶液中，酸性多糖可从中性多糖中沉淀出来，所以控制季铵盐的浓度也能分离各种不同的酸性多糖。
值得注意的是酸性多糖混合物溶液的PH 要小于9，而且不能有硼砂存在，否则中性多糖将会被沉淀出来。
2.4 柱层析：包括纤维素柱层析、纤维素阴离子交换柱层析、凝胶柱层析、亲和层析、高压液相层析和其它柱层析。
如用活性炭及硅胶做载体的柱层来分离多糖；或用硼砂型的离子交换树脂分离中性多糖。
纤维素柱层析纤维素柱层析对多糖的分离既有吸附色谱的性质，又具有分配色谱的性质，所用的洗脱剂是水和不同浓度乙醇的水溶液，流出柱的先后顺序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最后出柱，与分级沉淀法正好相反。
举例说明多糖的分离纯化及生理作用3.1板栗多糖的分离纯化及抗氧化活性研究（1）板栗粗多糖的提取称取原料粉末50 g，加入去离子水1000 ml在100℃水浴中回流2h.先用纱布过滤，然后离心除去不溶物质。
将提取液减压浓缩至约200 ml然后将体积比为4: 1的三氯甲烷/正丁醇混合液等体积加入多糖溶液中。
振荡30 min后，静置，除去中间层变性蛋白质，并收集上层清液，重复以上操作3次去除蛋白。
向滤液中加入95%乙醇至含乙醇量达到80%，边加边搅拌，得灰白色絮状沉淀。
静置6h后，倾出上层清液，余下进行离心分离沉淀，回收上层乙醇溶液。
固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干即为粗多糖(CPS)。
（2）板栗粗多糖的纯化将二乙胺基乙基纤维素（DE-A E- 52)处理后填充3. 0 x 50 cm层析柱,用2倍量蒸馏水平衡。
取0. 5 g多糖用蒸馏水溶解后上样，蒸馏水洗脱后分别用0. 1. 0. 3. 0. 5 mol/ L氯化钠溶液梯度洗脱，洗脱液流速为60 ml/ h分部收集，每管10 ml隔管取0. 2 ml洗脱液用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖的含量。
以480 nm处吸收值为纵坐，分部收集的管数为横坐标，做出多糖的洗脱曲线。
将柱层析分出的各个组分分别合并收集，减压浓缩至100 ~ 200 ml，自来水流水透析48 h,去离子水透析24 h,每4—6 h换一次水。
离心除去不溶性杂质后，用4倍体积的95%乙醇进行沉淀，固体部分用少量无水乙醇洗涤2次，再用无水乙醚洗涤2次，自然晾干后得纯化多糖( CPS1)3.2胡萝卜多糖的分离纯化及抑制小鼠酒精肝损伤作用研究胡萝卜粗多糖的制备（1）将胡萝卜洗净，切丝，于50℃烘干，粉碎。
按料液比1:10，超声波处理时间为25 min，超声波功率800 W，纤维素酶用量为0.8 % （w/w)，酶解温度50℃，酶解pH为4.5 ,酶解时间50 min. 6层纱布过滤，4500 r/min离心15min，取上清液，浓缩，用3倍量浓缩体积的95%乙醉沉淀24 h, 4500 r/min离心10 min，收集沉淀，冷冻干燥，得到胡萝卜粗多糖胡萝卜多糖的分离纯化胡萝卜粗多糖经除蛋自后，既得精制胡萝卜多糖CP。
采用DEAE-cellulose 52柱层析对精制胡萝卜多糖进行初步分级分离，为获得精制多糖，将分离所得组分分别经过SephadexG-100凝胶柱层析进一步纯化.3.3玉米花粉多糖的分离纯化玉米花粉多糖提取预处理过的玉米花粉加水，在一20℃冷冻24 h以上(或加碱或不作处理)，取出后迅速加人到60 0C以上的热水中搅拌，使花粉内部的物质自萌发孔处溢出，经真空抽滤或离心收集滤液;滤渣再经此操作数次。
合并提取液并浓缩。
浓缩液加3~5倍体积95%以上乙醇，收集沉淀物，经过低温真空干燥或常压80℃干燥，即为玉米花粉粗多糖PPM 。
玉米花粉多糖纯化PPM通过Savag法脱蛋白后透析、离心。
上清液加人乙醇使之体积分数达到30%，离心得沉淀PPMA;继续向上清液中加乙醇使之体积分数达到60%，离心得沉淀PPMB;再向溶液中继续加乙醇使之体积分数达到75%，离心得沉淀PPMC。
然后将PPMC经过DEAE-Sephadex A-25柱层析，得到多糖PPMC-1。
后者再用DEAE-Sepha-dex U-200凝胶柱层析，进行纯度鉴定。
玉米花粉多糖的药理作用玉米花粉多糖(PPM)系从玉米花粉中提取的水溶性多糖，研究表明:PPM 可提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;其对大鼠肺泡巨噬细胞具有激活作用;PPM可以抑制肿瘤，对高血脂也有一定疗效。
3.4油松花粉多糖分离纯化及生理作用热水提取油松花粉多糖取一定量经破壁脱脂、酒精浸提处理的油松花粉，按料液比(g/mL)1:10加水，60℃下提取。
离心，合并上清液，减压浓缩，加入4倍量的95%乙醇过夜沉淀，离心取沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，得油松花粉粗多糖。
水提多糖的分离纯化将油松花粉粗多糖溶于水，用10%三氯乙酸（TCA）除蛋白，剧烈振荡，离心收集上清液，减压浓缩，重复操作直至不再产生白色沉淀。
然后取多糖浓缩液流水透析48 h，减压浓缩，加入4倍量的95%乙醇过夜沉淀，离心取沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，得油松花粉精制多糖。
先用DEAE—纤维素52柱进行初步分离，分离组分再用Sephaeryl S-200。
柱进一步细分即得精制油松花粉多糖油松花粉多糖的生理作用油松花粉营养丰富、全面，含多种维生素、蛋白质、氨基酸，不饱和脂肪酸，单糖，多糖，其中多糖含量丰富，含量达1.2 %~2.5 %。
目前国内外药理学研究证明松花粉能增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖等作用。
3.5豌豆多糖的抗氧化与抑菌活性研究豌豆水溶性多糖的提取称取干燥豌豆豆渣20. 0 g，加入200 ml六偏磷酸钠水溶液，在80℃水浴加热回流4. 5h，过滤，将豆渣放回蒸馏烧瓶中，重复上述步骤2次(每次加200 ml六偏磷酸钠水溶液作为提取液)，合并3次的滤液，将所得溶液用旋转蒸发仪蒸发浓缩至体积约100 ml离心(4 000 r/min，10 min)弃去残渣，上清液为多糖水溶液。
将上清液移入100 ml烧杯，加入三氯甲烷:正戊醇=5: 1（体积比）溶液，剧烈振荡，摇20 min离心，分去水层和溶液层交界处的变性蛋自质，得脱蛋自多糖溶液，重复2次。