p16INK4a与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

p16INK4a与妇科恶性肿瘤关系的

研究进展

【摘要】p16INK4a基因是一种抑癌基因，在CyclinD CDK4/6 pRb E2F通路中发挥重要负反馈调节作用，大部分恶性肿瘤中均发现该基因表达缺失。p16INK4a低表达是卵巢癌不利的预后指数，可作为卵巢癌独立的预后因子;p16INK4a在宫颈癌中呈过表达，有助于宫颈癌的筛查;p16INK4a在子宫内膜癌发生发展中起着重要作用，与子宫内膜癌转移灶发生率的增加密切相关;而在外阴癌HPV感染型中，常有p16INK4a过表达,是可靠的HPV阳性外阴癌的标记物。

【关键词】pl6INK4a;卵巢癌;宫颈癌;子宫内膜癌; 外阴癌

癌基因和抑癌基因对细胞周期正、负反馈调节失控是细胞突变和恶性肿瘤发生的重要机制之一[1]。p16INK4a基因是人们发现的一种直接作用于细胞周期，抑制细胞分裂的抑癌基因，在CyclinD1 CDK4/6 pRb E2F通路中发挥重要负反馈调节作用[2]。由于该基因产物对细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4的活性具有抑制作用，因而也称为INK4 (inhibitor of CDK4)基因[3]。在大部分恶性肿瘤中均发现该基因表达缺失，但是在妇科肿瘤中p16INK4a基因的失活和表达却不尽相同,与妇科肿瘤的发生、发展及预后密切相关。因此，对p16INK4a表达的检测在妇科肿瘤的诊断和治疗中有着重要的临床意义。

1 p16INK4a基因的结构、产物及功能

pl6INK4a基因位于染色体9p21，全长约8.5kb，由3个外显子和2个内含子组成，该基因位点又是少见的重迭编码基因位点，包含两个重迭基因INK4a和ARF,因阅读框不同分别编码蛋白Pl6INK4a 和P14ARF，并分别对CyclinD1 CDK4/6 pRb E2F和MDM2 P53通路起调节作用[3 4]。

在细胞周期调控中，最重要的调节位于G1 S期间，若此调控点失常，细胞异常增殖失控，可致肿瘤形成。pl6INK4a可与CDK4/6、CyclinD1 CDK复合物结合，从而抑制Rb蛋白的磷酸化和转录调节因子E2F释放，诱导细胞G1 S期停滞;p16INK4a基因

的变异或其蛋白的失活会导致CyclinD1 CDK4/6 pRb E2F调节功能的失控，从而使细胞过度增殖，导致肿瘤发生[5-6]。近年来研究表明p16INK4a基因的失活广泛存在于多种肿瘤组织及其肿瘤细胞系中,其失活的机制主要有基因的缺失、突变和甲基化[7]。

2 p16INK4a与妇科肿瘤

2.1 卵巢癌

卵巢癌的死亡率高居妇科恶性肿瘤首位[8]。尽管多数患者经过肿瘤细胞减灭手术及铂类、紫杉醇等联合化疗预后有所改善，但2a复发率仍超过70%。研究发现，p16INK4a低表达是卵巢癌不利的预后指数，在卵巢癌预后中有重要地位，与卵巢癌患者产生化疗耐药相关。Kommoss等[8]采用免疫组化试验对FIGO中300例Ⅱb IV 期卵巢癌患者进行p16INK4a蛋白表达的检测发现，94%(283/300)患者p16INK4a呈阳性表达,6%(17/300)呈阴性表达,在低表达、中等表达和高表达的病例中,呈中等表达者存活率较高。Surowiak等[9]的研究也证实p16INK4a的蛋白低表达是卵巢癌不利的预后指数, 同时证实p16INK4a低表达与卵巢癌患者产生化疗耐药相关。在43例卵巢癌病例和6例正常卵巢组织中，取PL(primary laparotomy)和SCR(secondary cytoreduction)期共73例石蜡包埋样本，检测p16INK4a、Ki67和caspase 3的表达，发现p16INK4a在正常卵巢上皮组织中定位于细胞核，而在卵巢癌组织中定位于胞质和胞核，统计分析证明p16INK4a 低表达主要是在年轻病例和死亡病例中。Kaplan Meier's生存曲线

分析p16INK4a低表达表明患者总生存率缩短,证实p16INK4a低表达是卵巢癌不利的预后指数。

2.2 宫颈癌

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球女性恶性肿瘤中其发病率仅次于乳腺癌[10]，p16INK4a在宫颈癌的发生发展中起着重要作用。人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宫颈癌的主要病因，几乎100%高危型人乳头瘤病毒(high risk HPV，HR HPV)阳性的宫颈癌和癌前病变中pl6INK4a呈阳性表达[11 12]。p16 INK4a较HR HPV更具有敏感性和特异性，可以评估各种HPV 亚型的致癌性。

Eleuterio等[13]应用免疫组化方法检测l3例重度鳞状上皮内病变、26例轻度鳞状上皮内病变和57例宫颈正常组织中Pl6INK4a 蛋白表达，表达率分别为92.3%、l5.4%和0%;重度鳞状上皮内病变中，pl6INK4a表达的诊断敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值分别是92.3%、100.0%、100.0%和98.3%。pl6INK4a与重度鳞状上皮内病变的相关系数为0.95，HR HPV与高危上皮内瘤变的相关系数为0.47,HR HPV感染阳性的标本P16INK4a蛋白表达均为阳性，证实P16INK4a蛋白表达的检测用于宫颈上皮内瘤变辅助诊断比HR HPV更具有敏感性。

Ishikawa等[14]通过检测p16INK4a和HPV表达率来评估各种HPV亚型的致癌性，在CIN I、Ⅱ、Ⅲ和宫颈鳞癌中HR HPV 感染率分别为69.8%(37/53)、97.5%(39/40)、91.7%(44/48)和100.0%(16/16);HR HPV阳性的CIN I、Ⅱ、Ⅲ和SCC(squamous carcinoma of cervix)中p16INK4a阳性表达率分别是32.4%(12/37)、82.1%(32/39)、93.2%(41/44)和100.0%(16/16)。在CIN I、Ⅱ中p16INK4a 表达是明显有区别的，HPV导致的细胞周期失调多发生在CINⅡ中，在CIN I中p16INK4a过表达发生在HPV16、HPV52多于HPV51、HPV35。用p16INK4a表达做为HPV致癌性的分子标记，证实各种亚型高危HPV导致pRb功能障碍的水平是不同的，在CINⅡ中发生率最高。

目前，尚没有单一可靠的宫颈癌筛查方法。Pl6INK4a蛋白表达在宫颈癌筛查中虽不能替代高危HPV检测，但可以作为协助高危宫颈上皮内瘤变的组织学诊断指标,宫颈癌进展中高危HPV病毒的整合是必需的，HPV病毒整合和游离状态下pl6INK4a表达并不是都呈阳性。Samama等[15]做了这方面的研究，对241例宫颈液基细胞学涂片，行巴氏染色分级，同时分别用原位杂交技术和免疫组化技术检测HR HPV和pl6INK4a，观察到所有重度鳞状上皮内病变整合的HR HPV均呈阳性，pl6INK4a过表达。但是在部分阴性HPV和ASCUS中pl6INK4a表达呈阳性，而有些pl6INK4a表达阴性的ASCUS和轻度鳞状上皮内病变中则包含游离型HR HPV。提示如果用pl6INK4a检测替代HR HPV检测，有些HR HPV阳性但