实验一细菌形态学检查
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实验一 细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 2学时一、目的要求1．了解、熟悉油镜的使用和使用原理。
2．掌握细菌抹片的制备及美蓝和革兰氏染色方法。
3．能够识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特征。
4．熟悉细菌的基本形态学特征和特殊构造。
二、知识背景细菌个体微小，无色透明，在一般显微镜下不易识别，必须用适当的染料使其着色后，才能看到其形态、排列和结构。
某些细菌因有特殊的染色性，更可借特殊的染色方法加以鉴别。
因此染色技术是细菌鉴定中的基本技术之一。
检查微生物标本，需要使用显微镜。
比较多用的是普通光学显微镜。
根据不同要求，可使用暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。
前几种显微镜用可见光线或紫外光线作照明光源，它们都属于光学显微镜；电子显微镜则是用电子流代替照明光源，与光学显微镜不同。
［普通光学显微镜的构造和使用］普通光学显微镜（或称生物显微镜）的构造，使用与保护方法，已在《组织学与胚胎学》教材中讲过，这里概述油镜的原理和使用要点：检查细菌标本，多用油镜进行，油镜是一种高倍放大（95-100倍）的物镜，一般都标有放大倍数（如95×；100×等）和特别标记，以便识别。
国产镜多用“油”字表示，国外产品则常用“Oil 或“HI”作记号。
油镜上还常漆有黑环或红环，而且油镜镜身比高倍镜和低倍镜长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。
油镜头的晶片细小，进入镜中的光量也较少，其视野比用高倍镜时为暗。
当油镜头和载玻片之间为空气层所隔时，因为空气的折光指数与玻璃的不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相似的油类，如香柏油等，使光线不致于因折射而大为损失，则可使视野充分照明，并能使操作者清楚地进行观察和检查（图l ）。
实验室中几种常用物质的折光指数 品名 玻璃 檀香油香柏油 加拿大树胶二甲苯 液体石蜡松节油甘油 水 折光指数 1.52-1.59 1.52 1.51 1.52 1.49 1.48 1.47 1.47 1.33进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度（升高集光器，开大光圈，调好反光镜等）。
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。
在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。
以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。
革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。
2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。
它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。
3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。
在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。
4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。
与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。
除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。
细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。
希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。
细菌形态理化鉴定
细菌形态理化鉴定1形态学特征1.1菌落形态培养到24h后观察平板上单菌落形状、大小、颜色与突起特征。
1.2细胞形态光学显微镜观察菌体的形态、大小、运动性等。
1.3革兰氏染色取无油迹的干净载玻片，滴上一滴无菌蒸馏水，用接种环挑取少许菌苔，于水滴边缘轻轻涂几下。
自然风干，在火焰上通过几次，固定涂片。
滴加结晶紫液，染1min，用水冲净结晶紫液。
滴加碘液冲净残水，并覆盖约lmin。
用水冲去碘液，将片上的水甩干。
滴加95%乙醇液脱色约20-30s，并立即用水冲净乙醇。
用番红液染l-2min。
用水洗净番红，风干，用显微镜油镜观察涂片。
1.4芽孢染色取培养24h左右的菌体涂片、干燥、固定。
滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿使沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。
加热时间从冒蒸汽时开始计时约4-5min。
倾去染液，待载玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
用蕃红水溶液复染lmin，水洗。
待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
1.5荚膜染色按常规取菌涂片，空气中自然干燥。
用1%的结晶紫水溶液染色2min。
以20%的硫酸铜水溶液冲洗，用吸水纸吸干残液。
干后用油镜观察。
菌体染成深紫色，菌体周围的荚膜呈淡紫色。
2生理生化特性实验1、尿素酶（Urease）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。
尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。
其活性最适pH为7.0。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养10，60和120min，分别观察结果。
或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。
培养2，4和24h 分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。
培养基配制方法：蛋白胨：1 g ；NaCl：5 g ；KH2PO4 ：2 g ；葡萄糖1 g ；琼脂：15 g；酚红：0.012g；蒸馏水1000 ml。
细菌的形态检查实验报告
细菌的形态检查实验报告细菌的形态检查实验报告引言：细菌是一类微小而广泛存在于自然界中的生物体，它们在生态系统中扮演着重要的角色。
为了更好地了解细菌的形态特征，我们进行了一项细菌形态检查实验。
本报告将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论，希望能对细菌的形态学研究提供一定的参考。
实验目的：1. 了解细菌的形态特征，包括形状、大小和结构等；2. 掌握细菌形态检查的基本方法和技巧；3. 分析不同形态的细菌在环境适应和病原性方面的差异。
实验方法：1. 样本收集：从不同环境中采集细菌样本，包括土壤、水体和人体等；2. 样本处理：将采集到的细菌样本进行培养和纯化，获得单一细菌种类的纯培养物；3. 镜检观察：将纯培养物取一滴放在玻璃片上，加一滴透明油滴于其上，用显微镜进行观察；4. 形态测量：通过显微镜观察，测量细菌的长度、宽度和形状等参数；5. 形态分类：根据细菌形态特征，将其分为球菌、杆菌、螺旋菌等不同形态类型。
实验结果：经过实验，我们观察到了多种不同形态的细菌。
其中，球菌呈圆形或卵圆形，直径在0.5-2微米之间；杆菌呈长条状，长度在1-10微米之间；螺旋菌呈螺旋状，长度和宽度均在2-20微米之间。
此外，我们还观察到了一些特殊形态的细菌，如分枝杆菌和链球菌等。
讨论：细菌的形态特征与其在环境适应和病原性方面密切相关。
球菌通常具有较强的耐受力和适应性，能够在不同环境中生存和繁殖。
链球菌则常常是人体感染的致病菌之一，其球状结构有助于其在宿主细胞表面附着和侵袭。
杆菌则具有较高的代谢活性和生长速度，常见于土壤和水体等环境中。
螺旋菌则多分布于水体中，其螺旋形状有助于其在水中的游动。
细菌的形态特征还与其生长环境和营养需求密切相关。
例如，分枝杆菌的分枝结构有助于其吸收营养和释放代谢产物，使其能够在养分较为匮乏的环境中生存。
此外，细菌的形态特征还可用于分类和鉴定。
通过观察细菌的形态特征，可以初步确定其属于哪一类细菌，进而进行进一步的分类和鉴定。
细菌的形态学检查常用的方法
细菌的形态学检查常用的方法
细菌的形态学检查是指通过观察细菌的形态、结构和大小来进
行分类和鉴定的方法。
常用的方法包括：
1. 显微镜观察，使用光学显微镜或电子显微镜观察细菌的形态
和结构。
通过放大细菌的形态特征，如形状、大小、细胞壁结构等
来进行分类和鉴定。
2. 染色法，常用的染色方法包括革兰氏染色、折射率染色、吉
姆萨染色等，这些染色方法可以使细菌在显微镜下更清晰地显示出
形态特征，有助于鉴定。
3. 形态培养特性，利用不同的培养基和培养条件，观察细菌在
不同环境下的生长特性和形态变化，如菌落形态、生长速度等。
4. 生化反应，通过观察细菌对不同生化试剂的反应，如碘试验、氧化酶试验等，来鉴定细菌的形态学特征。
5. 分子生物学方法，包括PCR、序列分析等技术，通过对细菌
的基因组进行分析，可以更准确地鉴定细菌的形态学特征。
综上所述，细菌的形态学检查常用的方法包括显微镜观察、染色法、形态培养特性、生化反应和分子生物学方法，这些方法可以从不同角度全面地观察和鉴定细菌的形态学特征。
细菌形态学检查法(一)
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------细菌形态学检查法(一)细菌形态学检查法(一) 细菌形态学检查法（一）细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，不仅可以为后续的进一步检验提供参考依据，更重要的是可以通过细菌形态学检查迅速了解标本中有无细菌及菌量的大致情况；对少数具有典型形态特征的细菌可以作出初步诊断，为临床选用抗菌药物治疗起到重要的提示作用。
临床标本的细菌形态学检查方法主要包括染色标本和不染色标本的检查。
一、显微镜细菌体积微小，必须借助显微镜放大后才能观察。
细菌的一般形态结构可用光学显微镜观察，而细菌内部的超微结构则需用电子显微镜观察。
1．普通光学显微镜普通光学显微镜以可见光作为光源，波长 0.4～0.7m，最大分辨率 0．2m，约为波长的一半。
人肉眼能分辨的最小距离是 0．2mm，因此用油镜放大 1000 倍，0．2m 的微粒即被放大到肉眼可见的 0．2mm。
一般细菌都大于 0．m，故可用普通光学显微镜进行观察。
2．暗视野显微镜暗视野显微镜是在普通光学显微镜上装暗视野聚光器，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，背景视野变暗，菌体发亮。
观察时黑暗的背景中可见到发亮的菌体，明暗反差提高了观察效1 / 3果，常用于不染色标本的动力及运动状况检查。
3．荧光显微镜荧光显微镜以高压汞灯作为光源，能发出280～600nm波长的光线，主要在 365～435nm 之间。
根据使用荧光素的不同选择不同波长的光线作为激发光。
因其波长比可见光短，故分辨率高于普通光学显微镜。
细菌预先经相应的荧光素处理，然后置荧光显微镜下激发荧光，在暗色背景中可见到发荧光的菌体。
用于观察细菌的结构及鉴别细菌。
实验一细菌形态学检查
蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水 洗 碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色
实验操作
每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
革兰染色
结语
谢谢大家！
革兰染色-基本步骤
a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min； c)脱色：95%乙醇
至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30
s，自然干燥后镜检
革兰染色-结果与注意事项
结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项： 涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌
实验一细菌形态学检查
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。
2． 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3． 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4． 不染色和各种染色标本的显微镜观察。 5． 细菌特殊结构的染色与观察。
【实验内容】
光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察
形态学检查的意义
细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断
✓ 结核涂片 ✓ 淋球菌涂片
显微镜的使用
先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调 香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经
空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物 像清晰 镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
细菌的形态学检查
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革兰染色法
结晶紫、碳酸钠初染，30秒 碘液媒染30秒
丙酮酒精数滴，脱色约5秒
碱性复红液2~3滴，5秒钟
待干，镜检。
注：每一步均需 细流水冲洗。
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• 油镜观察结果1000倍
放大倍数：10×100
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• 白色念珠菌革兰染色1000倍
放大倍数：10×100
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革兰氏染色意义：
注明 菌名：大肠杆菌 染色法： 放大倍数：10×100
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细菌形态示意图绘图要求
绘细菌的
形态 排列 染色性 特殊结构
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1.涂片
① 接种环置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌。
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（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
② 取1~2环生理盐水（NS)置于载玻片上，接种 环用火焰烧灼灭菌。
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（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
③ 小指和手掌小鱼肌侧拔掉棉塞，并烧灼试管口灭菌。 用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取适量菌，注意勿使沾 有菌液的接种环触及试管壁及试管口。
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（二）细菌涂片标本的制备
3.固定
目的：使细菌蛋白变性，菌 体牢固黏附于玻片上，还可杀 死细菌。
玻片有菌膜一面向上，在火焰的外焰钟摆 样速度通过三次，时间约3秒钟。
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革兰染色法操作步骤：
• 初染 媒染 脱色 复染
初染（结晶紫.碳酸钠） 媒染（碘液）
脱色（95%乙醇） 复染（复红）
• 玻璃折射率： n=1.52
• 香柏油折射率： n=1.515
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二、细菌标本染色检查法
技能点13病料中细菌的形态学检查.
国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库《动物微生物与免疫技术》技能点13 病料中细菌的形态学检查
实训目标
1．病料中细菌的形态学检查实验目标：
通过观察病料中是否有菌，从而初步判断病料是否取自细菌感染病例。
若病料中有菌，根据细菌形态初步鉴定其种类
2．病料中细菌的分离培养实验目标：
用鉴别培养基分离培养后，看是否得到菌落。
若有菌落生长，则根据菌落特征进一步鉴定细菌种类。
仪器及材料疑似大肠杆菌病料、镊子、剪刀、玻片、酒精灯、染色缸及染色架、美兰染液、吸水纸、擦镜纸、香柏油、乙醇乙醚、洗瓶、烙刀、接种环、麦康凯平板、记号笔、温箱、酒精灯等
方法与步骤
1．触片以无菌剪刀、镊子剪取被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做数个压印或涂抹成适当大小的一薄层。
2．干燥涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰高处微烤加热干燥。
3．固定火焰固定是最常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（一般4～6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
4．美蓝染色在已固定好的抹片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2～3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干和镜检，结果菌体呈蓝色。
微生物学实验报告
微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分：显微镜的使用一、目的要求1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。
2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。
3．了解各种显微镜的主要特征。
二、实验原理（一）光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。
1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。
2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。
（二）放大倍数标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。
总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。
物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。
显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。
分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。
因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。
R=0.61λ/N.A式中：R-----分辨距离；λ------作用光的波长；N.A------数值口径。
一些介质的折射率介质折射率空气水玻璃香柏油1 13 55 1.56三、实验内容（一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。
（二）方法：细菌很小，须使用油镜方可观察到。
油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。
2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。
在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。
然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。
微生物实验-细菌的人工培养及形态学检查
三、各种培养基的接种
一）无菌操作
在医疗实践中或微生物试验中防止周围环境中的微生物污 染操作对象，同时防止操作对象的微生物污染周围环境。
1.四种接种方式：接种针用于穿刺接种细菌（半固体培养基），接种环用于固体、 液体培养基的细菌接种。（相对无菌）
2.任何一个实验，操作前均应在器皿上做标记：时间，菌种，
种。 • 生长现象：浑浊、
沉淀、菌膜样生长。
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细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：37℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
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实验一 细菌的人工培养
一、细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查：每班两个血平板，标记 方法：在室内选择一处放一个平皿，揭开皿盖
Mycosel平板
几种常用培养基
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(5).鉴别培养基：根据各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及代谢产物不同 ，在培养基中加入底物和指示剂来鉴别细菌。
1）蓝色半固体培养基（溴麝香草酚蓝） 2）无色半固体培养基（醋酸铅） 3 ）基础液体培养基
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细菌动力鉴别
细菌生化反应鉴别
鉴别培养基
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(3).选择培养基：培养基中加入某种/些化学物质，能抑制某 类细菌生长而使另一类细菌生长，从而将后者选择出来。 常用于肠道致病菌的分离与选择培养。
(4).厌氧培养基：用于厌氧菌的分离、培养和 鉴定。
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血平板
巧克力平板
MacConkey平板
Байду номын сангаас
X.L.D平板
Sabourand平板
2、按用途分：
(1).基础培养基：含有大多数细菌生长所需要的基本营养成 分。最常用的为肉汤培养基
细菌实验室检查项目
细菌室常规检测项目：一形态学检查（Morphological Examination）（一）各种染色1革兰染色（Gram stain）：将细菌分为革兰阳性菌如葡萄球菌属，链球菌属等；革兰阴性菌如大肠埃希菌沙门菌，志贺菌等。
2抗酸染色(Acid-fast stain)：通过染色将细菌分为两大类：抗酸性细菌和非抗酸性细菌，抗酸性细菌种类较少，如结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌等。
正常：未见。
抗酸染色，找到红色分枝杆菌，及报告“找见抗酸分枝杆菌”，量可以用加号表示：++++每个视野>10根+++每个视野发现1～10根++100个视野发现10～99根+300个视野发现3～9根±300个视野发现1～2根3异染颗粒染色（Metachromatic granula stain）：用于检查棒状杆菌。
4墨汁染色（Indian ink negative staining）：用背景着色，而细菌本身不着色的染色方法，用于脑脊液中查找新生隐球菌。
正常：未见。
5鞭毛染色（Flagella stain）：鞭毛的数目和位置随细菌种类而不同，可分为周毛菌、单毛菌、双毛菌和丛毛菌，是细菌分类和鉴定的重要依据。
如霍乱弧菌是单鞭毛菌。
6荚膜染色（Capsules stain）：荚膜是细菌壁外一层粘液性多聚物，赋予致病菌的侵袭力。
染色将荚膜染成与菌体不同颜色，可作为细菌鉴定的依据。
如肺炎链球菌。
（二）涂片检测(smear)1便球杆比检查( stool cocus/bacillus)：即革兰阳性球菌与革兰阴性杆菌之比。
正常值：便球杆比：1:3临床意义：健康人肠道内寄居着大量厌氧菌和小部分需氧菌。
除人乳喂养的婴儿肠道内以革兰阳性球菌为主外，其余人均以革兰阴性杆菌占绝对优势。
在肠道发生致病菌如沙门、志贺、弧菌感染时往往由于使用抗生素而是革兰阴性杆菌受到抑制，此时球菌/杆菌比值有可能变大。
若比值显著增大，常提示肠道菌群紊乱或发生二重感染。
微生物学基本实验方法和诊断
五、鲎试验(Limulus test, LT)
鲎试验是利用鲎试剂能与微量内毒素反应形成固态 凝胶来检测内毒素的试验。 鲎试剂是鲎血液中的变形细胞溶解物（Limulus amebocytes lysate，LAT），为白色粉末，易溶于 水和生理盐水中。鲎试剂中含C因子、B因子、凝固 酶原和凝固蛋白原等几种参与级联酶反应的成分。 在一定条件下，微量的内毒素即能激活鲎试剂溶液 中的C因子，活化C因子激活B因子，活化B因子使凝 固酶原转变为凝固酶，凝固酶使凝固蛋白原转变成 凝固蛋白，最终导致凝胶的形成。
培养基的种类—按用途分类
（3）鉴别培养基：在培养基中加入特定的底物 和指示剂，即为鉴别培养基。鉴别培养基用来 作细菌的生化试验，以便鉴定细菌，因此这类 培养基是临床细菌检验常的培养基。如糖发酵 培养基、克氏双糖铁培养基（KIA）、动力－吲 哚－尿素（MIU）培养基等。
培养基的种类—按用途分类
（4）选择培养基：在培养基中加入某种化学物质 或抗生素，以抑制某些细菌种类生长，有助于需要 的细菌种类生长。此类培养基主要用于从含菌种类 （主要是正常菌群）较多的标本（如粪便）中分离 培养专性病原菌。如胆盐培养基、SS琼脂、麦康凯 琼脂、中国兰琼脂、伊红－美兰琼脂用于从粪便中 分离培养志贺菌和沙门菌；庆大霉素琼脂、碱性琼 脂用于从粪便中分离培养霍乱弧菌。 （5）特殊培养基：包括培养细菌L型的培养基，培 养厌氧菌的厌氧培养基。这类培养基用于培养营养 要求和生长条件较特殊的细菌。
细菌L型检查
（一）培养基：培养细菌L型的培养基需 具有丰富的营养和高渗生长条件。培养基 常以心脑浸液及牛肉浸液为基础，加入 1~2％蛋白胨、5％NaCl（使致高渗）， pH7.6~7.8、1％琼脂，高压蒸汽灭菌后制 备成固体培养基，必要时高压蒸汽灭菌后 待至60℃左右加入20％无菌马、羊或人血 浆，制备成固体培养基。
临床微生物学检验技术
二、染色标本
· 细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、 排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因 此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起 着非常重要的作用。
· （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 · （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、
荧光染色。
革兰染色
三、生化反应
（一）碳水化合物的代谢试验 1.糖（醇、苷）类发酵试验
原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶， 因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分 解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌 对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力， 可用以鉴定细菌种类。
方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中， 35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示 剂，立即观察结果。
结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔 红色为弱阳性。
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠 埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠 杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌 属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
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革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结
晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革
兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形
成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。
2. 染色方法
1 标本涂片、干燥和固定。 2 染色：在已固定细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴， 室温作用1min，用细流水轻轻冲洗，甩去积水。再滴 加碘液数滴，室温作用1min，冲洗。滴加95%酒精数滴， 轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片， 使脱掉的染料随酒精流去，再滴加酒精，直到流下的 酒精无色为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。 再滴加稀释石炭酸复红液复染约30s后用细流水冲洗。 3 标本染色后，晾干或用吸水纸吸干，滴香柏油后 用油镜观察。
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实验操作
每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
革兰染色
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工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
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鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系
取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使 用
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鞭毛染色-涂片的制备
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形态学检查的方法
不染色标本检查法 染色标本检查法 特殊染色检查法
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不染色标本检查法1
压片法（压滴法）
1. 用接种环分别取细菌2~3环，置于洁净载玻片中央 2. 轻轻覆上盖玻片 3. 油镜下观察
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不染色标本检查法2
悬滴法
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9
染色标本检查法
s，自然干燥后镜检
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革兰染色-结果与注意事项
结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项： 涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌
脱色过度：革兰阳性菌 革兰阴性菌 18~24 h 菌龄最佳 已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照
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将菌种接种在肉汤管中，经24 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥
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鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
2． 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3． 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4． 不染色和各种染色标本的显微镜观察。 5． 细菌特殊结构的染色与观察。
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3
【实验内容】
光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察
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4
形态学检查的意义
消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。
5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地 面等处，应立即报告老师及时适当处理。
6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后， 关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
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2
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。
实验一 细菌形态学检查
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1
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。
2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。
3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在
细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断
✓ 结核涂片 ✓ 淋球菌涂片
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显微镜的使用
先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调 香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经
空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物 像清晰 镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）
染色基本步骤：
✓ 涂片： ✓ 干燥：室温自然干燥 ✓ 固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色 ✓ 染色：革兰染色 ✓ 镜检
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革兰染色-基本步骤
a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min； c)脱色：95%乙醇
至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30
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芽胞染色-染液规格
石碳酸复红液 脱色液 碱性美蓝液
20 ml 20 ml 20 ml
碱性品红 乙醇 亚甲蓝
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芽胞染色-染色步骤与方法
将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定 滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒
蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水 洗 碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色
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特殊染色（示教）
鞭毛染色 芽胞染色 荚膜染色
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鞭毛染色-套组内容及规格
内容
复红酒精溶液(A液) 鞣酸水溶液(B液) 钾明矾溶液(C液) 工作液过滤瓶
规格
20 ml 20 ml 20 ml
主要成分
品红 鞣酸 钾明矾
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鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用