高效油脂降解菌株的筛选及特性研究
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3+X8?OY3*> Z*O[Y \ Z*?O[Z*O[Y
工业用水与废水
]B=L R&
+BL P
P$$R ^ $&
高效油脂降解菌株的筛选及特性研究
张英，秦华明，朱明军，赵继伦，梁世中
" 华南理工大学 食品与生物工程学院，广东 广州 !#$%&$ ’ 摘要：从含油废水中筛选出一株高效油脂降解菌，以橄榄油为唯一碳源和能源，在橄榄油的质量浓度为 P$ 0 Q > 的无机培养基中培养， R G 内油脂的去除率达 S$T 以上。菌种特性研究表明：其降解油脂的最适温度为 P! V 左右， U) 值为 %L $ 。 关键词：含油废水；废水处理；菌株；油脂降解菌 中图分类号：2_R_L _‘ 文献标识码： * 文章编号： #$$_ ^ P&!! " P$$R ’ $P ^ $$$! ^ $R
分别取样，测定油脂含量，结果见图 V 。由图 V 可看出该菌降解油脂的最适温度为 PM W 左右。
入 S1% 途径 及 8XY 循环 进一 步 氧化 。也 可 以逆 S1% 途径生成葡萄糖。 !" % 讨论 本研究对油脂降解菌株筛选及降解性能作了初 步的探讨。实验过程中同时发现，一般利用油脂效 率比较高的菌株其利用油酸的能力也较高，由此我 们可以推测：该菌之所以能够高效降解油脂，一方 面是由于产脂肪酶能力较高，能够将橄榄油降解为 脂肪酸，另一方面可能是能Leabharlann Baidu时地利用代谢产生的
H2I
发酵培养基中培养 2 G，油脂去除率达 D5R 以上。 经初步鉴定，该菌为浅白隐球酵母，其最适生长温 度为 4: F 左右，S= 为 !1 5。 )" ) 菌株生长曲线 使用 4Q 菌株，以橄榄油为唯一的碳源，在 25 F ， A:5 M < NOP 的条件下培养 C4 T ，每隔 ! T 取 样、离心、洗涤，将菌体放入 A5: F 的烘箱中干 燥至恒重，测定细胞干重，结果如图 A 所示。
!" #" $ 该菌株的除油机理 自然界中的降油微生物能够利用天然油脂和脂 肪作为自身生长的碳源，从而令含油废水得到净 化，这是由于微生物释放的胞外脂肪酶作用使油脂 与脂肪分解成为能被直接利用的小分子物质。如橄 榄油被降解为油酸和甘油，油酸进入微生物体内进 行脂肪酸的降解—— — ! N 氧化作用；甘油在胞内进 行磷酸化作用及脱氢，生成磷酸二羟丙酮，可以进
表A
菌株序号 AQ 4Q 2Q 3Q :Q !Q
图4
橄榄油降解曲线
)" +
菌株降解油脂的初步特性研究
筛选菌株特征
菌株特征
)" +" ! 起始 S= 值 将该菌接入以橄榄油为唯一碳源的发酵培养基 中，橄榄油的质量浓度为 45 ; < *，改变起始 S= 值为 :1 5， !1 5， C1 5，D1 5，培养 A4，43 T 后分别 取样，测定油脂含量，结果如图 2 所示。由图 2 可以看出该菌降解油脂的最适起始 S= 值为 !1 5。 )" +" ) 培养温度 改变摇床温度为 4:，25，2: F ，在 A4，43 T
圆形、 边缘透明、 呈紧密放射状、 中间白色、 隆起 圆形、 乳白色、 表面光滑 圆形、 边缘整齐、 呈放射状、 粘度大、 中间白色凸起 圆形、 边缘有分支、 不透明、 中间凸起、 乳白色、 菌落大 圆形、 边缘整齐、 透明、 隆起湿润、 黄色 圆形、 边缘整齐、 红色、 颗粒状、 菌落小
・ !・
张英，秦华明，朱明军，等：高效油脂降解菌株的筛选及特性研究
!"#"$%&’( ’) *&+,-.))&$&"($/0 1&#-2"+345&(+ !%34&( 4(5 !%65/ ’) 7,434$%"3&8%&$8 9,"3"’)
()*+, -./01 23+ )4567./01 ()8 9./06:4/1 ()*; <.6=4/1 >3*+, ?@.6A@B/0
从广州肉联厂废水处理的 2 个不同点 7 排污 口、曝气池、处理后的贮水池 8 取得 ! 个水样。对 ! 个含油水样进行分离筛选工作，在驯化 3 个周期 后，存活的微生物很少，只有 ! 株菌 7 各菌株特征 如表 A 8 。其中曝气池中微生物的种类较多，且降 解油脂的能力都较高；经过 3 个星期的驯化后， 从处理后的贮水池中取得的水样中基本已没有存活 的微生物。而在 ! 株菌种中，从曝气池中筛选得 到的 4Q 菌生长最好，且油脂降解效率较高，在以 橄榄油为唯一碳源且质量浓度高达 45 ; < * 的无机
###################################$
图 V 不同培养温度下橄榄油的降解情况
/53.>;?;’< <.@’/0;( 6;3;< *’/;<C’/ 5’*.:;( :;.<’=*5<50;.> " D $ 7 E50’* F’/’*(9+ #GGU+ HP I #O J K HOH# N HOHU7 " H $ 张树政 7 酶制剂工业 I 下 J " 1 $ 7 北京：科学出版社，#GUV7 " V $ 沈叔平，汪小梅 7 废水中动植物油脂的紫外分光光度测定法 " D $ 7 中国环境监测， #GGV ，#O I H J ：V N !7 " M $ 刘楚歆，李本荣 7 紫外分光光度法测定废水中的油脂 " D $ 7 中国 环境监测，#GGH ，G I V J ： PP N PH7
： ! 7 7 #=3 8 4 &>3 8 9 :1 5 ; < *J ! 7 ? 4 =@> 3 8 9 41 5 ; < *J ! 7 #K= 4 @> 3 8 9 41 5 ; < *J ! 7 #KL0 8 9 41 5 ; < *J ! 7 B;&>3 ・C=4 > 8 9 51 : ; < *， ! 7 橄榄油 8 9 451 5 ; < *。 !& ’ 复筛方法 挑取一环新鲜斜面种子，接入上述发酵培养基 中， 25 F ， A:5 M < NOP 的条件下培养，不同时间 取样，测废水中的油含量。 !" ( ) )" ! 油脂含量的测定 采用紫外分光光度计法 H 3 6 : I 。 结果与讨论 菌种筛选
图 H 不同起始 3Z 值下橄榄油的降解情况
脂肪酸，降低脂肪酸的抑制。
参考文献：
" # $ % &’()’*+ , -./0’*+ 1 2 %.3.4+ ’0 567 89’ :;.<’=*5<50;.> .? .6;4’ .;6 5>< 09’ 0*’50@’>0 .? 6;3;<A*;(9 B..6 /(.C*;>= B5/0’B50’* C><’* 5’*.:;( 09’@.39;6;( (.><;0;.>/ " D $ 7 E50’* F’/’5*(9+ #GGG+ HH I H J K LMH N LLO7 " P $ Q R’?’:4*’+ S %546+ 1 15C*’0+ ’0 567 -;>’0;( (95*5(0’*;T50;.> .?
收稿日期： 修回日期： P$$P ^ #$ ^ $S ； P$$P ^ ## ^ P!
! " +5P )e;& ’ f #L $ 0 Q >1 ! " +5a= ’ f $L ! 0 Q >1 ! " 90?;& ・‘)P ; ’ f $L $! 0 Q >。 ./ 0 驯化方法 取含油废水 ! 7> ，接种于 P! 7> " 含橄榄油 !L $ 0 Q > ’ 的驯化培养基中，置于 R$ V ，#!$ H Q 7./ 的恒温摇床上培养。 ‘ G 为一个周期，每周期结 束 后渐次将菌液移至含油量为 #$L $， #!L $， P$L $ 0 Q > 的驯化培养基上培养。 ./ 1 平板分离培养基 ! " 牛肉膏 ’ f !L $ 0 Q >， ! " 蛋白胨 ’ f !L $ 0 Q >， ! " 葡 萄 糖 ’ f RL $ 0 Q >， ! " +5a= ’ f !L $ 0 Q >1 ! " 琼 脂 ’ f P$L $ 0 Q >，用 +5P a;R 调 U) 值至 SL $ 。 ./ 2 平板分离方法 将驯化的菌液取 # 7> ，加入 _ 7> 无菌水， 制成起始菌液，再对它进行适当的稀释，取一定量 涂布分离平板，R$ V 培养 P& g &S @ ，将生长的菌
（ !"##$%$ "& ’""( )*( +,"#"%,-)# .*%/0 1"234 !4,*) 5*,6/ "& 7$-4*"#"%80 92)*%:4"2 ;<=>?= ， !4,*)）
!"#$%&’$：* @.0@6CDD.E.C/EF1 B.=6GC0H5G./0 IJH5./ K5I IC=CEJCG DHB7 B.=F K5IJCK5JCHL ;=.MC B.= K5I 4ICG 5I J@C B/=F IB4HEC BD E5HNB/ 5/G C/CH0FL O@C IC=CEJCG @.0@6CDD.E.C/EF1 B.=6GC0H5G./0 IJH5./ K5I E4=J4HCG ./ 5/ ./BH05/.E E4=J4HC 7CG.47 ./ K@.E@ J@C 75II EB/EC/JH5J.B/ BD B=.MC B.= K5I P$0 Q >L O@C HC7BM5= H5JC BD B.= ./ R G5FI K5I 5NBMC S$T L O@C IJ4GF BD J@C E@5H5EJCH.IJ.EI BD J@C IJH5./ I@BKI J@5J J@C 7BIJ I4.J5N=C JC7UCH5J4HC 5/G U) M5=4C DBH B.= GC0H5G5J.B/ 5HC P! V 5/G %L $ HCIUCEJ.MC=FL ()*+,%-#：B.=F K5IJCK5JCHW K5IJCK5JCH JHC5J7C/JW IJH5./W B.= GC0H5G./0 IJH5./ 随着人民生活水平的提高以及餐饮业的增多， 排放在水体中的油脂含量日益增高。对于这类废水 的处理，人们采用了不同方法，如物理法有筛滤、 沉淀、隔油等，化学法有絮凝、吸附、电解等，这 些方法一般投资大、流程复杂、且化学方法会产生 二次污染。相比之下，微生物能利用油脂作为生长 的碳源和能源，使之水解成甘油和脂肪酸，最终降 解为水和 a;P 等代谢产物。此法成本低、无二次 污染，是极具发展前景的油脂废水处理方法。因 此，从自然环境中寻找高效降解油脂菌，用于含油 废水的处理，是一项非常有意义的工作，受到国内 外学者的重视 b # ^ P c 。本文对高效油脂降解菌株的筛 选进行了初步研究。 . ./ . 材料和方法 驯化培养基 ! " dP)e;& ’ f #L $ 0 Q >， ! " d)Pe;& ’ f #L $ 0 Q >，
图A
菌株生长曲线
从图 A 可以看出，接种后的 5 E A4 T 为迟缓 期 ， A4 E 25 T 为 对 数 生 长 期 ， 25 E :3 T 为 稳 定 期，之后进入衰退期。 )" * 菌株降解油曲线 将 4Q 菌株接入以橄榄油为唯一碳源的液体培 养基中，在相同的条件下培养 C4 T ，每隔 ! T 取 样测定发酵液中剩余的橄榄油浓度，结果见图 4。 从图 4 中可以看出， A G 后橄榄油的去除率已经达 !5R 以上，到第 2 天达到 D5R 以上。
・!・
"#$%&’(")* +)’,( - +)&’,+)’,(
工业用水与废水
./01 23
#/1 4
4552 6 53
落挑至斜面保藏培养基，供初筛用。 !" # 初筛培养基 ! 7 酵 母 膏 8 9 51 : ; < *， ! 7 7 #=3 8 4 &>3 8 9 41 5 ; < *， ! 7 ?=4 @>3 8 9 A1 5 ; < *， ! 7 B;&>3 ・ C=4> 8 9 51 : ; < *， ! 7 琼脂 8 9 451 5 ; < *，每皿 4 滴橄榄油。 !" $ 初筛方法 初筛培养基灭菌后倒入平板，固化后，每皿加 4 滴灭菌橄榄油，用玻璃刮子涂抹均匀，挑接斜 面新鲜培养物少许，在平板上涂成圆点， 4D E 25 F 培养 2 E 3 G，选取在平板上生长的菌株，接种 斜面保藏。 !" % 复筛及发酵培养基 培养基组分
工业用水与废水
]B=L R&
+BL P
P$$R ^ $&
高效油脂降解菌株的筛选及特性研究
张英，秦华明，朱明军，赵继伦，梁世中
" 华南理工大学 食品与生物工程学院，广东 广州 !#$%&$ ’ 摘要：从含油废水中筛选出一株高效油脂降解菌，以橄榄油为唯一碳源和能源，在橄榄油的质量浓度为 P$ 0 Q > 的无机培养基中培养， R G 内油脂的去除率达 S$T 以上。菌种特性研究表明：其降解油脂的最适温度为 P! V 左右， U) 值为 %L $ 。 关键词：含油废水；废水处理；菌株；油脂降解菌 中图分类号：2_R_L _‘ 文献标识码： * 文章编号： #$$_ ^ P&!! " P$$R ’ $P ^ $$$! ^ $R
分别取样，测定油脂含量，结果见图 V 。由图 V 可看出该菌降解油脂的最适温度为 PM W 左右。
入 S1% 途径 及 8XY 循环 进一 步 氧化 。也 可 以逆 S1% 途径生成葡萄糖。 !" % 讨论 本研究对油脂降解菌株筛选及降解性能作了初 步的探讨。实验过程中同时发现，一般利用油脂效 率比较高的菌株其利用油酸的能力也较高，由此我 们可以推测：该菌之所以能够高效降解油脂，一方 面是由于产脂肪酶能力较高，能够将橄榄油降解为 脂肪酸，另一方面可能是能Leabharlann Baidu时地利用代谢产生的
H2I
发酵培养基中培养 2 G，油脂去除率达 D5R 以上。 经初步鉴定，该菌为浅白隐球酵母，其最适生长温 度为 4: F 左右，S= 为 !1 5。 )" ) 菌株生长曲线 使用 4Q 菌株，以橄榄油为唯一的碳源，在 25 F ， A:5 M < NOP 的条件下培养 C4 T ，每隔 ! T 取 样、离心、洗涤，将菌体放入 A5: F 的烘箱中干 燥至恒重，测定细胞干重，结果如图 A 所示。
!" #" $ 该菌株的除油机理 自然界中的降油微生物能够利用天然油脂和脂 肪作为自身生长的碳源，从而令含油废水得到净 化，这是由于微生物释放的胞外脂肪酶作用使油脂 与脂肪分解成为能被直接利用的小分子物质。如橄 榄油被降解为油酸和甘油，油酸进入微生物体内进 行脂肪酸的降解—— — ! N 氧化作用；甘油在胞内进 行磷酸化作用及脱氢，生成磷酸二羟丙酮，可以进
表A
菌株序号 AQ 4Q 2Q 3Q :Q !Q
图4
橄榄油降解曲线
)" +
菌株降解油脂的初步特性研究
筛选菌株特征
菌株特征
)" +" ! 起始 S= 值 将该菌接入以橄榄油为唯一碳源的发酵培养基 中，橄榄油的质量浓度为 45 ; < *，改变起始 S= 值为 :1 5， !1 5， C1 5，D1 5，培养 A4，43 T 后分别 取样，测定油脂含量，结果如图 2 所示。由图 2 可以看出该菌降解油脂的最适起始 S= 值为 !1 5。 )" +" ) 培养温度 改变摇床温度为 4:，25，2: F ，在 A4，43 T
圆形、 边缘透明、 呈紧密放射状、 中间白色、 隆起 圆形、 乳白色、 表面光滑 圆形、 边缘整齐、 呈放射状、 粘度大、 中间白色凸起 圆形、 边缘有分支、 不透明、 中间凸起、 乳白色、 菌落大 圆形、 边缘整齐、 透明、 隆起湿润、 黄色 圆形、 边缘整齐、 红色、 颗粒状、 菌落小
・ !・
张英，秦华明，朱明军，等：高效油脂降解菌株的筛选及特性研究
!"#"$%&’( ’) *&+,-.))&$&"($/0 1&#-2"+345&(+ !%34&( 4(5 !%65/ ’) 7,434$%"3&8%&$8 9,"3"’)
()*+, -./01 23+ )4567./01 ()8 9./06:4/1 ()*; <.6=4/1 >3*+, ?@.6A@B/0
从广州肉联厂废水处理的 2 个不同点 7 排污 口、曝气池、处理后的贮水池 8 取得 ! 个水样。对 ! 个含油水样进行分离筛选工作，在驯化 3 个周期 后，存活的微生物很少，只有 ! 株菌 7 各菌株特征 如表 A 8 。其中曝气池中微生物的种类较多，且降 解油脂的能力都较高；经过 3 个星期的驯化后， 从处理后的贮水池中取得的水样中基本已没有存活 的微生物。而在 ! 株菌种中，从曝气池中筛选得 到的 4Q 菌生长最好，且油脂降解效率较高，在以 橄榄油为唯一碳源且质量浓度高达 45 ; < * 的无机
###################################$
图 V 不同培养温度下橄榄油的降解情况
/53.>;?;’< <.@’/0;( 6;3;< *’/;<C’/ 5’*.:;( :;.<’=*5<50;.> " D $ 7 E50’* F’/’*(9+ #GGU+ HP I #O J K HOH# N HOHU7 " H $ 张树政 7 酶制剂工业 I 下 J " 1 $ 7 北京：科学出版社，#GUV7 " V $ 沈叔平，汪小梅 7 废水中动植物油脂的紫外分光光度测定法 " D $ 7 中国环境监测， #GGV ，#O I H J ：V N !7 " M $ 刘楚歆，李本荣 7 紫外分光光度法测定废水中的油脂 " D $ 7 中国 环境监测，#GGH ，G I V J ： PP N PH7
： ! 7 7 #=3 8 4 &>3 8 9 :1 5 ; < *J ! 7 ? 4 =@> 3 8 9 41 5 ; < *J ! 7 #K= 4 @> 3 8 9 41 5 ; < *J ! 7 #KL0 8 9 41 5 ; < *J ! 7 B;&>3 ・C=4 > 8 9 51 : ; < *， ! 7 橄榄油 8 9 451 5 ; < *。 !& ’ 复筛方法 挑取一环新鲜斜面种子，接入上述发酵培养基 中， 25 F ， A:5 M < NOP 的条件下培养，不同时间 取样，测废水中的油含量。 !" ( ) )" ! 油脂含量的测定 采用紫外分光光度计法 H 3 6 : I 。 结果与讨论 菌种筛选
图 H 不同起始 3Z 值下橄榄油的降解情况
脂肪酸，降低脂肪酸的抑制。
参考文献：
" # $ % &’()’*+ , -./0’*+ 1 2 %.3.4+ ’0 567 89’ :;.<’=*5<50;.> .? .6;4’ .;6 5>< 09’ 0*’50@’>0 .? 6;3;<A*;(9 B..6 /(.C*;>= B5/0’B50’* C><’* 5’*.:;( 09’@.39;6;( (.><;0;.>/ " D $ 7 E50’* F’/’5*(9+ #GGG+ HH I H J K LMH N LLO7 " P $ Q R’?’:4*’+ S %546+ 1 15C*’0+ ’0 567 -;>’0;( (95*5(0’*;T50;.> .?
收稿日期： 修回日期： P$$P ^ #$ ^ $S ； P$$P ^ ## ^ P!
! " +5P )e;& ’ f #L $ 0 Q >1 ! " +5a= ’ f $L ! 0 Q >1 ! " 90?;& ・‘)P ; ’ f $L $! 0 Q >。 ./ 0 驯化方法 取含油废水 ! 7> ，接种于 P! 7> " 含橄榄油 !L $ 0 Q > ’ 的驯化培养基中，置于 R$ V ，#!$ H Q 7./ 的恒温摇床上培养。 ‘ G 为一个周期，每周期结 束 后渐次将菌液移至含油量为 #$L $， #!L $， P$L $ 0 Q > 的驯化培养基上培养。 ./ 1 平板分离培养基 ! " 牛肉膏 ’ f !L $ 0 Q >， ! " 蛋白胨 ’ f !L $ 0 Q >， ! " 葡 萄 糖 ’ f RL $ 0 Q >， ! " +5a= ’ f !L $ 0 Q >1 ! " 琼 脂 ’ f P$L $ 0 Q >，用 +5P a;R 调 U) 值至 SL $ 。 ./ 2 平板分离方法 将驯化的菌液取 # 7> ，加入 _ 7> 无菌水， 制成起始菌液，再对它进行适当的稀释，取一定量 涂布分离平板，R$ V 培养 P& g &S @ ，将生长的菌
（ !"##$%$ "& ’""( )*( +,"#"%,-)# .*%/0 1"234 !4,*) 5*,6/ "& 7$-4*"#"%80 92)*%:4"2 ;<=>?= ， !4,*)）
!"#$%&’$：* @.0@6CDD.E.C/EF1 B.=6GC0H5G./0 IJH5./ K5I IC=CEJCG DHB7 B.=F K5IJCK5JCHL ;=.MC B.= K5I 4ICG 5I J@C B/=F IB4HEC BD E5HNB/ 5/G C/CH0FL O@C IC=CEJCG @.0@6CDD.E.C/EF1 B.=6GC0H5G./0 IJH5./ K5I E4=J4HCG ./ 5/ ./BH05/.E E4=J4HC 7CG.47 ./ K@.E@ J@C 75II EB/EC/JH5J.B/ BD B=.MC B.= K5I P$0 Q >L O@C HC7BM5= H5JC BD B.= ./ R G5FI K5I 5NBMC S$T L O@C IJ4GF BD J@C E@5H5EJCH.IJ.EI BD J@C IJH5./ I@BKI J@5J J@C 7BIJ I4.J5N=C JC7UCH5J4HC 5/G U) M5=4C DBH B.= GC0H5G5J.B/ 5HC P! V 5/G %L $ HCIUCEJ.MC=FL ()*+,%-#：B.=F K5IJCK5JCHW K5IJCK5JCH JHC5J7C/JW IJH5./W B.= GC0H5G./0 IJH5./ 随着人民生活水平的提高以及餐饮业的增多， 排放在水体中的油脂含量日益增高。对于这类废水 的处理，人们采用了不同方法，如物理法有筛滤、 沉淀、隔油等，化学法有絮凝、吸附、电解等，这 些方法一般投资大、流程复杂、且化学方法会产生 二次污染。相比之下，微生物能利用油脂作为生长 的碳源和能源，使之水解成甘油和脂肪酸，最终降 解为水和 a;P 等代谢产物。此法成本低、无二次 污染，是极具发展前景的油脂废水处理方法。因 此，从自然环境中寻找高效降解油脂菌，用于含油 废水的处理，是一项非常有意义的工作，受到国内 外学者的重视 b # ^ P c 。本文对高效油脂降解菌株的筛 选进行了初步研究。 . ./ . 材料和方法 驯化培养基 ! " dP)e;& ’ f #L $ 0 Q >， ! " d)Pe;& ’ f #L $ 0 Q >，
图A
菌株生长曲线
从图 A 可以看出，接种后的 5 E A4 T 为迟缓 期 ， A4 E 25 T 为 对 数 生 长 期 ， 25 E :3 T 为 稳 定 期，之后进入衰退期。 )" * 菌株降解油曲线 将 4Q 菌株接入以橄榄油为唯一碳源的液体培 养基中，在相同的条件下培养 C4 T ，每隔 ! T 取 样测定发酵液中剩余的橄榄油浓度，结果见图 4。 从图 4 中可以看出， A G 后橄榄油的去除率已经达 !5R 以上，到第 2 天达到 D5R 以上。
・!・
"#$%&’(")* +)’,( - +)&’,+)’,(
工业用水与废水
./01 23
#/1 4
4552 6 53
落挑至斜面保藏培养基，供初筛用。 !" # 初筛培养基 ! 7 酵 母 膏 8 9 51 : ; < *， ! 7 7 #=3 8 4 &>3 8 9 41 5 ; < *， ! 7 ?=4 @>3 8 9 A1 5 ; < *， ! 7 B;&>3 ・ C=4> 8 9 51 : ; < *， ! 7 琼脂 8 9 451 5 ; < *，每皿 4 滴橄榄油。 !" $ 初筛方法 初筛培养基灭菌后倒入平板，固化后，每皿加 4 滴灭菌橄榄油，用玻璃刮子涂抹均匀，挑接斜 面新鲜培养物少许，在平板上涂成圆点， 4D E 25 F 培养 2 E 3 G，选取在平板上生长的菌株，接种 斜面保藏。 !" % 复筛及发酵培养基 培养基组分