蛋白酶发酵培养基

产碱性蛋白酶的嗜热菌株筛选及发酵条件研究 食品与发酵工业 2008,34(10) 嗜热枯草芽孢杆菌， 玉米粉 40g/L，黄豆粉 40g/L，MgSO4 0.5g/L，NaCl 10g/L,K2HPO4 1.0g/L，起始 pH10.0，培养温度 45℃， 摇瓶转速 190rpm，250mL 三角瓶的装液量 100mL，48h 后发酵液酶活为 1180U/mL。
产高温蛋白酶微生物菌种资源的研究 微生物学杂志 1997，17（3）： 选择培养基：蛋白胨 1,葡萄糖 0.1,酪蛋白 0.5，NaCl 0.5，CaCl2 0.01，L-try 0.01，琼脂 1.5, pH7.2-7.4 PSY 培养基：蛋白胨 0.8，酵母粉 0.4，NaCl 0.3.，琼脂 1.5%，pH7.2 F5M 培养基：蛋白胨 0.5，酵母粉 0.1，NaCl 0.2，K2HPO4 0.05，MgSO4*7H2O 0.001,FeSO4 0.0001,pH7.2 F8 培养基(%) 蛋白胨 0．2，葡萄糖 0．2，(NH4)2SO4 l，CaCO3 0．2，FeSO4 0．05，MgSO4*7H2O 0.2，K2HPO4 0.2，KH2PO4*7H2O 0.05，pH7.0。 F12 培养基(%) 玉米粉 4，Na2HPO4 0.4， KH2PO4·7H2O 0.03，pH9.0- 9.3
（1）初筛培养基：干酪素 2.0%（用 2.0% NaOH 溶液加热溶解），琼脂 1.5%，pH 7.0；（2）斜面培养基： 牛肉膏 0.4%，蛋白胨 0.6%，酵母浸出粉 0.2%，NaCl 0.5%，琼脂 2.0%，pH 7.0； （3）发酵培养基Ⅰ：麸皮 4.0%，蛋白胨 0.1%，Na2HPO4·12H2O 0.4%，KH2PO4 0.03%，pH 7.0； （4）发酵培养基Ⅱ：玉米淀粉 2.0%，麸皮 2.0%，Na2HPO4·12H2O 0.4%，KH2PO4 0.03%，ZnCl2 0.1%，pH 7.0。 产中性蛋白酶菌株的筛选及其发酵条件的优化 湖南农业科学 2009，（5）：102~104，107
弹性蛋白酶发酵培养基 酪蛋白胨 3%，葡萄糖 4%，玉米提取液 0.2%，K2HPO4 0.1%，MgSO4*7H2O 0.01%，pH7.0.发酵菌种为芽孢杆 菌，发酵培养 24h.
对黑曲霉黄色变株 A 一 2580 产耐温酸性蛋白酶的发酵条件进行优化，由试验结果得如下结论： (1) 麸皮和豆饼粉分别是该菌发酵产生酸性蛋白酶的良好碳源和氮源. (2)通过正交试验优化培养基，确定其最适产酶培养基为(g/L)：麸皮 21.6、豆饼粉 48.4、NH C1 2.0、 KH2PO 0.8. (3)培养基起始 pH 为 4～5，接种量 30 ml 发酵液中 2×10 8 次方个孢子，发酵温度 30℃，时间 72 h， 酸性蛋白酶的产量达到最高，平均酶活达 6700 u/m1.
ELI 1 2 发酵条件的确定及弹性蛋白酶的纯化研究 现代食品科技 2009，Vo1．25，No5 Bacillus pseudofirmus 最佳碳源为葡萄糖，最佳浓度为 2.0%；最佳氮源为酵母粉，最佳浓度为 0.25%。其最佳发酵条件为在 pH 7.5
和 37℃的条件下进行 150 r/min 的摇瓶发酵。
上，还原糖含量低于 0.5%，镜检有大量芽孢产生时即可终止发酵，为保证后处理过程中酶活不会大量损失， 需迅速降温.
普通中温淀粉酶菌种 a 一淀粉酶 枯草芽孢杆菌 BF-7658 变异株具有较高的产活力，其最适 pH 为 7.5，最适碳氮比为 1.4：1。a-淀粉酶发酵 培养基：玉米粉 7%，豆饼粉 5%，磷酸氢二钠 0.8%，硫酸铵 0.4%，氯化钠 0.15%，灭菌前 pH7.0 一 7.5，灭 菌后 pH6.5—7.0。37.4±1℃下培养 44～48 小时。
不同菌株配伍摇瓶发酵蛋白酶的初探 江西农业大学学报 2009, Vo1．31，No．3 种子培养基 (%)：牛肉膏 0.5，蛋白胨 1.0，NaC1 0.5，pH 7.0～ 2。用于活化纳豆芽孢杆菌 NI、SH、TCP、 B，、B 株、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。 初筛培养基(%)：牛肉膏 0.3，酪素 1.0，NaC1 0.5，琼脂粉 1.5，pH 7.0—7.2, 0.1 MPa 压力灭菌 30 min。 发酵培养基(%)：可溶性淀粉 l，蛋白胨 0.5，Na2HPO4 0.4，KH2PO4 0.03，CaC12 0.1 。
产碱性蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及其酶学性质的初步研究 中国酿造 2009,(2) 富集培养基：牛肉膏 0.5g、蛋白胨 1g、NaCl 0.5g、水 100mL，pH10.5。 平板初筛培养基：将硼砂/NaOH 缓冲液（pH10.5）、脱脂乳溶液分别灭菌，混合倒平板，使得脱脂乳的最终 浓度在 10%。 种子培养基：酵母粉 0.5g、胰蛋白胨 0.5g、葡萄糖 1g、K2HPO4 1.8g、水 100mL。 摇瓶发酵培养基：酵母浸粉 1g、棉籽饼粉 2g、麦芽糊精 10g、柠檬酸钠 0.3g、CaCl2 0.3g、K2HPO4 1g、 水 100mL。
碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)， 37℃，培养 48 h， 1 发酵培养基 l：可溶性淀粉 1%、蛋白胨 0.5%、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、CaCl2 0.1% 、 pH 中性、121℃灭菌 25 min。 2 发酵培养基 Il：玉米粉 2% 、豆饼粉 3% 、麸皮 3% 、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、 ZnCl2 0.1% 、pH 8.0、121℃灭菌 25 min。 发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉 50g，玉米粉 50g，麸皮 25g，KH2PO4 0.3g，Na2HPO4 0.4 g，Na2CO3 lg； 自 然 pH，在 36℃下通风培养，前期通风 1：0.15，后期通风 1：0.2，搅拌 40 h 左右。
中性蛋白酶： 菌种耐热芽孢杆菌 XJT9503，从新疆吐鲁番火焰山土壤里分离筛选而得. 种子培养基组分(g/dI )：玉米粉 2，豆饼粉 1，磷酸氢二钠 0.4，硫酸镁 0.02，氯化钙 0.02. 发酵培养基组分(g/dI )：玉米粉 2，豆饼粉 1，葡萄糖 0.5，磷酸氢二钠 0.4，碳酸钠 0.085，硫酸镁 0.02， 氯化钙 0.02. 3 000 L 发酵罐发酵工艺参数为：将培养 8 h 的种子罐种子，以 5%接种量移种于 3 000 L 发酵罐， 46℃ 、180 r/min、4 L/(L·min)通气量下发酵培养 18 h 左右，测定发酵酶活达 10 000 u/mI 以
3 株高温蛋白酶产生菌的分离与鉴定 应用与环境生物学报 2007，13(4)：561～56 ① 酪素培养基 ：蛋白胨 10 g，葡萄糖 1 g，氯化钠 5 g，氯化钙 0．1 g，L-酪氨酸 0．1 g，琼脂 22 g， 酪素 5 g，蒸馏水 1 000mL，pH 7．2～7．4，112℃ ，灭菌 30 min． ② 牛乳脱脂培养基：用新鲜牛奶反复加热，除去脂肪．每次加热 20～30 min，冷却后用吸管从底层吸出 牛奶，弃去上层的脂肪．凋节 pH 至中性．112℃ ，灭菌 30 min． ③ 富集培养基：酵母膏 1 g，蛋白胨 2 g，硫酸铵 3 g，硫酸钾 0．5 g，氯化钾 0．1 g，甘氨酸 0．7 g， 1%氯化锰 80 L，1%绷酸钠 210 tLL，1%硫酸锌 11 tLL，0．1%硫酸铜 25 L，0.1%钼酸钠 15 L，0.1%硫酸钒 15 L，0.1%硫酸 5L，0.1%硫酸镍 5 L，1 mol L 氯化镁 500 L，0．3 mol L 硝酸钙 500/zL，1% 硫酸铁 100/xL， 0．5 mol L 氯化氢 100L，50%硫酸 200 L，蒸馏水 1 000 mL，pH 7．0，115℃ ，灭菌 30 min． ④ 葡萄糖铵盐培养基：葡萄糖 10 g，硫酸铵 1．5 g，磷酸二氢钾 0．5 g，磷酸氢二钾 1．5 g，硫酸镁 0．2 g，氯化钠 0．5 g，蒸馏水 l 000 mL，pH 7．0． ⑤ 发酵培养基(Fd 培养基) ：葡萄糖 10 g，酵母膏 2 g，蛋白胨 0.2 g，氯化钠 2 g，氯化钙 2 g，磷酸氖 二钾 5 g，磷酸二氰钾 1.25 g，硫酸镁 0.01 g，硫酸铁 0.0001g，蒸馏水 1000 mL，pH 7.0
产高温蛋白酶高温菌的筛选 武汉工业学院学报,2004, V01．23No．4 酪素培养基， 蛋白胨 1% ，葡萄糖 0.1% ，NaC1 0.5% ，CaCl2 0.01% ，L—Tyr 0.01% ，琼脂 1.8% ，酪 素 0.5% ，pH 7.2～7.4，113℃，灭菌 30 min。用于菌种分离。 PYS 培养基 酵母膏 0.4% ，蛋白胨 0.8% ，NaC1 0.3% ，琼脂 1.8% ，pH7.2 ～7.4，灭菌 30 min。用于菌 种保藏。
耐高温蛋白酶菌株的筛选 生物技术 2005, Vol115 ,No15 :20 培养基[6 ] :平板分离培养基、富集培养基、选择培养基、 液体发酵培养基。 [6 ]钱存柔,黄仪秀. 微生物学实验教程[M] . 第 1 版. 北京:北京大学出 版社,1999. 66 - 74.
原料乳中产耐高温蛋白酶菌株的筛选与鉴定 2009 年第 37 卷第 10 中国乳品工业 荧光假单胞菌 1.1802。 培养基：NB 固体[6]（质量分数）：胰蛋白胨 0.5 g，酵母浸膏 0.25 g，脱脂奶粉 0.1 g，葡萄糖 0.1 g， 琼脂 1.8 g，蒸馏水 100 mL，调节 pH 值至 7.2。 NB 液体[6] （质量分数）：胰蛋白胨 0.5 g，酵母浸膏 0.25 g，脱脂奶粉 0.1 g，葡萄糖 0.1 g，蒸馏水 100 mL，调节 pH 值至 7.2。 脱脂乳培养基：脱脂乳 100 mL，琼脂 1.8 g。
低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌 发酵培养基 (1) 豆饼粉(水解液，加 0.5%NaOH，121℃水解 30min，冷却、过滤)4.5%、玉米浆(酶解液.购自华北制药 厂)6%、Na2HPO4 0.4%、KH2PO4 0.03%、Na2CO，0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0，2%、泡敌约 0.5‰(视 具体情况及时补加)，pH 7，121℃灭菌 30 min。 (2)豆饼粉(水解液.加 0.5 NaOH，121℃水解 30 min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖 1%、Na2HPO40.4%、 KH2PO40.03%、Na2CO3 0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0.2%、泡敌约 0.5‰(视具体情况及时补加)， pH7。 121℃灭菌 30min 分批发酵动力学试验 使用瑞士 Bioengineering 公司 NLF22 型自动控制发酵罐进行分批发酵。发酵罐容积 20 L .两层六平直 叶搅拌，双挡板。采用 1.2.3 节(1)培养基，装料系数 0.65，接种量 4%，培养温度 18℃ ，以 5mol/L NaOH 液调节 pH7 左右，通气量 1：1、搅拌速度 300～500r/min，控制溶氧在 35%～45%之间。 补料分批发酵试验 使用瑞士 Bioengineeri g 公司 NLF22 型自动控制发酵罐进行补料分批发酵。发酵罐容积 2OL，两层六平 直叶搅拌，双挡板。采用 1.2.3 节(2)培养基，装料系数 0.4，接种量 4%，培养温度 18℃，以 5mol/L NaOH 液调节 pH 7 左右，通气量 1：1、搅拌速度 300～500 r/min，控制溶氧在 35 ～4底物浓度并及时取样测定糖浓度、细胞浓度及总酶活力。