ELISA法检测血清抗心磷脂抗体
抗心磷脂抗体的实验室检测
典 型 的 抗 心 磷 脂 抗 体 出 现 于 原 发 性 和 继 发 性 抗 磷 脂 综 合 征 。可 长 期 持 续 存 在 。然 而 ，其 他疾 病 如 感 染 ，恶 性 肿 瘤 ，服 药 （如 氯丙 嗪 等 ）或 健 康 个 体 也 可检 出 。 此 时 。抗 心 磷 脂 抗 体 常 常 为 一 过 性或 持 续 几 年 消 失 。因 此 。并 非 所 有 ＡＣＡ 阳性 均 为 ＡＰＳ患 者 。 ２．２ ＡＣＡ 与 血 栓 性 疾 病
２．３ ＡＣＡ 与 反 复 流 产
研 究 发 现 在 自身 免 疫 性 疾 病 ．某 些 因 感 染 、药 物 导 致 的 疾 病 中 ，如 果 ＡＣＡ 阳 性 ，则 习 惯 性 流 产 的 发 生 率 较 高 ，约 ２８ 左 右 ，且 高 滴 度 的ＩｇＧ 型ＡＣＡ 可 作 为 预 测 高危 妇 女 流 产 发 生 的一 种 较 为 敏 感 的指 标 。 ２．４ ＡＣＡ 与 肾脏 疾 病 Ⅲ
［４］张 文 ，李 芳 ，张丽 颖 ．抗 心 磷 脂 抗 体 的 临 床 意 义 ［Ｊ］．中 国 药 物 与 临
床 ，２００２，２（２）：６９—７１ ［５］王 宇 泓 ，杨 锡 强 ．抗 心磷 脂 抗 体 的 研 究 发 展 ［Ｊ］．重 庆 医 学 ．２００３，
３２（４）：４４７— ４４９
［６］钟 清 ．杜 晓 刚 ，陈 思 静 ．等 ．肾脏 病 患 者 抗 心 磷 脂 抗 体 检 测 的 临 床 意 义 ［Ｊ］．广 东 医学 ，２００２，２３（１２）：１２５０—１２５１
很 多 文 献 报 道 ＡＣＡ 是 血 栓 形 成 的 指 标 之 一 ，一 些 年 轻 人 出 现 不 明 原 因 的多 发 性 深 部 静 脉 栓 塞 ，肾 静 脉 栓 塞 ，视 网 膜 静脉 栓 塞 ．实 验 室 检 查 唯 一 不 正 常 的指 标 就 是 ＡＣＡ 升 高 。
抗磷脂抗体检测方法
抗磷脂抗体检测方法
抗磷脂抗体检测方法是用于检测人体血清中是否存在抗磷脂抗体（APA），这是一类自身免疫抗体，与磷脂类物质结合而产生。
以下是几种常见的抗磷脂抗体检测方法：
1.免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的检测方法，在抗磷脂抗体检测中也广泛应用。
该方法将标准化的抗磷脂抗原固定在微孔板上，然后通过加入待测血清样本，观察是否有抗磷脂抗体与抗原发生特异性结合。
结果可以通过酶标记的二抗或底物染色来定量或定性分析。
2.凝集试验：抗磷脂抗体可与磷脂类物质结合形成凝集，因此凝集试验也是一种常见的抗磷脂抗体检测方法。
这种方法通常通过向抗原和血清混合后进行观察，观察是否有凝集形成。
3.血浆高灵敏度C反应蛋白（hs-CRP）：hs-CRP是一种炎症标志物，但高水平的hs-CRP也可能与抗磷脂抗体的存在相关。
因此，测量血浆中的hs-CRP水平也可以作为抗磷脂抗体的间接指标。
系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义
系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义张晓梅;夏小明;连金泉;罗兴燕;杨峰【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(050)004【摘要】目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者抗心磷脂抗体(anti-cardiopin antibody,ACA) 的检测及其临床意义.方法采用ELISA 法检测69例SLE患者(SLE组)和50例健康体检者(正常对照组)的血清ACA水平,同时对SLE组患者进行抗核抗体(anti-nuclear antibody,ANA)、抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody,dsDNA)、尿蛋白定性、补体C3、血小板计数等测定.结果 SLE组血清ACA阳性23例,阴性46例.SLE组血清ACA抗体水平为(13.18±11.53)kRU·L-1,显著高于正常对照组的(5.01±2.67)kRU·L-1(P＜0.01).ACA阳性组ANA平均滴度高于ACA阴性组(1∶2 549.2 vs 1∶1 324.0),但差异无统计学意义(P＞0.05).ACA阳性组抗dsDNA、尿蛋白定性阳性率分别为60.9%、65.2%,均显著高于ACA阴性组的34.8%、30.4%(P＜0.05或P＜0.01).ACA阳性组补体C 3、血小板计数分别为(0.43±0.17)g·L-1、(91.42±16.19)×109·L-1,均显著低于ACA阴性组的(0.59±0.19)g·L-1、(108.24±22.05)×109·L-1(均P＜0.01).结论 ACA在SLE的发病及病情发展起了重要的作用.它对SLE的诊断、病情严重程度的评价、判断预后及疗效观察等均有重要的临床意义.【总页数】3页(P66-68)【作者】张晓梅;夏小明;连金泉;罗兴燕;杨峰【作者单位】上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000;上饶市人民医院检验科,江西,上饶,334000【正文语种】中文【中图分类】R593.24+1【相关文献】1.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义 [J], 李建民2.系统性红斑狼疮D-二聚体、抗心磷脂抗体检测的临床意义 [J], 吴南辉;许赤多3.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体检测及临床意义 [J], 张玉蓉;李义德;王立新4.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义 [J], 张晓梅;夏小明;连金泉;罗兴燕;杨峰5.系统性红斑狼疮患者抗心磷脂抗体的检测及其临床意义 [J], 梁虹;徐世正;周心房;熊腊元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2020抗磷脂综合征诊断与治疗(系列八)(三)抗磷脂综合征实验室检查
2020抗磷脂综合征诊断与治疗（系列八）（三）抗磷脂综合征实验室检查2016年我国复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）诊治专家共识将复发性流产定义为：3次或3次以上在妊娠28周之前的胎儿丢失。
但大多数专家认为，连续发生2次流产即应重视并予评估，因其再次出现流产的风险与3次者相近。
2017年欧洲人类生殖与胚胎学会（ESHRE）的最新定义：反复妊娠丢失（recurrent pregnancy loss，RPL）又称反复自然流产（recurrent spontaneous abortion，RSA），是指2次或2次以上孕周在24周之前的妊娠丢失。
反复流产发病原因众多，既可能是单一因素、也可能是混杂的多因素。
反复流产病因主要包括遗传因素（夫妻染色体异常2%-5%）、生殖道解剖结构异常（7%）、内分泌紊乱（8%-12%）、生殖道感染（4%）、免疫及血栓性疾病等因素（50%-60%），其他还有男性因素、环境因素、精神因素、药物因素、不良生活习惯、营养状况及不明原因反复流产（unexplained recur-rent spontaneouse abortion，URSA）。
不明原因反复流产中约80%与免疫学因素相关。
反复流产的诊断为排除性诊断，病因检查和治疗费用较高。
中国地域辽阔，经济发展不平衡，对反复流产患者病因检查和保胎用药应遵循因地制宜、量力而行、规范检查和适度治疗的原则。
根据不良孕产史、流产次数、经济条件、检查技术、酌情选择检查项目，尽可能做到病因清楚，诊断准确。
孕后根据既往流产病史、流产病因，孕后阴道超声、绒毛膜促性腺激素（HCG）、孕酮（P）、雌二醇（E2）、免疫和凝血等检查，横向及纵向综合分析，准确判断胚胎发育情况，恰当选择保胎药物，力争做到精准检查、精准诊断、精准用药、精准保胎。
为了推广普及反复流产与精准保胎事业，规范反复流产病因检查、诊断和治疗，我将反复流产与精准保胎理论知识按临床需要编排为以下篇章，供同行参考使用。
2种不同方法检测抗磷脂抗体的结果比较
ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１１．１８·临床实验研究·２种不同方法检测抗磷脂抗体的结果比较王杜平ａ，陈艳红ａ，祖蓓蓓ｂ，杨德良ａ，金海峰ａ，刘苏贤ａ，牛国平ａ（徐州市中心医院ａ．检验科，ｂ．风湿免疫科，江苏徐州２２１００９）摘要：目的 比较化学发光法（ＣＬＩＡ）与ＥＬＩＳＡ检测抗磷脂抗体（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＰＬｓ）的结果。
方法 收集８６例抗磷脂综合征（ＡＰＳ）患者、５０例健康人对照共１３６份血清，分别用ＥＬＩＳＡ和ＣＬＩＡ法检测抗心磷脂抗体（ａＣＬ）ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ和抗β２糖蛋白Ⅰ抗体（ａβ２ＧＰⅠ）ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ。
对比分析２种方法学试剂检测结果的一致性。
结果 ＥＬＩＳＡ法与ＣＬＩＡ法检测ａＣＬＩｇＭ／ＩｇＧ和ａβ２ＧＰⅠＩｇＭ／ＩｇＧ／ＩｇＡ的总符合率均超过８５％，仅ａＣＬＩｇＡ符合率稍差，为７７．９％；除ａＣＬＩｇＡ项目Ｋａｐｐａ值为０．１９８外，其他项目符合率Ｋａｐｐａ值范围为０．４３４～０．７８７。
在ＡＰＳ组中，ＣＬＩＡ法检测ａＣＬ（ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ）和ａβ２ＧＰⅠ抗体（ＩｇＧ／ＩｇＭ／ＩｇＡ）的检出率均高于ＥＬＩＳＡ法（８６．０％ｖｓ６２．８％，９１．９％ｖｓ８１．４％），差异有统计学意义（χ２分别为６．７、１０．５，Ｐ＜０．０５）。
结论 ＣＬＩＡ法与ＥＬＩＳＡ法检测ａＰＬｓ的结果符合率较高，而ＣＬＩＡ法检测可提高对ＡＰＳ患者的检出率，为临床诊断提供更好的实验室诊断依据。
关键词：化学发光法；酶联免疫吸附试验；抗磷脂抗体；抗心磷脂抗体；抗β２糖蛋白Ｉ抗体中图分类号：Ｒ４４６．６ 文献标志码：Ａ 抗磷脂综合征（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＰＳ）是一组异质性自身免疫性疾病，其特征是反复出现动脉血栓、静脉血栓以及妊娠并发症，血清中抗磷脂抗体（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＰＬｓ）持续阳性等［１］。
ELISA法检测梅毒患者血清中抗心磷脂抗体
主围监垦崖壁蜜枣盎型些生！笪篁１１鲞箜兰塑ＥＬＩＳＡ法检测梅毒患者血清中抗心磷脂抗体郑占才１张荣富２白彦萍１陈锡唐［摘要］目的：探时ＨＪＳＡ法测定抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）在梅毒检测中的应用价值。
方法：用ＥＬｌＳＡ法检测６７例梅毒患者血清巾ＡＣＡ水平，并对恐例ＡＣＡ阳性的自身免疫性疾病患者血清进行ＲＰＲ、ＴＰＰＡ榆测。
结果：３９侧ＲＰＲ阳性的梅毒血清中，ＥＨＳＡ检测ＡＣＡ阳性２３例，若以ＲＰＲ为金标准，ＥＨＳＡ法检测梅毒的敏感性只有５８９７％（２３１３９）；２８倒ＲＰＲ阴性（ＴＰＰＡｍ性）的梅毒Ｊ】『【清中，ＥＬＩＳＡ检测ＡＣＡ阿性１例。
＾（Ｈ的阳性牢与ＲＰＲ滴度呈正相关（ｒ＝０９９５，Ｐ＜０００１）。
２２倒ＡＣＡ阳性的对照血清，ＴＰＰＡ椅测均阴性，ＲＰＲ阳性１例＝．结论：本研究提示ＥＬＩＳＡ法检测梅毒患者血清中ＡＣＡ时，敏感性和特异性均不如ＲＰＲ法。
［关键词］梅毒；酶联免疫吸附实验；抗心磷脂抗体ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆⅫｔｉｃⅫ蝴ａｎｆｉｂ础ｌｅｓｈｔｓｍｏｆｓｙｐｌ越ｓｂｙＥＬＩＳＡｚｋ增励删，蜘田蜡胁卿，ＢａｉＹａｎｐｉｎｇ，ｄ—Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ㈣蝴，ＣｈｉｎａＪａｐａｎｆ恤ｒｌ蛳Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９［ＡｌⅪｔｎｌｅｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：＇ｌｉｂｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅ硝ａｌｌＨＩＳＡｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｆｉｌｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｆｉｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＣＡ）ｉｎ【ｍｎｅｎｂｗｉｔｈｓ刑ｆｉｌｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１’Ｅｓ盯ａｏｆ６７ｃａｓ瞄ｏｆｓｙｐｈｉｌｉｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＡＣＡ—ＥＬＩＳＡ，ａｎｄ２２ｃａｓ・惜ｏｆａｕｔｏｉＦＩＩＩＴＩＩＩｌｌｆ＇ｄｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈｐｏａｉｔｉｖｅＡＣＡｗｅｒｔｊｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈＲＰＲａｎｄＴＰＰＡＲｔｓｕｌｌｓ：Ｏｆｔｈｅ３９ｃａｓ嘴０ｆＲ豫ｐｏｓｉ—ｔｉｒｅｓｙｐｈｉｌｉｓ．Ｚ３ｗｅｍＡＣＡｐｏｓｉｔｉｖｅｂｙＡＣＡ—ＥＬｌＳＡＣｏｍｐａｒｄｔｗｉｔｈＲＰＲ，ｌｌｌｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ０ｆＡＣＡ—ＥＩ，ＩＳＡⅧ５８９７％（２３／３９）．Ｏｆｔｈｅ２８ｃａｓｅｓｏｆＲＰＲｎｅｇａｔｉｖｅ（１胛ＡＦｚｓｉｔｉｖｅ）ｓｙｐｈｉｌｉｓ，１ｗａｓＡＣＡｐｏｓｉｔｉｖｅｂｙ廿』ｓＡ．ＴｈｅｒｅｗａｓａｐｏｓｉｔｉｖｅＩｉｌｌｅ８１＂ｃｏｍｊ｜ａｔｉ（）１１ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｉｔｅｒ０ｆＲＰＲａｎｄｔｈｅｔｒ，ｓｉｔｉｖｅｒｉｔｅｏｆＡＣＡｂｙＥＬＩＳＡ（ｒ＝０．９９５，Ｐ＜０００１）．ＡⅡｔｈｔ＿２２ｃｏｎｔｒｏｌｓ棚ｏｆＡＣＡｐｏｓｉｔｉｖｅ㈣ｗｅ撺僻Ａｎｅｇａｔｉｖｅ，ｂｕｔＯｎｅｏｆｔｈｅｍ惴ＲＰＲｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｃｌｍｅｌｕｓｉｍ・Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉ，：ｉｔｒａｎｄＨｅｃｉｔｌｃｉｔｙｏｆＡＣ“叫ＳＡｉｎｔｅｓｔｉｎｇｆｏｒｔｈｅｄｉａ＂ａｓｉｓｏｆｓｙｐｈｉｌｉｓａｒｅｋｓａｔｉｒｉｎｇｔｈａｎＲＰＲｌＫｅｙｗｏｒｄｓｓｙｐｈｉｌｉｓ；ＥＬＩＳＡ；ａｎｔｉｃｍａｔｉｏｌｉｐｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ梅毒螺旋体感染人体后，患者血清中产生一种抗心磷脂抗体，又称反应索。
ELISA检测血清抗体
间接ELISA检测血清抗体一实验原理将一定量的已知抗原吸附在酶标板的凹孔内，加入待测抗体（如免疫抗血清），保温后洗涤未结合的杂质蛋白；加酶标抗抗体（酶标二抗）并保温，洗涤；加底物保温一定时间后，加酸或碱终止酶促反应，底物降解量等于抗体量，酶标仪测定抗体含量。
原理如图。
包被抗原加入一抗加酶标二抗终止显色二实验操作程序1 包被用包被液稀释正常人血清（抗原）稀释1000倍↓酶标板每孔加入稀释后人血清100μl↓置于湿盒中37度1小时2 洗涤取出酶标板↓甩去酶标板小孔内液体，用洗涤液（PBST缓冲液，pH7.4）洗3次，每次3分钟，每次洗后，在滤纸上排干3 封闭封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。
滤纸干燥过的酶标板↓每孔加入100μl抗体稀释液↓置于湿盒中37℃保温1小时↓洗涤，方法同（2）。
4 加一抗（兔抗人血清）：将兔抗人抗血清用抗体稀释液稀释不同倍数：100、1000、10000、40000、80000、160000倍，每样设3复孔。
同时设阴性对照孔，阴性对照孔只加抗体稀释液。
（兔抗人抗血清稀释1000倍）封闭后的酶标板↓每孔加入不同稀释倍数的人抗兔抗血清100μl，每样设3复孔↓置于湿盒中37℃保温1小时↓洗涤，方法同（2）5 加酶标二抗用抗体稀释液将酶标二抗稀释为5000倍。
加入一抗并洗涤过的酶标板↓每孔加入稀释后的酶标二抗100μl↓置于湿盒中37度0.5小时↓洗涤，方法同（2）6 显色：每孔加底物A和B各50μl，置于室温显色15分钟左右。
可见颜色明显的梯度变化。
7 终止：显色后，用2MH2SO4溶液50μl终止反应.终止后即测吸光值。
8 酶标仪检测吸收值。
双波长检测：630nm/450nm三溶液配制以下为准备的药品，学生自己配制底物显色液A（避光）：50mlNa2HPO4.12H2O(MW358.14) 18.4g过氧化脲0.03g需要加热促进溶解底物显色液B(避光)：50ml柠檬酸H2O 0.515gTMB母液1ml(TMB母液：10mgTMB+1mlDMSO)四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)辣跟过氧化物酶的底物，经酶作用后共产物显兰色。
抗心磷脂抗体(ACA)IgGELISA
抗心磷脂抗体(ACA) IgG ELISA磷酯有着广泛的生理意义。
循环抗磷脂抗体的存在可引起种种疾病，这些抗磷脂抗体的作用途径至今不清楚。
可能通过与内皮细胞膜上磷脂的交叉反应防止花生四烯酸释放，致使前列环素合成减少，从而促进血小板凝聚；另一种机理是防止血纤维蛋白溶解酶原激活剂的释放，降低血纤维蛋白溶酶原转变成血纤维蛋白溶酶，致使血纤维蛋白裂解减低。
ACA的存在常易发生静脉及动脉血栓形成。
ACA对血小板膜上的磷脂具有交叉反应，导致网状内皮系统摄血小板作用加强。
ACA阳性见于急性缺血性脑病，缺血性视神经病、脑血栓形成、偏头痛样头痛、肺源性高血压和习惯性流产。
抗磷脂抗体综合症的实验室诊断主要是抗磷脂抗体测定。
本试剂盒用于定性检测人血清中的抗心磷脂抗体ACA IgG浓度。
酶标板96wells 浓缩洗涤液(20X) 25ml吸收液12ml 酶联物12ml底物A 6ml 阴性对照 1 vial底物B 6ml 终止液6ml1.避免溶血、高血脂标本。
2.标本中若有悬浮物，应离心去除。
3.标本若不及时检测，请冻存于-20°C。
1.取出所需板条，其余立即密封放回2-8°C。
取出的板条应放入自封袋内（密封）平衡至室温再试验，以防水滴凝聚在冷板条上。
2.浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至500ml)。
未用完的放回2-8°C。
3.试剂盒应平衡至室温再试验。
1.样品孔内先加入100ul吸收液，再加入10ul血清标本。
2.加入100ul阴性对照至相应孔内。
(必要时加入100ul阳性血清至适当孔内)3.空白孔内加入100ul吸收液。
4.轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 45分钟。
5.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗5次。
6.每孔加入100ul 酶联物, 轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 30分钟。
7.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗5次。
抗心磷脂抗体的检测与临床意义
温浴30min
加入稀释后的酶结 合物100微升
避光温浴15min
加入终止液100 微升
酶标仪450nm 波长读取吸光
度值
绘制标准曲线， 报结果
1. 样本：血清或EDTA、肝素、柠檬酸盐抗凝的血浆 2. 酶结合物使用前需混匀，稀释后需在4小时内使用 3. 所有试剂使用前需在室温（18-25℃）平衡30min 4. 底物液对光敏感，需避光显色
APS是一种自身免疫性疾病，目前公认的诊断标准 是病人具有下列临床特点之一：全身各脏器动、静 脉血栓：复发性流产；胎儿死亡以及由于胎儿宫内 窘迫提前分娩致新生儿死亡；自身免疫性血小板减 少，上述临床表现同时伴有病人血清中出现抗心磷 脂抗体（aCL）和/或狼疮凝血因子（LA）。
在临床上由于抗心磷脂抗体的特异性更强，与上述 临床表现关系更密切，因而也称为抗心磷脂综合征 （anti-cardiolipin syndrome, ACS)。
半定量：按照以下公式将对照血清或患 者样本的吸光度值比上标准品2的吸光 度值，通过比值半定量估计结果。
对照或患者样本的吸光度值 比值＝
标准品2的吸光度值
欧蒙建议按照以下原则解释结果：
比值＜1.0 阴性 比值 ≥ 1.0 阳性
定量检测：分别以3份标准血清浓度和 其吸光度为横、纵坐标，以点对点的方 式绘制标准曲线，根据标准曲线求出患 者血清中的抗体浓度。
溶血性贫血
4.APS相关肾病
肾动脉血栓/狭窄、肾脏缺血坏死、 肾性高血压、深静脉血栓、微血管闭塞 性肾病和相关的终末期肾病统称为APS相 关肾病
4.其他类型的APS
网状青斑（80%） 心脏瓣膜病变（晚期） 神经精神症状
——偏头痛、舞蹈病、癫痫、 格林巴利综合症等
抗心磷脂抗体的检测与临床意义
4. 底物液对光敏感，需避光显色
半定量：按照以下公式将对照血清或患 者样本的吸光度值比上标准品2的吸光 度值，通过比值半定量估计结果。 比值＝ 对照或患者样本的吸光度值 标准品2的吸光度值
欧蒙建议按照以下原则解释结果：
比值＜1.0 阴性 比值 ≥ 1.0 阳性
定量检测：分别以3份标准血清浓度和 其吸光度为横、纵坐标，以点对点的方 式绘制标准曲线，根据标准曲线求出患 者血清中的抗体浓度。
时景伟
2014-04-02
1 什么是抗心磷脂抗体 2 抗心磷脂抗体的检测方法 3 抗心磷脂抗体的临床意义 （抗磷脂综合征）
第一分部
1.自身抗体是指针对自身组织，器官、细胞 及细胞成分的抗体； 2.人体有完整的自身免疫耐受机制的维持； 3. 自身免疫反应，产生自身抗体； 4.正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体。
欧蒙建议对结果 做如下解释： ＜12 阴性 ≥ 12 阳性
关于单位： 心磷脂抗体IgA/G/M RU/ml 心磷脂抗体IgM 心磷脂抗体IgG 心磷脂抗体IgA PL-IgM-U/ml PL-IgG-U/ml PL-IgA-U/ml
相对单位 百分位
经亲和层析从标准血清纯化得 到1微克/ml抗心磷脂IgA抗体 结合心磷脂的活性
*抗心磷脂抗体(aCL)
属于IgG/IgM型的自身抗体，通
常使用ELISA方法测定，其中IgG被
认为与血栓形成和习惯性流产有很
强的相关性。
抗心磷脂是 pangborn 1941年从牛 的心肌中分离出来的一种具有抗原性的 磷脂，并加以命名
抗心磷脂抗体的免疫学分型有IgG和 IgA和IgM三类，其发生率男女无明显差 异。
2.产科表现
胎盘血管的血栓形成导致胎盘功能不全， 可引起宫内发育迟滞、反复流产。其发生率 可达10%-25%，一般发生在妊娠10周以后。 在第34周或之前还可发生先兆子痫或妊高症 以及严重的胎盘功能不足所致的早产。
抗心磷脂抗体标准范围
抗心磷脂抗体标准范围抗心磷脂抗体（aPL）是一类自身抗体，它们会与心磷脂结合并导致血液凝固异常。
抗心磷脂抗体可以导致血栓形成，从而引发静脉血栓栓塞症、肺栓塞、中风、心肌梗死等疾病。
因此，了解抗心磷脂抗体的标准范围对于诊断和治疗相关疾病至关重要。
抗心磷脂抗体的标准范围是指在正常人群中的分布范围，通常是通过对大规模人群进行检测和统计得出。
目前，临床上常用的抗心磷脂抗体包括IgG、IgM和IgA三种类型。
在正常人群中，这些抗体的水平通常都很低，但在某些疾病状态下，它们的水平会显著升高。
根据临床研究和实践经验，抗心磷脂抗体的标准范围通常被定义为：1. IgG类抗心磷脂抗体的标准范围，阴性或者低水平，通常是小于等于GPL单位/ml。
2. IgM类抗心磷脂抗体的标准范围，阴性或者低水平，通常是小于等于MPL单位/ml。
3. IgA类抗心磷脂抗体的标准范围，阴性或者低水平，通常是小于等于APL单位/ml。
需要指出的是，不同的实验室可能会有略微不同的标准范围，因此在进行检测时应该参考具体实验室提供的参考范围。
此外，抗心磷脂抗体的检测结果还应该结合患者的临床症状、病史等信息进行综合分析，以确定是否存在相关疾病。
除了标准范围外，抗心磷脂抗体的阳性结果还需要考虑其临床意义。
一般来说，如果患者在两次检测中至少间隔12周，且IgG或IgM类抗心磷脂抗体阳性，同时伴有血栓事件的病史，可以考虑为抗磷脂抗体综合征（APS）。
而在无血栓事件的情况下，需要结合其他临床表现进行综合判断。
总之，了解抗心磷脂抗体的标准范围对于诊断和治疗相关疾病非常重要。
在进行相关检测时，应该注意参考具体实验室提供的标准范围，并结合患者的临床情况进行综合分析，以确保准确的诊断和治疗。
抗磷脂抗体总结
抗磷脂抗体总结抗磷脂抗体（Antiphospholipid Antibodies, aPL）是一组能与多种含有磷脂结构的抗原物质发生免疫反应的抗体。
自20世纪50年代被发现以来，抗磷脂抗体在医学领域引起了广泛关注。
这类抗体与一系列临床表现相关，统称为抗磷脂综合征（Antiphospholipid Syndrome, APS），这是一种以血栓形成、血小板减少、习惯性自发性流产等为特点的自身免疫性疾病。
本文将对抗磷脂抗体的基本概念、分类、检测方法、临床意义及研究进展进行详细总结。
一、基本概念与分类（一）基本概念抗磷脂抗体是指能与磷脂成分及其结合蛋白发生反应的免疫球蛋白。
磷脂是构成细胞膜的主要成分之一，具有维持细胞结构和功能的重要作用。
当机体产生针对磷脂的抗体时，可能导致细胞膜损伤，进而引发一系列病理生理变化。
（二）分类根据与磷脂结合的特异性，抗磷脂抗体可分为两大类：一类是针对心磷脂（Cardiolipin, CL）和其他带负电荷磷脂的抗体，称为抗心磷脂抗体（Anticardiolipin Antibodies, aCL）；另一类是针对磷脂结合蛋白的抗体，如抗β2-糖蛋白I抗体（Anti-β2-Glycoprotein I Antibodies, anti-β2GPI）。
其中，抗心磷脂抗体是最早发现和研究最为深入的抗磷脂抗体。
二、检测方法（一）实验室检测1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：这是目前最常用的抗磷脂抗体检测方法，具有灵敏度高、特异性好的优点。
通过酶标记的抗人免疫球蛋白与样本中的抗磷脂抗体结合，形成抗原-抗体-酶复合物，进而通过底物显色反应判断抗体水平。
2. 凝集试验：利用磷脂抗原与抗磷脂抗体结合后形成的复合物能激活补体，导致红细胞凝集的原理进行检测。
但此方法操作繁琐，且易受补体活性影响，现已较少使用。
3. 固相放射免疫试验（SPRIA）：利用放射性同位素标记的抗人免疫球蛋白与样本中的抗磷脂抗体结合，通过测定放射性强度判断抗体水平。
抗心磷脂抗体指标,这些知识你都明白吗？
抗心磷脂抗体指标，这些知识你都明白吗？
人的体内有一种自身存在的抗体名叫抗心磷脂抗体，英文名称叫ACA，情况下，这种抗体的检测结果是阴性的，说明这种抗体的含量属于正常范围内，那么人体的正常抗心磷脂抗体含量是多少呢？
★一、抗心磷脂抗体正常值
正常人血清中ACA测定结果一般为阴性。
即①ACA结合率<20%(固相RIA法)；②待测血清与阴性对照吸光度比值
(P/N)<2.1(ELISA法)。
★二、实验室指标
（1）IgG-APL（中/高度水平）
(2)IgM－APL
（3）LA阳性
★三、临床意义
(1)ACL主要存在于各种自身免疫病(如SLE、RA、干燥综合征、皮肌炎、硬皮病、白塞综合征等)患者中，在某些恶性肿瘤、药物诱发性和感染性疾病中也多见，如梅毒、麻风、AIDS、疟疾感染者及淋巴细胞增生障碍性疾病。
(2)在抗磷脂抗体综合征、复发性动静脉血栓形成、反复自然流产、血小板减少症及中枢神经系统病变者中，ACL均有较高
的阳性检出率，且高滴度的ACL，可作为预测流产发生及血栓形成的一种较为敏感的指标。
(3)脑血栓患者以IgG型ACL阳性率最高，且与临床密切相关；约70%未经治疗的ACL，阳性孕妇可发生自然流产和宫内死胎，尤其是IgM型ACL可作为自然流(死)产的前瞻性指标；血小板减少症则以IgG型ACL多见，且与血小板减少程度呈正相关。
★四、注意事项
检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
检查时要求：配合医生的检查，SLE患者神经病可能与ACA 对胶质细胞的抑制引起的血脑屏障破坏及ACA对神经细胞和神
纤维的作用有关。
抗磷脂抗体谱4项
抗磷脂抗体谱4项
抗磷脂抗体谱通常包括以下四项指标：
1. 抗心磷脂抗体（anticardiolipin antibody, ACL）：ACL抗体
是一种自身免疫抗体，在系统性红斑狼疮（SLE）和抗磷脂抗
体综合征等自身免疫疾病中常出现。
可以测定IgG、IgM和
IgA类型的ACL抗体。
2. 抗β2糖蛋白I抗体（anti-beta2 glycoprotein I antibody,
β2GPI）：β2GPI是一种人体内的磷脂结合蛋白，抗β2GPI抗
体与血中的β2GPI结合，可能导致血液凝固异常和血栓形成。
3. lupus anticoagulant（LA）：LA是一种可以引起体内自凝的
抗体，与磷脂结合后抑制凝血酶的活性，容易导致凝血异常和血栓形成。
4. 抗磷脂抗体（antiphospholipid antibody, aPL）：抗磷脂抗体
包括上述的ACL和β2GPI抗体，以及其他类型的抗体，如抗
磷脂抗体预防蛋白（anticardiolipin binding protein antibody, aCLBP）等。
抗磷脂抗体综合征（APS）患者中，抗磷脂抗体
的存在与血栓形成、反复流产等症状有关。
抗磷脂综合症实验室诊断标准
抗磷脂综合症实验室诊断标准抗磷脂综合症（Antiphospholipid syndrome，APS）是一种自身免疫性疾病，其特征是体内存在抗磷脂抗体（antiphospholipid antibodies，aPL）并伴有血栓形成或妊娠并发症。
抗磷脂抗体是指抗体反应性与磷脂成分或与磷脂结合的蛋白质成分相关联的自身抗体。
本文将详细介绍基于实验室指标的抗磷脂综合症诊断标准。
诊断抗磷脂综合症一般需要满足以下条件：1.至少在两次检查间隔三个月内阳性的抗磷脂抗体（IgG或IgM 型）：包括抗心磷脂抗体（anticardiolipin antibodies，aCL）和/或抗β2糖蛋白I抗体（anti-β2-glycoprotein I antibodies,anti-β2-GPI）。
2.血浆中抗磷脂抗体转阴的时间间隔需大于至少6个月。
3.阳性的实验室指标必须与下列临床特征之一相关联：-血栓形成：包括静脉和/或动脉的血栓形成，如深静脉血栓形成、肺栓塞、脑血栓栓塞等。
-子痫前症：指孕妇晚期出现高血压、水肿、肝功能异常和/或异常凝血等症状。
-胎儿死亡：指妊娠超过10周的胎儿死亡，未能注射维生素K引起的原因所致的胎儿死亡，或连续失去两个或更多的妊娠。
需要注意的是，本诊断标准中关于抗磷脂抗体的测定应基于国际公认的标准方法，如酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）或固相蛋白A测定法（solid-phase immunoassay）。
测定时需要至少进行两次检测，并确保具备临床意义。
除了上述核心诊断标准，一些实验室检测也可用于协助APS的诊断和鉴别诊断。
这些包括以下几个方面：1.微血栓形成检测：-血小板计数和形态评估，以检测血小板减少和/或异常。
-血浆凝血酶活性测定（thrombin generation assay），以检测凝血功能异常。
2.凝血功能检测：-活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，aPTT），以检测凝血酶原激活部分的异常。
ELISA检测方法操作要点
ELISA检测方法操作要点ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫化学检测方法，用于检测体液或体内细胞中的特定抗原或抗体。
ELISA技术的成熟和广泛应用使得它成为临床、生物学和分子生物学研究中常用的检测方法之一、以下是ELISA检测方法操作要点的详细说明：1.样品准备：-合理选择样品：根据实验目的，选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液、细胞提取物等。
-样品储存：样品应储存在适当的温度下，并避免反复冻融，以防止抗原或抗体的降解。
2.酶标板涂层：-选择合适的酶标板：常用的有96孔和384孔酶标板，根据实验需要进行选择。
-涂层溶液制备：根据实验方案中的要求，配制相应浓度的涂层溶液，如抗体或抗原。
-涂层操作：将涂层溶液加入酶标板孔中，静置一段时间，使其充分吸附在孔壁上，再进行废液排空和孔洗涤。
3.酶标抗体制备：-选择合适的酶标抗体：根据实验目的和需要，选择适当的酶标抗体。
-酶标抗体质量控制：酶标抗体应经过质量控制，并充分稀释到合适的浓度。
4.样品孔加样：-样品孔设置：根据实验设计，将需要检测的样品和相应质控品按照实验要求加到酶标板中。
-操作要点：如实验要求，控制加样量、加样顺序和均匀性，避免交叉污染。
5.洗涤步骤：-洗涤缓冲液：选择适当的洗涤缓冲液，用于洗涤酶标板孔，去除非特异性结合物质。
-洗涤方法：进行洗涤时，操作要轻柔而均匀，避免产生气泡。
6.标记抗体操作：-选择合适的标记抗体：标记抗体一般选择与目标抗原或抗体不同的免疫球蛋白。
-标记抗体质量控制：标记抗体应经过质量控制，并充分稀释到合适的浓度。
7.显色反应：-底物选择：根据实验方案，选择合适的底物，以产生特定的颜色反应。
-反应时间：根据实验方案，控制好反应时间，过长过短都可能对结果造成影响。
8.反应终止：-反应终止剂选择：根据实验要求，选择合适的反应终止剂，以停止酶反应。
-反应终止时间：反应终止剂一般在反应完成后加入，在规定的时间内进行终止。
抗心磷脂抗体
抗心磷脂抗体抗心磷脂是pangborn 1941 年从牛的心肌中分离出来的一种含有抗原性的磷脂，并加以命名，其在哺乳动物心肌中含量最高，每个心磷脂分子包含4 个不饱和的脂肪酸，极易氧化。
抗磷脂综合征(anti-phospholipid syndrome,APS)是指由抗磷脂抗体(APL 抗体)引发的一组临床征象的总称，重要体现为血栓形成，习惯性流产，血小板减少等。
在同一患者可仅有上述一种体现，也可同时有多个体现。
APS 是一种本身免疫性疾病，现在公认的诊疗原则是病人含有下列临床特点之一:全身各脏器动、静脉血栓:复发性流产;胎儿死亡以及由于胎儿宫内窘迫提前分娩致新生儿死亡;本身免疫性血小板减少，上述临床体现同时伴有病人血清中出现 APL 涉及抗心磷脂抗体(ACA)和狼疮凝血因子(LA)。
在临床上由于抗心磷脂抗体的特异性更强，与上述临床体现关系更亲密，因而也称为抗心磷脂综合征(anti-cardiolipin syndrome,ACS)。
APL 是一组对机体带磷脂负电荷的蛋白复合物产生的特异性本身抗体，机体内某些血浆蛋白如β2 糖蛋白(β2-GPI)的分子上带有 ACA 的抗原决定簇，ACA 与β2-GPI 结合后能识别带负电荷的磷脂复合物，并使β2-GPI 的表面构造发生变化而出现被 ACA 识别的表位，β2-GPI 含有克制凝血酶原、克制二磷酸腺苷(ADP)等引发的血小板聚集及其表面生成凝血酶、并阻滞磷脂依赖性凝血反映，当 ACA 与其反映后易形成血栓。
因此，当 ACL 结合到细胞上通过蛋白上的结合磷脂诱发促凝活性，磷脂在 APS 栓塞的发生机理中起到系统性红斑狼疮(SLE)中出现这种综合征时称为继发性抗磷脂综合征，而在非 SLE 患者中出现者称为原发性磷脂综合征。
本综合征涉及血栓栓塞(特别累及中枢神经系统血管),血小板减少和伴有自体免疫性抗磷脂膜构造抗体的流产.体外凝血指标检查成果延长.其作用机制可能涉及抗体诱导的血小板被激活和过敏产生富含磷脂酰丝氨酸的促凝物质表面和血小板减少症.ACA 是抗磷脂抗体(antiphospholipikantibodies，APA)的成分之一。
抗核抗体和抗心磷脂抗体在梅毒患者的检测及临床意义
抗核抗体和抗心磷脂抗体在梅毒患者的检测及临床意义周建伟;孔翠;蔡淑静;张昭才;杨永军;申爱华【摘要】目的探讨梅毒患者血清抗核抗体(ANA)和抗心磷脂抗体(ACA)检测的临床意义.方法以血清梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)呈阳性的梅毒患者为研究对象,健康体检者为对照.采用间接免疫荧光法检测血清中的ANA,用ELISA检测血清中的ACA.患者血清同时做甲苯胺红不加热血清试验(TRUST).结果 200例梅毒患者样本中,有45例ANA呈阳性,阳性率为22.5％;有54例ACA-IgM阳性(27.0％)和25例ACA-IgG阳性(12.5％).与健康对照相比,差异有统计学意义(P＜0.01).ANA阳性率与TRUST滴度的相关系数仅为0.393;ACA-IgM阳性率与TRUST滴度的相关系数为0.762;ACA-IgG阳性率与TRUST滴度的相关系数为0.417.结论梅毒患者ANA阳性率较高,ACA-IgM的阳性率与TRUST滴度有较好的相关性;建议临床将ANA和ACA作为梅毒患者的实验室常规检测指标.【期刊名称】《中国中西医结合皮肤性病学杂志》【年(卷),期】2018(017)004【总页数】3页(P317-319)【关键词】抗核抗体;抗心磷脂抗体;甲苯胺红不加热血清试验【作者】周建伟;孔翠;蔡淑静;张昭才;杨永军;申爱华【作者单位】济宁医学院附属医院,山东济宁272000;济宁医学院附属医院,山东济宁272000;济宁医学院附属医院,山东济宁272000;济宁医学院附属医院,山东济宁272000;济宁市皮肤病防治院,山东济宁272000;济宁医学院附属医院,山东济宁272000【正文语种】中文【中图分类】R759.1;R446.6梅毒是由苍白螺旋体（TP）感染所致的一种慢性性传播疾病，可通过血液、胎盘及性传播，并可侵犯全身多个器官，临床表现复杂多样。
近年来，梅毒感染人数在我国呈逐年上升趋势。
TP对人体的致病机制尚不完全清楚。
乙肝患者血清抗心磷脂抗体的检测
乙肝患者血清抗心磷脂抗体的检测
庞伟鸿;刘红杏;阳军
【期刊名称】《河北医学》
【年(卷),期】2002(008)011
【摘要】目的:了解抗心磷脂抗体(ACA)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的检出率.方法:采用ELISA法测定83例HBV患者和66例正常对照者血清的ACA.结果:HBV 患者ACA阳性率为16.9%,与正常对照组(4.5%)比较有显著性升高(P＜0.01);在HBV患者中,肝功能异常者ACA阳性率明显高于肝功能正常者(P＜0.01).结论:ACA 可常见于乙型肝炎患者,并可能与乙型肝炎的病情有一定关系.
【总页数】3页(P991-993)
【作者】庞伟鸿;刘红杏;阳军
【作者单位】广东医学院附属湛江中心医院检验科,广东,湛江,524037;广东医学院附属湛江中心医院检验科,广东,湛江,524037;广东医学院附属湛江中心医院检验科,广东,湛江,524037
【正文语种】中文
【中图分类】R512.6+2
【相关文献】
1.乙肝患者血清前S1抗原和乙肝血清标志物联合检测的意义 [J], 姚春红;邓建平
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3.乙肝患者血清前S1抗原与HBV血清标志物的检测结果分析 [J], 朱梅英;吴凌云;
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临床检验杂志 2010年 1月第 28卷第 1期 Ch in J C lin L ab Sc,i Jan. 2010, V o .l 28, N o. 1
文章编号: 1001-764X ( 2010) 01-016-03
#临床检验技术研究 #
EL ISA 法检测血清抗心磷脂抗体
金燕萍 1, 陈因1, 于雪 莹1, 鄢盛恺 1, 侯林浦 2, 李欣 2, 吴尔若 2, 马旭 2 ( 1. 卫生部中 日友好医院检 验科, 北京 100029; 2. 国家人口计生委科学技术研究所, 北京 100081)
度心磷脂包被效果进行比较, 结果用 100、50、12. 5、 6. 25和 3. 125 Lg /m l心磷脂包被时, P /N 值分别为 6. 988、6. 474、5. 891、4. 762和 3. 733。在以后的研 究中均选用 50 Lg /m l浓度包被。同法选用 1 Lg /m l B2-G P I进行包被。包被体积 50 Ll与 100 L l结果无 区别, 均选用 50 Ll。 2. 3 包被条件的比较 一种方法是在氮气条件下 快速蒸发约 20 m in, 另一种在 4 e 过夜, 两者结果无 显著差异, 因此选用 4 e 过夜进行包被。分别用 10 g /L BSA、3 g /L BSA-H epes、10% 小牛血清 ( 灭活 )、 10% 小牛血清 ( 新鲜 ) 、10 g /L PEG-PBS等 5种封闭 液封闭, 结果见表 1。各种封闭液封 闭效果无显著 差异 ( P > 0. 05) , 但以 10 g /L PEG-PBS混合液效果 最佳且价格便宜。
敏感、特异、简便快速、重复性佳的特点, 可 用于血清 ACA 水平的常规检测。
关键词: 抗心磷脂抗体; 酶联免疫 吸附试验
中图分类号: R 446. 6
文献标识码: A
S tudy on an EL ISA for detecting an ticard iolip in an tibod ies in serum J IN Yan-p ing1, CH EN Y in1, YU X ue-y ing1, YAN Sheng-kai1, H OU Lin-pu2, LI X in2, W U E r-ruo2, M A X u2 ( 1. D epartm ent of Laboratory, China-Japan F riendship H o sp ital, B eij ing 100029; 2. N ational R esearch Institu te of Fam ily P lanning, Beij ing 100081, Ch ina) Abstrac t: Ob jec tive T o ana ly ze influenc ing facto rs on an EL ISA for detecting an ticard io lipin antibod ies ( ACA ) in serum and to improve test procedures. M ethods ACA in 559 serum sam ples w as detec ted by indirect EL ISA, in wh ich the standard certificated by Con federation of Euro immun also serv ed as cut-o ff va lue. Re su lt T he techn ica l com parison and im provem ent o f m ethod fo r detec ting ACA w ere accomp lished w ith the specificity o f 96. 7% ( 503 /522) , sensitiv ity o f 89. 2% ( 33 /37) and c lin ica l co incidence of 96. 2% ( 538 /559) . Conclusions T he optim ized m ethod has advantages of h igh sens itiv ity and spec ificity, good repeatability, rap idity, and conv en ience. The assay can be used for routine detection o f ACA in se rum. K ey word s: anticardio lip in an tibody; EL ISA
1 材料和方法
1. 1 样本来源 血清样本来自本院及北京大学第 一医院检验科, 其中健 康成人 431名, 梅毒患者 89 名, SLE患者 39名, 均保存于 - 70 e 待测。经欧蒙 公司 EL ISA 法检测 ACA 试剂盒测定, ACA 阳性 37 份, ACA 阴性 522份。 1. 2 试剂 包被用抗原 Ñ 为心磷脂, Ò 为 B2-糖蛋 白 Ñ ( beta 2 g lycoprote in I, B2-GP I)。心磷脂系从 牛心中提取的心磷脂乙醇溶液, 浓度为 4. 7 mg /m ,l
2 实验与结果
2. 1 包被载体的比较 本研究对 Corn ing Costar高 亲和力板条、C-射线处理国产 8孔板条及国产 12孔 板进行了比较, 将阳性及阴性样本用以上不同包被 载体进行检测, 其 P /N 值显 示不同厂家、批号的包 被载体对包被抗原的吸附力和均一性均有差别, 其 中以 C orn ing Costar板吸附力最佳。 2. 2 包被抗原浓度与体积的选择 以 4份阳性血 清与 4份阴性血清平均 A 值的比值 ( P /N ) 对不同浓
注: * 含 10 mm ol /L H epes, 150 mmo l/ L N aC ,l 3 g /L BSA, pH 7. 4。
10% 小牛血清 (新鲜 ) 0. 649 0. 226 2. 872
10 g /L PEG-PBS
0. 634 0. 210 3. 019
2. 4 样 本稀释 液的比 较 本 研究 就含 不同浓 度 BSA 的稀释液对检测结果的影响进行比较, 结果含 有 20 g /L、100 g /L BSA的 PBS稀释液的检测结果基 本一致, 并且加入显色剂后对实验结果无显著影响。 但未含 BSA的稀释液则检测结果不佳。 2. 5 样本稀释度与反应温度的选择 血清 1B50和 1B100 稀释 P /N 值分别为 3. 737 和 3. 511, 二者无显著区 别。稀释度 > 1B200, P /N值显著降低 ( 2. 963~ 2. 646)。 反应温度 25 e 优于 37 e 水浴。 2. 6 B2-GP I对检测结果的影响 用欧蒙公司 A CA 检测试剂检测结果 阳性的血清 25 份, 阴性血清 17 份进行比较, 发现单用心磷脂抗原包被时, 敏感性为 68. 0% ~ 76. 0% , 特异性为 82. 4% ; 将 B2-GP I与心 磷脂抗原混合后包被者, 敏感性 84. 0% , 特 异性仅 76. 5% ; 而先包被心磷脂抗原, 次日再包被 B2-GP I时, 敏感性最高, 达 92. 0% , 特异性也最高, 为 94. 1% 。 2. 7 稳定性试验 包被板及试剂于 37 e 分别存放 4~ 8 d后, 与 4 e 存放的试剂进行比较。放 37 e 后 A 值略有下降, 但与 4 e 保存者无统计学差异。 2. 8 精密度 4份血清样本同一批次重复检测 12 次, 批内变异系数 ( CV ) 为 4. 0% ~ 9. 5% ; 以 3份血 清样本重复检测 12次, 批间 CV 为 9. 9% ~ 15. 4% 。
作者简介: 金燕萍, 1962年生, 女, 主管技师, 本科, 从事临床病毒与血清自身抗体检测。
临床检验杂志 2010年 1月第 28卷第 1期 Chin J C lin L ab Sc ,i Jan. 2010, V o .l 28, N o. 1
# 17#
涤后加入底物系统显色, 最后加入终止液 200 L,l 于 酶联仪 450 nm 波长测 A 值。以欧蒙公司 ACA 试剂 盒标示的临界值判定结果是否阳性。 1. 5 统计学方法 采用 SPSS 11. 0 统计软件对检 测数据进行统计学分析。
摘要: 目的 分析 EL ISA 检测血清抗心磷脂抗体 ( A CA )的方法学影响因素, 并 对实验条件进行优化。方法 用间接 EL ISA 检
测 559份血清 ACA 水平 , 并以欧蒙公司标准品标优 化, 本 试验特 异性为
96. 4% ( 503 /522), 敏感性为 89. 2% ( 33 /37), 临床诊断符合率 为 96. 2% ( 538 /559)。结论 优化后的 EL ISA 法检测 ACA 具有
表 1 5种不同封闭液效果的比较 ( A 值均值 )
标本
ACA 阳性血清 ( n = 11) ACA 阴性血清 ( n = 12)
P /N
10 g /L BSA
0. 908 0. 316 2. 873
3 g /L BSA-H epes*
0. 855 0. 309 2. 767
10% 小牛血清 (灭活 ) 0. 630 0. 212 2. 972
抗磷脂抗体综合征 ( an tiphospho lipid syndrom e, APS)为非器官特异性的自身免疫性疾病, 临床表现 包括反复血管栓塞、流产或胎死宫内、血小板减少、 溶血性贫血及肢端顽固性溃疡等, 这些临床表现可 单一出现或并存。由于 APS患者体内具有中、高滴 度抗心磷脂抗体 ( anticardio lip in an tibody, ACA ) 并可 长期存在 [ 1] , 因此 A CA 为 诊断 APS 的 重要 依据。 EL ISA法检测 ACA 具有简便、快速、可定量检测抗 体类型及易于标准化等优点, 但影响因素较多, 不同 实验室测得的结果差异较大 [ 2-3] 。本研究对 EL ISA 法 检测 ACA的影响因素进行了比较研究, 现报告如下。