维生素b12测定

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择

维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数

E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL

容量瓶中，加水至刻度，摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。

2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。

2.3 线性关系

标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。

表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略）

以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。见图1。

2.4 精密度试验

精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。RSD数值较小，说明该方法精密度好。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。

表2 供试品溶液冷藏温度下24 h内测定值（略）

2.6 重复性试验

精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项下含

量测定法测定，计算得维生素B12的平均含量为22.6 μg/mL（批号为070303），RSD为1.08%（n=5），说明该方法有较好的重复性。

2.7 含量测定

以水为空白，取2.2.2项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。结果见表3。

表3 维生素B12片剂含量测定结果（略）

维生素B12片剂的标示量为25.0 μg，由以上测定结果可知，山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%～110.0%之内。RSD较小，说明该厂生

产的药品含量稳定。

3 讨论

3.1. 维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中。在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。维生素B12能促进红血球的形

成和再生，防止贫血；促进儿童发育，增进食欲；增强体力；维持神经系统的正常功能；促使注意力集中，增强记忆力与平衡感。能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。维生素B12为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须［４］。主要用于治疗恶性贫血，

与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议［５］。口服维生素B12仅用

于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏［６］。

3.2 本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素B12的含量，将对照品按不同比例用水稀释，在361 nm波长处进行紫外可见吸收测定，得到标准曲线。将维生素B12

片剂研磨，精密称定并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。利用该方法得到的样品溶液，按中国药典规定波长361 nm测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据，结果表明，经紫外可见吸收测定，所测片剂含量均在标示范围之内。

3.3 本实验需避光操作。维生素B12片剂为糖衣片，呈水溶性，除去糖衣时要刮净，研细，减小干扰，使溶解度增高。

3.4 因紫外可见分光光度法所需样品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到

供试品溶液。

3.5 本方法简便、准确、灵敏度高，可作为测定维生素B12片剂含量的方法。

【参考文献】

［１］李发美.分析化学［Ｍ］.第5版.北京：人民卫生出版社，2003，6：210.

［２］中国药典2005年版［Ｓ］.二部.北京：化学工业出版社，2005：668～669.

［３］李发美.分析化学实验指导［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2004：98～99.

［４］杨宝峰，苏定冯.药理学［Ｍ］.第6版.北京：人民卫生出版社，2003，7：303～304.

［５］徐叔云.中华临床药物学［Ｍ］.下册.人民卫生出版社，2003，5：1141.

［６］陆晓和.实用临床用药监护［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2003，10：384.

GB 5413.14-2010 婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定

本标准代替GB/T 5413.14-1997《婴幼儿食品和乳粉维生素B12的测定》。

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适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。利用莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii）对维生素B12 的特异性和灵敏性，定量测定出试样中维生素B12 的含量。在测定用培养基中供给除维生素B12 以外的所有营养成分，这样微生物生长产生的透光率就会同标准曲线工作液及未知待测溶液中维生素B12 的含量相对应。以不同浓度标准溶液的透光率相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，根据标准曲线即可计算出试样中维生素B12的含量。