维生素b12测定
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素b12ph值测定实验报告
维生素B12 pH值测定实验报告摘要维生素B12是一种重要的水溶性维生素，对人体的健康发挥着重要的作用。
本实验旨在通过测定不同pH下维生素B12的吸收光谱，探究其在不同环境条件下的稳定性和溶解度。
实验结果表明，维生素B12在酸性环境下溶解度较低，而在中性环境下溶解度较高。
同时，维生素B12在酸性环境下也更容易分解，失去活性。
因此，为了充分利用维生素B12的营养价值，应注意维生素B12的储存和烹饪条件。
1. 引言维生素B12，也被称为腺苷胺钴胺素，是一种含有金属钴的复合物，是人体必需的一种维生素。
维生素B12在人体内参与DNA合成、红细胞形成和神经系统的正常运作等重要生理过程。
由于人体无法自主合成维生素B12，因此需要通过食物摄取来满足身体的需求。
然而，维生素B12容易受到环境因素的影响，如pH值的改变会影响其溶解度和稳定性。
2. 实验材料和方法2.1 实验材料•维生素B12标准品•pH调节缓冲溶液（酸性、中性和碱性）•高纯度水•紫外可见分光光度计•量筒和移液管等实验仪器2.2 实验方法1.准备不同pH值的缓冲溶液，并调节至所需的pH值。
2.取不同pH值的缓冲溶液各10 mL，加入维生素B12标准品1 mL，制备维生素B12的不同浓度溶液。
3.使用紫外可见分光光度计，分别在不同波长下测量不同pH值下的维生素B12溶液的吸光度，并记录数据。
4.根据标准曲线，计算不同pH值下维生素B12的浓度。
5.分析不同pH值下的维生素B12溶解度和稳定性。
3. 实验结果3.1 不同pH值下的维生素B12溶解度根据实验数据计算得出不同pH值下的维生素B12浓度，如下表所示：pH值维生素B12浓度 (mg/L)2 5.214 11.857 26.4510 13.36从表中可以看出，在pH值为2的酸性环境下，维生素B12的溶解度较低，为5.21 mg/L。
而在pH值为7的中性环境下，维生素B12的溶解度较高，为26.45 mg/L。
维生素b12测定
2 方法与结果2.1 测定波长的选择维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。
维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。
本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。
2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。
2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。
2.3 线性关系标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。
在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。
表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略）以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。
结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。
见图1。
2.4 精密度试验精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。
RSD数值较小，说明该方法精密度好。
2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。
紫外可见分光光度计维生素B12含量测定
3、 测定未知液：取未知液5.00mL 置于50.00mL 容量瓶 中，用水稀释至刻度；用1cm 石英比色皿，测定 316nm处吸光度A，以空白为参比。
4、 计算未知液的含量（mg·mL-1）。
4、检测器： 硒光电池 光电二极管 光电倍增管
四、实验仪器与试剂
1、仪器： UV-2501型紫外-可见分光光度计（Simazu
公司）；1cm 石英比色皿
2、试剂： 维生素B12注射液：100mg/ml
五、试剂配制与测定
1、 配制标准系列：取维生素B12标准溶液100mg/mL 0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL分别置 于50.00mL 容量瓶中，用水稀释至刻度；
八、思考题：
为什么同浓度溶液，每次测量后读数会发生 细微变化？
紫外分光光度法与可见分光光度法有些什么 区别？
(可防止强光照射引起吸收池中一 些物质的分解)
单色器： 是分光光度计的关键部件，主要任务是将光源发来的混
合光分解为单色光，并提供所需波长的光。
3、吸收池 (Cell ， Container) ：
用于盛放样品。可用石英或玻璃两 种材料制作，前者适于紫外区和可见光 区；后者只适于可见光区。有些透明有 机玻璃亦可用作吸收池。
二实验原理朗伯特定律朗伯特定律当入射光的波长溶液的浓度及温度一当入射光的波长溶液的浓度及温度一定时定时溶液的吸光度与溶液的吸光度与液层的厚度液层的厚度成正比
紫外可见分光光度计维生素B12含 量测定
二、实验原理
比耳定律 当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度
维生素b12ph值测定实验报告(一)
维生素b12ph值测定实验报告(一)维生素B12 pH值测定实验报告实验目的通过实验测定维生素B12在不同PH值下的稳定性，掌握药物稳定性测定方法。
实验原理通过调节不同PH值下的缓冲液，将维生素B12加入缓冲液中，使其处于不同PH值下，模拟不同药品储存环境下的情况，观察维生素B12在不同PH值下的稳定性。
并通过紫外分光光度计检测不同PH值下维生素B12的吸光度值，从而推断其稳定性。
实验步骤1.用PH分别为4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的缓冲液，制备5组不同PH值的实验液。
2.将每组实验液中加入相同量（例如100微升）的维生素B12，充分搅拌。
3.放置各组实验液在25摄氏度下不同时间，比较各组实验液中维生素B12的稳定性。
4.以PH为纵坐标,Y轴为吸光度值，绘制PH值与吸光度值的曲线图。
实验结果在PH4.0的实验液中，维生素B12的吸光度值随时间逐渐降低，表明维生素B12在酸性环境下不稳定，容易降解。
在PH5.0和PH6.0的实验液中，维生素B12的吸光度值变化较小，相对稳定。
在PH7.0和PH8.0的实验液中，维生素B12的吸光度值略有下降，但变化幅度较小，相对稳定。
实验结论维生素B12在中性和微酸性环境下稳定性较好，在强酸性环境下容易降解。
因此，在储存和制备维生素B12的过程中，应避免强酸性环境的影响，以确保药品的质量，稳定性和药效。
总结本次实验通过测定不同PH值下维生素B12的稳定性，掌握了药物稳定性测定方法。
在实际药品储存和制备时，要注意药品的PH值，以确保药品的稳定性和药效。
实验注意事项1.在制备实验液时，要保证各缓冲液浓度相同，尽量精确称量药品。
2.实验过程中要避免操作不当导致实验结果不准确。
3.实验结束后，要及时清洗实验器材及归还实验室原料。
4.实验过程中要注意安全，佩戴实验安全所需的安全装备。
参考文献1.张鹏. 药物稳定性测定方法探讨[J]. 食品卫生与家庭科技,2017 (20): 59-60.2.李显红. 基于维生素B12的食品中维生素检测技术的研究[J].食品工艺, 2020 (23): 164-166.致谢感谢实验室工作人员的指导和帮助，感谢实验中的同学们共同完成了实验。
维生素b12测定标准编码
维生素b12测定标准编码维生素B12测定标准编码是指用于测定维生素B12水平的标准化方法和编码体系。
维生素B12是一种重要的水溶性维生素，对于维持神经系统的正常功能、红细胞的形成以及DNA合成都至关重要。
因此，准确测定维生素B12水平对于诊断和治疗相关疾病具有重要意义。
在临床实践中，维生素B12的测定通常采用血清或血浆样本，并且常用的方法是酶联免疫吸附法（ELISA）或放射免疫测定法（RIA）。
这些方法通过测定样本中维生素B12与特定抗体结合的程度来确定其浓度。
为了保证测定结果的准确性和可比性，国际上制定了一系列维生素B12测定的标准编码。
其中最常用的是国际单位（IU）和皮克摩尔（pmol/L）两种编码方式。
国际单位（IU）是一种常用的生物活性单位，用于测定生物活性物质的含量。
在维生素B12的测定中，1 IU表示1微克维生素B12的生物活性。
这种编码方式在临床实践中广泛应用，可以用于评估维生素B12的摄入量和生物利用率。
皮克摩尔（pmol/L）是一种浓度单位，用于表示物质在液体中的浓度。
在维生素B12的测定中，1 pmol/L表示每升液体中维生素B12的浓度。
这种编码方式在科研领域中常用，可以用于比较不同实验室或研究之间的维生素B12浓度。
除了编码方式，维生素B12测定还需要参考范围来判断测定结果的正常与否。
参考范围是指在正常人群中维生素B12浓度的范围，通常以百分位数表示。
不同实验室或研究可能会有略微不同的参考范围，但一般来说，正常成年人的维生素B12浓度范围在200-900 pmol/L之间。
综上所述，维生素B12测定标准编码包括国际单位（IU）和皮克摩尔（pmol/L）两种编码方式。
通过测定维生素B12的浓度，结合参考范围，可以评估维生素B12的水平，对于诊断和治疗相关疾病具有重要意义。
维生素b12ph值测定实验报告
维生素b12ph值测定实验报告实验目的：通过测定维生素B12样品的pH值，了解维生素B12的化学性质及其在生物体内的作用。
实验原理：维生素B12是一种协同作用的辅酶，参与体内的蛋白质、脂肪、碳水化合物代谢。
维生素B12具有特殊的化学结构，其分子中含有一种金属原子钴，并与一种特殊的质子转移辅酶结合在一起。
维生素B12的化学结构特殊，有着较强的稳定性，在经过多次加热及酸碱处理后，仍可保持其特殊的结构及生物活性。
实验步骤：1、取维生素B12标准物质1g，在50mL容量瓶中溶解。
2、取上述维生素B12溶液1mL，加150mL蒸馏水，摇匀，分别记录其浓度为C1。
3、取另外标定的氢氧化钠（NaOH）溶液，分别调整不同浓度的溶液，分别测得其pH值。
4、将上述不同pH值的氢氧化钠溶液加入维生素B12溶液中，摇匀后分别记录其pH值为C2。
5、分别计算出不同pH值下维生素B12分子的离解度，绘制维生素B12的离解曲线。
实验结果：通过实验测定，得出不同pH值下维生素B12离解度的曲线如下所示：离解度 | pH值0.20 | 4.00.50 | 4.30.80 | 4.51.00 | 4.61.00 | 5.01.00 | 5.50.90 | 6.00.70 | 6.50.50 | 7.00.30 | 7.50.10 | 8.0实验结论：从实验结果可以看出，维生素B12在不同的pH值下离解度不同。
当pH值小于4.0时，其离解度较低，随着pH值的升高，其离解度逐渐增加。
当pH值大于8.0时，其离解度急剧下降。
综合来看，维生素B12在pH 4.5 - 5.5之间的离解度最高，这也就是维生素B12最稳定的范围。
因此，在生产及贮存过程中，需要将其保持在适当的pH值范围内，以保持其生物活性。
维生素B12测定原始记录表
标准溶液名称：维生素B12标准工作液 标准曲线工作液：低浓度0.01ng/mL，高浓度0.020ng/mL
试管号
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
标准曲线工作液浓度ng/mL
0.00
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.10
维生素B12含量
0.00）
维生素B12含量平均值
p（ng/ml）
试验中维生素B12含量X μg/100g
1
2
3
平均值
A1
B1
C1
D1
A2
B2
C2
D2
检验员：复核人：审核人：
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.10
吸光度1
吸光度2
吸光度3
吸光度平均值
标准曲线Y=
样品测定
提取液定容体积V mL；计算公式 p= 曲线查得维生素B12含量/V1；X=p×V×f×100/（m×1000）
序号
试样质量
m（g）
稀释
倍数f
吸取试样
液体积
V1（mL）
吸光度
样品编号
样品名称
检验项目
维生素B12
检验依据
GB5009.285—2022食品中维生素B12含量的测定
检出限
仪器名称
仪器型号
仪器编号
检测起止日期
环境条件
温度 湿度
分析步骤：称取试样_____于250mL灭菌瓶中，用10mL的提取溶液混匀后，加150mL水，摇匀，置于压力灭菌器中121℃水解10min,冷却后用盐酸溶液(1mol/L)调pH至4.5±0.2，转人250mL容量瓶中，定容至刻度。混匀，过滤。移取滤液5mL,加入20mL~30mL水，用氢氧化钠溶液(1mol/L)调pH至6.8±0.2，转入100mL容量瓶中，定容至刻度。根据试样中维生素含量用水对试样提取液进行适当稀释，使稀释后试样提取液中生物素含量在0.01ng/mL~0.02ng/mL范围内。取4支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL试样提取液，补水至5.0mL,加入5.0mL维生素B12测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行。取试管分别加人标准使用工作液低浓度0.0mL(未接种空白)、0.0mL(接种空白)、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.00mL、和高浓度3.0mL、4.0mL、5.0mL,补水至5.00mL,相当于标准系列管中维生素B12含量为0.00ng、0.00ng、0.01ng、0.02ng、0.03ng、0.04ng、0.05ng、0.06ng、0.08ng、0.10ng。加5.0mL维生素B12测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行，绘制标准曲线时，以每点均值计算。所有的试管盖上试管帽，放入灭菌釜内，121℃(0.10mPa~0.12mPa)灭菌5min。试管快速冷却至室温，在无菌操作条件下，将接种液转入无菌管，向每支测定管接种50μL测试均菌液，其中标准曲线管中未接种空白和样品空白除外。置于36℃士1℃恒温培养箱中培养19h~20h,直至获得最大混浊度。将培养好的测定管用漩涡混匀器混匀。用厚度为1cm比色杯，于550nm处，以未接种空白管调节透光率为100%或吸光度为0，读出接种空白试管的读数，再以接种空白试验管为空白，调节透光率为100%或吸光度为0，然后依次测定标准系列管、试样系列管吸光值。
维生素b12检测方法标准
维生素b12检测方法标准
维生素B12检测方法标准通常是由专业医学组织或者卫生管理机构制定并推荐的。
常见的维生素B12检测方法包括血清维生素
B12测定、全血维生素B12测定和甲基辛酸测定等。
血清维生素B12测定是最常用的方法，它通过采集静脉血样本，然后在实验室中使用特定的化学试剂来测定血清中维生素B12的浓度。
全血维生素
B12测定则是直接测定全血中的维生素B12含量，通常用于评估维生素B12的储备情况。
甲基辛酸测定是一种新型的维生素B12功能性检测方法，通过测定尿液中的甲基辛酸浓度来评估维生素B12的代谢情况。
这些方法的标准通常包括了样本采集、实验室分析、结果解读和质量控制等方面的详细步骤和要求。
对于样本采集，标准通常会规定使用特定类型的采血管和采血技术，以确保样本的准确性和可靠性。
在实验室分析过程中，标准通常会规定使用特定的仪器设备和试剂，以及严格的操作流程和质量控制措施，以确保测定结果的准确性和可比性。
对于结果解读，标准通常会规定参考范围和异常结果的判定标准，以便医生能够准确诊断患者的维生素B12状况。
此外，标准还会要求实验室具有相应的认证和资质，并且参与
外部质量评估和监测，以确保检测结果的可靠性和准确性。
总的来说，维生素B12检测方法的标准涵盖了从样本采集到结果解读的全过程，旨在确保检测结果的准确性和可靠性，以指导临床诊断和治疗。
高效液相色谱法测定维生素B12片的含量
高效液相色谱法测定维生素Ｂ１２片的含量陈 沛（宁德市食品药品检验检测中心，福建宁德３５２１００）摘要：目的 建立一种用ＨＰＬＣ检测维生素Ｂ１２片含量的方法。
方法 采用ＨＰＬＣ法，选用ＡｇｉｌｅｎｔＬＣ１２００高效液相色谱仪，ＳｅｐａｘＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＡｍｅｔｈｙｓｔＣ１８ Ｈ色谱柱，流动相为０ １％磷酸溶液（０ ０１％二乙胺）∶乙腈（８３∶１７）；流速０ ７ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长：３６０ｎｍ。
结果 维生素Ｂ１２片在浓度（５ ２７～１３ １８）μｇ·ｍＬ－１范围内线性关系良好（相关性：０ ９９９９６）。
精密度为０ ０５％。
回收率为９５ ８％。
结论 此方法操作简易，且分离效果好，准确率高，专属性强，适合维生素Ｂ１２片含量的测定。
关键词：维生素Ｂ１２片；含量测定；高效液相色谱法中图分类号：Ｒ９２７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６ ３７６５（２０２０） １１ ００９９ ０３作者简介：陈 沛，女（１９７９－）。
职称：主管药师。
维生素Ｂ１２片，为常用于治疗巨幼红细胞性贫血的抗贫血药。
其检验依据为ＷＳ １００１ （ＨＤ １０５７） ２００２〔１〕采用紫外分光光度法测定其含量，需取除去糖衣的供试品１００片，精密称取约相当于维生素Ｂ１２１ ２５ｍｇ（即约相当于５０片供试品），置５０ｍＬ量瓶中，此操作步骤易导致溶解困难，也给过滤取样测定增加难度，易致使检测结果不准确，重现性较差。
本法采用ＨＰＬＣ法测定维生素Ｂ１２片的含量，方法更简易，结果更准确，重现性更好，现将方法介绍如下。
１ 仪器与试药１ １ 仪器 ＡｇｉｌｅｎｔＬＣ１２００高效液相色谱仪；ＳｅｐａｘＴｅｃｈｎｏｌｏ ｇｉｅｓＡｍｅｔｈｙｓｔＣ１８ Ｈ色谱柱（４ ６×２５０ｍｍ，５μｍ）；ＢＳＡ２２４Ｓ电子天平；ＭＳ２０５ＤＵ电子天平；岛津ＵＶ２４５０紫外分光光度计；ｐＨＳ ３Ｃ型酸度计。
１ ２ 材料 维生素Ｂ１２对照品（中国食品药品检定研究院，批号１００２４８ ２０１７０５，含量为９１ ３％）；维生素Ｂ１２片（山西亨瑞达制药有限公司，批号：１８０８０２，规格：２５μｇ）；甲醇、乙腈（色谱纯）；磷酸、二乙胺、盐酸、氢氧化钠、过氧化氢（分析纯）；超纯水。
维生素B12(VB12)检测
维生素B12（VB12）检测
维生素B12（Vitamin B12, VB12），又称为钴胺素，为一种含有3价钴的多环系化合物，是唯一含金属元素的维生素，也是唯一含必须矿物质的维生素，因含钴而呈红色，又称红色维生素，是少数有色的维生素。
维生素B12是唯一的一种需要一种肠道分泌物（内源因子）帮助才能被吸收的维生素，参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、生化法，可高效、精准的检测维生素B12的含量变化。
此外，我们还提供其他维生素检测服务以及维生素检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。
样品制备：
1）称取粉末样品20 mg；
2）加入10 mL盐酸溶液，震荡摇匀；
3）加入10 mL水，震荡摇匀；
4）将溶液定容到200 mL；
5）用0.45 μm的微孔滤膜过滤；
6）用HPLC检测。
HPLC和LC-MS测定维生素B12样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. 维生素B12含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
b12检验项目
b12检验项目
B12检验项目是指对人体血液中的维生素B12浓度进行测试的一项检验项目。
维生素B12是一种水溶性维生素，它在体内
参与DNA合成和红细胞形成，维持神经系统正常运作的重要
物质。
B12检验项目可通过抽取一定量的静脉血样进行，常见的检测
方法有放免法、化学发光法等。
通过检测血液中的维生素B12浓度，可以了解身体是否缺乏维生素B12，以及维生素B12
吸收是否受阻等情况。
维生素B12缺乏可导致巨幼红细胞性贫血、神经系统症状
（如手脚麻木、思维困难等）、口腔炎等。
因此，B12检验项
目常用于确认维生素B12缺乏症的诊断，明确病因进而指导
个体治疗方案。
需要注意的是，B12检验项目只能测量维生素B12在血液中的浓度，不能直接反映维生素B12在细胞内的代谢和利用情况。
因此，在补充维生素B12或进行治疗之前，应该综合考虑病
人的症状、病史、其他检测指标等综合因素，以确定是否需要进行维生素B12补充或治疗。
维生素b12含量测定计算公式
维生素b12含量测定计算公式维生素B12是一种重要的水溶性维生素，也称为腺苷钴胺。
它在人体内起着多种关键作用，包括维持神经系统的正常功能、参与红细胞的形成以及维持DNA合成的正常进行等。
因此，准确测定维生素B12的含量对于评估人体健康状态具有重要意义。
测定维生素B12含量的常用方法是通过高效液相色谱法（HPLC）进行分析。
以下是维生素B12含量测定的计算公式：维生素B12含量（μg/100g）=（峰面积样品/峰面积内标品）× 内标品含量（μg/100g）其中，峰面积样品为待测样品中维生素B12的峰面积，峰面积内标品为已知浓度的内标品（通常为氰钴胺）的峰面积，内标品含量为内标品的浓度。
在进行维生素B12含量测定时，需要先准备好样品和内标品，将其分别进行提取和前处理，然后通过HPLC进行分离和定量分析。
具体步骤如下：1. 样品准备：将待测样品（如动物肝脏、蛋黄等）称取适量，加入适量的溶剂（如甲醇、乙腈等）进行提取，使维生素B12溶解在溶剂中。
2. 内标品准备：称取适量的内标品（如氰钴胺），加入适量的溶剂进行提取，使内标品溶解在溶剂中。
3. 前处理：将提取得到的样品和内标品溶液通过滤膜过滤，去除杂质。
4. HPLC分析：将前处理后的样品注入HPLC系统进行分离和定量分析。
在HPLC系统中，使用特定的色谱柱和流动相，通过梯度洗脱和紫外检测器等设备，将样品中的维生素B12和内标品分离，并测定其峰面积。
5. 计算维生素B12含量：根据上述计算公式，利用HPLC分析得到的峰面积数据和内标品的浓度，即可计算出样品中维生素B12的含量。
需要注意的是，维生素B12的测定方法可能因实验室条件和设备不同而略有差异，但基本原理和步骤是相似的。
此外，为了保证测定结果的准确性和可靠性，需要进行空白对照实验、质控样品分析以及仪器校准等措施。
通过HPLC分析方法可以准确测定维生素B12的含量。
这一方法操作简便、准确可靠，对于评估人体健康状况和合理膳食的制定具有重要意义。
维生素b12含量测定计算例题
维生素b12含量测定计算例题
维生素 B12 是一种对人体健康非常重要的维生素，其含量的测定在临床实践和营养学研究中具有重要意义。
下面是维生素 B12 含量测定计算的例题:
假设有一段已知重量为 w 克的食物，其中含有维生素 B12 的质量为 q 毫克。
要测定食物中维生素 B12 的含量，需要进行以下步骤:
1. 将食物进行研磨，使维生素 B12 充分分散。
2. 使用灵敏度合适的检测器，测量食物中维生素 B12 的含量。
3. 根据测量结果，计算出食物中含有的维生素 B12 质量，即 q = fid × w，其中 fid 是检测器的灵敏度，单位为毫安/毫克。
根据上述步骤，可以使用以下公式计算食物中维生素 B12 的含量:
维生素 B12 含量 (毫克/克) = q / (0.001 × w)
其中，0.001 是毫安/毫克的单位转换系数。
在实际测定过程中，可能会受到多种因素的影响，例如检测器的灵敏度、食物研磨的精细程度、测量时间等等。
因此，在实际应用中，需要根据具体情况对测定结果进行修正，以确保计算结果的准确性和可靠性。
紫外可见分光光度计维生素B12含量测定
6. 数据处理与结果计算
根据朗伯-比尔定律，利用标准溶液的吸光度值和浓度绘 制标准曲线，再根据待测样品溶液的吸光度值在标准曲线 上查出对应的浓度，从而计算出待测样品中维生素B12的 含量。
02 实验材料与设备
离心机
用于分离待测样品中的维生素 B12，以便进行测量。
实验试剂
抗坏血酸
用于还原维生素B12，提高其在紫 外可见光下的吸收度。
氢氧化钠
用于调节溶液的pH值，确保实验 环境的稳定性。
03 实验步骤
标准溶液的配制
总结词
准备标准溶液，为后续测定提供参考。
详细描述
根据实验要求，准确称取适量的维生素B12标准品，用适宜的溶剂溶解并稀释至所需浓度，制备标准溶液。确保 标准溶液的浓度准确可靠，以保障测定结果的准确性。
标准曲线的绘制
总结词
根据标准溶液的浓度和吸光度绘制标准曲线，为后续样品测定提供依据。
详细描述
根据实验要求，取不同浓度的标准溶液，在选定的波长下测定其吸光度值，绘制标准曲线。标准曲线 应是一条通过原点的直线，用于将样品的吸光度值转化为相应的浓度值。
样品测定
总结词
根据标准曲线和样品的吸光度值，计算样品 的维生素B12含量。
通过紫外可见分光光度计测定，维生 素B12溶液在280nm波长下的吸光 度分别为0.56、0.58、0.57、0.59。
实验结论
根据吸光度和浓度之间的关系，计算 出维生素B12的含量分别为2.30mg/L 、2.42mg/L、2.37mg/L、2.49mg/L 。
结果分析
准确性分析
误差分析
维生素B12含量的测定
实验四维生素B12含量的测定目的要求1、掌握紫外分光光度计的原理和使用方法。
2、熟悉吸光系数法定量分析方法的应用。
重点1、比吸光系数的概念和定量测定方法。
2、比吸光系数与摩尔吸光系数的关系。
难点比吸光系数的定义与定量测定方法及应用。
仪器设备紫外分光光度计、石英比色皿、容量瓶、移液管、纸镜头等。
内容提要1、维生素B12标准溶液的配制（或用标准品）。
3、购置维生素B12注射液或片剂等样品。
4、1%浓度标准品维生素吸光度的测定（1cm比色皿）。
5、1%浓度样品维生素吸光度的测定。
6、分别求得样品和标准品的比吸光系数。
7、将样品的比吸光系数与标准品的比吸光系数值比较，计算出样品的质量百分数。
操作要点1、仪器的准备（校准、预热）2、仪器的操作步骤（讲解示范）。
3、设置波长(361nm)、调零、调满度。
4、测定。
5、数据记录与结果处理。
6、将比色皿洗净装盒，关机。
7、填写仪器使用记录和实验周志。
注意事项1、开启电源，使仪器预热20分钟。
2、开机前，先确认仪器样品室内是否有东西档在光路上（以免影响仪器自检）。
3、若无标准品可采用文献的吸收系数，但不一定可靠，因测定条件不同。
思考题1、本实验是否可用玻璃比色皿？在紫外分光光度计上，还有其它方法能测其含量吗？2、维生素B12在361nm和550nm波长处与最大吸收，其在361nm的吸光度与550nm处的吸光度的比值为3.15-3.45（中国药典），如果要对维生素B12进行定性鉴别，如何操作？3、《中国药典》规定，维生素B12注射液的正常含量应为表示量的90.0%-110%，根据本实验结果判断是否符合要求？并分析误差产生的原因？。
紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量
实验四 紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量一、实验目的1、理解紫外—可见分光光度法定性分析、定星分析的原理。
2、掌握紫外—可见分光光度法测定维生素B12含量的原理。
3、掌握UV—7502PC紫外—可见分光光度计的结构、原理与操作。
二、原理分子中的电子发生跃迁需要的能量约在1~20eV之间，其对应的吸收光的波长范围大部分处于紫外和可见光区域，通常将分子在这一区域的吸收光谱称为电子光谱或紫外—可见吸收光谱。
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律，即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。
1. 紫外-可见分光光度计的基本结构紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录系统组成。
图1 紫外—可见分光光度计基本结构图2.透光率和吸光度如图2所示：入射光强度I0，吸收光强度I a，透过光强度I t， 反射光强度为I r I0═ I a + I t + I r被测溶液和参比的吸收池同样材料和厚度，反射光强度影响相互抵消，上式简化为I0═ I a + I t透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；反之，透光率愈小，溶液对光的吸收愈多透光率的负对数称为吸光度，用符号A 表示。
维生素B12含量测定
一、实验目的： • 1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。 • 2、掌握维生素B12注射液的紫外分光光度 法鉴别及含量测定。 • 3、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。 • 4、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 二、主要仪器与试药 • 维生素B12注射液、维生素B12对照品 • Mini-1240型紫外-可见分光光度仪、石英比 色皿、50ml容量瓶，5ml 吸量管
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
1、维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝 脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中; 2、在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动; 3、维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血； 4、促进儿童发育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白质 适宜地为体内所利用。 5、主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶 酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多 发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助 治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证 实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏。
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五、实验结果 1. 鉴别：维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰： 278 nm、361 nm、550 nm。 2. 检查：A361/ A278 应为1.70-1.88， A361/ A550应 为3.15-3.45 。 3. 含量测定： 吸收系数法：利用上述361nm处测定得到的 吸收度，按其吸收系数E1％1cm=207 计算含量及 标示量百分含量。
紫外分光光度法
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• 维生素B12是含钴的有机药物； • 为深红色结晶，又称为红色维生素B12或 氰钴胺； • 是唯一含有主要矿物质的维生素。 • 分子量：1355.38 • 分子式：C63H88CoN14O14P
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2 方法与结果
2.1 测定波长的选择
维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。
维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数
E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。
本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL
容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。
2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。
2.3 线性关系
标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。
在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。
表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略）
以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。
结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。
见图1。
2.4 精密度试验
精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。
RSD数值较小，说明该方法精密度好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。
结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。
表2 供试品溶液冷藏温度下24 h内测定值（略）
2.6 重复性试验
精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项下含
量测定法测定，计算得维生素B12的平均含量为22.6 μg/mL（批号为070303），RSD为1.08%（n=5），说明该方法有较好的重复性。
2.7 含量测定
以水为空白，取2.2.2项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。
结果见表3。
表3 维生素B12片剂含量测定结果（略）
维生素B12片剂的标示量为25.0 μg，由以上测定结果可知，山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%～110.0%之内。
RSD较小，说明该厂生
产的药品含量稳定。
3 讨论
3.1. 维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中。
在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。
维生素B12能促进红血球的形
成和再生，防止贫血；促进儿童发育，增进食欲；增强体力；维持神经系统的正常功能；促使注意力集中，增强记忆力与平衡感。
能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。
维生素B12为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须［４］。
主要用于治疗恶性贫血，
与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。
也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议［５］。
口服维生素B12仅用
于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏［６］。
3.2 本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素B12的含量，将对照品按不同比例用水稀释，在361 nm波长处进行紫外可见吸收测定，得到标准曲线。
将维生素B12
片剂研磨，精密称定并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。
利用该方法得到的样品溶液，按中国药典规定波长361 nm测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据，结果表明，经紫外可见吸收测定，所测片剂含量均在标示范围之内。
3.3 本实验需避光操作。
维生素B12片剂为糖衣片，呈水溶性，除去糖衣时要刮净，研细，减小干扰，使溶解度增高。
3.4 因紫外可见分光光度法所需样品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到
供试品溶液。
3.5 本方法简便、准确、灵敏度高，可作为测定维生素B12片剂含量的方法。
【参考文献】
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［３］李发美.分析化学实验指导［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2004：98～99.
［４］杨宝峰，苏定冯.药理学［Ｍ］.第6版.北京：人民卫生出版社，2003，7：303～304.
［５］徐叔云.中华临床药物学［Ｍ］.下册.人民卫生出版社，2003，5：1141.
［６］陆晓和.实用临床用药监护［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2003，10：384.
GB 5413.14-2010 婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定
本标准代替GB/T 5413.14-1997《婴幼儿食品和乳粉维生素B12的测定》。
本标准与GB/T 5413.14-1997相比，主要变化如下：
——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定》。
本标准附录A为规范性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——GB 5413-1985、GB/T 5413.14-1997
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本
适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
利用莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii）对维生素B12 的特异性和灵敏性，定量测定出试样中维生素B12 的含量。
在测定用培养基中供给除维生素B12 以外的所有营养成分，这样微生物生长产生的透光率就会同标准曲线工作液及未知待测溶液中维生素B12 的含量相对应。
以不同浓度标准溶液的透光率相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，根据标准曲线即可计算出试样中维生素B12的含量。