高二生物 酶活力的测定
酶活力测定方法
空白和对照试验： 空白试验：是指杂质反应和自发反应引起
的变化量，它提供的是未知因素的影响。空 白值可以通过不加酶，或不加底物，或二者 都加（酶预先经过失效处理）。
对照试验：是指用纯酶或标准酶制剂测得 的结果，主要作为比较或标定的标准。
3）测定方法：
取样测定法：
酶变性剂：5% 三氯醋酸 3% 高氯酸 其它酸、碱、醇类
A1 - A2
0.003 : 1 =
:X
T
A1 - A2 0.003T
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2
0.003TW
A1—A 2 P=
0.003 T W
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽 图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其 生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方 法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微量肽 图法和胰蛋白酶切ＲＰ ＨＰＬＣ肽图法。返回练习与思考
1．何谓：生化药物、生物技术药物、 基因工程药物和生物制品？ 2．生化药物和基因工程药物各分哪 几种？ 3．与化学合成药物的分析相比，生 物药物的分析有何特点？
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加热：使酶失效
酶反应
不同的时间取样
终止反应
测定
连续测定法：在反应过程中对反应系统进 行直接连续检测。
检测方法： 紫外-可见分光光度法 旋光法 荧光分光光度法 电化学测定法 酶偶联测定法 离子选择性电极测定法等。
示例：胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶 肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸） 水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键 供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学 反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越 高。
【高中生物】高中生物知识点：酶的制备和活力的测定
【高中生物】高中生物知识点：酶的制备和活力的测定酶的制备和活力的测定：酶活力（enzymeactivity）：也称为酶活性，是指酶在催化一定的化学反应时表现出来的能力，通常用酶促反应的速率即酶促反应过程中单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示。
酶活力的高低会受温度、pH、激活剂等多种因素的影响。
酶的提取一般选择在低温和适合的pH下进行，有时还要加入酶的激活剂以提高酶活力。
例如，从植物材料中提取果胶酶就是在低温、偏酸性的提取液和NaCl作激活剂的条件下进行的。
一、制备果胶酶1、实验材料和器具：新鲜的水果或蔬菜；质量分数为10%的NaCl溶液，0.1mol/L冰醋酸；研钵，剪刀，漏斗，纱布或滤纸，烧杯，精密pH试纸，试管，酒精灯，离心机，榨汁机等。
2、果胶酶的制备：（1）将50g新鲜的水果或蔬菜洗净，在预冷的研钵内用剪刀迅速剪碎后研磨，边研磨边加入质量分数为10%NaCl溶液50mL，制成匀浆。
（2）漏斗中放置滤纸或5层纱布过滤匀浆液，收集滤液。
（3）以4000r/min的离心速率离心滤液15min。
注意使用同一规格的离心管，离心管内滤液的高度不超过离心管长度的2/3，离心前要确保在离心机中对称放置的离心管（内含滤液）的质量相等。
（4）离心完毕后，果胶酶主要存在于离心管的上清液中，迅速地将上清液倒入洁净的小烧杯内，用0.1mol/L冰醋酸将pH调至3～4，在0～4℃下保存备用。
二、观察果胶酶对苹果匀浆液的作用1、用榨汁机制作苹果匀浆液，将匀浆液置于90℃的恒温水浴中保温4min。
冷却后再过滤，收集滤液。
2、取两支试管，编号为1和2，分别加入30mL滤液，再向试管1中加入30mL保存备用的上清液，向试管2中加入经过90℃水浴保温4min后的上清液30mL，振荡摇匀两支试管，置于室温下。
3、观察两支试管中苹果匀浆液的澄清程度变化，并将结果记录在下表中。
项目苹果匀浆液/mL上清液/mL90℃水浴保温4min后的上清液/mL现象澄清时间试管1 （样品管）3030试管2 （对照管）3030知识点拨：注意事项：在温度、pH影响酶活性的实验中，始终都贯穿着对照原则，而在设置对照实验时最重要的是运用单一变量原则，其中的变量就是我们所研究的对象，所以在分析实验问题时，要紧紧抓住研究变量，把其他可能影响实验结果的变量变为常量，才能保证对照实验结果的严密性和准确性。
酶活性的实验报告
一、实验目的1. 了解酶活性测定的基本原理和方法。
2. 探究温度、pH值、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和激活剂对酶活性的影响。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一和可调节的特性。
酶活性是指酶催化反应的能力，通常用酶活力单位（U）表示。
在一定条件下，酶活力与反应速率成正比，即反应速率越快，酶活力越高。
本实验采用比色法测定酶活性。
在酶催化反应中，底物被转化为产物，同时产生一定量的有色物质。
通过测定有色物质的吸光度，可以计算出酶活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
- 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。
- 抑制剂：碘化钠、氟化钠、氯化钠等。
- 激活剂：硫酸铵、氯化钙等。
- pH缓冲液：磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。
2. 实验仪器：- 紫外-可见分光光度计- 恒温水浴锅- 移液器- 试管- 试管架- 秒表四、实验方法1. 酶活力测定：- 将酶和底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 根据吸光度计算酶活力。
2. 温度对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同温度的水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同温度下酶活性的变化。
3. pH值对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同pH值的缓冲液中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同pH值下酶活性的变化。
4. 底物浓度对酶活性的影响：- 将酶和不同浓度的底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同底物浓度下酶活性的变化。
5. 酶浓度对酶活性的影响：- 将不同浓度的酶与底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
酶活力测定实验报告
酶活力测定实验报告一、实验目的酶活力测定实验的主要目的是了解酶的活性及其影响因素，掌握测定酶活力的基本方法和原理，以及学会使用相关仪器和试剂进行实验操作。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质或核酸。
酶活力是指酶催化一定化学反应的能力，通常用在一定条件下酶催化反应的速度来表示。
本实验采用分光光度法测定酶活力，其原理是基于酶催化反应所产生的产物在特定波长下具有光吸收特性，通过测定反应体系在该波长下吸光度的变化，可以计算出酶催化反应的速度，从而反映酶的活力。
以过氧化氢酶为例，过氧化氢酶能够催化过氧化氢分解为水和氧气。
在本实验中，通过加入一定量的过氧化氢溶液，使其与过氧化氢酶反应，然后使用高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，根据高锰酸钾溶液的用量计算出过氧化氢酶的活力。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的猪肝或土豆等富含过氧化氢酶的组织。
过氧化氢溶液（3%）。
高锰酸钾溶液（002 mol/L）。
磷酸缓冲液（pH 70）。
2、实验仪器研钵。
离心机。
移液器。
分光光度计。
恒温水浴锅。
试管、量筒、容量瓶等玻璃仪器。
四、实验步骤1、酶液的制备称取新鲜的猪肝或土豆组织_____g，置于研钵中，加入适量的磷酸缓冲液（pH 70），研磨成匀浆。
将匀浆转移至离心管中，以_____rpm 的转速离心_____min，取上清液即为粗酶液。
2、酶活力的测定取_____支试管，分别标记为 1、2、3。
在 1 号试管中加入_____mL 磷酸缓冲液（pH 70）作为空白对照，在 2、3 号试管中分别加入_____mL 粗酶液。
向 1、2、3 号试管中分别加入_____mL 过氧化氢溶液（3%），立即摇匀，并同时开始计时。
在反应进行_____min 后，迅速向 1、2、3 号试管中分别加入_____mL 浓度为 2 mol/L 的硫酸溶液终止反应。
用移液器吸取_____mL 反应液，加入到另一支装有_____mL 高锰酸钾溶液（002 mol/L）的试管中，摇匀。
酶活力的测定
4. 抑制剂和激活剂
抑制剂和激活剂是影 响酶活力的其他因素 。抑制剂会抑制酶的 活性，而激活剂则会 增强酶的活性。在测 定酶活力时，需要排 除抑制剂和激活剂的 影响，并进行适当的 样品处理和数据处理 以确保实验结果的准 确性
酶活力的测定
酶活力的测定
三、实验步骤与操作要点
酶活力测定的实验步骤包括样品准备、反应体系配制、温度控制、时间记录、产物或底物 浓度测定等。在操作过程中需要注意以下几点
酶活力是指酶催化特定化学反应的能力， 通常以单位时间内转换底物的摩尔数来 表示
通过测定酶活力，可以了解酶的性质、 作用机制以及底物特异性等方面的信息一、酶活力测 定的基本原理
酶活力测定的基本原 理是利用酶催化的化 学反应速率与酶浓度 成正比的性质，通过 测定反应速率来推算 酶的浓度和活力。常 用的方法有终点法、 动力学法和连续监测 法
酶活力测定结果受到多种因素 的影响，包括温度、pH值、底 物浓度、抑制剂和激活剂等。 为了获得准确的测定结果，需 要严格控制实验条件，并进行 适当的样品处理和数据处理
酶活力的测定
1. 温度
温度是影响酶活力的 重要因素之一。大多 数酶在一定的温度范 围内具有最佳活性， 温度过高或过低都会 影响酶的活性。因此 ，在测定酶活力时， 需要选择适当的温度 ，并进行温度控制以 确保实验结果的准确 性
酶活力的测定
四、时间记录
时间记录是酶活力测定的关键步骤之一。在酶促反应过程中，需要准确记录反应时间，以 便计算反应速率和产物生成量。在时间记录过程中，需要注意控制反应时间，避免过长或 过短的反应时间对实验结果的影响
酶活力的测定
五、产物或底物浓 度测定
产物或底物浓度的测定是酶活力 测定的关键步骤之一。通过测定 产物或底物的浓度，可以计算出 酶的活性。在浓度测定过程中， 需要注意选择适当的测定方法， 并进行准确的浓度计算。常用的 浓度测定方法有分光光度法、色 谱法等
《生物化学》第四节 酶的活力测定及分离提取
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酶有最适pH 的原因
（1）pH 影响E 结构的稳定性，过酸、过碱会强 烈影响酶蛋白的构象，甚至使E 变性失活。
（2）pH 影响E 分子上某些基团的解离状态。 （影响结合基团、催化基团的解离 — 酶活力降
低影响活性中心构象 — 影响酶专一性） （3）pH 影响S 分子某些基团的解离状态。
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3、抑制类型
（1）不可逆抑制：I 与E 共价结合，是一不 可逆反应，二者结合后，不能透析除去抑 制剂而恢复酶活力，称为不可逆抑制作用。
（2）可逆抑制：I 与E 非共价结合，为可逆 反应，透析能除去抑制剂使酶恢复活力， 称为可逆抑制作用。
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（二）不可逆抑制剂
• I 与E 共价结合，是不可逆反应，不能透析 除去。
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反竞争反应模式
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反竞争性抑制的速度方程
Vm [I]
· [S]
1 + Ki
=
Km
+ [S]
[I]
1 + Ki
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反竞争性抑制的双倒数方程
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反竞争性抑制的双倒数图形特征
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反竞争性抑制的特点：
⑴ 反竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的 分子结构类似；
⑵ 抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合； ⑶ 必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制
的结合部位结合。 • 非竞争性抑制剂——I 与S 结合在酶的不同
部位。 • 反竞争性抑制剂——E 必须先与S 结合，然
后才与I 结合
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1. 竞争性抑制（competitive inhibition） 抑制剂与底物竞争与酶的同一活性中心结 合，从而干扰了酶与底物的结合，使酶的 催化活性降低，称为竞争性抑制作用。
《酶活力的测定》课件
数据记录与整理
实验数据记录
在实验过程中，应准确、及时地记录实验数据，包括实验条件、实验步骤、实 验结果等。
数据整理
将实验数据整理成表格或图表，便于分析和比较。数据整理时应确保数据的准 确性和完整性。
数据分析与处理
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括平均值、标准差、误差等指 标的计算。
数据处理
对异常值或离群数据进行处理，如剔除、替换或修正，以确 保数据分析的准确性。
未来，酶活力测定技术的发展将更加注重高灵 敏度、高特异性和自动化方向，为生物工程领 域的研究提供更加精准和高效的工具。
感谢您的观看
THANKS
问题
实验操作复杂，耗时较长。
改进建议
优化实验流程，简化操作步骤，提高实验 效率。
酶活力测定在生物工程领域的应用前景
酶活力测定是生物工程领域中重要的研究手段 ，可用于研究酶促反应动力学、酶的抑制剂和 激活剂等方面的研究。
随着生物工程技术的不断发展，酶活力测定的 应用范围将不断扩大，如应用于生物制药、生 物能源和生物环保等领域。
通过实验，我们掌握了酶活力测定的基本原理和方法，学会了如何设置实验条件和 操作实验。
实验过程中，我们观察到了酶促反应的动力学特征，如米氏方程的适用性和酶促反 应的速率常数。
实验中存在的问题与改进建议
问题
改进建议
实验过程中存在误差，如温度控制不精确 、底物浓度不均匀等。
采用更精确的仪器和设备，如恒温控制器 和磁力搅拌器，以提高实验的准确性和可 重复性。
米氏方程是描述酶促反应速率与底物浓度关系的方程，其形式为V=Vmax[S]/（Km+[S]），其中V代表反应速率，Vmax代表 最大反应速率，[S]代表底物浓度，Km代表米氏常数。
酶活力的测定实验报告
酶活力的测定实验报告酶活力的测定实验报告引言：酶是一类生物催化剂，能够加速生物体内化学反应的速率。
酶活力的测定是生物学实验中常见的实验之一，通过测定酶活力的大小，可以了解酶在不同条件下的催化效果，进而研究酶的特性及其在生物体内的作用机制。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶的活力，探究酶活力与温度、酶浓度和底物浓度的关系。
材料与方法：1. 实验所需材料包括过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物、缓冲液、显色剂等。
2. 实验仪器包括分光光度计、试管、移液器等。
3. 实验步骤：a. 准备一组不同温度下的试验样品，分别将过氧化氢酶溶液和过氧化氢底物按照一定比例混合，并加入适量的缓冲液。
b. 在不同温度下，将试验样品分别放入预先恒温的水浴中反应一定时间。
c. 取出反应后的试验样品，加入显色剂，并在分光光度计中测定吸光度。
d. 重复上述步骤，分别改变酶浓度和底物浓度，进行实验。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同条件下的酶活力数据，并进行了分析和讨论。
1. 温度对酶活力的影响：在实验中，我们分别将试验样品置于不同温度下进行反应，结果发现酶活力随温度的变化呈现一定的规律性。
当温度较低时，酶活力较低，随着温度的升高，酶活力逐渐增加，但当温度超过一定范围后，酶活力开始下降。
这是因为酶是一种蛋白质，其结构在高温下容易受到破坏，从而导致酶活力的降低。
2. 酶浓度对酶活力的影响：在实验中，我们分别改变了酶的浓度，结果发现酶浓度对酶活力有着明显的影响。
当酶浓度较低时，酶活力较低，随着酶浓度的增加，酶活力逐渐增加，但当酶浓度超过一定范围后，酶活力开始趋于饱和，增加酶浓度对酶活力的提高效果不明显。
这是因为酶浓度的增加会导致底物与酶结合的速率增加，但酶分子之间的竞争也会增加，从而限制了酶活力的提高。
3. 底物浓度对酶活力的影响：在实验中，我们分别改变了底物的浓度，结果发现底物浓度对酶活力也有着明显的影响。
当底物浓度较低时，酶活力较低，随着底物浓度的增加，酶活力逐渐增加，但当底物浓度超过一定范围后，酶活力开始趋于饱和，增加底物浓度对酶活力的提高效果不明显。
酶活力测定的方法
酶活力测定的方法
酶活力测定的方法有多种，下面列举常用的几种方法：
1. 比色法：通过测定酶反应产生的可见光吸收或色素形成来间接测定酶活力。
常用的比色法有尼林蓝法、间苯二酚法、对苯二酚法等。
2. 发光法：利用酶催化的氧化还原反应产生的发光信号来测定酶活力。
常用的发光法有荧光发光法、葡萄糖氧化酶法等。
3. 毛细管电泳法：通过测定酶催化反应产生的电荷变化、离子浓度变化或pH 值的变化来测定酶活力。
4. 毛细管电泳法：通过测定酶催化反应产生的电荷变化、离子浓度变化或pH 值的变化来测定酶活力。
5. 凝胶电泳方法：通过观察酶在凝胶上的迁移距离或酶活性的带状图案的强度来测定酶活力。
6. 标记物法：利用酶催化与标记物反应产生的物质变化来测定酶活力，常用的标记物有放射性同位素、酶标记物等。
以上是常用的酶活力测定方法，不同方法适用于不同类型的酶和反应体系。
在实
际应用中，需要根据具体情况选择最合适的方法来测定酶活力。
高中生物高二生物PPT课件酶活力的测定共31页
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
高中生物高二生物PPT课件酶活力的 测定
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
酶活性测定技术的使用教程
酶活性测定技术的使用教程简介：酶活性是指单位时间内酶能够催化的底物转化的数量，是评估酶活性及其效率的重要指标。
酶活性的测定对于生物学、医学和食品科学等领域具有重要意义。
本篇文章将为您介绍酶活性测定技术的使用教程，帮助您了解如何准确测定酶活性并获得可靠的实验结果。
一、酶活性测定原理酶活性测定的原理是通过测定单位时间内酶所催化的底物转化速率来评估酶的催化效率。
常见的酶活性测定方法包括色谱法、光谱法、比色法和电化学法等。
选择合适的方法需要根据实验的具体目的和所研究的酶的特性来决定。
二、酶活性测定步骤1. 样品制备：首先根据实验目的选择合适的样品，可以是纯酶、酶提取液或含酶的生物样品。
按照实验要求将样品进行预处理，例如将样品离心、稀释或者浓缩等。
2. 酶活性测定方法选择：根据样品和实验目的的不同，选择合适的酶活性测定方法。
常用方法包括比色法、光谱法和电化学法。
3. 实验操作：根据所选择的酶活性测定方法，进行相应的实验操作。
通常包括以下几个步骤：a. 准备试剂并调整反应体系：根据实验所需，准备好所需的试剂，并按照比例将试剂加入到反应体系中。
b. 控制实验条件：因为酶活性常受温度、pH值和离子浓度等因素的影响，所以在实验过程中需要控制好这些条件以确保准确的结果。
c. 反应时间和反应温度的优化：根据所研究的酶的特性，通过调整反应时间和反应温度来优化实验条件。
d. 反应停止和数据记录：根据所使用的方法，选择合适的方法来停止反应，并记录数据。
4. 数据分析：根据实验所得的数据，进行数据分析和结果解读。
根据所使用的酶活性测定方法，可以得到对应的活性值。
常用的酶活性单位有单位时间里转化底物的数量（例如单位时间里转化的亚硝酸盐浓度变化量）或者特定反应物的生成速率等。
5. 结果验证：通过对多组样品的测定，可以进行结果验证。
重复实验或者使用多个不同方法进行测定，可以提高结果的可靠性。
同时，设立对照组和空白组，可以进一步确认实验结果的准确性。
-酶活力的测定
二、酶活力的测定
在使用离子选择电极法测定某些酶的酶活力时,
用氧电极可以测定一些耗氧的酶反应。如葡萄糖
氧化酶的活力就可用这个方法很方便地测定。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
5.其他方法
除上述方法外，还有一些测定酶活力的方
法，例如旋光法、量气法、量热法和层析法
等，但这些方法使用范围有限，灵敏度较差,
酶单位的定义：在一定条件下，一定时间内将一定 量的底物转化为产物所需的酶量。这样酶的含量就可 以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表 示，即 “U/g” 或 “U/mL” 。
世界各地实际应用的酶活力单位的定义各不相同。 同一种酶往往有几种不同的单位。
例如，1IU＝lμmol/min；1Kat = 1mol/s
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
1.分光光度法
分光光度法主要利用底物和产物在紫外光或可见光
部分的光吸收度的不同，选择一适当的波长，测定反
应过程中反应进行的情况。其优点是简便、节省时间
和样品，可检测到nmol/L水平的变化。该方法可以连 续地读出反应过程中光吸收的变化，已成为酶活力测
定中一种重要的方法之一。几乎所有的氧化还原酶都
2.荧光法
荧光法主要是根据底物或产物荧光性质的差别来进行测 定。由于荧光方法的灵敏度往往比分光光度法要高若干个 数量级，而且荧光强度和激光的光源有关，因此在酶学研 究中越来越多地被采用，特别是一些快速反应的测定方法。
该法缺点：易受其他物质干扰，有些物质如蛋白质能吸 收和发射荧光，这种干扰在紫外区尤为显著，故用荧光法 测定酶活力时，应尽可能选择可见光范围的荧光进行测定。
酶活力测定实验报告
酶活力测定实验报告酶活力测定实验报告引言：酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应的速率，对于维持生物体内的代谢平衡起着重要的作用。
酶活力测定实验是一种常用的实验方法，通过测量酶催化反应中底物消耗量或产物生成量的变化，来间接反映酶的活性水平。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶（catalase）在不同温度下的活性变化，探究酶活性与温度之间的关系。
材料与方法：1. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴槽。
2. 实验试剂：过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物溶液、磷酸盐缓冲液。
3. 实验步骤：a. 在分光光度计中设置波长为240nm。
b. 准备一组含有过氧化氢酶、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液的混合溶液，作为实验组。
c. 将实验组的混合溶液分别置于不同温度的恒温水浴槽中反应一段时间。
d. 取出反应后的混合溶液，通过分光光度计测定其吸光度，得到反应速率。
e. 重复以上步骤，分别在不同温度下进行实验，并记录实验数据。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同温度下过氧化氢酶的活性变化曲线。
实验结果显示，随着温度的升高，过氧化氢酶的活性呈现出先增加后降低的趋势。
在较低温度下，酶的活性较低，反应速率较慢；随着温度的升高，酶的活性逐渐增强，反应速率也随之增加；然而，当温度超过一定范围后，酶的活性开始下降，反应速率逐渐减小。
这一结果可以解释为酶的活性受到温度的影响。
酶是一种蛋白质，其活性受到温度的变化而变化。
当温度升高时，酶分子内部的振动加剧，使得酶与底物之间的碰撞频率增加，酶活性增强；然而，当温度过高时，酶分子的结构开始发生变化，部分酶分子失去了原有的构象，导致酶活性下降。
这种变化可能是由于酶分子的部分构象发生变化，使得酶活性中心的空间结构发生改变，从而影响了酶与底物之间的互作用。
此外，实验结果还表明，酶活性与温度之间存在一个最适温度。
在最适温度下，酶的活性达到最高点，反应速率最快。
这是因为在最适温度下，酶分子的结构处于最稳定的状态，酶活性中心与底物之间的互作用最为紧密，因此反应速率最高。
高二生物 专题4 酶的研究与应用
各取一支分9组分别放入37度的恒温水箱中恒温加热．
酶量
待试管内温度稳定后，将果胶 1 酶2依次3加入4相同5温度6的苹果7 泥中8 9 mg mg mg mg mg mg mg mg mg
恒温保持2０ｍｉｎ
果汁量
过滤果汁，用量筒测量果汁的量，填入表格
高二生物 专题4 酶的研究与应用
1．探究不同种类加酶洗衣粉的效果
步骤
烧杯编号
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
注入自来水 加入物质（等量）
500ml
奶渍布
500m l
奶渍布
500ml
奶渍布
控制水温
37℃ 37℃ 37℃
加入洗衣粉（等量）
蛋白酶 洗衣粉
复合酶 洗衣粉
脂肪酶 洗衣粉
用玻璃棒搅拌
ห้องสมุดไป่ตู้
5min 5min 5min
观察实验现象 高二生物 专题4 酶的研究与应用
3．下面三幅图是研究人员对黑曲霉A1果胶酶性质的研究结果，据图分析 温度、pH和Ca2＋浓度等与酶活力的关系。
高二生物 专题4 酶的研究与应用
4．洗涤剂等方面的应用——加酶洗衣粉 酶的种类及洗涤原理
高二生物 专题4 酶的研究与应用
1．下图中横轴均表示酶的反应条件，纵轴为酶的反应速度，能 正确反映温度和pH与酶反应速度关系的是( )
A．甲和乙 C．甲和丙 答案：D
B．乙和丙 D．都是甲
高二生物 专题4 酶的研究与应用
高二生物 专题4 酶的研究与应用
5．某同学用实验来探究pH值对酶活性的影响。他准备了5份含有 等量果胶酶溶液的试管，用0.1%的盐酸或氢氧化钠溶液调节至不同 的pH值，每支试管加五块0.1 cm3的正方体苹果块，试管均置于25℃ 室温条件下。
酶活性的测定(1)
酶活性的测定1 实验背景（1）酶活性的定义酶活性（enzyme activity）也称酶活力，指酶催化指定化学反应的能力酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的化学反应的速率来表示，反应速率愈快，就表明酶活力愈高酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示，实际酶活性测定中一般以测定产物的增加量为准012345678910111213141551015202530时间/min产物的量酶活性＝反应初速率＝产物量的变化/时间/ m m o l /LpNPP （磷酸对硝基苯酚）pNP （对硝基苯酚）＋Pi碱性磷酸酶（2）酶活性的测定方法方法原理优点缺点分光光度法底物、产物或指示剂在紫外或可见光部分吸光度不同操作简便，节省时间和样品，可用于动力学监测灵敏度相对较低荧光法底物、产物的荧光性质有差别灵敏度高易受其它物质（特别是蛋白质）干扰同位素测定法底物用放射性同位素标记灵敏度高操作复杂，代价昂贵电化学方法用pH计跟踪H+浓度的变化操作比较简便仅适用于有H+生成或消耗的反应碱性磷酸酶测活原理pNPP （磷酸对硝基苯酚）pNP （对硝基苯酚）＋PiA 410= ε（λ）C LpNP 的摩尔消光系数ε（λ）为17500 mol -1·L·cm -1117500A C 410⨯=碱性磷酸酶肌酸激酶测活原理肌酸＋MgATP2-MgADP-+ 磷酸肌酸+ H+用百里酚蓝作为pH指示剂，测定597 nm吸光度的变化，用于计算酶活性[H+]∆A597= 1.3 ∆[H+]将酶加入底物溶液中，快速混合，开始反应 反应一段时间后，加入反应终止液，终止反应使用分光光度计测定产物的浓度，计算酶活性①终止法测定碱性磷酸酶的活性123456789101112131415051015202530时间/min产物的量/ m m o l /L●计算酶样品的活力单位数（U，activity unit）酶活力单位是酶活力大小的一种衡量单位按照国际酶学委员会的规定，1个酶活力国际单位是指在最适反应条件（指最适pH、温度25℃等）下，1分钟内能催化1μmol底物转化为产物所需的酶量1 IU=1 μmol/min碱性磷酸酶活力国际单位规定：以pNPP 为底物，在pH 为8.5，30o C 下每分钟产生1μmol pNP 所需要的酶量为一个活力单位1011750010004.0A 6410⨯⨯⨯⨯=位数碱性磷酸酶活力国际单管号测活液AKP 30o C反应10min终止液A 410360 μL40 μL3.6 mLn V ⨯⨯04.0)ml (V ：碱性磷酸酶样品的总体积；n ：酶样品的稀释倍数碱性磷酸酶活力国际单位数●计算酶样品的比活力酶的比活力指每毫克酶蛋白所含有的酶活力单位数比活力= 总活力U/总蛋白mg比活力是酶纯化程度的指标04.0c 101 1750010004.0A6 410⨯⨯⨯⨯⨯=碱性磷酸酶比活力C：碱性磷酸酶样品的浓度（mg/mL）碱性磷酸酶比活力②连续法测定碱性磷酸酶的活性将适量酶加入底物溶液中，快速混合将酶与底物的混合液迅速转移入比色杯中，放入分光光度计 利用分光光度计连续测定吸光度的变化利用吸光度变化的动力学曲线与 A值计算酶活力连续法测定碱性磷酸酶的活性11750010002.0A 位数碱性磷酸酶活力国际单6410⨯⨯⨯∆=碱性磷酸酶活力国际单位数测活液AKP 30o C 连续反应∆A 4102 mL 22 μL2 实验试剂（1）底物溶液（测活液）pH 8.5100 mL 50 mmol/L Tris-HCl0.2 mg/mL BSA10 mmol/L pNPP2 mmol/L MgAc2（2）酶稀释液pH 8.5100 mL50 mmol/L Tris-HCl0.2 mg/mL BSA2 mmol/L MgAc22 实验试剂（3）测活终止液0.5 mol/L Na3PO410 mmol/L EDTA3 实验操作1）准备4个玻璃试管，放在试管架上，用微量移液器将0.2mL酶稀释液加入1号试管中，然后将0.2mL酶溶液加入1号试管，用旋涡混合器混合；接下来，将0.2mL 酶稀释液加入2号试管，从1号试管取出0.2mL液体样品，加入2号试管，用旋涡混合器混合；将0.2mL酶稀释液加入3号试管，从2号试管取出0.2mL液体样品，加入3号试管，用旋涡混合器混合；将0.2mL酶稀释液加入4号试管，从3号试管取出0.2 mL液体样品，加入4号试管，用旋涡混合器混合。
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开 关
(1)酶活力单位是指在一定条件下，1min 内能转化 1μmol 底
物的酶量。测定过程中温度保持在 25 ℃，其他条件如pH 和
底物浓度等均应采用最适条件。
(2)测定方法
①一是测定完成一定量反应所需的时间，所需时间越短，说 明酶活力 越高 ；反之，酶活力 越低 。
学习探究区
第6课时
②二是测定在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速
学习探究区
第6课时
2．果胶酶可以将果胶水解成 β半乳糖醛酸，而半乳糖醛酸具有
还原性糖醛基，可用次碘酸钠法定量测量，其原理如下：碘
本 在碱性溶液中可以生成具有强氧化性的次碘酸盐，次碘酸盐
课 栏
能与醛糖反应，从而使醛糖氧化成糖酸盐。
目 开
RCHO＋I2＋3NaOH→RCOONa＋2NaI＋2H2O
关 醛糖
(2)为什么在混合苹果泥和果胶酶之前，要将果泥和果胶酶分装
在不同的试管中恒温处理？
本 答案 将果泥和果胶酶分装在不同的试管中恒温处理，可以保
课
栏 证底物和酶在混合时的温度是相同的，避免了果泥和果胶酶混
目
开 合时影响混合物的温度，从而影响果胶酶活性的问题。
关
(3)该实验的自变量是 温度 ，根据单一变量原则，应确保各实
表示在温度为 a 的情况下生成物量与时间的关系图。则当温
度增加一倍时生成物量与时间的关系是
(B )
本 课 栏 目 开 关
A．曲线 1 B．曲线 2 C．曲线 3 D．曲线 4
解析 从图一可以看出，当温度由 a 变为 2a 时，酶促反应 速率提高，所以能在更短的时间内达到图二中的饱和值。
学习探究区
本 课 栏 目 开 关
第6课时
酶活力的测定
本 课
[学习目标定位]
栏 目
1.识别酶活力和酶反应速度的关系。2.解释果胶酶活力测定
开 关
原理及方法。3.探究果胶酶作用的最佳条件。
知识储备区
第6课时
1．果胶酶是能够分解果胶的 多种 酶的总称，除了含有_果__胶__
本 _分解_酶外，还含有少量的_纤__维__素___酶__、_半__纤__维__素__酶__、__淀__粉__酶__
本 达到实验预设的 pH(或“方法一的操作会在达到预定 pH 之前
课 就发生了酶的催化反应”)
栏
目 开
(3)在探究温度或 pH 的影响时，是否需要设置对照？如果需要，
关 又应该如何设置？为什么？
答案 需要设置对照实验，不同的温度梯度之间或不同的 pH 梯度之间就可以作为对照，这种对照称为相互对照。
学习探究区 3．探究果胶酶浓度的影响
胶被果胶酶分解后的产物是半乳糖醛酸；果胶酶是一类酶的总
称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
自我检测区
第6课时
2．下列与酶的活性有关的说法，不正确的是
(A)
A．酶的活性是由蛋白质结构决定的，不受外界条件的影响
B．酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力
本 课
C．酶的活性受温度、pH 等因素的影响
活力 条件
第6课时
果胶酶用量
自我检测区
第6课时
1．果胶酶的作用底物是果胶，下列有关叙述正确的是 ( A )
本 课
A．果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一
栏 目
B．果胶酶可催化果胶分解成可溶性的半乳糖，使得浑浊的
开
果汁变澄清
关
C．果胶是由半乳糖聚合而成的一种高分子化合物
D．果胶酶就是果胶分解酶的简称 解析 果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物；果
学习探究区
第6课时
归纳提炼 1．为了得到一种高纯度、高活力的酶制剂，往往要经过一系列 本 复杂的分离纯化过程，而各个过程中采取的手段可能很温
课
栏 和，也可能很激烈，这些手段都或多或少地影响到酶的活性。
目
开 为了掌握了解每一个过程中的酶活力的损失程度以及所采
关
取的手段是否合适，以决定是否进行下一步操作，就必须在 完成了每一步操作后都要对酶活力进行测定。
4、5、6、7、8，再把 pH 相等的果胶酶溶液和苹果泥相混合。
请 问 哪 一 种 方 法 更 为 科 学 ： ________ ， 并 说 明 理 由 ：
_________________________________________________。
学习探究区
第6课时
答案 方法二。方法二的操作能够确保酶的反应环境从一开始
② 加
反应液加入两个碘量瓶中，碱性条件下(碳酸钠
加热煮沸，冷却后分别加入 提供碱性条件)，碘可
碘 氧 化
1 mL1mol/L 的_碳____酸___钠_____溶 以和果胶酶的水解 液和 5 mL0.1 mol/L 的 碘 产物β半乳糖醛酸
液，混匀
作用，生成糖酸盐
学习探究区
第6课时
分别加入 2 mL1 mol/L 的硫 滴定时加入硫酸的目
验组相同的变量有 果泥量、果胶酶的浓度和用量、水浴时间
_和___混__合__物__的__p_H_等。 (4)果胶酶的活性是通过 相同反应时间内产生的果汁的体积 来
体现的。
学习探究区
第6课时
2．探究 pH 对果胶酶活性的影响
(1)果胶酶的最适 pH 范围为 6.0 左右。因此设置 pH 时要以此为
_中__心__设置 pH 梯度，如：可设置系列：4 、5 、6、7、8 五组。
(2)本实验步骤中，在完成“烧杯中分别加入苹果泥(假定 pH 的
本 课
改变对苹果泥成分无影响)，试管中分别注入果胶酶溶液、编号、
栏 目
编组”之后，有下面两种操作：
开 关
方法一：将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥相混合，再
把混合液的 pH 分别调至 4、5、6、7、8。
方法二：将试管中果胶酶溶液和烧杯中苹果泥的 pH 分别调到
学习探究区
第6课时
探究点二 探究果胶酶作用的最佳条件
本 酶的活性受多种因素的影响，实际应用中为了最大限度
课 栏
地利用酶，就要先确定酶的最佳作用条件，结合下列实
目 开
验体会探究酶最佳作用条件的方法。
关 1．探究温度对果胶酶活性的影响
学习探究区
本 课 栏 目 开 关
第6课时
学习探究区
第6课时
(1)果胶酶的最适温度为 45～50 ℃。设置温度梯度时，要以这个 范围为 中心 设置，上图实验中的温度梯度为 5 ℃。
保证反应液的用量必须 相同 ，否则影响实验结果的准确性。
本
课 栏
归纳提炼
目 开
1．温度和 pH 对果胶酶活性的影响曲线图
关
学习探究区
第6课时
2．不同果胶酶用量对出汁量影响的曲线图(在浓度和体积相同
的条件下)
本
课
栏 目
3．极端条件对酶活性的影响区别
开 关
酶的结 影响因素 酶的活性
构
低温
降低 未破坏
高温 降低或失活 破坏
( C)
A．配制不同浓度的果胶酶溶液，并在各组中加入等量的该
本
溶液
课
栏 B．调节 pH，使各组中的 pH 相同而且处于适宜状态
目
开 C．用玻璃棒搅拌加酶的果泥，搅拌时间可以不同
关
D．在相同且适宜的温度条件下进行实验
解析 根据单一变量的原则，除了果胶酶的浓度外，其他 因素都要保持相同且适宜。
自我检测区
本 课
胶、 果胶酶 ；2 号试管内加 保温的目的是使酶
栏 目
①保 入等量的果胶和 蒸馏水 ， 对底物很好地发挥
开 关
温 均用冰乙酸将 pH 调至3.5 ，作用，温度和 pH
放在恒温水浴锅中 50 ℃保 都应是 最适宜 的
温2h
学习探究区
第6课时
从 1、2 号瓶中分别取 5 mL 这一步的目的是在
本 课 栏 目 开 关
导致酶失去活性。
知识储备区
第6课时
4．在下列坐标系中画出温度和 pH 对酶活性的影响曲线
本 课 栏
目 答案
开 关
学习探究区
第6课时
探究点一 检测果胶酶的活力
不同条件下，酶的活性是不同的，要定量地比较酶活力的差别
本 课
就要进行酶活力的测定。结合教材实验，完成下面的探究内容。
栏 目
1．酶活力单位及其测定方法
到破坏。
自我检测区
答案 (1)最高 (2)0 ℃ 100 ℃ 甲 如下图 甲
第6课时
第6课时
4．如图是果胶酶在不同温度条件下的酶活性变化曲线，请回 答下列问题。
本
课
栏
目
开 关
(1)在 35 ℃时，果胶酶的活性________。
(2)在________和________时，果胶酶的活性都降为 0，但恢
复至 35 ℃时，________图的催化活性可能恢复，请在图中
画出恢复曲线，由此表明________图中所示酶的结构未受
糖酸盐
利用过量的碘在碱性条件下出半乳糖醛酸的量，以此来
表示果胶酶的活性。
学习探究区
第6课时
活学活用
1．下列关于酶活力与酶促反应速率的叙述中，错误的是( D ) A．酶活力是指酶催化某一化学反应的能力
B．酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应
课 栏
_和蛋白酶 等。工业上生产的果胶酶全部是 复合 酶。国
目 开
产的果胶酶多是利用 黑曲霉 菌种，经深层液体培养发酵后
关 制得，含有 酯酶、水解酶和裂解酶 3 个组分。
2．果胶酶的作用：能够将果胶分解，瓦解植物的细胞壁及胞
间层 ，提高 出汁率 ，并且使果汁变得澄清 。