猪脾转移因子的部分生化和免疫性及其应用
[doc] 猪脾转移因子(PS—TF)对人血淋巴细胞膜流动性的影响
[doc] 猪脾转移因子(PS—TF)对人血淋巴细胞膜流动性的影响猪脾转移因子(PS—TF)对人血淋巴细胞膜流动性的影响示(1)膜流动性定可作为TF作用于淋巴细胞的早期反应指标.(2)膜流动性的变化可能与TF信息传递有关.关键词转移因子淋巴细胞膜藏动性徽粘度TF是白细胞可透析分子的混合物,具有转移迟发型超敏反应,增强某些抗原或分裂素诱导的淋巴细胞转化作用,恢复E玫瑰花结反应,调整外周血T淋巴细胞亚群…等生物学效应TF的化学本质尚不十分确定,一般认为是多肽或寡核糖核苷肽一类亲水性物质.因此,TF难于通过细胞脂质膜这样就提出了TF分子中的信息是如何转导入T淋巴细胞的问题.本文试图通过TF对T淋巴细胞膜流动性的变化为TF作用机理的研究提供一些实验数据材料和方法一,试剂l,6一二苯基一l,3,5一已三烯(DPH)系美国sIGMA公司产品,四氢呋喃为北京化学试剂厂出品.二,仪器日本HITACH公司M850型荧光分光光度计;DHQ—A型多用混合器; LH一586一l型可调恒温循环水装置#水平式离心机等.三,TF用匀浆一透析法制备,最大吸收峰为252nm,260/280比值大于2.6.口,人血淋巴细胞制奋l4例健康人外周血淋巴细胞甩Terasaki的密度梯度分离法制得,淋巴细胞悬液浓度为2×10’/ml. 五,淋巴知胞膜流动性的测定吸取2mmol/LDPH的四氢呋喃液4001~1,加入40ml0.02mol/LTris—HCI(pH8.O)缓冲液中,在快速混合器上蔽光振荡l5min,而后吸取上述混合液2.0ml至另一试管中.向该试管中加入淋巴细胞悬液0.1ml,室温下蔽光振荡15mln后,25?水浴保温30min加入TF(1单位/m1)0.05ml,37?水浴保温,根据加入TF的不同时间(O,l2,3,4,5和6h)分别在M一850型荧光分光光度计上,仍在25? 恒温条件下测定激发波长为360rim,发射波长为430nm的荧光强度,以不加DPH的0.9NaCI溶液在相同条件下的荧光强度为参照体系,经消除杂散光及其它干扰因素,荧光偏振度(P)按下式计算:尸=0_军』其中GIO/oGIo/一I9业0/90’+?90不. 式中Io/o,10/90分别为起偏器光轴垂直放置,检偏器光轴垂直或水平放置时测得的荧光强度#I90/0,I90/90分别为起偏器光轴水平放置,检偏器光轴垂直或水平放置时测得的荧光强度.膜馓粘度(i)按下式计算:i=F结累一,TF作用时问对膜流动性的影响TF作用时间对膜流动性影响的结果见表l.表1淋巴细胞膜DPH荧光偏振庄的变化(N一14) 237由表1可见,加入TF后立即(O时)测定的荧光偏振度与未加TF组无显着差异.其它各时间段测定的荧光偏振度与未加TF组比较相差均非常显着(P<0.001).各组问t检验发现第2,3小时差异不显着,即呈平台表2淋巴细胞膜DPH氍拈度变化(N兰14)趋势.荧光体的偏振度与溶液的牯滞度有关,所以用膜的流动性还可反映细胞膜脂酰基侧链区微粘度的变化.膜的微粘度越低,表明膜流动性越强.微粘度的变化见表2.由表2可见,加入TF后微粘度的变化与TF对膜偏振度的变化呈同一趋势,即加入TF1小时后膜的流动性明显升高,第2,3 小时亦有平台现象.二,pH对膜流动性的影响在5支装有DPH标记的人血淋巴细胞悬液的试管中各加入TF(1单位/m1)0.05ml,再分别加入pH6.5,7.0的0.02mol/L磷酸盐缓冲液和pH7.5,8.0和8.5的0.02mol/LTris—HCI缓冲液2.0ml,37X2保温2小时用上述荧光偏振法测其偏振度,结果见表3.表3pH与夔光倡振庄的是未(N=9)由表3看出,在pH8.o的Tris—HCI缓冲液的条件下,膜流动性较强.三,TF浓度与膜流动性的关未在装有DPH标记的淋巴细脆悬液的5支试管中分别加入不同稀释倍数的TF,37?保温2小时,测其荧光偏振度.10例正常人结果见附图.80100稀释僭教附圈TF稀释倍数与P的关系(n嚣lO)实验表明,随TF稀释倍数增加,TF浓238度降低.膜流动性降低(P增高),反之,膜流动性增强.四,关于氯离子干扰问题卤素化合物是荧光碰撞淬灭剂,其中氯离子对荧光有较强的影响,而TF又是以0+9NaCI为溶剂, 所以测定荧光偏振度必须考虑氯离子的消除或分离问题.为此,我们在对照管中加入与样品管相同剂量的0.9NaCI,进行与样品管平行时间的r值测定.结果看出.对照管的P在1,5小时基本呈一直线,由此证实,带电荷的氯离子因高度水化,很难进入膜脂双层的碳氢相,通透性极低,难通过膜.从另一侧面表明本实验中不同时间r的变化为TF 入膜后引起的改变.讨论DPH是一种多烯矩形碳氢化合物,它的全反构型是唯一能发荧光的构型.它可与细胞膜脂质中的非极性烃链区结合,使其介质粘度增加,而高粘度的介质抑制了全反构型向顺反异构体的转化,使得DPH荧光度增强,通过对DPH在膜质中的荧光偏振度测定可定量,监测,反映膜脂双分子整个脂肪酸链的各个层次的流动性0”.荧光偏振度(P) 越大,膜的流动性越小;r越小,则其流动性越大.细胞膜流动性可以反映膜蛋白生物活性及其与膜脂的相互作用动态,并与细胞生长, 细胞识别,细胞免疫细胞分化等有密切关系.因此细胞膜流动性的变化可能是细胞适应外界环境变化的敏感指标.目前认为TF可能与淋巴细胞膜受体结合,从而参与了细胞介导免疫调节作用.以往研究表明.TF的信息可以通过cAMP,cGMP等第二信使传导系统在细胞内进行表达”,但是TF信息如何通过细胞膜转导入细胞内?本研究结果显示,亲水的TF’能够在1小时对淋巴细胞膜流动性产生显着影响的事实提示;细胞膜流动性的变化与TF信息传递有关.TF可能选择性地与淋巴细胞膜表面的特异受体相结合,激活信息通路,从而将信息转导入细胞.本实验发现,加入TF后第1小时即对淋巴细胞发生作用,即淋巴细胞膜流动性显着增高,膜的有序性降低.这些变化可能与膜蛋白活性改变有关.因此,认为膜流动性测定可作为TF作用于淋巴细胞的早期反应指标.在测定TF对淋巴细胞膜流动性影响时应注意几个问题.?pH:结果表明pH8+0Tris—HCI缓冲液比较稳定,且膜流动性亦较高.?浓度;实验表明,膜流动性随TF浓度增加而增高.但以膜流动性较高的4O倍稀释的TF(0.05单位/m1)较为适宜.?时间:我们注意到在加入TF后第2,3小时,淋巴细胞膜流动性变化呈平台趋势(见表1),也就是说,在加入TF后2,3小时问,膜流动性相对稳定.提示若将膜流动性作为反映TF作用的指标,在此期间测膜偏振度较稳定.我们研究TF与膜流动性的关系只是一个开端,尚有许多问题需要进一步探讨,如TF与膜发生相互作用更明确的时间点,在体实验中TF对淋巴细胞膜作用会发生什么变化?TF影响膜流动性的作用机制等问题还有待深入研究.(本实验所用人血淋巴细胞是由本室路萍讲师提供,在此致谢.)参考文献1.抽炳森,辱.TF的研兜进晨一第四届全国TF学术讨论台论文橐.1o月艟.北京.中国科学技术出版杜.199067—742.毛中兴.苷.第四军医太学199ol?(4).2983.Bhattachar/ya?etaI.A”hjfBiochemlstr]andBio-physics1989I275(2)|3794.Sh~nltlzkyM?etBiochiIrLBio~hysActa19715l483【1)Il335.柄捂慵等.生物化学与生物物理避晨1985l82.676-D~ye:】M.TF盟DLE的研究与临床应用.第一艟.北京l学苑出版杜.1989,833—8402397.黄莉莉,等.第四军医大学1984;5(1)40(1992年3月3日收稿11992年6月29rl晦回)TheEffectofTransferFactorofPigSpleen(PS—TF)onLymphocyteMembraneFluidityofHumanBloodShenXiaojingelal(DepartmentofBiochemistry.MedicalCollegePLA,Beijing100071)AbstractTransfFactor(TF)wasaddedtOthelymphocyteofhumanbloodwithlabel ied1,6-di口heny1—1,3,5一hexatriene(DPH)todetermineits~uore$cen{:epolarizationva1ueatdifferem ~.mes.Itwbundthatthepolarizationof1ymphocytemembranewasremarkablyreducedatthe firsthourwhenTFwasadded.thatis.thefluidityof1ymphocytemembranewasincreased.Inaddition, wedealtwithquestionsofthepH.TFconcentration.timesandtheinterferenc~,wiIhchlorideiononmembr anefluidity.Theresu】tsshowthat(1)ThedeterminationOfmembranef]uidhycanbeusedasthefirstreactio nindexonlymphoeytes.(2)ThechangeOfmembranenuitymayberelatedtothesignaltransferenceofTF.KeywordsTransferFactor.Lymphocyte(),Microvlscoshy,Membranefluidi ty读者?作者?蝻者朱锅华教授t您好我和我的学生经常阅读您主办的《免疫学杂志).我们也曾投了一些稿件在贵刊.为了该列的创立和成长,您付出了巨大的劳动.我想国内免疫学界都会有口皆碑.我们衷心祝愿该刊不断提高,早日跻身于国内和国际核心刊物的行列.正如您所知,科学的国际化愈来血明显,国际间的交流不断增加,因此,我们建议将该刊的外文名张改为(ImmunologicalJournal》或者拉丁文{ActaImmunolog[caSii~iea》(免疫),这样有别于英文的{JournalofImmunology》和现有的国内外其它刊物.康安顺颂贲昆龙(副研究员,灵长类免疫学实验室主任)I992.7.28贲昆龙教授感谢您对《免疫学杂志》的关心和爱护f关于本刊的中外文名称问豚.已有不少前辈和同遭提出异议.叶天星教授曾指出:”外文名称是否改为J.ofImmunology(Chongqing),以便与国外同名杂志区别”I恩师谢步文教授曾指示最好在《免疫学杂志》后加上副标鼯——分子免疫学.这样既突出了本刊的特色,叉可与国内同类杂志相区别.”两位前辈的关切之情,蓝于言表,感激之余顿觉亲切感人.但本刊系经国家新闻出版署和总政宣传部批准出版的国内外发行的刊物.如在刊名后加上重庆字样,等于打上了地方性刊物的印记f再则国家新闻出版署规定巳批准刊物的名称不许随意变更.对两位前辈的肺腑之言迟迟未作复.实难从命之故也f您的建议即刻解开了我的困惑,我们决定将《免疫学杂志)的外文名称从1993年起改~J{Immun.logica1Journal》.1988年本刊复刊词中曾写道,f免疫学杂志》但靠主机动力的牵引和众多团丁的培育.又写过;.有这么多园丁来浇灌,还怕它不开花结果?”您对本刊的培育之情令人难忘.让它载人本刊的发展史上令后人来评说吧f此致笔安! 束锡华92.9.4。
猪转移因子-新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验
猪转移因子-新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验作者:韦建刚来源:《新农村》2011年第15期摘要:猪转移因子-新必妥是从猪体免疫器官中提取的能够转移免疫致敏信息的低分子肽-核苷酸复合物,它能够增强机体的免疫机能,是较好的免疫增强剂。
我们进行了新必妥增强猪瘟免疫效果的试验,分别选取16头21日龄仔猪作为试验组和对照组,试验组注射猪瘟疫苗免疫2头份/头和猪用转移因子新必妥3ml;对照组只注射猪瘟疫苗免疫2头份/头。
在免疫后的7、14、21、28天采血检测抗体,研究猪脾转移因子对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的影响。
结果显示,免疫后7~28 d试验组的免疫效果均显著优于对照组。
表明猪转移因子-新必妥对仔猪体液免疫有一定的增强作用。
关键词:转移因子猪瘟疫苗免疫试验一、前言免疫增强剂也称免疫佐剂,是一类通过非特异性途径提高机体对抗原或微生物特异性反应的物质。
在动物生产业中,为了使动物机体的免疫功能维持平衡,防止病原微生物感染发病,需要增强抗原的免疫原性,多年研究认为,应用生物免疫增强剂是解决免疫功能低下和抗原免疫原性不足的重要途径。
当前已经被研究证实和用于临床具有免疫增强作用的物质不下数十种(如:转移因子、白细胞介素2、干扰素、胸腺素等),其功能各异,有的能非特异性地增强动物机体对抗原的反应,引起细胞免疫和体液免疫应答,有的只能特异的增强机体对某些抗原的免疫应答。
转移因子(Transfer factor简称TF)是T淋巴细胞释放的一种能够转移致敏信息的可透析小分子物质,它能够特异地将供体的细胞免疫信息转移给受体,从而增强受体的免疫功能[1],被誉为T细胞活性的触发剂、细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。
转移因子TF含多种成分,分子量小,无热原,无抗原性,无毒副作用和无种属差异,是一种新型而又安全的免疫制剂[2,3]。
1949年,Lawrence氏首次发现,结核菌素阳性供者的活淋巴细胞能使皮试阴性受者转变为皮试阳性[4]。
猪脾的功效 猪脾的药理及做法
猪脾的功效猪脾的药理及做法对于现在的大多数人来说,猪脾已经不陌生了,随着物质生活的不断的变化,大家对于饮食也是越来越加的重视,越来越多的肉制品出现在大家的餐桌上,但是对于猪脾大家了解多少呢?对于猪脾的功效作用知道多少呢?目录1、猪脾的介绍2、猪脾营养成分3、猪脾的药理作用4、猪脾的功效分类5、猪脾的功效与作用6、猪脾的做法随着生活的不断的变化,大家对于肉制品的需求也在不断的增加,在日常的生活中大家对于饮食的要求可能没有太多的注意,对于猪脾的一些功效大家可能都不是很了解,其实猪脾所含有的一些营养元素还是很丰富的。
猪脾的介绍原料分类畜肉类及制品。
禁忌人群无特殊禁忌人群。
适应人群适宜于小儿脾胃虚弱、饮食不化、食欲减退的人食用。
原料介绍猪科动物猪的脾脏。
营养分析猪脾有益脾胃,助消化之功效;多用于小儿脾胃虚弱、饮食不化、食欲减退。
适宜人群适宜于小儿脾胃虚弱、饮食不化、食欲减退的人食用。
食材文化猪脾味甘,性平。
治脾虚、纳差、腹泻。
猪脾营养成分热量94千卡,硫胺素0.09毫克。
钙1毫克,蛋白质13.2克。
核黄素0.26毫克,镁14毫克。
脂肪3.2克,烟酸0.6毫克。
铁11.3毫克,碳水化合物3.1克。
维生素C0毫克,锰0.02毫克。
膳食纤维0克,维生素E0.33毫克。
锌1.44毫克,维生素A0微克。
胆固醇461毫克,铜0.06毫克。
胡罗卜素1.1微克,钾234毫克。
磷111毫克,视黄醇79.4微克。
钠26.1毫克,硒16.5微克。
猪脾的药理作用1.免疫调节作用猪脾可用来制取转移因子(TF),TF是一种低分子肽一枝耷酸复合物,是介导细胞免疫的重要淋巴因子之一。
能将供体的细胞免疫能力,特异地转移给受体,使受体具有供体的细胞免疫能力。
TF在体外能增强PHA和ConA等对淋巴细胞、NK细胞、K细胞和Mφ的刺激作用,提高淋巴细胞转化率和E玫瑰花结形成率,促进中性粒细胞和单核细胞的趋化作用。
在体内能传递或转移迟发型超敏反应( DTH)。
转移因子研究及临床应用
・’97全国生物技术研讨会优秀论文选登・转移因子研究及临床应用任丽君 刘 悦 范红霞(开封医学科学研究所) 转移因子(transte factor・TF)是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物,具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体非特异性细胞免疫功能等作用,被誉为T细胞活性的触发剂,细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。
由于其分子量小、无毒、无抗原性、不引起过敏反应,优点,是目前应用广泛的增强免疫制剂。
1 转移因子作用机理转移因子自1955年被发现以来,作为具有特异和非特异性免疫活性的细胞调节因子,免疫增强剂已显示出其广阔的应用前景,也吸引着大批科学工作者从事转移因子实验及临床研究,转移因子在各类疾病中的治疗机理的报道也日趋增多,其研究主要集中在下列五个方面: 111 传递特异非特异细胞免疫信息,激活正常淋巴细胞、修复淋巴细胞膜受体的免疫活性。
转移因子传递细胞免疫信息的功能在TF发现初期的经典试验中就得以证实[1],从利用抗原球孢子致敏细胞制备的转移因子,能使受者获得对球孢子菌素发生细胞免疫反应实验到利用人工合成抗原进行的实验,都令人信服地证实转移因子具有传递特异细胞免疫信息的活性。
傅颖缓[2]等采用H32TdR掺入法对肺结核、乙肝、乙肝病毒携带者、过敏性哮喘等疾病的125例患者进行体外淋巴细胞增殖试验,结果表明在适合浓度下TF可激活淋巴细胞,产生淋巴细胞增殖反应促进作用。
徐燕萍[3]等用人、猪、牛三种不同种属转移因子进行淋巴细胞E受体激活试验,发现三种转移因子均能激活淋巴细胞E受体,提高人和猪血淋巴细胞玫瑰花的形成率。
韩敬淑[4]采用胰蛋白酶消化正常人淋巴细胞,然后用转移因子做E花环重建试验证实转移因子在E受体受损情况下具促胰蛋白酶消化的淋巴细胞恢复玫瑰花环形成能力,为临床研究中发现的转移因子对免疫功能低下者疗效尤为显著提供了实验室依据。
同时临床转移因子治疗细胞免疫功能低下疾病后,细胞免疫功能提高与临床治疗疗效正相关的报道也进一步证实TF的激发、修复淋巴细胞膜受体传递免疫信息的作用机理。
转移因子在猪病防治上的应用
转移因子在猪病防治上的应用转移因子是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物,具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体非特异性细胞免疫功能等作用,被誉为T细胞活性的触发剂,细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。
1.作用机理转移因子是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物,具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体非特异性细胞免疫功能等作用,被誉为T细胞活性的触发剂,细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。
2.猪用转移因子在猪病防治中的应用2.1使用方法每100千克体重1毫升,每日1次,连用3次,重症加量。
与干扰素配合使用,效果更佳。
2.2预防转移因子可以将免疫反应活性转移给正常未致敏的免疫细胞,使之成为致敏淋巴细胞,提高细胞的免疫效果,具有免疫增强剂的功能。
因此,在临床上给猪免疫接种疫苗时,加入转移因子,可有效的提高疫苗的免疫效果。
如按免疫程序给猪接种猪瘟弱毒疫苗,加入稀释后的转移因子与疫苗混合肌注,使猪瘟抗体产生快、抗体水平高、抗体持续时间长,明显的增强其疫苗的免疫效果。
当发生猪瘟时,用10~12头份猪瘟弱毒疫苗加转移因子(小猪0.5毫升、大猪1~2毫升)混合肌注,2天即可控制疫情。
给猪接种O型口蹄疫灭活浓缩疫苗时,同时分开肌注转移因子,也可收到增强疫苗免疫的效果。
由于免疫抑制性疾病如蓝耳病、圆环病毒2型感染、伪狂犬病及猪气喘病等抑制动物机体免疫细胞的功能,干扰疫苗的免疫应答,产生免疫麻痹,导致免疫失败。
如在接种疫苗的同时使用转移因子,可激活被免疫抑制性疾病所抑制的免疫细胞,使其恢复免疫功能,可有效地减少免疫抑制与免疫麻痹的发生。
故转移因子可用于预防与治疗猪的免疫抑制性疾病。
仔猪断奶前3天,每头肌注0.2毫升转移因子,断奶时可有效的控制断奶应激,饲料应激、营养应激及环境应激的发生。
2.3治疗转移因子用于治疗猪蓝耳病、圆环病毒2型感染、非典型猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、猪流感、传染性胃肠炎及流行性腹泻等,应配合中药抗病毒制剂及广谱抗生素进行综合治疗,其治疗方法请参照干扰素对病毒性疾病治疗方法实施。
猪转移因子在养猪生产中的使用
2020第6期 93猪 转 移 因 子 在 养 猪 生 产 中 的 使 用万遂如(中国畜牧兽医学会动物传染病学分会,吉林 长春 130122) 中图分类号:S828 文献标志码:A 文章编号:1002-1957(2020)06-0093-04目前,我国在畜牧业生产中开展的兽用抗菌药使用减量化行动,这是全面贯彻落实以人民为中心的发展理念,实施乡村振兴策略和推进农牧业绿色发展,加快畜牧业转型升级,保障畜牧业生产安全、动物性食品安全、公共卫生安全、人民健康与生态环境安全,而采取的一项积极果断的重要举措,具有重大的现实意义。
“减抗”与“限抗”后对养猪生产会有影响吗?我认为不会有大的影响。
在养猪生产中积极选用生物兽药、中兽药制剂以及其它抗生素替代品以替代兽用抗生素应用,不仅不会影响猪只的健康生产,而且更有利于促进养猪生产的持续发展。
本文就猪用转移因子在养猪生产中的使用,作一介绍,仅供养猪场参考。
1 转移因子的定义与特点转移因子(TF)是人或动物的白细胞中具有免疫活性的T淋巴细胞在抗原或丝裂原的刺激下所释放的,一类可透析的小分子多肽和核苷酸复合物,也是一种能够转移免疫致敏信息的淋巴因子。
因为它能介导迟发型超敏反应的转移而称之为转移因子。
转移因子具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体特异性和非特异性细胞免疫功能的作用,同时又含有多种氨基酸、分子量小、无抗原性、无毒副作用、不引起过敏反应、不产生特异性抗体、无种属差异,可跨种系界限应用等特点。
因此,目前转移因子作为一种新型的、安全的免疫增强剂已被广泛应用于人和动物的病毒病、细菌病、寄生虫病与真菌病的防治,效果十分明显。
2 转移因子的分类转移因子根据细胞来源不同可分为不同种类的转移因子,如人转移因子(H-TF)、猪转移因子收稿日期:2020-04-30作者简介:万遂如(1938-),男,江西南昌人,教授,主要从事家畜传染病的教学、科研及临床工作,现任中国畜牧兽医学会动物传染病学分会名誉秘书长.Haemophilus parasuis: generation of an extensive passenger domain repertoire specific for pathogenic strains[J]. J Bacter, 2009, 191: 576-587.[19] Steenbergen S M, Lichtensteiger C A, Caughlan R, et al. Sialicacid metabolism and systemic pasteurellosis[J]. Infect Immun, 2005, 73(3): 1284-1294.[20] Mcvicker J, Tabatabai L, Muriel V S, et al. Haemophilus parasuisnovel proteins hopes for vaccine[J]. Respirat Diseasea Livestock, 2005, 10: 22.[21] 赵倩,汤承,杨发龙,等.副猪嗜血杆菌omp P2基因的结构特征及其与毒力的联系[J].中国科学,2010,40(6):522-532.[22] Zhang N Z, Chu Y F, Gao P C, et al. Immunological identificationand characterization of extracellular serine protease-like protein encoded in a putative espP2 gene of Haemophilus parasuis[J]. J Vet Med Sci, 2012, 74(3): 983-987.[23] Angen O, Oliveira S, Ahrens P, et al. Development of animproved species specific PCR test for detection of Haemophilus parasuis[J]. Vet Microbiol, 2007, 119: 266-276.[24] Howell K J, Peters S E, Wang J, et al. Development of amultiplex PCR assay for rapid molecular serotyping of Haemophilus parasuis[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2015,53: 3812-3821.[25] 江军,姜平,王一成,等.浙江省副猪嗜血杆菌血清型调查及其潜在毒力相关基因分析[J].畜牧与兽医,2016,48(8):1-7.[26] Chao N Van, Tam V T, Zou G, et al. Characterization of serotypesand virulence genes of Haemophilus parasuis isolates from Central Vietnam[J]. Vet Microbiol, 2019, 230: 117-122. [27] Bello-Orti B, Costa-Hurtado M, Martinez-Moliner V, et al.Time course Haemophilus parasuis infection reveals pathological differences between virulent and non-virulent strains in the respiratory tract[J]. Vet.Microbiol, 2014, 170(3): 430-437. [28] 贾爱卿,王贵平,宣华,等.副猪嗜血杆菌毒力因子的研究进展[J].中国动物传染病学报,2015,23(4):72-80. [29] Falkow S. Molecular Koch' s postulates applied to microbialpathogenicity[J]. Rev Infect Dis, 1988, 10(2): S274-S276. [30] Morozumi T, Hiramune T, Kobayashi K, et al. Experimentalinfections of mice and guinea pigs with Haemophilus parasuis[J].Nat Inst Anim Health Q (Tokyo), 1982, 22(1): 23-31.[31] 任梅渗,王印,杨泽晓,等.副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株的构建与鉴定[J].中国兽医科学,2016,46(2):203-209.(编辑:富春妮)养猪 SWINE PRODUCTION2020 94养猪 SWINE PRODUCTION(6)(P-TF)、牛转移因子(B-TF)、羊转移因子(S-TF)、鸡转移因子(C-TF)、鹅转移因子(G-TF)等;从免疫特性上又分为特异性转移因子(STF)和非特异性转移因子(TF)两大类。
转移因子在动物疾病防治中的应用
摘 要:转移因子能提高机体免疫能力,具有多种优点,可用作免疫激活剂和增强剂,防治病毒类疾病,促进机体生长发育,疫苗增强剂,化学药物伴侣,效果显著,具有广泛的应用前景和发展空间。
关键词:转移因子;免疫;应用转移因子(transfer factor,TF)是存在于人和动物白细胞中的可透析小分子物质,能将供体所具有的细胞免疫功能转移给受体,从而提高受体的免疫功能。
1949年,Lawrence首次发现,结核菌素阳性供者的活淋巴细胞能使皮试阴性受者转变为皮试阳性。
以此为依据,Lawrence等1953年将其对应的白细胞可透析物质(DLE)重复实验后,发现DLE具备活淋巴细胞同样的功能,并把引起这种效应的物质称之为“转移因子”。
20世纪七八十年代以来,随着细胞免疫学技术的发展,人们对转移因子的研究逐步深入并活跃起来,对动物转移因子的应用也进行了广泛的探索,并取得了可喜的进展。
1972、1975、1976年相继召开了3次国际性TF专业性会议。
目前研究的主要内容是集中在异种动物特异性TF的研制和在临床上应用、TF的纯化、TF 的活性测定、及临床适应症的研究,动物模型的建立等。
江国托等(2006)以异种动物血液为原料,应用细胞培养技术富集活化白细胞,实现TF工业化规模生产。
在兽医临床实验性治疗中,TF 对病毒性传染病、真菌感染病、免疫缺陷等病的辅助治疗,疗效显著。
20世纪90年代,国外已批准TF应用于动物疾病的防治。
美国已有部分品种的转移因子获准生产并用于动物疫病治疗。
1991年美国FDA批准TF用于猪病的防治。
1996年日本批准用于家禽疾病的防治。
2009年,国内作为一类新兽药批准TF用于鸡和猪的疾病防治。
1 生物学功能TF属多肽类物质,含多种氨基酸,分子量小,无热原,无抗原性,无毒副作用和无种属差异,是一种新型而又安全的免疫制剂。
医学领域里在其基础理论及临床应用等方面的研究均有很多的报道。
TF具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、增强淋巴细胞转化、提高机体免疫功能等作用,该活性产物能够将致敏淋巴细胞的免疫信息传递给未致敏的受体淋巴细胞。
猪脾转移因子的制备及临床应用
猪脾转移因子的制备及临床应用乔宏兴;白静【摘要】本试验采用透析法提取猪脾转移因子(TF),并对其理化性质、生物活性、安全性进行了研究.结果表明,TF可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,体外抑菌结果显示金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌对转移因子敏感,而链球菌不敏感.对猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎分别使用TF(0.2、0.1、0.05 mL/kg)和药物进行治疗,结果表明使用0.1 mL/kg TF的剂量效果较好.%In this experiment,transfer factor was extracted by dialysis from porcine spleen and physics and chemistry nature, biological activity,safety testing was researched, the result showed that TF could enhance the phagocytosis of mouse peritoneal macrophages, TF was sensitive to Staphylococcus, E. Coli, Salmonella, but had little effects on Streptococci. We used TF(0. 2, 0. 1, 0. 05 mL/kg) respectively and drug treatment for porcine epidemic diarrhea and porcine circovirus? The result showed that 0.1 mL/kg use of the effect was better.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)007【总页数】3页(P203-205)【关键词】转移因子;巨噬细胞;抑菌【作者】乔宏兴;白静【作者单位】郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州 450011;郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州 450011【正文语种】中文【中图分类】S852.4转移因子(transfer factor,TF)是从致敏淋巴细胞中提取的一种可溶性不耐热的小分子肽,分子质量为3500~5000,56℃30min可灭活,低温保存数年活性不消失。
【VIP专享】干扰素、转移因子、免疫球蛋白在猪病防治中重要作用
近年来,基因工程生物制剂在畜禽疾病防治上的研究有着突飞猛进的进展,因为无药残、不产生 耐药性、发挥效果快等原因被广泛推广应用,发挥着常规化学药品难以达到的效果,专业从事生物制剂研 究的大连三仪动物药品有限公司研发出的猪用基因工程干扰素、猪用转移因子、排疫肽(猪浓缩免疫球蛋 白)等系列生物工程制剂通过大量临床证实,对猪病具有良好的预防与治疗效果。现简介如下,供有关单 位参考。 一、 猪用干扰素(IFN) 干扰素是机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞产生的具有高活性的多功 能糖蛋白,在正常机体的脾脏、肝脏、肾脏、外周血淋巴细胞和骨髓中都可以检出。通过基因工程手段获 得的猪用干扰素无论是含量或是活性,均高于机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激产生的干扰素。 (一)作用机理 1、抗病毒作用:干扰素作用于动物机体细胞内的干扰素受体,经信号传导等一系列的生物化学过程, 启动基因合成抗病毒蛋白,抑制病毒多肽链的合成,阻断了病毒的繁殖,使病毒不能在动物机体内生长与 繁殖,从而起到抗病毒的作用。 2、免疫调节作用:猪干扰素能增强免疫器官巨噬细胞的吞噬作用和消毁能力,从而达到调节免疫自 稳功能,降低应激反应等目的。 (二)猪用干扰素在猪病防治中的应用 主要用于猪流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒感染、猪瘟、兰耳病、圆环病毒 II 型感染、伪狂犬 病、猪流感、水疱病、细小病毒病等的防治,特别是和猪用转移因子协同使用时,对猪的一些免疫抑制性 疾病的防治有更好的效果。 1、使用方法:每 40 公斤体重肌肉注射 1 毫升,每日 1 次,连用 3 天,重症加量 2~3 倍。与猪用转 移因子联合使用,应用灭菌注射用水或生理盐水稀释,混合后肌肉注射。 2、预防与治疗方案 (1)猪传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒病的治疗:按使用治疗量肌注干扰素,每日 1 次,连 用 3 天,同时肌注复方穿心连注射液或双黄连注射液或痢菌净,每日 1~2 次,连用 4 天,并改饮电解质 多维或口服补液盐 7 天。 (2)兰耳病、圆环病毒 II 型感染、非典型猪瘟、伪狂犬病、细小病毒病、猪流感的治疗:按使用治 疗量肌注干扰素,每日 1 次,连用 3 天,同时配合肌注复方灵芝多糖注射液或奇健(复方黄芪多糖注射液) 或复方柴胡注射液,每公斤体重 0.1 亳升,每日 1 次,连用 3~4 天。 在进行上述治疗中,为了增强疗效,提高治愈率,减少死亡率,应使用转移因子配合治疗,每 100 公 斤体重肌注 1 毫升,每日 1 次,连用 3 天,可使病猪很快康复,并能减少病后僵猪的发生。 (三)使用干扰析综合的能力。过程与方法1.通过观察蚯蚓教的学实难验点,线培形养动观物察和能环力节和动实物验的能主力要;特2征.通。过教对学观方察法到与的教现学象手分段析观与察讨法论、,实对验线法形、动分物组和讨环论节法动教特学征准的备概多括媒,体继课续件培、养活分蚯析蚓、、归硬纳纸、板综、合平的面思玻维璃能、力镊。子情、感烧态杯度、价水值教观1和.通过学理解的蛔1虫.过观适1、察于程3观阅 六蛔寄.内列察读 、虫生出蚯材 让标容生3根常蚓料 学本教活.了 据见身: 生,师的2、解 问的体巩鸟 总看活形作 用蛔 题线的固类 结雌动态业 手虫 自形练与 本雄学、三: 摸对 学动状习人 节蛔生结4、、收 一人 后物和同类 课虫活构请一蚯集 摸体 回并颜步关 重的动、学、蚓鸟 蚯的 答归色学系 点形教生生让在类 蚓危 问纳。习从 并状学理列学平的害 题线蚯四线人 归、意特出四生面体以形蚓、形类 纳大图点常、五观玻存 表及动的鸟请动文 本小引以见引、察璃现 ,预物身类 3学物明 节有言及的、导巩蚯上状 是防的体之生和历 课什根蚯环怎学固蚓和, 干感主是所列环史 学么据蚓节二样生练引牛鸟 燥染要否以举节揭 到不上适动、区回习导皮类 还的特分分蚯动晓 的同节于物让分答。学纸减 是方征节布蚓物起 一,课穴并学蚯课生上少 湿法。?广的教, 些体所居归在生蚓前回运的 润;4泛益学鸟色生纳.靠物完的问答动原 的4蛔,处目类 习和活环.近在成前题蚯的因 ?了虫以。标就 生体的节身其实端并蚓快及 触解寄上知同 物表内特动体结验和总利的慢我 摸蚯生适识人 学有容点物前构并后结用生一国 蚯蚓在于与类 的什,的端中思端线问活样的 蚓人飞技有 基么引进主的的考?形题环吗十 体生行能着 本特出要几变以动,境?大 节活的1密 方征本“特节化下物.让并为珍 近习会形理切 法。课生征有以问的小学引什稀 腹性态解的 。2课物。什游题主.结生出么鸟 面和起结蛔关观题体么戏:要利明蚯?类 处适哪构虫系察:的特的特用确蚓等 ,于些特适。蛔章形殊形征板,这资 是穴疾点于可虫我态结式。书生种料 光居病是寄的们结构,五小物典, 滑生?重生鸟内学构,学、结的型以 还活5要生类部习与.其习巩鸟结的爱 是如原活生结了功颜消固类构线鸟 粗形何因的存构腔能色化练适特形护 糙态预之结的,肠相是系习于点动鸟 ?、防一构现你动适否统。飞都物为结蛔。和状认物应与的行是。主构虫课生却为和”其结的与题、病本理不蛔扁的他构特环以生?8特乐虫形观部特8征境小理三页点观的动位点梳相组等、这;,哪物教相,理适为方引些2鸟,育同师.知应单面导鸟掌类结了;?生识的位学你握日构解2互.。办特生认线益特了通动手征观识形减点它过,抄;察吗动少是们理生报5蛔?物,与的解.参一了虫它和有寄主蛔与份解结们环些生要虫其。蚯构都节已生特对中爱蚓。会动经活征人培鸟与飞物灭相。类养护人吗的绝适这造兴鸟类?主或应节成趣的为要濒的课情关什特临?就危感系么征灭来害教;?;绝学,育,习使。我比学们它生可们理以更解做高养些等成什的良么两好。类卫动生物习。惯根的据重学要生意回义答;的3.情通况过,了给解出蚯课蚓课与题人。类回的答关:系线,形进动行物生和命环科节学动价环值节观动的物教一育、。根教据学蛔重虫点病1.引蛔出虫蛔适虫于这寄种生典生型活的线结形构动和物生。理二特、点设;置2.问蚯题蚓让的学生生活思习考性预和习适。于穴居生活的形态、结构、生理等方面的特征;3.线形动物和环节动物的主要特征。
猪脾转移因子生产工艺的改进
猪脾转移因子生产工艺的改进【摘要】目的对猪脾转移因子的生产工艺进行改进。
方法在原技术基础上,增加了反复冻融工序,于酸性条件下对猪脾转移因子进行提取,比较现行工艺及改进工艺的提取率。
结果改进后的生产工艺提高了转移因子的收率(收率由12.4% 增加至21.2%)、含量及活性。
结论改进后的工艺为利用超滤技术制备高含量制剂提供了基础。
【Abstract】Objective Improve the production craft for pig spleen shift factor. Methods Increase the jelly melts working procedure over and over again for, and in acerbic condition, compare the collect rates with the present productive technology. Results The improve productive technology has improved the collect rates ( from 12.4% to 21.2%) , contents, activity. Conclusion The improve productive technology is also the basis whitch is provided by the over filter techonology in order to preparate the high contents preparation.【Key words】Pig spleen;Shift factor;Production craft;Jelly melts;Improvement脾脏是机体的免疫器官之一。
猪脾转移因子是从猪脾脏中提取的含有12种游离氨基酸及多肽(寡核苷酸)等40多种小分子物质,其等电点为4.48,多肽部分富含天冬氨酸,肽链N末端可能封闭。
猪脾转移因子的制备及临床应用
外医学研究 , 2 0 1 3 ( 4 ) : 2 9 - 3 0
[ 2 ] 了‘ 贤红 .不同保 守方法治 疗未破裂 型异位 妊娠 的疗效 及不 良反
应研究[ J 】 . 临床合理用药杂志 , 2 0 1 3 ( 3 0 ) : 2 3 . [ 3 ] 马倩雯 , 郭荣 .活血 化瘀 消瘕方 联合复方米非 司酮治疗异位妊娠
治疗 中该指标渐渐恢复 , 治疗后期加 以得 当的处理基本可控 。
始终各有不 同。虽然从其 药理学 角度来 说 , 米 非 司酮 完全 可
以做到药物流产 , 但要进行 异位妊娠 的治疗 则需要多大剂 量 和多长疗程 才能 产生较 高 的治疗 总 有效 率 呢?针 对 这一 问 题, 我院进行 了本 次实验性治疗 研究。研究表明 , 对照组在 对 血B . H C G水平没有严格限制而行保守治疗 的情 况下 , 治疗效
的保证 , 有 文 献 资 料 表 明人 类 1日2 0 0 0 ag r 米 非 司 酮 是相 对 安
全的 , 故我们将实验 c组 的剂量 提升到 1日5 0 0 m g 。通过 实 验可 以看出 , 实验 c组在前 一周 内的不 良反应如乏力 、 水肿 、
各期 妊娠均能产生一定 引产效应 , 常被 用于 临床上非手术性 抗早孕治疗口 。随着近年 来 医疗 水平 的发展 , 也逐渐 有人应
摘要 : 本文以健康猪脾为原料, 采用p H值调节- 超滤法制备脾转移因子。物理性状淡黄色、 透明。经紫外光谱检测分析, 猪脾转移因子在 2 5 0- s
1 n m处有峰值 。 且A 2 6 0 / A 2 8 0 > 1 . 9 ; 采用二羟基 甲苯法测定核糖含量 , 采用双缩脲 法测定 多肽含量 ; 并进行 了毒性试验、 体外抑 茵试验 、 T细胞花 环试验、 安 全性试验( 无茵试验 、 过敏试验 、 抗原检验 结果均为 阴性) 。并系统介绍猪 脾转移 因子 的临床应 用, 包括 治疗扁平疣、 小儿支气 管哮喘 、
干扰素、转移因子、免疫球蛋白在猪病防治中重要作用
现代生物工程制剂(猪用干扰素、转移因子、免疫球蛋白)在猪病防治中的应用近年来,基因工程生物制剂在畜禽疾病防治上的研究有着突飞猛进的进展,因为无药残、不产生耐药性、发挥效果快等原因被广泛推广应用,发挥着常规化学药品难以达到的效果,专业从事生物制剂研究的大连三仪动物药品有限公司研发出的猪用基因工程干扰素、猪用转移因子、排疫肽(猪浓缩免疫球蛋白)等系列生物工程制剂通过大量临床证实,对猪病具有良好的预防与治疗效果。
现简介如下,供有关单位参考。
一、猪用干扰素(IFN)干扰素是机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞产生的具有高活性的多功能糖蛋白,在正常机体的脾脏、肝脏、肾脏、外周血淋巴细胞和骨髓中都可以检出。
通过基因工程手段获得的猪用干扰素无论是含量或是活性,均高于机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激产生的干扰素。
(一)作用机理1、抗病毒作用:干扰素作用于动物机体细胞内的干扰素受体,经信号传导等一系列的生物化学过程,启动基因合成抗病毒蛋白,抑制病毒多肽链的合成,阻断了病毒的繁殖,使病毒不能在动物机体内生长与繁殖,从而起到抗病毒的作用。
2、免疫调节作用:猪干扰素能增强免疫器官巨噬细胞的吞噬作用和消毁能力,从而达到调节免疫自稳功能,降低应激反应等目的。
(二)猪用干扰素在猪病防治中的应用主要用于猪流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒感染、猪瘟、兰耳病、圆环病毒II型感染、伪狂犬病、猪流感、水疱病、细小病毒病等的防治,特别是和猪用转移因子协同使用时,对猪的一些免疫抑制性疾病的防治有更好的效果。
1、使用方法:每40公斤体重肌肉注射1毫升,每日1 次,连用3天,重症加量2~3倍。
与猪用转移因子联合使用,应用灭菌注射用水或生理盐水稀释,混合后肌肉注射。
2、预防与治疗方案(1)猪传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒病的治疗:按使用治疗量肌注干扰素,每日1次,连用3天,同时肌注复方穿心连注射液或双黄连注射液或痢菌净,每日1~2次,连用4天,并改饮电解质多维或口服补液盐7天。
切向流过滤制备抗猪繁殖与呼吸综合征猪脾转移因子注射液及其质量评价
切向流过滤制备抗猪繁殖与呼吸综合征猪脾转移因子注射液及其质量评价随着我国规模化养猪业的发展,猪群饲养密度加大、免疫抑制病、饲料霉菌毒素等诸多原因导致猪群免疫功能低下,使猪群抵抗力差、疫苗免疫后不能产生有效保护,甚至免疫失败时有发生,让我国养猪业面临巨大风险。
其中,猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种重要的免疫抑制性疾病,已造成严重的经济损失。
我国主要以疫苗免疫来防控PRRS,显示出一定效果,但至今我国PRRS的防控依然面临巨大压力。
为提高PRRS疫苗免疫效力,PRRS疫苗免疫佐剂的研发是一项重要工作。
转移因子(Transfer Factor,TF)是一种免疫增强佐剂,对于抗体或者抗生素控制不力的传染病及免疫缺陷疾病的预防起到重要作用。
但目前国内兽用TF的生产均为非特异性TF(NonspecificTF,NTF)。
在这种情形下,抗 PRRS 特异性 TF(SpecificTF against PRRS,PRRS-STF)的制造工艺及其质量评价将成为TF研发、生产的方向。
基于此,本研究拟建立逐级切向流过滤技术生产PRRS-STF,对制备过程中的各项技术条件进行优化,为PRRS-STF的大规模生产提供可靠的参考依据,并对应用该工艺制备的PRRS-STF 进行质量评价。
1.PRRS-STF的制备及检验研究本试验从PRRS抗体阳性的免疫健康猪群,选取无牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、PRRS病毒(PRRSV)、口蹄疫病毒(FMDV)、伪狂犬病病毒(PRV)污染的猪脾脏,探索建立了 PRRS-STF的规模化制造工艺和特异性效力检验方法(白细胞粘附抑制法),并对实验室试制的3批等渗PRRS-STF进行了检验。
结果显示,3批PRRS-STF多肽含量、核糖含量、脱E受体法效力检验非特异性效力和白细胞粘附抑制法效力检验特异性效力均较接近,分别达到2.5 mg/mL以上、55 μg/mL以上、12%以上和30%以上;鉴别检验时PRRS-STF的OD260nm/OD280S0nm比值均大于1.9且均在250 nm~260nm处有最大吸收峰,内毒素含量均不超过10EU/mL;蛋白质定性检验、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验(包括BVDV、PPV、CSFV、PCV-2、PRRSV、FMDV、PRV、致细胞病变检验和红细胞吸附性外源病毒检验)结果均为阴性。
一种猪脾转移因子制备方法[发明专利]
专利名称:一种猪脾转移因子制备方法
专利类型:发明专利
发明人:王甜,苏建东,王尚尚,杨燚,田凤菊,夏广欣,李建丽,吴全忠,杨保收,李守军
申请号:CN201310755932.2
申请日:20131230
公开号:CN103705539A
公开日:
20140409
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明提供了一种猪脾转移因子制备方法,该方法包括组织绞碎、均质破碎、微滤、超滤等步骤,本发明采用高压均质机快速破碎细胞,能更有效的保持转移因子活性;此外和现有技术相比本发明的技术方案无需冻融步骤,缩短了生产周期;使用微滤-超滤技术截留适宜分子量的有效成分,获得转移因子原液,相比于传统的透析技术效率更高。
本工艺大大缩短生产周期,适用于规模化生产的需求;用健康猪脾脏为原料,经去脂肪、细胞破碎、微滤、超滤制备的转移因子溶液,为非特异性免疫调节剂,用于增强动物机体免疫功能。
申请人:天津瑞普生物技术股份有限公司
地址:300308 天津市滨海新区空港经济区环河北路76号空港商务园西区W2
国籍:CN
代理机构:天津滨海科纬知识产权代理有限公司
代理人:李莉华
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动物转移因子及其在兽医临床上的应用
动物转移因子及其在兽医临床上的应用
袁朝霞;亓文宝
【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》
【年(卷),期】2005(30)4
【摘要】转移因子(Transfer factor,TF)是白细胞中有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类可透析的小分子肽与核苷酸复合物。
TF带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息,在受者体内能够诱导T细胞转变为特异性致敏淋巴细胞,因此它能够特异地将供者的细胞免疫力被动地转移到受者体内,使受者获得特异性细胞免疫功能,
【总页数】4页(P15-17,33)
【作者】袁朝霞;亓文宝
【作者单位】仲恺农业技术学院,广东,广州,510225;华南农业大学兽医学院,广东,广州,510642
【正文语种】中文
【中图分类】S852.33+1
【相关文献】
1.转移因子在兽医临床上的初步试用 [J], 周富荣;吕宝珊;王建国;
2.转移因子和重组转移因子在防治动物疾病中的应用研究 [J], 魏云强
3.正常猪脾脏转移因子(TFd)的特性及其在兽医临床上的应用 [J], 周富荣
4.超声测定动物骨质密度在兽医临床上应用 [J], 熊道焕
5.中兽医在动物疫病预防临床上的运用 [J], 袁菊
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