实验食品中游离氨基酸的测定

4.结果计算
氨基酸（g/100mL）=
C×K ×100
V×106
式中： C——从标准曲线上查得的氨基酸含量，μg K——稀释倍数 V——测定时取样量，mL
5. 注意事项 （1）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄 色，最大吸收波长在440nm处。 （2）有颜色的样品必需经脱色处理至无色 后方可使用。
实验十一：食品中游离氨基酸的测定 （茚三酮法）
1．实验原Fra Baidu bibliotek 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽
、氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚 三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在 570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基 酸含量成正比，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤：
（3）样品测定
管号
8
9 10 11
样品溶液/mL
0 0.5 0.5 0.5
水/mL 磷酸盐缓冲液/mL
1.6 1.1 1.1 1.1 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4
按上表加样后混匀，按标准曲线的步骤进行实验，在相同条件下测 定样品的吸光度，并在标准曲线上查出氨基酸含量微克数。
水/mL
1.6 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6
磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
氨基酸含量/μg 0 100 120 140 160 180 200
各种试剂加到比色管后混匀，于电炉上沸水浴15min，取出冷却至 室温后加水至10mL刻度线，静置15min后，在570nm处测定吸光度 ，以氨基酸含量(μg)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2. 实验材料、仪器与试剂 材料：酱油 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，
移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸
氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。
试剂配制：（P64） （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04的磷酸缓冲液 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮
氨酸标准溶液。
3. 实验步骤 （1）样品的处理：准确吸取0.5mL酱油于 100mL烧杯中，加入5g活性炭和50mL蒸馏 水，置于80℃水浴锅中，保持半小时后过滤 ，用蒸馏水将滤渣清洗数遍，收集滤液于 100mL容量瓶中，定容至刻线，摇匀备用。
（2）标准曲线的绘制
管号
1 2 3 4 56 7
氨基酸标准溶液/mL 0 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0