大肠菌群平板计数法(建议收藏)
大肠菌群平板计数法检验流程
大肠菌群平板计数法检验流程
朋友！今天咱来唠唠这大肠菌群平板计数法的检验流程。
先说准备工作哈，这可重要啦！得把那些培养皿、移液器啥的都准备好。
我跟你说，我刚开始学的时候，就老忘这忘那的，被师傅好一顿骂！
然后呢，就是取样。
这取样可得小心，千万别弄撒了，不然又得重来，那可烦死个人！我记得有一次，我手一抖，样本撒了一地，唉，当时我那个心呐，哇凉哇凉的。
接下来就是接种啦！这一步可得仔细，就跟绣花似的。
我记得好像是用移液器吸取一定量的样品，加到培养皿里。
不过也可能记错喽，嘿你可得自己多注意。
培养的时候，你就等着吧。
这期间你可别着急，着急也没用。
我以前就老着急，总想着快点出结果，结果啥也没弄好。
等培养好了，就开始计数啦！这时候你得瞪大眼睛，一个一个数清楚。
要是数错了，那可就白忙活了。
哦，对了！之前说的取样，一定要保证无菌操作，不然结果就不准啦！这可是关键中的关键。
我跟你讲，这检验流程啊，就得多练。
我刚开始也是笨手笨脚的，现在不也熟练了嘛！
要是你在操作过程中遇到啥问题，别慌，慢慢琢磨，或者来问我也行。
我这又扯远啦，反正按照这步骤来，多练几次，你肯定能掌握！怎么样，朋友，加油干吧！。
大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
大肠菌群平板计数法电子教案
精品文档
精品文档大肠菌群平板计数法
一、操作步骤
1.样品的稀释
2.选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。
同时取1mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
3.及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
4.平板菌落数的选择
选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
5.证实试验
从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
6.大肠菌群平板计数的报告
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：
100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。
大肠菌群平板计数法实验报告
大肠菌群平板计数法实验报告
一、实验目的
本实验旨在通过大肠菌群平板计数法，检测两种不同类型的样品，分
别研究其大肠菌群的数量。
二、实验原理
大肠菌群平板计数法是一种测定复合微生物群落中不同细菌种群数量
的方法，通过在培养基上培养细菌分离特定细菌和其他微生物，然后在培
养基表面形成菌落，把形成的菌落数目统计出来就可以测定某一种细菌的
数量。
三、实验材料
1.无菌培养环：用于现场取样，主要成分是聚丙烯，尺寸为20
cm×40 cm；
2.筛选液：用于本实验的筛选液是根据微生物学原理，采用等量的乳
酸盐，氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成的液体，用于筛选出大肠菌群；
3.抗生素优势培养基：用于本实验，培养基由甘露醇、尿素、抗生素
等制备而成，用于培养出大肠菌群；
4.保存液：用于本实验的液体是根据微生物学原理，采用等量的乳酸盐、氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成，用于保存细菌；
5.透明细菌示踪液：用于本实验，示踪液由甘露醇、尿素、抗生素等
有机物质制备而成，用于追踪细菌的繁殖情况。
四、实验步骤
1.采样：用无菌环把样品和筛选液放在瓶中，搅拌均匀，然后加入适量。
大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
饮料—大肠菌群的测定—平板计数法
3.3 乳糖发酵管 3.3.1 成分
蛋白胨
20g
乳糖
10g
0.04％溴甲酚紫水溶液
25mL
蒸馏水 3.3.2 制法
1000mL
将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正 pH7.4,加入指示剂,分装 3mL,并放入一个小倒管,115℃高
压灭菌 15min。
3.4 EC 肉汤
3.4.1 成分
1
胰蛋白胨
20g
3 号胆盐(或混合胆盐)
匀稀释液。
5.2.2 用 1 mL 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1 mL，注入含有 9 mL 灭菌生理盐水或其他稀释
液的试管内，振摇试管混匀，做成 1：100 的稀释液。
5.1.3 另取 1 mL 灭菌吸管，按上条操作依次做 10 倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用 1
支 1 mL 灭菌吸管。
5.1.4 根据饮料卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。
FSPYL026 饮料 大肠菌群的测定 平板计数法
F_SP＿ YL＿026
饮料—大肠菌群的测定—平板计数法
1 范围 本方法采用平板计数法测定饮料中的大肠菌群。
本方法适用于饮料中大肠菌群的测定，饮料中大肠菌群数系以 １００ ｍＬ（ｇ）检样内大肠
菌群最可能数（ＭＰＮ）表示。
2 原理
饮料检样经处理，在需氧及兼性厌氧、37℃条件下培养，通过计数报告检样中大肠菌群 最可能数。大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
3.2.1 成分
蛋白胨
10g
乳糖
10g
磷酸氢二钾
2g
琼脂
17g
2%伊红 Y 溶液
20mL
大肠菌群平板计数法方法学验证报告
大肠菌群平板计数法方法学验证报告实验步骤如下：1.准备培养基：将大肠杆菌选择培养基加入培养基瓶中，并用自来水洗净外面的杂质，随后用蒸馏水冲洗内表面。
将瓶口用无菌布覆盖，用锡箔纸包好，然后高温高压灭菌，储存在无菌环境中备用。
2.取少量待检样品：将待检食品样品（例如牛奶、蔬菜、饮用水等）取一适量，在无菌的条件下进行操作。
先将样品摇匀使其均匀分布，然后用无菌吸管取1毫升待检样品。
3.稀释样品：用无菌吸管将1毫升待检样品转移至无菌试管中，再向试管分别加入9毫升无菌生理盐水，摇匀使其均匀混合。
此时的样品为10倍稀释样品，将试管中的液体倒入下一个试管中，再加入9毫升无菌生理盐水，以此类推，制备出一系列浓度递减的稀释样品。
4.接种培养基：将每个稀释样品分别倒入标记好的平板培养基上，倒入后轻轻晃动，使其均匀分布在培养基上，然后在无菌工作台上用无菌铂丝铲取纱球大小的韧带状菌液涂抹在固体培养基表面，使细菌均匀生长。
5.培养和计数：将培养基板反面朝上，放入37°C恒温培养箱中进行培养，培养的时间一般为24小时。
待培养结束后，观察培养基表面是否出现典型的大肠菌群菌落。
使用菌落计数器对每个平板上的菌落进行计数。
根据以上实验步骤进行大肠菌群平板计数法的实验后，得出以下结论：1.适用性验证：通过本实验，我们可以验证大肠菌群平板计数法的适用性。
在我们的实验中，使用该方法对不同类型的食品样品进行了检测，并得出了相应的菌落计数。
这表明该方法适用于不同类型的样品，可以准确地测定大肠菌群数量。
2.优点：大肠菌群平板计数法具有以下优点：简单易行，操作方便；可定量测定大肠菌群数量，结果可靠；适用于不同类型的食品样品。
3.缺点：大肠菌群平板计数法也存在一些局限性：菌落计数需要较长时间，一般需要24小时才能观察到菌落；该方法只能测定培养基中能够生长的细菌，无法对其他微生物进行定量测定。
综上所述，大肠菌群平板计数法是一种能够准确测定大肠菌群数量的方法。
【检测】关于大肠菌群平板计数法的一些实践经验分享!
【检测】关于大肠菌群平板计数法的一些实践经验分享!一、VRBA培养相关问题1.所用器皿是否需要灭菌？答：不需要。
配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留。
煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般常用的卫生纸（软纸）覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。
在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。
2.如何保持“煮沸2min”？答：可以用电磁炉或电热板进行加热煮沸，在该培养基即将煮沸时调低温度。
实际操作时，不需要严格按照此要求进行，加热煮沸数秒即可。
原因：本培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。
3.若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？答：不可以。
4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。
且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌（即培养基未完全熔融就会发生喷涌现象）。
4.倾注完成后是否需要“覆盖一层”？如何覆盖？答：一般情况下不需要覆盖。
在实际操作过程中，若检验员初次接触该食品（或食品品类），则有必要在倾注培养基后再覆盖一层（原因是不清楚该样品是否会发生蔓延）。
而如此往复测试几次后，若该样品或食品品类均不存在蔓延现象，则以后的实验中都不需要进行覆盖。
若重复多次测试后都有蔓延现象，则以后的检验中最好都进行覆盖，最好是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（“一层”是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。
二、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？答：不要去管什么是大肠菌群的典型形态，建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验非常简单，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心了。
大肠菌群平板计数法标准号
大肠菌群平板计数法标准号大肠菌群平板计数法是指在实验室条件下，通过将待检样品分散在含有特定培养基的平板上，利用培养基对大肠菌群产生的特异性反应，以及对大肠菌群可生长的特定条件进行培养和计数，从而评估样品中大肠菌群的数量。
该方法已被广泛应用于食品、环境和医疗卫生等领域的微生物检测。
大肠菌群平板计数法标准号是《食品微生物学通则》GB 4789.3-2016。
该标准是由中国国家标准化管理委员会于2016年发布的，是用于食品微生物检测的基本规范。
根据该标准，大肠菌群平板计数法的操作流程主要包括样品制备、平板培养、菌落计数和结果表达。
下面将对每个步骤进行详细介绍。
首先，样品制备是指将待检样品进行预处理，以提高大肠菌群的检测效果。
根据不同样品的特点，可以采取不同的处理方法，如加入适量的缓冲液进行搅拌均匀、加热杀菌和稀释等。
此外，还需要注意样品制备过程中的卫生要求，以防止交叉污染。
然后，将样品均匀地分散在含有选择性培养基的平板上。
选择性培养基可以抑制非大肠菌群的生长，从而增加大肠菌群在平板上的菌落形成，方便后续的计数。
常用的选择性培养基有MacConkey琼脂、立兰肠杆菌培养基等。
接下来，将含有样品的平板置于适宜的温度和湿度条件下进行培养。
大肠菌群在一定的温度范围内可迅速繁殖，通常将培养温度控制在37摄氏度。
此外，还需要为培养提供适当的湿度，可以通过在培养箱内放置含水的培养皿或湿度控制器来实现。
菌落计数是大肠菌群平板计数法的核心步骤。
通常，在培养一定时间后，将平板上的菌落进行计数。
菌落计数可以手工进行，也可以使用计数仪来实现。
在进行计数时，需要注意区分出不同的菌落，并排除其他非大肠菌群的菌落。
最后，根据菌落计数的结果，可根据标准对样品中大肠菌群的数量进行评估。
通常，大肠菌群的计数结果以CFU/g（或CFU/mL）表示，即每克（或每毫升）样品中大肠菌群的菌落数。
需要注意的是，大肠菌群平板计数法在应用中存在一定的局限性。
大肠杆菌平板计数法计算公式
大肠杆菌平板计数法计算公式嘿，咱来聊聊大肠杆菌平板计数法的计算公式。
你知道吗，在咱们日常生活中，大肠杆菌其实无处不在。
就像有一次，我去菜市场买菜，看到一个卖菜的大妈，她的菜摊看起来倒是挺干净的，可我就多了个心眼儿，想到了大肠杆菌这玩意儿。
咱先来说说大肠杆菌平板计数法的原理哈。
简单说，就是通过培养大肠杆菌，然后数个数来估算样品中大肠杆菌的数量。
这就好比数数一群调皮的小孩子，得一个一个地数清楚。
那计算公式是啥呢？这就得提到几个关键的概念啦。
比如说，我们要先确定稀释倍数。
就像把一杯浓糖水不断加水稀释，直到甜度合适。
同样的，对样品中的大肠杆菌也得进行合适的稀释。
假设我们做了一系列稀释，然后在不同稀释度的平板上培养出了菌落。
这里面就有个关键的东西叫“平均菌落数”。
可别小看这个数，算起来也有讲究。
比如说，一个平板上的菌落密密麻麻的，数都数不清，那这可不行，得重新做。
要是菌落太少，也不准确。
那具体怎么算平均菌落数呢？咱得把同一稀释度的几个平板上的菌落数加起来，然后除以平板的个数。
比如说，同一稀释度有三个平板，菌落数分别是 50、60 和 70，那平均菌落数就是（50 + 60 + 70）÷ 3 =60 啦。
然后呢，根据稀释倍数，就能算出样品中大肠杆菌的数量。
比如说，稀释倍数是 100 倍，平均菌落数是 60 个，那每毫升样品中的大肠杆菌数就是 60×100 = 6000 个。
再给您举个例子哈。
有一回我在实验室做实验，就碰到了一个挺棘手的情况。
按照正常步骤做了稀释和培养，结果有一个稀释度的平板上菌落长得奇奇怪怪的，有的地方密，有的地方稀。
这可把我愁坏了，琢磨了半天，发现是在稀释的时候没摇匀。
后来重新认真操作，才得到了靠谱的结果。
总之啊，大肠杆菌平板计数法的计算公式虽然看起来有点复杂，但只要咱们搞清楚每个步骤的原理，认真操作，就不会出错。
这就跟咱们做数学题一样，一步一步来，总能算出正确答案。
您要是在实际操作中遇到啥问题，别着急，多琢磨琢磨，肯定能搞定！。
大肠菌群检验原始记录-平板计数法5样
10-1
24 26 10
10-2
3
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
6
稀释度
第一稀释度 第二稀释度 第三稀释度
样
品 VRBA 疑似大肠菌群菌落数
5
接种 BGLB 管数
10-1
20 22 10
10-2
1
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
7
VRBA 空白（仅 VRBA）
-
-
空 白
稀释液空白（稀释液+VRBA）
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材： 天平：( xxxx) 培养箱: ( xxxx)
洁净工作台: (xxxx)
培养基及试剂： 结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）： xxxx 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）： xxxx 磷酸盐缓冲液：xxxx 0.1mol/L 氢氧化钠：
配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期：2022/xx/xx
实验过程： 1.样品处理和稀释： 1.1 如需要，使用 0.1mol/L 氢氧化钠或 0.1mol/L 盐酸将样品调整 pH 在 6.5~7.5 之间。 1.2 制备样品稀释液
根据样品状态，无菌操作，称取/吸管吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混 匀），制成 1:10 样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。 2.接种 VRBA
-
-
BGLB 空白（仅 BGLB）
-
-
大肠菌群平板计数法计算公式
大肠菌群平板计数法计算公式
构建类肠杆菌群计数技术是衡量卫生水中大肠杆菌群的一个重要手段。
大肠杆菌群平板计数法是大肠杆菌群计数法中一种比较常见的技术，主要是利用培养基的抗血清特异性效能吸附技术，将水样中大肠杆菌群从环境介质中捕获、纯净、总数计算。
其计数法主要有以下几步：
（1）采样：从相应环境或样品中采集所需细菌样本；
（2）分离：用特定培养基培养，在合适的条件下，将沾染大肠杆菌群的样本分离出来；
（3）分析：采用抗血清特异性吸附技术，将纯化的大肠杆菌群模拟出来；
（4）计数：合理设置计数条件，将模拟出来的大肠杆菌群数目计算出来，得出大肠杆菌群数量。
大肠杆菌群平板计数法可以用于解决卫生水建筑中节水管道、游泳池和地下水渠等设备的安装的卫生检查问题，因为这类设备的渗漏可能会引起重要的公共卫生及环境污染问题。
由此可见，大肠杆菌群平板计数法也给建筑的正常使用 and 经营提供了较为准确的分析依据。
大肠杆菌群平板计数法是测定建筑环境中大肠杆菌群的一种有效手段，它为建筑安装和使用提供了较高精度的细菌数量测定结果，可以有效预防建筑环境传染疾病的发生。
这种技术可以广泛用于水处理厂、公共卫生毒理实验室、游泳池、室内健身中心、精湛的安装建筑市场以及大型建筑工程布置。
第一法大肠菌群mpn计数
第二法大肠菌群平板计数8、操作步骤、样品的稀释按进行。
、平板计数8.2.1、选取2 个～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml。
同时分别取1ml 生理盐水加人两个无菌平皿作空白对照。
、及时将15 mL-20ml冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mlVRBA 覆盖平板表层。
翻转平板，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。
、平板菌落数的选择选取菌落数在30-150 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为 mm 或更大。
、证实试验从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36℃±1℃ 培养24h-48h ，观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
、大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。
第三法大肠菌群PetrifilmTM 测试片法10、操作步骤样品的稀释按进行。
、测定10.2.1、样品接种及培养将待检样品选取2 个-3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两张测试片。
将PetrifilmTM 大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1ml样液垂直滴加在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下。
把压板（平面底朝下）放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。
拿起压板，静置至少1 min 以使培养基凝固。
将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，36℃±1℃ 培养24h±2h 。
、判读培养24h±Zh 后应立即计数，可目测或用标准菌落计数器、放大镜或PetrifilmTM 自动判读仪来计数。
大肠菌群平板计数法能力验证技术方案
大肠菌群平板计数法能力验证技术方案大肠菌群平板计数法是一种常用于测定大肠菌群数量的方法，广泛应用于食品卫生、环境监测以及临床诊断中。
为了保证测试结果的准确可靠，需要进行能力验证。
本文将从样品准备、实验操作、数据处理等方面，提出一种能力验证技术方案。
一、样品准备1.选择适当的样品能力验证样品应具备与真实样品类似的特性，如食品、水样或环境样品等。
可以选择一些常见的食品样品，如牛奶、肉类制品或蔬菜水果。
2.随机抽样从不同批次、不同地点或不同时间采样，确保样品的代表性。
每个样品取样量应根据实际需要确定，在保证结果准确性的前提下尽量减少消耗。
3.样品处理根据实验要求，对样品进行适当的预处理，如均质、稀释等操作。
确保样品中目标细菌的分布均匀，并避免细菌的损失或增加。
二、实验操作1.培养基准备根据大肠菌群的需求，配制适当的培养基。
常用的培养基包括发酵碱菜水平板、郑森琴水平板等。
确保培养基的质量和成分符合实验要求。
2.平板制备3.样品接种取一定量的样品，如10ml，经过适当的处理后，使用无菌吸管均匀涂布在培养基表面。
确保接种量适当，不过多或不过少。
4.孵育条件根据大肠菌群的生长要求，设置适当的孵育温度和时间。
通常情况下，37摄氏度下孵育24小时。
5.结算方法将孵育后的培养皿取出，使用显微镜观察和计数。
根据培养皿上大肠菌群的形状和颜色，判断其是否为目标菌群，并计数。
三、数据处理1.统计计数将每个培养皿上的大肠菌群数量进行统计，得到一个基本的计数值。
对于不同的样品，可以采用平均数、中位数、标准差等指标进行数据描述。
2.结果评估将实验得到的计数结果与参考值进行比较，评估实验的准确度和可靠性。
可以使用误差分析、相关系数等统计方法进行评估。
3.不确定度分析通过不确定度分析，评估实验结果的可靠程度。
可以根据具体情况选择不确定度分析方法，如C表示法、扩展不确定度法等。
4.结果报告将实验结果整理成报告，包括样品信息、实验方法、计数结果、评估结果和不确定度分析等内容。
大肠菌群平板计数法
大肠菌群平板计数法
一、操作步骤
1.样品的稀释
2.选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。
同时取1mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
3.及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
4.平板菌落数的选择
选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
5.证实试验
从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
6.大肠菌群平板计数的报告
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：
100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）
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大肠菌群检测MPN法与平板计数法比较
大肠菌群检测MPN法与平板计数法比较！GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中规定了大肠菌群计数的MPN法与平板计数法，那这两种方法怎么选择以及有什么区别呢？今天小编就跟大家安利一下~二者范围不同：GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》范围中规定：“本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。
”这里所说的含量高低通常以100CFU为准，即含量低于100CFU采用MPN 法，含量高于100CFU采用CFU法。
概念不同：•MPN（most probable number）法：即最近似数法，也称为最可能数法，是食品检验中常用的方法。
1915年，McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法，这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。
•平板计数法 (colony forming units）：CFU 即菌落形成单位，样品经过处理培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，以CFU/ml或CFU/g报告之。
•滤膜法（membrane filter method）：将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的菌落总数。
•菌落：是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
原理不同：•MPN法：利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
因为细菌在样本内的分布是随机的，所以检测细菌时，可应用概率理论计算菌数，实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际菌落数，实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。
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大肠菌群平板计数法
一、操作步骤
1.样品的稀释
2。
选取2个~3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL.同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
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3.及时将15 mL~20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀,待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。
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4。
平板菌落数的选择
选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落.典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
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5。
证实试验
从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内,36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h,观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性..。
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6.大肠菌群平板计数的报告
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8。
3中计数的平板菌落数,再乘以稀释倍数，即为每g（mL)样品中大肠菌群数。
例：10—4样品稀释液1mL,在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10
个接种BGLB肉汤管,证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g(mL)=6。
0×105CFU/g（mL)。
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