HE的染色基本原理

有些染料直接对组织染色时，由于染料 与组织间的作用力弱，有时甚至无作用，因 此组织着色很浅，甚至不着色，我们必须将 这些染料先与媒染剂结合生成色淀的染料称 为媒染染料（此类染料多为天染染料，如苏 木精、卡红）。
六、媒染剂
Fra Baidu bibliotek
凡由于和组织及染料结合，生成色淀， 并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧 酸等称为媒染剂。
• 粉红色
• 鲜红
弹力纤 维
胞浆嗜 酸性颗
粒
• 桔红
红血球
胶原纤 维
• 桔粉红
质量好HE具备条件
1. 细胞核与细胞浆蓝红相映，鲜艳亮丽； 2. 胞核鲜明、核膜、核染色质颗粒均清晰可见； 3. 组织或一般结构特点及假物质成分均能显示出来。
三、HE染色中二甲苯、酒精和水洗的作用
1. 二甲苯的作用： 二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染
2. 切片方面原因
①切片过厚； ②薄片水温低，附贴不牢或附贴下含气泡； ③烤片时间长或温度高，蛋白甘油没能发挥贴附作用； ④载玻片清洗的不洁净，含有油赋或混入尘污导脏东西。
3. 染色过程中的原因
①脱蜡时未经自高至低的各级酒精的缓冲调解逐渐加水， 用水急冲，振荡过甚；
②染液或试剂的酸碱度不适宜或停留时间较久，如HE 返蓝所用碱性溶液过大时易引起脱落；
间接染色过程中，媒染染料+媒染剂结合 =色淀+组织结合
媒染剂+组织然后 再与染料结合，生成 组织——媒染剂——染料结合物，从而使组织 着色
七、促染剂
指只增强染料的染色能力，但不参与 染色反应的一类物质。常见：伊红染液中冰 醋酸。
八、染色过程中易出现的问题及原因
（一）染色过程中易出现问题及注意事项
四、分化和蓝化作用
1. 分化作用
苏木素染色后，用水洗去未结合在切片中染 液，但是对细胞核中结合过多的染料和细胞浆 中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去， 才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个 过程称为染色的分化作用。
2.蓝化作用
分化之后苏木精在酸性条件下处红色离子 状态，在碱性条件下则处于蓝色离子状态，而 呈蓝色，所以分化之后用水洗去酸而中止分化， 而用弱碱水使苏木素染上细胞核变呈蓝色，称 蓝化作用，一般分用自来水浸洗变蓝，也可用 稀氨水或温水。
③染液或用具不洁净。
（三）染色不均
①组织取材固定不当，如：组织取材过大或过 厚，所用固定液浓度不对时，不能将组织固定 透或固定不完全； ②切片厚薄不均或切片时出现横纹也能引起不 均； ③染色处理不当引起染色不均的原因
a. 组织脱蜡不彻底； 原因：试剂陈旧，温度低
b. 染液试剂量少时； c. 分化剂浓度大，分化过强；
HE的染色基本原理
浙江省肿瘤医院病理科 李筠
一、细胞核的染色原理
细胞核内的染色质主要成份，去氧核糖核酸 （DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基 向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精 碱性染料以离子键或氢键结合而被染色，苏木精在碱性 溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。结果：细胞核 呈蓝色，软骨基质，钙盐颗粒呈深蓝，粘液呈灰蓝。
原因：进行急速分化或在分化后没有迅速入水，使 之终止分化均可造成染色不均 d. 染色或分化时、组织切片上有气泡时，则气泡内的 组织可能染不上色或没分化着，使之染色不均。
灰蓝色
粘粘液液
细细胞胞核核
蓝色
软软骨骨基基质质 钙钙盐盐颗颗粒粒
深 蓝 色
二、细胞浆的染色原理
细胞浆内主要成份是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与 PH值有密切关系，当PH调到蛋白质等电点4.7~5.0时，胞浆对外不 显电性，同时酸或碱性染粒不易染色，当PH调剂6~8时，大于蛋白 质的等电点时，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电 荷的染料染色，同时胞核也被染色，核和胞浆难以区分（阴离子） 的染料染色。伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负 电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阴离子）结合而使细胞浆 染色。结果：细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被 染成不同程度的红色或粉红色，如：胞浆内嗜酸性颗粒呈仅先强的 鲜红，胶原纤维呈桔粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈桔红 色；与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
液可以进入细胞和组织，因此，石蜡的存在 妨碍水和染料进入细胞，染色后二甲苯起透 明切片的作用，以利于光线的透过。
2. 酒精的作用： 酒精用于苏木素前，由高→低是为了洗脱用
于脱蜡的二甲苯使水能进入细胞和组织中，伊红 染色以后酒精由低→高逐渐脱去组织中水份，为 二甲苯进入细胞创造条件，否则组织切片透明度 达不到光学显微镜观察时透光度的要求，在显微 镜下不可能清晰的细胞和组织结构。
1. 在进行染色操作前，进一步了解组织来源， 固定、脱水、透明、包埋、切片的方法，因为 这些处理因素对组织染色的效果都有直接影响， 特别是固定液和固定时间与染色效果有特别重 要的关系。
2. 染液的配制 时间：配制后染液不能久存再用 PH：如显示酸性粘液物质 配制方法及条件皆可直接影响染色效果 如配制Hannis明矾苏木素染液加入氧化汞 温度过高或温度过低，从而影响染色
苏木素、伊红染色方法 （自动染色机程序）
二甲苯 5分钟
二甲苯 5分钟
二甲苯 3分钟
无水乙醇 5分钟
无水乙醇 3分钟
无水乙醇 3分钟
水洗
5分钟
苏木素 13分钟
水洗
3分钟
伊红
8秒
水洗
2秒
85%酒精 5秒
95%酒精 5秒
无水乙醇 3分钟
无水乙醇 5分钟
无水乙醇 5分钟
正丁醇 5分钟
二甲苯 5分钟
五、媒染染料
3. 水洗的作用： 在脱蜡酒精之后用水洗切片，使切片进入
水，才能使苏木精染液进入细胞核中，使细胞 核染色。
水洗目的：①切片清洁，提高切片质量；②切片着色 均匀；③防止不清洁的切片污染染液，保持染液的清 洁和纯度。 染色之后的水洗：为洗去未与切片结合染液 分化以后的水洗：中止分化作用 伊红染色后的水洗：洗去未结合的染液，以防止大量 伊红进入染缸
3. 保持染色剂和各种用具的清洁 4. 染色时间问题：与染液新旧、温度、不同 固定液固定时间长短
（二）切片脱落
1. 由于组织处理不当所致
①组织本身的原因，如凝血块、血栓、干涸成过硬的组 织及组织碎屑等；
②组织透明不足，石蜡不能浸透，切片时免强切出的片 子脱蜡时大收缩，入水或染液后易脱落；
③组织脱水透明过度，浸蜡时间长或温度太高，引起组 织收缩硬脆，不易切片完整切片。