扬州大学《现代分子生物学》5分子生物学研究方法
畜牧学专业《现代分子生物学》课程
畜牧兽医科技信息2022年第11期《现代分子生物学》是从分子水平研究生命本质的一门生物学前沿学科。
它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息传递中的作用和功能为主要研究内容，是当前生命科学中发展最快并正成为与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。
通过本课程的学习有利于学生掌握遗传信息的传递和表达机制，了解这门学科发展过程中重大发现的实验设计过程以及对遗传物质进行操作的基本实验技术，有利于培养和训练学生探索生命的奥秘，对学生的科学研究性思维和探索生命及自然畜牧学专业《现代分子生物学》课程教学探讨胡序明，陈世豪★（扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009）DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2022.11.009摘要：现代分子生物学是一门前沿性强、发展迅速、对生命科学领域各分支科学具有广泛和深入影响的学科。
为了使学生能够发现和认识生命科学领域中的分子生物学现象，具备一定的剖析能力，本文结合畜牧学专业现代分子生物学的教学实践，从教师队伍结构、课程教学内容以及教学方法和考核方法三个方面进行了初步探讨。
关键词：分子生物学；畜牧学；教学模式；教学考核基金项目：扬州大学教改课题（YZUJX2020—C16）作者简介：胡序明（1986~），重庆奉节人，博士，助理研究员，从事分子生物学技术研究。
★通信作者能，以及观察问题、分析问题和解决问题的能力，从而能够较全面地提高学生的基本素质。
通过实验技能考核（表1），可帮助学生形成科学概念、理解和巩固理论知识，正确掌握实验的基本方法和基本技能。
4结语微生物在自然中分布广泛，种类繁多，需借助仪器才能观察到微生物的形态和大小。
有益微生物对医药、工业、农业、畜牧业和科学研究产生重大影响；而有害微生物对人类、动物和植物致病，甚至危及生命。
为了让学生对微生物有初步的认识，需进行实验教学改革，通过实验讲解、实验操作，使学生根据微生物的培养特征、形态、特殊结构、生化特性及免疫实验鉴定微生物，学会应用微生物快速鉴定和自动化分析方法区别多种微生物，培养学生在实践中综合运用所学的知识去解决一些实际生产问题。
常见分子生物学实验方法
常见分子生物学实验方法1.DNA/RNA提取DNA和RNA提取是进行分子生物学实验的第一步。
常见的提取方法包括酚/氯仿法、离心法、基于载体的提取等。
这些方法可以从细胞、组织或血液中提取出高质量的DNA或RNA用于后续实验。
2.PCR扩增聚合酶链反应（PCR）是一种常用的体外DNA扩增技术，用于复制特定DNA片段。
通过PCR，可以从少量的DNA样本中扩增目标序列，并与特异性引物一起进行扩增。
PCR具有高度特异性和灵敏度，广泛应用于基因克隆、基因检测和定量分析等领域。
3.基因克隆基因克隆是指将特定目标基因从一个有机体中分离并插入到另一个有机体中。
常见的基因克隆方法包括限制性内切酶消化、连接、转化、筛选等。
基因克隆可以用于生成重组DNA、构建表达载体、设计并构建突变基因、重组蛋白质等。
4.蛋白质表达和纯化蛋白质表达和纯化是研究蛋白质功能和结构的重要步骤。
常见的表达系统包括细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。
表达后，通过亲和纯化、离子交换层析、凝胶过滤等手段纯化所得蛋白质。
5.基因敲除/敲入基因敲除或敲入是通过改变目标基因的DNA序列来研究基因功能的方法。
基因敲除可以通过CRISPR-Cas9系统、RNA干扰、转座酶介导的基因敲入等方法实现。
6.DNA测序DNA测序是分析DNA序列的方法。
常见的测序技术包括Sanger测序、下一代测序（包括Illumina、Ion Torrent、PacBio等）等。
DNA测序可以应用于基因组学、转录组学、评估其中一区域的突变等领域。
7.西方印迹西方印迹是一种蛋白质检测方法，用于检测和定量特定蛋白质的存在和表达水平。
通过电泳将蛋白质分离，然后转移到膜上，并使用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗的检测。
8.荧光定量PCR荧光定量PCR（qPCR）是一种用于定量分析DNA或RNA浓度的方法。
通过特异性引物、探针与目标序列的结合，实时检测并记录PCR扩增产物的信号，进而测定起始目标序列的数量。
分子生物学第五章分子生物学研究法(上)
分子生物学第五章分子生物学研究法（上）——DNA、RNA及蛋白质操作技术第三节RNA操作技术第四节SNP的理论与应用第五节基因克隆技术第六节蛋白质组与蛋白质组学技术夏玉琼2013-10-10目录RNA操作技术cDNA文库的构建基因文库的筛选SNP的理论与应用基因克隆技术蛋白质与蛋白质组学技术分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学cDNA文库的构建切割位点用四碱基特异性的限制性内切酶部分消化DNA 片段，有的仍有切割位点质粒DNA将DNA 克隆进质粒DNA细菌克隆每个细菌都带有不同片段的DNA细菌转化分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学cDNA文库的构建cDNA的长度0.5-8 kb载体：质粒载体和噬菌体类载体完整的cDNA文库包含大于5*105的独立克隆分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学目录RNA操作技术cDNA文库的构建基因文库的筛选SNP的理论与应用基因克隆技术蛋白质与蛋白质组学技术分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学基因文库的筛选含义通过某种特殊方法从基因文库中鉴定出含有所需重组DNA分子的特定克隆的过程筛选方法核酸杂交法PCR筛选法免疫筛选法分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学核酸杂交法培养基上的菌落盖上硝酸纤维素膜移去硝酸纤维素膜裂解、中和去除细菌蛋白DNA 印迹32P 标记探针杂交放射自显影图像挑出阳性克隆保存母板分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学PCR筛选法需获得基因特异性引物将整个基因文库保存在多孔培养板上用设计好的基因探针对每个孔PCR筛选，挑出阳性的孔对阳性的孔再稀释到次级多孔板中PCR筛选重复稀释重复筛选直到与目的基因对应的单个克隆分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学免疫筛选法文库铺于E.coli 形成噬菌斑转移到硝酸纤维素膜吸收λ噬菌体中表达的外源蛋白保存原板，加入一抗筛选膜上的噬菌斑印迹洗去未结合的抗体加入酶偶联的二抗加底物显色从保存板上挑出阳性噬菌斑一抗：第一抗体，识别目标蛋白二抗：抗体的抗体，能增强信号，增加该方法的灵活性分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学目录RNA操作技术SNP的理论与应用SNP概述SNP的检测技术SNP的应用基因克隆技术蛋白质与蛋白质组学技术分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学SNP概述single nucleotide polymorphism,pronounced “snips”单核苷酸多态性基因组DNA序列中由于单个核苷酸的突变而引起的多态性，发生频率1%或更高例如：某些人的染色体上的某个位置为A，而另外一些人的同样位置是T，染色体DNA同一位置上的每个碱基类型叫做一个等位位点继RFLP和SSR之后的第三代遗传标记遗传标记：在遗传分析上用作标记的基因分子生物学 夏玉琼 西安电子科技大学第一代遗传标记：RFLPRFLP标记是发展最早的DNA标记技术。
分子生物学第九章--分子生物学研究方法电子教案精选全文
可编辑修改精选全文完整版•第九章分子生物学研究方法1．课程教学内容(1)核酸技术1—基本操作(2)核酸技术2—克隆技术(3)核酸技术3—测序(4)基因表达和表达分析基因定点诱变(5)蛋白质与核酸的相互作用(6)其他（热点）技术2．课程重点、难点基因克隆技术、杂交技术、测序技术、蛋白质与核酸的相互作用检测技术3．课程教学要求掌握基因克隆技术、杂交技术、测序技术、蛋白质与核酸的相互作用检测等各种技术的原理。
本章内容•核酸的凝胶电泳•DNA分子的酶切割•核酸的分子杂交•基因扩增•基因的克隆和表达•细菌的转化•DNA核苷酸序列分析•蛋白质的分离与纯化•研究DNA与蛋白质相互作用的方法一、核酸的凝胶电泳基本原理：当一种分子被放置在电场当中时，它们会以一定的速度移向适当的电极。
电泳的迁移率：电泳分子在电场作用下的迁移速度，它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷成正比。
由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖和丙烯酰胺，从而降低了对流运动，故电泳的迁移率又同分子的摩擦系数成反比。
在生理条件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子化状态的。
从这个意义上讲，DNA和RNA的多核苷酸链可叫做多聚阴离子，因此，当核酸分子放置在电场中时，它就会向正极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的这种迁移率，取决于核酸分子本身大小和构型。
分子量较小的DNA 分子，比分子量较大的分子，具有较紧密的构型，所以其电泳迁移率也就比同等分子量的松散型的开环DNA分子或线性DNA分子要快些。
Gel matrix (胶支持物) is an inserted, jello-like porous material that supports and allows macromolecules to move through.Agarose (琼脂糖):(1) a much less resolving power than polyacrylamide,(2)but can separate DNA molecules of up to tens of kbDNA can be visualized by staining the gel with fluorescent dyes, such as ethidium bromide (EB 溴化乙锭)Polyacrylamide (聚丙稀酰胺):(1)has high resolving capability, and can resolve DNA that differfrom each other as little as a single base pair/nucleotide.(2)but can only separate DNA over a narrow size range (1 to a fewhundred bp).Pulsed-field gel electrophoresis (脉冲电泳)(1)The electric field is applied in pulses that are orientedorthogonally (直角地) to each other.(2)Separate DNA molecules according to their molecule weight, as wellas to their shape and topological properties.(3)Can effectively separate DNA molecules over 30-50 kb and up toseveral Mb in length.二、DNA分子的酶切割Restriction endonucleases (限制性内切酶) cleave DNA molecules at particular sitesRestriction endonucleases (RE) are the nucleases that cleave DNA at particular sites by the recognition of specific sequences.RE used in molecular biology typically recognize (识别) short (4-8bp) target sequences that are usually palindromic (回文结构), and cut (切割) at a defined sequence within those sequences. e.g. EcoRIThe random occurrence of the hexameric (六核苷酸的) sequence: 1/4096 (4-6=1/46)(1) Restriction enzymes differ in the recognition specificity: target sites are different.(2) Restriction enzymes differ in the length they recognized, and thus the frequencies differ.(3) Restriction enzymes differ in the nature of the DNA ends they generate: blunt/flush ends (平末端), sticky/staggered ends (粘性末端).(4) Restriction enzymes differ in the cleavage activity.三、核酸的分子杂交原理：带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA，当它们混合在一起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构。
《现代分子生物学》第三版 (朱玉贤 李毅 主编)课后习题答案 高等教育出版社
现代分子生物学课后习题及答案（共10章）第一章绪论1. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？2. 分子生物学研究内容有哪些方面？3. 分子生物学发展前景如何？4. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？答案：1. 分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。
狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或 DNA 的复制、转录、达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。
所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。
这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。
这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。
阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。
2. 分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。
由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。
由于 50 年代以来的迅速发展，该领域已形成了比较完整的理论体系和研究技术，是目前分子生物学内容最丰富的一个领域。
研究内容包括核酸/基因组的结构、遗传信息的复制、转录与翻译，核酸存储的信息修复与突变，基因达调控和基因工程技术的发展和应用等。
现代分子生物学（第3版）_课后答案-五章
第一章 绪论1， 简述孟德尔、摩尔根和沃森等人对分子生物学发展的主要贡献。
答：孟德尔的对分子生物学的发展的主要贡献在于他通过豌豆实验，发现了遗传规律、分离规律及自由组合规律；摩尔根的主要贡献在于发现染色体的遗传机制，创立染色体遗传理论，成为现代实验生物学奠基人；沃森和克里克在1953年提出DAN 反向双平行双螺旋模型。
反向双平行双螺旋模型。
2， 写出DNA 和RNA 的英文全称。
答：脱氧核糖核酸（答：脱氧核糖核酸（DNA, Deoxyribonucleic acid DNA, Deoxyribonucleic acid DNA, Deoxyribonucleic acid））， 核糖核酸（核糖核酸（RNA, Ribonucleic acid RNA, Ribonucleic acid RNA, Ribonucleic acid））3， 试述“有其父必有其子”的生物学本质。
答：其生物学本质是基因遗传。
子代的性质由遗传所得的基因决定，而基因由于遗传的作用，其基因的一半来自于父方，一般来自于母方。
自于父方，一般来自于母方。
4， 早期主要有哪些实验证实DNA 是遗传物质？写出这些实验的主要步骤。
答：一，肺炎双球菌感染实验，答：一，肺炎双球菌感染实验，11，R 型菌落粗糙，菌体无多糖荚膜，无毒，注入小鼠体内后，小鼠不死亡。
型菌落粗糙，菌体无多糖荚膜，无毒，注入小鼠体内后，小鼠不死亡。
22，S 型菌落光滑，菌体有多糖荚膜，有毒，注入到小鼠体内可以使小鼠患病死亡。
型菌落光滑，菌体有多糖荚膜，有毒，注入到小鼠体内可以使小鼠患病死亡。
33，用加热的方法杀死S 型细菌后注入到小鼠体内，小鼠不死亡；后注入到小鼠体内，小鼠不死亡；二，噬菌体侵染细菌的实验：二，噬菌体侵染细菌的实验：11，噬菌体侵染细菌的实验过程：吸附→侵入→复制→组装→释放。
，噬菌体侵染细菌的实验过程：吸附→侵入→复制→组装→释放。
2 2 2，，DNA 中P 的含量多，蛋白质中P 的含量少；蛋白质中有S 而DNA 中没有S ，所以用放射性同位素35S 标记一部分噬菌体的蛋白质，用放射性同位素32P 标记另一部分噬菌体的DNA DNA。
畜牧学专业《现代分子生物学》课程教学探讨
2023年第11期《现代分子生物学》是从分子水平研究生命本质的一门生物学前沿学科。
它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息传递中的作用和功能为主要研究内容,是当前生命科学中发展最快并正成为与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。
通过本课程的学习有利于学生掌握遗传信息的传递和表达机制,了解这门学科发展过程中重大发现的实验设计过程以及对遗传物质进行操作的基本实验技术,有利于培养和训练学生探索生命的奥秘,对学生的科学研究性思维和探索生命及自然规律的实践具有重要意义。
本文结合畜牧学专业现代分子生物学的教学实践,将从教师队伍结构、课畜牧学专业《现代分子生物学》课程教学探讨胡序明,陈世豪★(扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州225009)D O I :10.3969/J .I SSN.1671-6027.2023.11.006摘要:现代分子生物学是一门前沿性强、发展迅速、对生命科学领域各分支科学具有广泛和深入影响的学科。
为了使学生能够发现和认识生命科学领域中的分子生物学现象,具备一定的剖析能力,本文结合畜牧学专业现代分子生物学的教学实践,从教师队伍结构、课程教学内容以及教学方法和考核方法三个方面进行了初步探讨。
关键词:分子生物学;畜牧学;教学模式;教学考核基金项目:扬州大学教改课题(Y ZU JX 2020—C16)。
★通信作者事业的重要手段,深入挖掘各类课程的思政资源,强化学生的思想政治水平,增强当代大学生的获得感,为中国特色社会主义事业源源不断培养合格建设者和可靠接班人,而避免培养出具备专业能力而缺乏思想政治素养的学生。
不同的专业课具有不同的特点,有不同授课体系,要寻找专业课与思政课的协同点,才能推动推动专业课与思政课的协同育人发展。
在动物传染病的课程中,有许多历史典故、名人轶事,现实案例,将传染病的相关知识与历史、名人典故相结合,能够激发学生的学习兴趣和热情,加深了学生对专业知识的理解,提高了学生的文化素养。
分子生物学 分子生物学研究法
5‘ 供者
探针
3‘ 受者
Taqman法 分子信标(molecular beacon)法
高效液相色谱 ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ质谱分析法 DNA芯片技术（DNA chip）
SNP数据库
国立生物技术信息中心 德国的HGBAS网站
JST的数据库
2.5基因打靶(gene targeting)
通过DNA定点同源重组，改变基因组中 的某一特定基因，在生物活体内研究该 基因的功能。(反向遗传学)
抗原－抗体 特异性结合
SDS-PAGE 后转膜
基因表达产 物――蛋白
的检测
ELISA 原理和用途类似于Western blot,但在酶标板中操作，无需SDSPAGE转膜，操作简单，可批量检测，并可半定量测定。
Southern blot
Northern blot
Western blot
双脱氧法测序
gradient gel electrophoresis,DGGE) 原理:当双链DNA在变性梯度凝胶中进行 到与DNA变性温度一致的凝胶位置时， DNA发生部分解链，电泳迁移率下降， DNA链中有一个碱基改变时，会在不同 的时间发生解链，因影响电泳速度变化 的程度而被分离。
荧光共振能量传递 (fluorescent resonance energy transfer, FRET)
基因敲除(gene knockout)：定向敲除 基因敲入(gene knockin)：定向替代
基因打靶的必备条件
胚胎干细胞(ES细胞)
能在体外培养，保留发育的全能性
打靶载体
Neo（新霉素）阳性筛选标志 HSV-tk阴性筛选标志：单纯疱疹病毒
(herpes simplex virus) 胸腺嘧啶激酶 (thymidine kinase)
(NEW)朱玉贤《现代分子生物学》(第5版)笔记和课后习题(含考研真题)详解
4.3 名校考研真题详解 第5章 分子生物学研究法（上）——DNA、RNA及蛋白质操作技术
5.1 复习笔记 5.2 课后习题详解 5.3 名校考研真题详解 第6章 分子生物学研究法（下）——基因功能研究技术 6.1 复习笔记 6.2 课后习题详解 6.3 名校考研真题详解 第7章 原核基因表达调控 7.1 复习笔记 7.2 课后习题详解 7.3 名校考研真题详解 第8章 真核基因表达调控 8.1 复习笔记 8.2 课后习题详解 8.3 名校考研真题详解
② T2噬菌体感染大肠杆菌实验
a．在分别含有35S和32P的培养基中培养大肠杆菌。
b．用上述大肠杆菌培养T2噬菌体，分别制备含35S的T2噬菌体和32P的
T2噬菌体。
c．分别用含35S的T2噬菌体和32P的T2噬菌体感染未被放射性标记的大 肠杆菌。
d．培养一段时间后，将混合液离心，检测子代噬菌体放射性。上清液 主要是噬菌体，沉淀物主要是大肠杆菌。
（4）基因组、功能基因组与生物信息学研究
基因组计划是一项国际性的研究计划，其目标是确定生物物种基因组所 携带的全部遗传信息，并确定、阐明和记录组成生物物种基因组的全部 DNA序列。
功能基因组学相对于测定DNA核苷酸序列的结构基因组学，其研究内容 是在利用结构基因组学丰富信息资源的基础上，应用大量的实验分析方 法并结合统计学和计算机分析方法来研究基因的表达、调控与功能，以 及基因间、基因与蛋白质之间和蛋白质与底物、蛋白质与蛋白质之间的 相互作用和生物的生长发育等规律。功能基因组学的研究目标是对所有 基因如何行使其职能从而控制各种生命现象的问题作出回答。
严格地说，重组DNA技术并不完全等于基因工程，因为后者还包括其他
可能使生物细胞基因组结构得到改造的体系。
分子生物学研究方法教案
分子生物学研究方法教案一、教学目标1、让学生了解分子生物学的基本概念和研究范畴。
2、使学生掌握常见的分子生物学研究方法，包括其原理、操作步骤和应用领域。
3、培养学生的实验设计能力和科学思维，能够运用所学方法解决实际问题。
二、教学重难点1、重点（1）PCR 技术的原理和应用。
（2）核酸电泳技术的原理和操作。
（3）基因克隆的基本流程。
2、难点（1）PCR 反应体系的优化和常见问题的解决。
（2）基因克隆中载体的选择和构建。
三、教学方法1、讲授法：讲解分子生物学研究方法的基本原理和关键步骤。
2、演示法：通过多媒体展示实验过程和结果，增强学生的直观感受。
3、讨论法：组织学生讨论实验设计和结果分析，培养学生的思维能力。
四、教学过程1、课程导入（1）通过介绍一些与分子生物学相关的疾病诊断、基因治疗等实际应用案例，引起学生的兴趣，引出分子生物学研究方法的重要性。
2、分子生物学研究方法概述（1）简单介绍分子生物学的定义和研究对象，如 DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。
（2）列举常见的分子生物学研究方法，如 PCR、核酸电泳、基因克隆、DNA 测序等。
3、 PCR 技术（1）原理：讲解 PCR 技术的基本原理，即通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，实现 DNA 片段的指数扩增。
（2）反应体系：介绍 PCR 反应体系的组成成分，包括模板 DNA、引物、dNTPs、Taq DNA 聚合酶和缓冲液等，并说明各成分的作用。
（3）操作步骤：详细讲解 PCR 的操作步骤，包括模板 DNA 的制备、引物设计、反应体系的配制、PCR 扩增程序的设置等。
（4）应用：举例说明 PCR 技术在基因诊断、遗传分析、物种鉴定等方面的应用。
4、核酸电泳技术（1）原理：解释核酸电泳的原理，即根据核酸分子在电场中的迁移速率不同来分离和鉴定核酸片段。
（2）琼脂糖凝胶电泳：介绍琼脂糖凝胶电泳的操作方法，包括凝胶的制备、样品的加载、电泳条件的设置等。
现代分子生物学(第5版)
成书过程
成书背景
修订过程
成书背景
20世纪初以来，生命科学所取得的成就和进步，不但使生物学这门古老的学科焕发了青春，也使它在自然科 学中的地位发生了革命性的变化。生物学革命在各个科学之间广泛渗透、相互交叉、相互作用，推动了科学的发 展，生物学成为带头学科之一。分子生物学作为生物学科新兴、具有活力的科学，在推动中国科学事业的发展、 推动生物工程产业的崛起、推动国民经济持续高速发展等方面都有着举足重轻的影响 。
其中第二章讨论了染色体和DNA的基本结构及复制调控；第三至四章回顾了从DNA到RNA以及从mRNA到蛋白质 的生物信息流；第五、六两章集中阐述了现代分子生物学实验的技术原理和流程。第七、八两章研究了参与原核、 真核细胞基因表达调控的各种元件，探讨了DNA甲基化、蛋白质磷酸化、乙酰化修饰、染色质构象变化等表观遗 传修饰对基因活性和功能的影响，以及各种小RNA的产生与作用机制。第九、十两章讨论了疾病与人类健康、基 因与发育等重要生命现象的分子生物学基础，第十一章则主要讨论了DNA序列分析技术进步对基因组学的重大影 响。
二是重在敏锐和迟钝、失败与成功辩证法的核心。如果狭隘地从人类的角度看分子生物学这个学科，发育过 程是模块化的，每个模块都是一种自组织体，是适应性与结构化的产物。生命的演化其实就是一个不断模块化的 过程。因此，物种演化其实就是一系列发育模块的重组。
注：以上内容参考资料来源
作者简介
作者简介
朱玉贤，中科院院士，武汉大学高等研究院院长，蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室主任，教育部 高校大学生物学课程教指委主任委员。长江特聘教授，农业部“国家转基因生物安全委员会”委员，科技部 “863”高技术计划“现代农业技术领域”专家组副组长 。
分子生物学的方法
分子生物学的方法
1. 基因克隆啊，就好比是复制粘贴一个生命的密码！你想想，把一个基因完整地复制出来，那是多么神奇的事情呀！就像我们能精确地复制出一个自己喜欢的东西一样。
2. 聚合酶链式反应，哇哦，这可真是个厉害的手段！它就像是一个魔法放大器，能让一点点的遗传物质迅速增多，就如同把一颗小种子快速变成一片茂密的森林。
3. 核酸电泳呀，不就是给核酸分子来一场赛跑比赛嘛！看着它们在凝胶里奔跑，分出快慢，真的太有意思啦！
4. 基因编辑，这简直是在改写生命的剧本呀！可以按照我们的意愿去修改基因，就像我们在修改一篇文章一样任性。
5. 蛋白质印迹法，就好像是在茫茫人海中找出特定的那个人一样！精准地找到我们想要的蛋白质。
6. 实时定量 PCR，那可是对基因数量的精确测量呀！就如同我们用精准的尺子去量一个东西的长度。
7. 分子杂交，这不就是让不同的分子来个亲密拥抱嘛！看看它们能不能结合在一起，多有趣呀。
8. 基因芯片，哇，这相当于给基因们准备了一个超级大舞台呀！让它们同时展示自己，太震撼了。
9. 限制性内切酶，就像是一把精准的剪刀，能把 DNA 剪成我们想要的片段，厉害吧！
10. 细胞转染，这就像是给细胞送一份特别的礼物，把新的基因送进去，让细胞变得不一样。
我觉得分子生物学的方法真的是太神奇、太有趣了，它们让我们对生命的奥秘有了更深入的了解和探索，也为解决很多医学、生物学等方面的问题提供了强大的工具。
分子生物学5 分子生物学基本研究法
3、pBR322质粒载体
由三个不同来源的部分组成的：
第一部分来源于pSF2124质粒易位子Tn3的氨 苄青霉素抗性基因（AmpR）；
第二部分来源于pSC101质粒的四环素抗性基 因（tetr）；
5. 2 DNA操作技术 5. 2. 1核酸的凝胶电泳
自 从 琼 脂 糖 （ agarose ） 和 聚 丙 烯 酰 胺 （polyacrylamide）凝胶被引入核酸研究以来，按 分子量大小分离DNA的凝胶电泳技术，已经发展成 为一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互 作用的重要实验手段。
第一个核酸内切酶EcoRI是Boyer实验室在1972年发 现的，它能特异性识别GAATTC序列，将双链DNA分 子在这个位点切开并产生具有粘性末端的小片段。
图5-1 几种主要DNA内切酶所识别的序列及 其酶切末端。
Werner Arber, Hamilton Smith and Daniel Nathans were awarded the 1978 Nobel Prize for their work on REs.
多核苷酸激酶
把磷酸基团加到多聚核苷酸链的5'-OH末端 （进行末端标记实验或用来进行DNA的连接
末端转移酶
在双链核酸的3‘末端加上多聚或单核苷酸
DNA外切酶III
从DNA链的3'末端逐个切除单核苷酸
λ噬菌体DNA外切酶
从DNA链的5'末端逐个切除单核苷酸
碱性磷酸酯酶
切除位于DNA链末端的磷酸基团
嘌呤
分子生物学的研究方法
分子生物学的研究方法分子生物学是生命科学领域中的重要分支，研究生物大分子（如DNA、RNA、蛋白质等）的结构、功能及其在生物体内的相互作用关系。
分子生物学的研究方法随着技术的不断进步，越来越高效、精准。
本文将介绍几种常见的分子生物学研究方法。
1. PCR技术PCR技术是分子生物学中最常用的研究方法之一。
PCR技术简单来说就是以DNA为模板，通过循环加热和降温的方式使DNA 分离成两条单链，并利用DNA聚合酶合成新的DNA分子。
通过PCR技术可以扩增目标DNA片段，为其他分子生物学研究提供了重要的基础。
PCR技术的具体操作是：首先选择适当的引物，引物是一段长度为15~30个核苷酸的单链DNA，与目标DNA上的两端互补，可用来定向扩增DNA。
然后将待扩增的DNA样品与引物混合，加入适当浓度的DNA聚合酶和反应缓冲液，反复加热降温，反应若干个周期后，就可以得到扩增的DNA产物。
近年来，PCR技术不断发展，出现了许多高级变体，如RT-PCR技术和qPCR技术等。
这些技术在分子生物学、医学以及疾病诊断等领域得到了越来越广泛的应用。
2. 质谱技术质谱技术是一种分析化学技术，用于测定化合物的分子量、化学式以及数量等信息。
在分子生物学中，质谱技术主要用于分析蛋白质和核酸的结构和功能。
质谱技术的基本原理是将待测样品中的分析物（如蛋白质、核酸等）转化成气态或溶液状态下的离子，并利用质谱仪测定离子的质荷比。
通过离子的质谷比可以确定分析物的分子量、化学式以及数量等信息。
质谱技术的应用范围非常广泛，包括蛋白质组学、代谢组学以及疾病诊断等领域。
随着技术的不断进步，质谱技术也变得更加高效、精准，未来将有更多的应用。
3. 基因编辑技术基因编辑技术近年来获得了长足发展，它可以通过将基因序列中的单个碱基替换、插入或删除，来打造定制化的基因组序列。
这种技术有巨大的应用潜力，可以用于人类基因疾病的治疗以及植物、动物品种改良等领域。
基因编辑技术最常用的手段是CRISPR-Cas9系统，它是一种通过结合RNAs和酶分子来定向剪切DNA的系统。
现代分子生物学(第四版)朱玉贤课件 PPT 第1章 绪论
主要教材与参考书
1.《现代分子生物学》 第3版（2007）朱玉贤、李毅、郑晓峰
2. 现代生物学精要(Instant Notes)系列 《分子生物学》第二版（2002）刘进元 《Molecular Biology》2e P.C.turner,et al 3. Principles of Biochemistry
1994 Gilman Rodbell 美国
1995
Lewis Nusslein-Volhard Wieschaus
美国 德国 美国
建立DNA测序方法
诺贝尔生理医学奖
建立和发展了单克隆抗体技术
诺贝尔生理医学奖
发现可移动癌基因
诺贝尔化学奖 诺贝尔生理医学奖
G蛋白在细胞内信息传导中的作用 诺贝尔生理医学奖
发现了控制果蝇体节发育的基因
诺贝尔生理医学奖
年份
科学家
Doherty 1996 Zinkernagel
国籍
澳 瑞士
1997 Prusiner
美
Furchgott
美
1998
Ignarro Murad
1999 Blobel
美
Carlsson
德
2000 Greengard
预计到2020年，生物医药占全球药品的比重 将超过1/3，生物质能源占世界能源消费的比 重将达5%左右，生物基材料将替代10%-20%的 化学材料。
生物制造、生物能源、生物环保等一 批新兴产业正在快速形成。
据Ernst＆Young研究报告，2010年生 物环境、生物工业处理、生物海洋技术世界市 场规模将达到 134亿美元、327亿美元、288 亿美元。
分子生物学的研究方法
分子生物学的研究方法1. 基因克隆啊，这就好比是复制粘贴一样神奇！比如说我们要研究一个很重要的基因，那我们就可以通过基因克隆这个方法把它复制出来，然后好好研究它。
就像找到一把神奇的钥匙，打开我们了解生命奥秘的大门啊！2. 聚合酶链式反应，哇，这可是个厉害的家伙！你想想看，就像快速变魔术一样，能把少量的 DNA 迅速扩增好多倍。
比如要检测一个很微小的病原体，聚合酶链式反应就能大显身手啦！3. 核酸杂交，嘿，这不就像是在茫茫人海中寻找那个特别的人嘛！通过它可以找到特定的核酸序列哦。
比如说在基因诊断中，核酸杂交就能精准地找到出问题的地方，是不是超厉害呀！4. 基因测序就像在解读生命的密码本！我们可以知道基因的具体序列啦。
像破解一个神秘的代码一样，让我们对生命的了解深入到每一个碱基。
比如研究遗传病，基因测序就能告诉我们到底是哪里出了问题呀！5. 蛋白质印迹，这就像照妖镜一样，能让特定的蛋白质现形！当我们想知道某种蛋白质有没有表达或者表达量多少的时候，它就派上大用场了。
哎呀，简直太妙了！6. 细胞培养，哇塞，这就如同给细胞安个家呀！我们可以让细胞在特定的环境中生长繁殖。
比如想研究某种药物对细胞的影响，细胞培养不就正好嘛，多有趣呀！7. 基因编辑，这可是能直接修改生命蓝图的神技啊！就像我们拿着笔可以随心所欲地修改一样。
像要治疗一些基因导致的疾病，基因编辑没准就是未来的希望呢！8. 免疫印迹，嗯，这有点像侦探在找线索呢！通过它可以检测特定的蛋白质和抗体。
比如说研究自身免疫性疾病，免疫印迹就能帮忙找出那些捣乱的家伙呀！9. 实时荧光定量 PCR，嘿，这绝对是个精确的计量器呀！能实时检测DNA 的变化呢。
在监测基因表达的动态过程中，它可太有用啦，厉害不厉害！我觉得分子生物学的这些研究方法真的超级神奇，它们让我们对生命的探索不断深入，有着无比广阔的前景和重要性啊！。
《现代分子生物学》讲义-朱玉贤
免费考研网
免费考研网 制作 pdf 版本
2． 生物体内一切有机大分子的建成都遵循着各自特定的规则； 3． 某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质分子决定了它的属性。 分子生物学研究内容: DNA 重组技术------基因工程 基因表达调控-------核酸生物学 生物大分子结构功能----结构分子生物学 DNA 重组技术（又称基因工程） 这是 20 世纪 70 年代初兴起的技术科学，目的是将不同 DNA 片段（如某个基因或基因的一部分）按照人们的设计定向 连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。严格地说，DNA 重组 技术并不完全等于基因工程，因为后者还包括其他可能使生物细胞基因组结构得到改造的体系。DNA 重组技术是核酸化 学、蛋白质化学、酶工程及微生物学、遗传学、细胞学长期深入研究的结晶，而限制性内切酶 DNA 连接酶及其他工具 酶的发现与应用则是这一技术得以建立的关键。
分子生物学研究方法
分子生物学研究方法
分子生物学研究方法是研究生物分子结构、功能和相互作用的一系列实验方法和技术。
这些方法帮助科学家了解细胞的基本结构和功能，研究生物分子在疾病发展、遗传变异和进化中的作用。
以下是一些常用的分子生物学研究方法：
1. DNA提取：从细胞或组织中提取DNA，以用于后续实验。
2. 聚合酶链式反应（PCR）：用于扩增DNA片段，以便进行分析和检测。
3. 凝胶电泳：用电场将DNA、RNA或蛋白质分离成不同大小的片段，以便研究其结构和功能。
4. 蛋白质纯化：通过一系列步骤将目标蛋白质从混合物中纯化出来，以获得足够的纯度用于研究。
5. 克隆：将DNA序列插入到载体中，以产生大量目标DNA 分子，用于进一步的分析和实验。
6. 基因测序：确定DNA序列的顺序，以研究基因功能、分析遗传变异或进行进化研究。
7. 基因表达：将目标基因转录成mRNA，并翻译成蛋白质，以研究基因功能和调控机制。
8. 蛋白质相互作用：使用技术如亲和层析、酵母双杂交等研究蛋白质之间的相互作用关系，以探索细胞信号传导和代谢途径。
9. 基因编辑：利用技术如CRISPR/Cas9，对细胞或生物体的基因进行精确的编辑，以研究基因功能或治疗遗传疾病。
分子生物学研究方法的不断发展和创新使得科学家可以更深入地了解生物分子的结构、功能和相互作用，为疾病治疗和生物技术的发展提供了基础。
分子生物学基本分析方法
获得第一例转基因植物。
斯坦福大学获得关于重组DNA的专利。
GMO首次在环境中释放。
Watson出任“人类基因组计划”首席科学家。
DuPont公司获得转肿瘤基因小鼠—“Oncomouse”。
欧共体35个实验室联合完成酵母第三染色体全序列测 定(315kb)。 第一批基因工程西红柿在美国上市。
完成了酵母基因组(1.25×107bp)全序列测定。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重 复性质，相同数量的双链DNA几乎 具有等量的净电荷，因此它们能以 同样的速度向正电极方向迁移。
基本原理
一种分子被放置到电场中，它就 会以一定的速度移向适当的电极。我 们把这种电泳分子在电场作用下的迁 移速度，叫做电泳的迁移率，它与电 场强度和电泳分子本身所携带的净电 荷数成正比，与片段大小成反比。
5. 2. 2 核酸的分子杂交
将带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或 RNA混合在一起，其相应的同源区段就会退 火形成双链结构。如果退火的核酸来自不 同的生物有机体，所形成的双链分子就被 称为杂种核酸分子。
经过凝胶电泳分离的DNA或RNA 分子，都必须通过毛细管或电导作用 按其在凝胶中的位置原封不动地“吸 印”转移到滤膜上，因此，核酸杂交 也被称为“DNA印迹杂交”。由于该 方法是E. M. Southern首先设计出来 的，所以又叫做Southern blotting。
•荧光素: 如FITC、罗丹明类等，可以被紫外线激发 出 荧光进行观察，主要适用于细胞原位杂交。
•光密度或电子密度标记物:如金、银等，适用于细胞原 位杂交，可以在光镜下或电镜下进行观察。
由于放射性同位素对人体的危
害，近年来又发展了荧光法检测杂 交信号的技术（图5-7），虽然灵敏 度略低于同位素法，却使核酸杂交 实验变得更为安全。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
常用的转化方法：
§ 化学转化（CaCl2）法 § 电击法
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
化学转化原理：
在0℃冷冻处理时，处于CaCl 2低渗溶液中的大肠杆 菌细胞膨胀成球形。DNA可吸附于其表面。在短暂的 热冲击下，细胞吸收外源DNA ，然后在丰富培养基内 复原并增殖，表达外源基因。
出每微克的转化菌落数）
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
5.2.2 聚合酶链式反应（PCR）技术
§ 1985年，K.Mullis等研究成功的一种在体外快 速扩增特定基因DNA序列的方法
§ 原理：类似于天然的DNA复制过程。将待扩 增的DNA片段和两侧互补的两段寡核苷酸引 物，经过变性，退火和延伸若干个循环后， DNA扩增倍数可达2n 倍
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
反应体系
§ 模板DNA：待扩增的目的片段 § 特异性引物：人工合成的与待扩增的靶DNA两端序
列互补的寡核苷酸片段，15-30bp § DNA聚合酶 § dNTP § 含有Mg2+的缓冲液
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•5.1.3重组DNA技术的概念
▪ 重组DNA技术(recombinant DNA technique): 是 按照人们意愿，在体外对DNA分子进行重组,再将 重组分子导入受体细胞，使其在细胞中扩增和繁 殖，以获得该DNA的大量拷贝。
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•2、重组DNA技术的基本步骤
▪ ①目的基因的获得与载体的制备 ▪ ②目的基因与载体DNA的连接 ▪ ③重组DNA分子导入受体细胞 ▪ ④重组体的筛选与重组DNA的鉴定 ▪ ⑤克隆基因的表达及表达产物的检测与分离纯化
PPT文档演模板
▪ 1970年M.Mandel和A.Hige发现，大肠杆菌的细胞经过氯化 钙适当处理之后，便能吸收λ噬菌体的DNA。1972年美国 斯坦福大学S.Cohen报道，经氯化钙处理的大肠杆菌细胞 也能摄取质粒DNA。大肠杆菌转化体系的建立，对重组DNA 技术的创立具有特别重要的意义。
▪ 3、Southern杂交、DNA序列分析和聚合酶链反应
四环素、链霉素等 § -互补蓝白斑筛选 § 营养条件（自养、异养）
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
-互补筛选
§ β-半乳糖苷酶基因（LacZ）的调控序列和氨基
端（N端）146个氨基酸编码序列的质粒 § 编码β-半乳糖苷酶羧基端（C端）部分序列的
从DNA链的5’末端逐个切除单核苷酸
切除位于DNA链5’或3’末端的磷酸基团
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1、 重组DNA技术发展史
•限制性核酸内切酶
•限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)
•一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核 酸水解酶
•将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞 获得新的遗传性状
•转导？ 转染？
•感受态细胞（Competent cells） ： •受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2等化 学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变 化，能容许有外源DNA的载体分子通过，处于 这种状态下的细胞称~
PPT文档演模板
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
PPT文档演模板
•P153
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
电击转化：
•Bam HⅠ
•GGATC
C •GCCTAG
••GCCTAG•+••GATCGC
•分类:
•Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
•（基因工程技术中常用Ⅱ型）
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•命名
•Hin dⅢ •Haemophilus influenzae d株
•流感嗜血杆菌d株的第三种酶
•属 系 株 序
•
•
• • PPT文档演模板
第一个字母取自产生该酶的细菌属名， 用大写； 第二、第三个字母是该细菌的种名，用 小写； 第四个字母代表株； 用罗马数字表示发现的先后次序。 扬州大学《现代分子生物学》5分子
生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•Ⅱ类酶识别序列特点—— 回文结构(palindrome)
和鉴定； ▪ 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一
酶切位点，称为多克隆位点； ▪ 分子量小，以容纳较大的外源DNA。
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
§ 噬菌体载体：双链DNA病毒，约50kb,两端有一个12 个核苷酸5′端突出粘性末端
•筛选
•表型筛选
PPT文档演模板
•酶切电泳鉴定
•菌落原位杂交
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•5.1.5重组DNA技术的意义
▪ 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾越的鸿沟 ▪ 重组DNA技术缩短了进化时间 ▪ 重组DNA技术使人能对生物进行定向改造 ▪ 体外大量扩增、研究其结构、功能及调控机制，
•表达载体(expression vector) • 为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多 肽链而特意设计的载体称为表达载体。
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•载体的选择标准
▪ 能自主复制； ▪ 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选
••GCATGC•+••GCTAGC •平端切口
PPT文档演模板
••GCCTA•+••GATCGC G •粘端切口
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
▪ DNA连接酶: 通过磷酸二酯键把两个或多个DNA片 断连接成一个整体DNA分子。
▪ T4¯DNA连接酶 ▪ EcoR I 连接酶 ▪ T7¯DNA连接酶
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
目的基因的来源
§ 原
•天然DNA
•（染色体DNA、病 毒DNA(噬菌体DNA)、 质粒DNA、线粒体 DNA和叶绿体DNA）
PPT文档演模板
从而拓宽了分子生物学的研究领域，这对医学上 各种疾病等病因的查明、诊断及治疗具有重大意 义。
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•5.1.6重组DNA实验中常见的主要工具酶
酶类 限制性核酸内切酶 DNA连接酶
DNA聚合酶Ⅰ
反转录酶
多核苷酸激酶 末端转移酶 DNA外切酶Ⅲ λ噬菌体DNA外切酶 碱性磷酸酯酶
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•5.1.2关键性实验技术问世为重组DNA技术奠基
▪ 1、DNA分子的切割与连接技术
▪ 限制性核酸内切酶和连接酶的陆续发现，才使分子生物学 家有了进行DNA操作的基本工具。
▪ 2、载体构建和大肠杆菌转化体系的建立
Байду номын сангаас
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
蓝白斑
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
转化率的计算：
§ 转化体总数＝菌落数×（转化反应原液总体积/涂 板菌液体积）
§ 插入频率＝白色菌落数/蓝色菌落数+白色菌落数 § 转化频率＝转化体总数/加入质粒DNA的量（计算
使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞，通过 高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。
•菌液：生长对数期 •场强(最大转化效率)：12.5-15kV/cm
• 温度：0-4℃
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.2 常见的DNA操作技术
克隆的筛选：
§ 抗生素基因。 § 常用的抗生素有：氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、
•即反相重复结构，是 DNA分子中以某一处为轴，其两侧核苷酸排 列呈回文对称的序列。
•GGATC C •GCCTAG
•切口 ：平端切口、粘端切口
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史
•HindⅡ
•GTCGAC •CAGCTG
•Bam HⅠ
•GGATCC •CCTAGG
•λ噬菌体
▪ 黏粒、YAC、BAC ：高容量载体
PPT文档演模板
扬州大学《现代分子生物学》5分子 生物学研究方法
•5.1 重组DNA技术发展史