第四章植物组织培养技术二
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特点： ①繁殖率高，利用外植体的 芽特别是原受到抑制的腋芽 和大量形成不定芽。 ②能保持该种植物遗传稳定 性。 ③可使繁殖周期长的林木缩 短其童年期
（二）丛生芽发生型(器官型)
丛生芽发生型是指使外植体携带的顶芽或 腋芽在适宜培养环境中不断发生腋芽而呈丛生状 芽，或者直接从外植体上长出多个从芽，将单个 芽转入生根培养基中，诱导生根成苗的繁殖方法。
分为间接途径（经愈伤途径）和直接途径两种。 胚状体发生途径具有成苗数量大、速度快、结构 完整的特点，因而是外植体增殖系数最大的途径。
胚状体发生型 特点：①胚状体发生数量多、速度快、结构完整、 繁殖系数高。②遗传性稳定
菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察
（五）原球茎发生型
原球茎发生型是兰科植物的一种快繁方式， 它是指茎尖或腋芽外植体经培养产生原球茎（即 扁球状体、基部生假根）的繁殖类型。
四、移栽驯化
试管小植株的移栽驯化是试管苗从异养到自 养的转变，有一个逐渐适应过程。移栽前需对试 管植株进行高光强炼苗，使植株生长粗壮，并打 开瓶口，降低湿度，使其逐渐适应外界环境。 1.移栽 2.驯化管理
１.移栽
• 首先应洗去小植株根部附着的培养基，避免微生物 的繁殖污染，造成小苗死亡。
• 然后将小植株栽入人工配制的混合培养基质中，基 质用保湿又透气的材料，如蛭石、珍珠岩、粗沙、 泥炭等按比例混合，以利小植株生长。几天后小植 株可形成新的功能根系。
①繁殖速度较快。②遗传性不稳定，已产生变异。③愈伤组织 是遗传转化、细胞培养或原生质体培养的良好材料
• 器官发生型也是许多植物快繁的主要方式。由于不 定芽形成的数量与腋芽数目无关，其增殖率高于丛 生芽发生型。
• 但经过愈伤组织途径或者多次继代培养后，容易导 致细胞分裂不正常，增加变异植株发生频率。如香 蕉继代次数控制在8代之内，再生植株的变异率则 可控制在3%左右。
3.增殖体的大小和切割方法 一般携带一个茎节，但第一次增殖的茎段一般
都有2~4个茎节。 茎段可以垂直插入培养基中，但插入的深度不
应淹没茎节；或水平放入培养基表面，以刺激侧芽 的萌动。
青花菜增殖
枇杷增殖
三、芽苗生根
将单个芽苗转移到生根培养基或适宜环境中诱导生根。 1.离体生根（试管内生根）
降低无机盐浓度（1/2或者1/4），减少或不需要细胞 分裂素，增加生长素的浓度。
对有些植物，如果芽苗在含有生长素的培养基中生长 1～2d，再转移至无生长素的培养基中，或芽苗在含生长素 的生根溶液中浸蘸后直接插入无生长素的培养基中，湿度 85%以上，温度25℃，弱光或黑暗条件。
2.活体生根（试管外生Hale Waihona Puke Baidu） 芽苗先在生长素中快速浸蘸或在
含有相对高浓度生长素的培养基中培养 5~10天，然后在温室中栽入培养基质， 经常喷雾，给予高湿度环境，几天后便 可自行生根。
丛生芽发生型是大多数植物快繁的主要途 径，它不经过愈伤组织，能使无性系后代保持原 品种的特性，在生产中普遍应用。
特点： ①繁殖率非常 高，但繁殖速 度较慢。 ②遗传性稳定。
（三）器官发生型（已讲过）
是指外植体在适宜培养基和培养条件下，经过脱分化形成愈 伤组织，然后经过再分化诱导愈伤组织产生不定芽，或外植 体不形成愈伤组织而直接从其表面形成不定芽，将芽苗转移 到生根培养基中，经培养获得完整植株的繁殖方法。
第三节 植物离体繁殖
I概述 一、概念和特点
（一）概念
植物离体繁殖（ ）又称植物快繁或微繁，是 指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养， 使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。
（二）特点
1、繁殖效率高。 2、培养条件可控性强。 3、占用空间小。 4、管理方便，利于自动化控制。 5、便于种质保存和交换。
• 原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学构造。种子萌发初期并不出 现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，肿胀的胚呈小圆锥状， 故称为原球茎。
• 原球茎是短缩的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官， 它可以增殖，形成原球茎丛。由茎尖或腋芽外植体诱导产生原球茎，切 割原球茎进行增殖，或停止切割使其继续培养而转绿，产生毛状假根， 叶原基发育成幼叶，将其转移培养生根，形成完整植株。
植物快繁程序
植物快繁的程序包括四个阶段： 无菌（或初代）培养的建立 繁殖体增殖 芽苗生根 小植株的移栽驯化
一、无菌培养的建立
这个阶段的任务是母株和外植体的选取、 无菌培养物的获得及外植体的启动生长，以利于 离体材料在适宜培养环境中以某种器官发生类型 进行增殖。
二、增殖培养
1.培养材料的增殖方式 五种方式。(取决于培养目的和材料自身的可
能性。) 一般大多数植物采用无菌短枝或腋芽萌发或诱
导不定芽产生，再以芽繁殖芽的方式进行增殖；兰 科植物、百合等则采用原球茎增殖途径，以保障繁 殖材料的遗传稳定性。
2.增殖培养基 增殖率是植株快速繁殖特别是商业性繁殖
的重要指标。外植体在每次继代培养中，应能 产生最大数量的有效繁殖体。
基本培养基一般与启动生长培养基相同， 而细胞分裂素和矿物元素的浓度水平则高于启 动生长培养基。一般 1~3 0.1~1 。
2.驯化管理
• 移栽的试管小植株和活体生根的小植株，其湿度的 控制十分重要。因试管苗在高湿（90％～100％的 相对湿度）环境中生长，茎叶表面防止水分散失的 角质层等几乎全无，根系又不发达，移栽后难以保 证水分平衡，即使根系周围有足够的水分也不行。 所以，应采用加覆塑料薄膜、经常喷雾的方法，提 高小植株周围的空气湿度，减少叶面蒸腾。同时， 逐渐降低空气相对湿度，使其适应自然环境条件。
• 表现嵌合性状的植株通过此方式再生时，往往导致嵌合性 状发生分离而失去原有价值。如观赏植物色彩镶嵌的叶子、 带金边或者银边等性状的植物，通过器官发生性途径再生 植株时，可能导致这些观赏性状消失。这类植株快繁时， 应通过丛生芽途径进行。
A
B
C
E
花烛叶片离体培养及植株再生
（四）胚状体发生型
胚状体发生型是指外植体在适宜培养环境中，经 诱导产生体细胞胚的繁殖方法 ，从而形成小植株的繁 殖方法。
二、植物快繁器官形成方式（再分化形成植 株的方式）
根据器官形成方式的不同，将植物器官的 再生分为五种类型，即短枝发生型（不定 芽型）、丛生芽发生型（器官型）、器官 发生性、胚状体发生型和原球茎发生型。
（一）短枝发生型（不定芽型）
短枝发生型是指外植体携带的带叶茎段，在适 宜的培养环境中萌发，形成完整植株，再将其剪成 带叶茎段，继代再成苗的繁殖方法。
（二）丛生芽发生型(器官型)
丛生芽发生型是指使外植体携带的顶芽或 腋芽在适宜培养环境中不断发生腋芽而呈丛生状 芽，或者直接从外植体上长出多个从芽，将单个 芽转入生根培养基中，诱导生根成苗的繁殖方法。
分为间接途径（经愈伤途径）和直接途径两种。 胚状体发生途径具有成苗数量大、速度快、结构 完整的特点，因而是外植体增殖系数最大的途径。
胚状体发生型 特点：①胚状体发生数量多、速度快、结构完整、 繁殖系数高。②遗传性稳定
菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察
（五）原球茎发生型
原球茎发生型是兰科植物的一种快繁方式， 它是指茎尖或腋芽外植体经培养产生原球茎（即 扁球状体、基部生假根）的繁殖类型。
四、移栽驯化
试管小植株的移栽驯化是试管苗从异养到自 养的转变，有一个逐渐适应过程。移栽前需对试 管植株进行高光强炼苗，使植株生长粗壮，并打 开瓶口，降低湿度，使其逐渐适应外界环境。 1.移栽 2.驯化管理
１.移栽
• 首先应洗去小植株根部附着的培养基，避免微生物 的繁殖污染，造成小苗死亡。
• 然后将小植株栽入人工配制的混合培养基质中，基 质用保湿又透气的材料，如蛭石、珍珠岩、粗沙、 泥炭等按比例混合，以利小植株生长。几天后小植 株可形成新的功能根系。
①繁殖速度较快。②遗传性不稳定，已产生变异。③愈伤组织 是遗传转化、细胞培养或原生质体培养的良好材料
• 器官发生型也是许多植物快繁的主要方式。由于不 定芽形成的数量与腋芽数目无关，其增殖率高于丛 生芽发生型。
• 但经过愈伤组织途径或者多次继代培养后，容易导 致细胞分裂不正常，增加变异植株发生频率。如香 蕉继代次数控制在8代之内，再生植株的变异率则 可控制在3%左右。
3.增殖体的大小和切割方法 一般携带一个茎节，但第一次增殖的茎段一般
都有2~4个茎节。 茎段可以垂直插入培养基中，但插入的深度不
应淹没茎节；或水平放入培养基表面，以刺激侧芽 的萌动。
青花菜增殖
枇杷增殖
三、芽苗生根
将单个芽苗转移到生根培养基或适宜环境中诱导生根。 1.离体生根（试管内生根）
降低无机盐浓度（1/2或者1/4），减少或不需要细胞 分裂素，增加生长素的浓度。
对有些植物，如果芽苗在含有生长素的培养基中生长 1～2d，再转移至无生长素的培养基中，或芽苗在含生长素 的生根溶液中浸蘸后直接插入无生长素的培养基中，湿度 85%以上，温度25℃，弱光或黑暗条件。
2.活体生根（试管外生Hale Waihona Puke Baidu） 芽苗先在生长素中快速浸蘸或在
含有相对高浓度生长素的培养基中培养 5~10天，然后在温室中栽入培养基质， 经常喷雾，给予高湿度环境，几天后便 可自行生根。
丛生芽发生型是大多数植物快繁的主要途 径，它不经过愈伤组织，能使无性系后代保持原 品种的特性，在生产中普遍应用。
特点： ①繁殖率非常 高，但繁殖速 度较慢。 ②遗传性稳定。
（三）器官发生型（已讲过）
是指外植体在适宜培养基和培养条件下，经过脱分化形成愈 伤组织，然后经过再分化诱导愈伤组织产生不定芽，或外植 体不形成愈伤组织而直接从其表面形成不定芽，将芽苗转移 到生根培养基中，经培养获得完整植株的繁殖方法。
第三节 植物离体繁殖
I概述 一、概念和特点
（一）概念
植物离体繁殖（ ）又称植物快繁或微繁，是 指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养， 使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。
（二）特点
1、繁殖效率高。 2、培养条件可控性强。 3、占用空间小。 4、管理方便，利于自动化控制。 5、便于种质保存和交换。
• 原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学构造。种子萌发初期并不出 现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，肿胀的胚呈小圆锥状， 故称为原球茎。
• 原球茎是短缩的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官， 它可以增殖，形成原球茎丛。由茎尖或腋芽外植体诱导产生原球茎，切 割原球茎进行增殖，或停止切割使其继续培养而转绿，产生毛状假根， 叶原基发育成幼叶，将其转移培养生根，形成完整植株。
植物快繁程序
植物快繁的程序包括四个阶段： 无菌（或初代）培养的建立 繁殖体增殖 芽苗生根 小植株的移栽驯化
一、无菌培养的建立
这个阶段的任务是母株和外植体的选取、 无菌培养物的获得及外植体的启动生长，以利于 离体材料在适宜培养环境中以某种器官发生类型 进行增殖。
二、增殖培养
1.培养材料的增殖方式 五种方式。(取决于培养目的和材料自身的可
能性。) 一般大多数植物采用无菌短枝或腋芽萌发或诱
导不定芽产生，再以芽繁殖芽的方式进行增殖；兰 科植物、百合等则采用原球茎增殖途径，以保障繁 殖材料的遗传稳定性。
2.增殖培养基 增殖率是植株快速繁殖特别是商业性繁殖
的重要指标。外植体在每次继代培养中，应能 产生最大数量的有效繁殖体。
基本培养基一般与启动生长培养基相同， 而细胞分裂素和矿物元素的浓度水平则高于启 动生长培养基。一般 1~3 0.1~1 。
2.驯化管理
• 移栽的试管小植株和活体生根的小植株，其湿度的 控制十分重要。因试管苗在高湿（90％～100％的 相对湿度）环境中生长，茎叶表面防止水分散失的 角质层等几乎全无，根系又不发达，移栽后难以保 证水分平衡，即使根系周围有足够的水分也不行。 所以，应采用加覆塑料薄膜、经常喷雾的方法，提 高小植株周围的空气湿度，减少叶面蒸腾。同时， 逐渐降低空气相对湿度，使其适应自然环境条件。
• 表现嵌合性状的植株通过此方式再生时，往往导致嵌合性 状发生分离而失去原有价值。如观赏植物色彩镶嵌的叶子、 带金边或者银边等性状的植物，通过器官发生性途径再生 植株时，可能导致这些观赏性状消失。这类植株快繁时， 应通过丛生芽途径进行。
A
B
C
E
花烛叶片离体培养及植株再生
（四）胚状体发生型
胚状体发生型是指外植体在适宜培养环境中，经 诱导产生体细胞胚的繁殖方法 ，从而形成小植株的繁 殖方法。
二、植物快繁器官形成方式（再分化形成植 株的方式）
根据器官形成方式的不同，将植物器官的 再生分为五种类型，即短枝发生型（不定 芽型）、丛生芽发生型（器官型）、器官 发生性、胚状体发生型和原球茎发生型。
（一）短枝发生型（不定芽型）
短枝发生型是指外植体携带的带叶茎段，在适 宜的培养环境中萌发，形成完整植株，再将其剪成 带叶茎段，继代再成苗的繁殖方法。