紫外、荧光分光光度计说明

一、设备名称：

RF-5301PC荧光分光光度计；

二、使用原理

1、荧光分光光度计

由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。荧光是光致发光，任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的。

三、组成结构

光源、光件、样品池、检测器、数据处理器

1、荧光分光光度计

图RF5301PC荧光分光光度计

主要是由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器以及数据处理系统几部分组成

1. 光源：

为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。

2．激发单色器：

置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。 3．发射单色器：

置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。

4．样品室：

通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

5．检测器：

一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号

四、功能用途

1、荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器，扫描范围200-900nm，通常比紫外分光光度计检测灵敏度高2~3个数量级，能在紫外“力不能及”的领域发挥作用，是现代分析测试领域尤其是痕量分析领域一种应用广泛的重要分析仪器，在生命科学、医学及临检、药学及药理学、生化、食品、环保、公安等领域有广泛应用。

1.医学和临床检验———生物体试料的临床分析

2.药学和药理学———天然药物分析，药品质量控制和药物代谢的研究

3.生物化学———对于生物体内微量物质的测定

4.食品工业———食品中痕量组分的测定

5.污染物的分析———大气污染、环境卫生检测，食品污染物研究等

6.有机和无机化学———用吸光光度法不能测定的痕量组分分析

五、注意维护保养

1、仪器一定要安装在稳定牢固的实验台上，远离振动源。

2、氙灯寿命为500h，超过使用时间必须更换，否则易引起爆炸。

3、荧光分光光度计氙灯点亮后需一定时间稳定，故进行精密测试应在 30分钟以上。关闭氙灯电源后，若要重新使用，请等待 60秒以后重新触发。

4、供试品测试完毕后应及时取出，长时间放置在样品室中会污染光学系统，引起性能下降。样品室应保持干燥，应及时更换干燥剂。

六、仪器操作

现场具体操作

一、设备名称：UV2401紫外可见分光光度计

二、使用原理

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A

是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。

三、组成结构

主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。

四、功能用途

1 检定物质

根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。

2与标准物及标准图谱对照

将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。

3 比较最大吸收波长吸收系数的一致性

4 纯度检验

5 推测化合物的分子结构

6 氢键强度的测定

实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。

7 络合物组成及稳定常数的测定

8 反应动力学研究

9 在有机分析中的应用

有机分析是一门研究有机化合物的分离、鉴别及组成结构测定的科学，它是在有机化学和分析化学的基础上发展起来的综合性学科。

五、注意维护保养

1、样品池使用挥发性物质时比色皿要扣盖。

2、比色皿使用后要清理干净。

3、使用时要遵照使用手册来完成操作。

4、在更换保险丝或通电之间，应关闭电源开关断开电源线。

六、仪器操作

现场具体操作