紫外、荧光分光光度计说明
紫外分光光度法和荧光分析法
1 Beer-Lambort 定律A=log T =Ecl *A为吸收度；
*T为透光率； *E为吸收系数（以 E *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。
1% 1cm
表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值）
适用条件：入射光为单色光 溶液是稀溶液 固体、 液体和气体样品在同一波长 下，各组分吸光度具有加和性
吸收光谱
10-4-10-7g/ml
选择性
高
一般
应用
硫色素荧光法测定维生素B1
维生素B1 在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，在紫（365nm）
照射下呈蓝色荧光（435nm）通过与对照品荧光强度比较。即可测得供试 品含量（课本260页）
荧光分光光度法测定维生素E
采用同步荧光扫描法测定血清中维生素E，有效的消除溶剂拉曼 光谱的干扰，提高灵敏度和准确性。（课本277页）
双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两
束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收 较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、 选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提 高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度 成正比 （例子：课本366页）
其他
卡尔曼滤波法
偏最小二乘法 小波变换
三波长分光光度法
系数倍率法
……
原理 与紫外-可见法异同点
应用
原理
荧光 — 分子吸收电磁波后，从其最低激发 态重新发射紫外线或可见光的现象 利用某些物质被一定波长的光照射后所产 生的，能够反映该物质特性的荧光来进行 定性定量的分析方法——荧光分析法。
荧光分光光度计使用操作注意事项 光度计操作规程
荧光分光光度计使用操作注意事项光度计操作规程荧光分光光度计也被称作（荧光光谱仪），是一款利用惰性气体氩气作载气，将气态氢化物和过量氢气与载气混合后，导入加热的原子装扮置。
原子荧光光谱分析法具有设备简单、灵敏度高、光谱干扰少、工作曲线线性范围宽、可以进行多元素测定等优点。
在地质、冶金、石油、生物医学、地球化学、材料和环境科学等各个领域内获得了广泛的应用。
作为一款专业测量分析物质的设备，为避开荧光光谱仪在使用过程中显现分析误差，需要注意以下几点：1.在打开荧光光谱仪的主机之前，需要调整其设备各性能数值，比如需要先开氩气钢瓶总阀并将出口压力调至规范区域内，否则会导致仪器欠压报警并对荧光光谱仪的正常工作造成影响。
2.需要安装需测的元素灯，再打开仪器，开启设备后等仪器自检结束，再检查看元素灯有没有亮，然后取下排风罩，将调光器放在原子化器上，旋转元素灯座的可调螺钉，调整元素灯光斑中心至对光器横线与竖线的交叉点，便完成对元素灯的安装调整。
3.在使用荧光光谱仪的过程中应保持试验室通风情形良好，并对废液桶进行适时处理，以保持废液排放正常。
4.在荧光光谱仪完成测试后，需要对其进行适时清理，避开因残留异物导致下次检测显现错误。
5.在对荧光光谱仪清洁完后，依照规定操作对各开关进行关闭，并进行相应的存放操作。
6.定期对荧光光谱仪进行检修保养，适时清洁荧光光谱仪中的异物，避开其对设备造成损坏。
由于资料有限，因而上述（荧光光谱仪）操作注意事项并不全面，在实际进行操作的过程中，建议咨询相关专业技术人员，并查阅相应使用说明书。
原子吸取分光光度计有效的样品处理技术原子吸取分光光度计样品要被吸喷雾化后才能被分析，为了使测量的结果有代表性，必需要保证样品均匀的分布在溶液中。
所以有很多样品必需要经过前处理才能拿来测定，而不同的样品有不同的前处理方法，同一样品也有多种的前处理方法，选择不同方法的依据就是便利快捷、同时又要尽量削减样品的用量，削减有效成分的流失。
紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计1.工作环境1.1尺寸和重量长570×宽660×高275mm，约重量36kg1.2使用温度范围15℃~35℃1.3使用湿度范围45% to 80%2.技术规格2.1分光系统2.1.1*光学系统：双光束能提高检测精度，是目前高灵敏度、高精度紫外检测设备的必要光学系统2.1.2*分光器：衍射光栅/衍射光栅型双单色器前级单色器：双波长闪耀全息光主单色器：高性能闪耀全息光栅，象差校正型切尼尔－特纳装置从物理结构上保证分光的纯净，减少杂散光，提高检测精确度。
2.1.3设定波长范围：190~1100nm2.1.4测试波长范围：190~900nm2.1.5*衍射光栅刻线数：1600 lines/mm，高刻线数光栅能保证检测数据的准确性2.1.6波长准确性：±0.3nm2.1.7波长重复精度：±0.1nm2.1.8波长扫描速度波长移动速度: 约 3200nm/min波长扫描速度: 约 900～160nm/min监控扫描速度: 约 2500nm/min2.1.9波长设定：扫描开始波长和扫描结束能够以1nm单位设置；其它为0.1nm单位。
2.1.10谱带宽度：0.1/ 0.2/ 0.5/ 1/ 2/ 5nm 6段转换2.1.11分辨率：0.1nm2.1.12*杂散光：0.0003% 以下(220nm,Nal 10g/L 溶液)使用低杂散光的紫外设备，能提高检测准确性，减少数据偏差。
2.1.13测光方式：双光束测光方式（负反馈直接比例方式）2.1.14测光类型：吸光度（Abs），透射率（％），反射率，能量（E）2.1.15测光范围：吸光度：-4~5 Abs2.1.16记录范围：吸光度-9.999~9.999 Abs2.1.17测光准确度：±0.002Abs(0～0.5Abs)2.1.18重复测光精度：±0.001Abs.(0～0.5Abs)2.1.19基线平滑度：±0.001 Abs以内（除去干扰，狭缝2nm，波长扫描速度低时）2.1.20基线校正：计算机自动校正（电源启动时，自动存储备份的基线，可以再校正）2.1.21漂移：小于0.0004Abs/h (电源启动2小时后)2.2光源：50W卤素灯（2000小时寿命）和氘灯（插座型）内置光源位置自动调整机构2.3检测器：光电倍增管2.4计算机：主流品牌台式机一台内存≥2G硬盘≥320GDVD刻录光驱显示器：19”液晶显示器2.5打印机：主流品牌激光打印机一台2.6供货配置一览表紫外可见分光光度计主机一台自动六联池一个10mm方形石英比色皿17个10mm带塞方形石英比色皿10个必要配件耗材3.随机资料: 中英文操作手册4.验收指标: 按技术指标5.售后服务5.1 厂家的技术人员在最终用户处进行安装，调试5.2 厂家工厂或分析中心内为最终用户的一名操作人员做三天的免费培训，用户差旅、食宿自理保修期: 安装验收后，保修一年定货量: 1 台交货期: 合同生效后30天内原子荧光光度计原子荧光光度计技术要求1、用途用于样品中As、Sb、Bi、Hg、Se、Te、Sn、Ge、Pb、Zn、Cd元素的痕量分析及后续元素形态功能的扩展。
紫外分光光度计及荧光积分球
前言：在分光光度计中，一个是作为检测器用的光电倍增管，另一个是作为附件用的积分球，两者看似没有直接的联系，实际上，积分球的问世和使用正是弥补了光电倍增管在检测多样化样品时的自身缺陷。
而对于积分球检测器这种附件，许多仪器使用者了解甚少，甚至没有听说过。
为此，本文针对这两者的关系做一简单介绍，以飨读者。
1．光电倍增管的使用：光电倍增管英文名称是photomultiplier tube，简称PTM。
在目前的一些双光束分光光度计中经常使用光电倍增管作为检测器。
由于光电倍增管具有灵敏度高，噪声低及响应速度快的特点，所以被广泛地应用在许多光学仪器中作为检测器，这是众所周知的常识。
2．光电倍增管的结构：光电倍增管有侧窗式和端窗式两种，在实际应用范围里又以侧窗式居多，因此、本文以R 928型侧窗式光电倍增管为例加以介绍。
R928型光电倍增管有11个电极，分别为：1个光阴极（Ｋ），9个倍增极，也称打拿极（D Y）和1个阳极（P）；外观图和内部图如图－1，图－2所示：图－1、R928型光电倍增管外观图图－2、R928型光电倍增管内部结构顶视图3．光电倍增管的简单工作原理：当入射的检测光信号（S/R）照射到光阴极（K）后，光阴极向真空中激发出光电子。
这些光电子首先进入倍增系统的第一个打拿极DY1，然后通过进一步的二次电子发射，逐级通过其余的8个打拿极（DY2～DY9）而得到递增式的倍增放大；最后这些被多次放大后的电子被阳极（P）收集作为信号输出。
图－3是R928电极排列及供电电路示意图：图－3、R928电极排列及供电电路示意图4．光电倍增管灵敏度特性的分析：虽然光电倍增管有许多优点，但暇不掩玉，该器件自身也有两个致命的缺陷；①灵敏度因强光照射（这也就是为何仪器在通电的情况下样品室盖子不能打开的原因）或因照射时间过长而降低，停止照射后又部分地恢复；鉴于光电倍增管的这种特性致使它随着使用时间的累加，灵敏度会逐渐下降（一般从长波长开始下降，俗称“红外紫移”）且噪声输出却逐渐加大，直至被弃用。
分光光度计
分光光度计一．分光光度计基本结构简介能从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器称为分光光度计。
分光光度计因使用的波长范围不同而分为紫外光区、可见光区、红外光区以及万用（全波段）分光光度计等。
无论哪一类分光光度计都由下列五部分组成，即光源、单色器、狭缝、样品池，检测器系统。
（1）光源要求能提供所需波长范围的连续光谱，稳定而有足够的强度。
常用的有白炽灯（钨比灯、卤钨灯等），气体放电灯（氢灯、氘灯及氙灯等），金属弧灯（各种汞灯）等多种。
钨灯和卤钨灯发射320－2000nm连续光谱，最适宜工作范围为360－1000nm，稳定性好，用作可见光分光光度计的光源。
氢灯和氘灯能发射150－400nm的紫外结，可用作紫外光区分光光度计的光源。
红外线光源则由纳恩斯特（Nernst）棒产生，此棒由ＺrＯ2:Ｙ2Ｏ3=17:3（Ｚr为锆，Ｙ为钇）或Ｙ2Ｏ3，ＧeＯ2（Ｇe为铈）及ＴhＯ2（Ｔh为钍）之混合物制成。
汞灯发射的不是连续光谱，能量绝大部分集中在253.6nm波长外，一般作波长校正用。
钨灯在出现灯管发黑时应及更换，如换用的灯型号不同，还需要调节灯座的位置的焦距。
氢粘及氘灯的灯管或窗口是石英的，且有固定的发射方向，安装时必须仔细校正接触灯管时应戴手套以防留下污迹。
（2）分光系统（单色器）单色器是指能从混合光波中分解出来所需单一波长光的装置，由棱镜或光栅构成。
用玻璃制成的棱镜色散力强，但只能在可见光区工作，石棱镜工作波长范围为185￣4000nm，在紫外区有较好的分辩力而且也适用于可见光区和近红外区。
棱镜的特点是波长越短，色散程度越好，越向长波一侧越差。
所以用棱镜的分光光度计，其波长刻度在紫外区可达到0.2nm，而在长波段只能达到5nm。
有的分光光系统是衍射光栅，即在石英或玻璃的表面上刻划许多平行线，刻线处不透光，于是通过光的干涉和衍射现象，较长的光波偏折的角度大，较短的光波偏折的角度小，因而形成光谱。
f98荧光分光光度计说明书_概述
f98荧光分光光度计说明书概述1. 引言：概述：本文是《f98荧光分光光度计说明书》的概述部分。
本部分将简要介绍该说明书的结构、目的以及主要内容，以便读者更好地理解并使用该荧光分光光度计。
文章结构：本说明书主要包括引言、正文、f98荧光分光光度计的使用指南、常见问题解答和故障排除、结论和展望等几个部分。
引言部分为整篇文章的开头，为读者提供了对全文内容的基本了解。
目的：该说明书旨在向用户详细介绍f98荧光分光光度计及其工作原理、特点和功能。
同时，通过使用指南和常见问题解答，帮助用户正确操作仪器，并解决在实验过程中可能遇到的问题和故障。
接下来，我们将逐一介绍“1. 引言”中所列出的各小节内容。
2. 正文:2.1 什么是f98荧光分光光度计:f98荧光分光光度计是一种专门用于测量和分析样品中的荧光特性的仪器。
它通过激发样品中的荧光物质并测量其产生的荧光信号来获取关于样品的信息。
f98荧光分光光度计可以广泛应用于许多领域，如生物学、化学、医学等。
2.2 f98荧光分光光度计的工作原理:f98荧光分光光度计使用一定波长范围内的激发源来激发样品中的荧光物质。
这些激发源可以是可见或紫外线的灯管或激光器。
当样品被激发时，其中的荧光物质会吸收能量并重新辐射出以较长波长的荧光信号。
f98荧光分光仪通过检测和记录这些荧光信号的强度来测量样品中所含有的荧-4.3 数据处理与结果解读”: {不要使用markdown,不要包含网址亮物质。
该仪器还可以根据用户需求进行专门设置和调整，以提高测量的准确性和灵敏度。
2.3 f98荧光分光光度计的主要特点和功能:- 高灵敏度：f98荧光分光光度计具有极高的灵敏度，可以检测到样品中微量的荧光物质，并提供准确的测量结果。
- 宽波长范围：该仪器可在可见光至紫外线范围内进行测量，适用于不同波长下的荧光样品。
- 多种测量模式：f98荧光分光仪支持多种不同的测量模式，如荧光强度、寿命等，方便用户根据需求进行选择。
一、荧光分光光度计配置及参数(进口)
技术参数：*1、单色器：机刻凹面衍射光栅,900g/mm,F2.2校正像差，且可见光区高的光通量,提高检测灵敏度。
2、闪跃波长：激发300nm，发射400nm。
*3、检测器测量波长范围：200~750nm和零次光；带自增益功能：连续可调（0-1000V）4、分辨率：最低分辨率1.0nm。
5、波长准确度：最低要求±1.0nm。
*6、波长扫描速度：30~60000nm/min，调节步距1nm，亦可按时间收集数据。
7、光谱带宽：EX：1，2.5，5，10，20nm；EM：1，2.5，5，10，20nm8、光源：150w连续光源氙灯。
*9、水平狭缝，最小试样体积：0.6mL(使用标准10mm池)，微量池最小体积0.2ml。
*10、水拉曼检测激发波长350nm，带宽5nm，响应时间2.0s，取水拉曼峰处噪声，灵敏度大于800：1（RMS）；11、可进行时间扫描和定量分析，三维荧光图谱。
*12、具有全波长预扫描功能，能自动、快速地寻找到最佳的激发和发射波长。
*13、线性动态范围：6个数量级；14、全波段的光谱校正，排除仪器的依赖性，确保高精度的数据。
15、控制系统和软件15.1计算机一台：计算机配置不低于i3处理器、2GB内存、500GB硬盘、DVD可刻录光驱、22英寸LED显示器，Windows7操作系统。
15.2分析软件：定性及定量分析软件，以及与此有关的应用分析软件。
16、固体支架：配套的标准固体支架。
17、恒温样品支架17.1、冷却循环水系统：与仪器标配套的标准的国产冷却循环水系统。
18、滤光片1套，带通滤光片250-390nm，低通截止滤光片，295、320、370、395、420nm19、氙灯1支20、激光打印机1台，满足仪器使用。
21、附件、配件按正常实验配齐，安装调试后能够正常进行实验。
技术参数1 技术规格1.1 电源电压：220V，50Hz1.2 温度：10~35℃1.3 相对湿度：45~85%2 现场免费培训，各项性能指标达到技术要求，由供需双方共同签字认可，现场验收，仪器验收合格后，供方须提供整机一年免费保修，并提供终身维修服务。
紫外分光光度计
紫外分光光度计：工作原理：物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。
紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
利用物质的分子或离子对某一波长范围光的吸收作用，对物质进行定性、定量分析以及结构分析。
紫外分光光度法首先确定实验条件，并在此条件下测得标准物质的吸收峰以及其对应波长值（同时可获得该物质的最大吸收波长）；再在选定的波长范围内（或最大波长值处），分别以（不同浓度）标准溶液的吸光度和溶液浓度为横、纵坐标绘出化合物溶液的标准曲线得到其所对应的数学方程；接着在相同实验条件下配制待测溶液，测得待测溶液的吸光度，最后用已获得的标准曲线方程求出待测溶液中所需测定的化合物的含量。
使用范围：凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。
分光光度法只适用于微量组分的定量分析(稀溶液，浓度在线性范围内，（c ＜0.01 mol/L)，浓溶液中光吸收定律将发生偏离，最适宜的吸光度测量范围为0.2-0.8之间（此时误差小）。
波长范围：可见-紫外分光光度计。
其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。
主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。
光源：在仪器的波长范围内提供足够的、稳定的连续的光。
紫外分光光度法和荧光分析法..
波长紫外可见分光光度计
主要应用
1、药物的杂质检查
利用药物与杂质对光的选择性吸收性质的差异，若药物在杂质的 最大吸收波长处没有吸收，则可在此波长处测样品溶液的吸收度，通 过控制样品溶液吸收度来控制杂质的量。 例：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 二羟基蒽醌的三氯甲烷溶液 在432nm处有最大吸收，而 地蒽酚在该处几乎无吸收。
双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两
束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收 较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、 选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提 高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度 成正比 （例子：课本366页）
在溶液中，当荧光物质 的浓度较低时,其荧光强 度与该物质的浓度通常 有良好的正比关系,即
IF=KC
光照 分子基态 辐射跃迁 荧光 激发态
若光源是：
由荧光波长可确定物质分子 可见-紫外光源 分子荧光分析法 具有结构 由荧光强度可测物质的含量 原子特征光谱作光源 原子荧光分析 X射线作光源 X射线荧光分析
其他
卡尔曼滤波法
偏最小二乘法 小波变换
三波长分光光度法
系数倍率法
……
原理 与紫外-可见法异同点
应用
原理
荧光 — 分子吸收电磁波后，从其最低激发 态重新发射紫外线或可见光的现象 利用某些物质被一定波长的光照射后所产 生的，能够反映该物质特性的荧光来进行 定性定量的分析方法——荧光分析法。
导数分光光度法
导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、
操作指南荧光分光光度计使用方法说明书
操作指南荧光分光光度计使用方法说明书一、简介荧光分光光度计是一种用于测量荧光物质的仪器，可用于快速、准确地分析和检测样品中的荧光强度。
本说明书将详细介绍荧光分光光度计的使用方法，以及操作步骤和注意事项。
二、仪器准备1. 根据实验需要，选择适当的荧光分光光度计，并确保其完好无损。
2. 将荧光分光光度计放置在平稳的台面上，并接通电源。
3. 检查仪器的各个部件是否干净，如有污物或尘埃应及时清理。
三、样品制备1. 根据实验要求，选择合适的样品进行测量。
2. 准备样品溶液，确保其浓度适中，以免超出荧光分光光度计的检测范围。
3. 将样品置于透明的石英或玻璃样品池中，并确保其表面光滑，无气泡和杂质。
四、仪器设置1. 打开荧光分光光度计，并启动相关软件。
2. 选择适当的检测波长范围，并设置荧光激发波长和荧光发射波长。
3. 对于荧光强度的测量，可以选择适当的增益和积分时间。
4. 确保荧光分光光度计的设置与所需测量结果一致。
五、测量操作1. 将样品池放置在仪器的样品舱中，并确保其固定。
2. 启动测量程序，等待荧光分光光度计自动调零，并进行基线校准。
3. 点击“开始测量”按钮，荧光分光光度计将开始对样品进行荧光强度的测量。
4. 在测量过程中，避免移动或震动荧光分光光度计，以免影响测量结果的准确性。
5. 测量完成后，保存并导出测量结果，同时进行数据分析和处理。
六、注意事项1. 使用荧光分光光度计时，应注意仪器的安全操作规范，避免误操作和事故发生。
2. 在进行测量前，确保仪器已经预热至稳定状态，并检查仪器的各项参数是否正常。
3. 使用前应按照仪器说明书正确安装和更换相关部件，确保仪器正常运行。
4. 在放置样品池时，要注意不要碰撞到仪器或其他物体，以免破坏样品池和仪器。
5. 维护仪器的干净卫生，避免污物或尘埃对测量结果的影响，定期清洁仪器的各个部件。
6. 使用后进行仪器的关机和断电操作，并妥善保管仪器和相关配件，以免损坏或丢失。
紫外、荧光光度计测定甲基红的发射光谱
紫外、荧光光度计测定甲基红的发射光谱一、目的与要求1．加深对紫外可见分光光度计和荧光光度计原理的理解;2．巩固紫外可见分光光度计和荧光光度计的基本操作。
二、方法原理紫外可见分光光度计分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比；如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A为吸光度,ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)就可以采用标准曲线法对溶液进行定量分析。
荧光光度计物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光正比关系,即If光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
激发荧光物质的激发波长的选择通常为其最大吸收波长。
紫外、荧光光度计均由5个部件组成：①辐射源。
②单色器。
③样品室。
对紫外分为石英池和玻璃池两种，前者适用于紫外到可见区，后者只适用于可见区。
④检测器，又称光电转换器。
⑤显示装置。
三、仪器与试剂1. PE LAMBDA 35 型紫外可见分光光度计2. F7000型荧光光度计3．试剂：甲基红、乙醇四、内容与步骤1．配制一定浓度的甲基红的乙醇溶液（约10-5 mol/L）。
分光光度计
14
双光束分光光度计 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通 过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的 透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。 双光束分光光 度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池， 还能自动消除光源强度变化所引起的误差。 双波长分光光度计 由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得 到两束不同波长1和2 的单色光；利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸 收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸 光度差值。对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析，以及存在背景干 扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏 度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。
六、紫外可见分光光度计的分析及应用
紫外可见分光光度计的定性分析 物质吸收不同波长的光的特性只与溶液中物质的结构有关，而与溶液的浓度无关不同的 物质，所得的吸收光谱曲线各不相同。因此，在分光光度法中，将吸收光谱曲线作为定性的依 据。 紫外可见分光光度计在定性分析上的应用
1,.用吸收谱图推测化合物的结构
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二、、不同类型分光光度计的特点
荧光分光光度计 荧光分光光度计的优缺点；
1.灵敏度高
个数量级。 2.定性更可靠
检测限可达10-10～10－12g/ml,比紫外可见分光光度法低3～4
荧光物质具有激发光谱和发射光光谱，可提供荧光强度、
荧光效率、荧光寿命、等多种物理参数，特征性强，较单一图谱定性更为可靠。 3.干扰因素较多 对试剂、环境等实验条件要求严格，测量精密度较差。 能产生荧光的物质相对较少，但许
紫外分光光度计操作规程
紫外分光光度计操作规程
《紫外分光光度计操作规程》
一、设备准备
1. 打开紫外分光光度计电源，等待仪器稳定。
2. 确保仪器内部清洁，并定期对其进行维护和校准。
3. 准备好所需的样品溶液或溶剂。
二、样品测量
1. 将空白样品放入光路中，进行基准校准。
2. 用无菌吸管将待测样品溶液小心地滴入样品槽中。
3. 将样品槽放入仪器，并记录下初始测量数据。
三、测量参数设置
1. 设置光谱扫描范围，根据需要选择合适的波长范围。
2. 确定光程长度并设置光谱扫描速度。
3. 根据样品的特性设置起始波长和结束波长。
四、开始测量
1. 点击“开始测量”按钮，仪器开始进行光谱扫描。
2. 在测量过程中要保持实验室环境安静，避免其他干扰。
3. 等待测量完成，记录下最终的光谱数据。
五、数据处理
1. 利用仪器自带的软件或其他数据处理软件对测量数据进行处理和分析。
2. 生成光谱图和数据报告，并保存备份。
3. 清洁样品槽和光路，关闭仪器电源，保持仪器整洁。
六、实验记录
1. 记录下实验中的所有操作步骤和参数设置。
2. 保存实验数据和光谱图，以备后续分析和验证。
以上即是紫外分光光度计的操作规程，操作人员在进行实验时务必按照规程进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
紫外与荧光实验讲义
实验一绘制吸收光谱及测定摩尔吸光系数一.实验目的通过紫外吸收光谱的绘制和摩尔吸光系数的测定，掌握Agilent8453 UV-V is的使用方法。
学习导数光谱计算方法及特点。
二.实验原理1．本实验用Agilent8453型分光光度计绘制氨基酸（苯丙氨酸，色氨酸）的紫外吸收光谱，找出它的吸收峰波长并计算摩尔吸光系数。
紫外分光光度法是利用物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，波长范围为200-400nm的紫外光谱。
各种分子都有其特征的吸收光谱，即吸光度与摩尔吸光系数随波长的变化而变化的规律。
吸收光谱的形状与物质的特征有关，以此进行定性分析。
为了清楚地描述各种物质对紫外区域电磁辐射的选择性吸收的情况，往往需绘制吸收光谱曲线，即吸光度对波长的曲线。
在吸收光谱曲线上可以找到最大吸收峰波长。
根据比尔定律：A = ε b c式中A—吸光度ε—摩尔吸光系数b—液槽厚度，单位：厘米c—摩尔浓度，单位：mol/l摩尔吸光系数可按下式计算：ε=A b c实验测得的吸收光谱及摩尔吸光系数与仪器及其狭缝宽度有关。
因此实验结果须注明所用仪器的型号及缝宽条件。
2．导数分光光度法：利用紫外-可见分光光度计软件系统带有的数学处理功能，对吸收光谱进行处理，可以获得导数光谱。
利用导数光谱进行分光光度测定，称为导数分光光度法。
通常可以获得1-4阶导数光谱。
在各阶导数光谱中，吸光度对波长的微分值与溶液中组分的浓度c保持线性关系：ssd Acdλ∝。
其中s为导数的阶数。
因此，可以利用导数光谱进行定量测定。
导数光谱可用于放大图谱间差别，定性分析中分辨重叠谱带，而且还可以减少定量分析中来自散射、基体、及其它吸收物的干扰影响。
由于导数光谱灵敏度高，因此对于试样纯度检验，多组分混合物的测定，消除共存杂质的干扰和背景吸收，测定混合式样都具有特殊的优越性。
三.实验仪器和试剂1.Agilent8453 UV-Vis分光光度计;2.移液枪(德国BRAND公司生产);3.25ml容量瓶，50ml容量瓶10支;4.氨基酸储备液：色氨酸0.400 g/l，苯丙氨酸2.00 g/l;5.去离子水四.实验步骤1.波长测定（1）用氨基酸储备液及去离子水在50ml容量瓶中配置氨基酸溶液，色氨酸浓度为50mg/l, 苯丙氨酸720mg/l；（2）分别取上述溶液，用1cm石英比色皿，以水作参比溶液，在波长范围为190nm——450nm间测定他们的吸收光谱。
荧光分光光度计使用说明 光度计常见问题解决方法
荧光分光光度计使用说明光度计常见问题解决方法荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190～650nm，发射波长扫描范200～800nm。
可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。
荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。
荧光分光光度计使用说明：开机时，请先开氙灯电源，再开主机电源。
每次开机后请先确认一下一起两边排热风扇工作正常，以确保仪器正常工作，发觉风扇有故障，应停机检查。
主机工作时顶部排热器温度很高,切勿触摸,以免受伤.氙灯点亮后需确定时间稳定，故进行精密测试应在30分钟以上。
当氙灯未能触发，并连续发生“吱吱”高频声或“叭叭”打火声时，请立刻关掉氙灯电源，稍后数秒重新触发。
请尽量削减不必要的氙灯触发次数，避开氙灯在高压下反复触发。
封闭氙灯电源后，若要重新使用，请等待60秒以后重新触发。
运行未知浓度的样品测试时，灵敏度设置请从低位向高围（0—7）渐渐设置，当灵敏度较高时（>3），为了保护光电倍增管，请拥护勿将强光置进样品室内。
当（仅当）操纵者错误操纵或其他干扰引起微机错误时，应当立刻关断主机电源，重新启动，但无须关断氙灯电源。
单色器内用螺丝紧固处不得松动，光学器件和仪器运行环境需保护清洁。
清洁仪器外表时,请勿使用乙醇乙MI等有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩.比色皿保持清洁。
02 T6新世纪紫外可见光分光光度计作业指导书
T6新世纪紫外可见分光光度计作业指导书1.目的采用正确的操作方法，规范操作和维护本仪器，以达到提供科学、准确、有效的数据的目的。
2.适用范围本操作规程适用于T6新世纪紫外可见分光光度计的操作、维护及期间核查。
3.职责实验室仪器操作人员必须认真负责按照操作规程操作本仪器，并出具准确的数据。
定期校准，及时保养和维护。
4.工作环境要求4.1 环境温度：5~35℃；相对湿度：不大于85%RH。
如果温度高于30℃以上，要保证相对湿度在70%以下4.2不要将仪器安装在空气中氯气、盐酸气体、硫化氢气体、亚硫酸气体等腐蚀性气体超标的场所4.3放置仪器的工作台应水平稳定，不能有震动；仪器的风扇附近应留足够的空间，使其排风顺畅。
4.4不与其它用电设备共用电源插座4.5避免灰尘较多的环境5.操作规程5.1 连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能。
5.2 接通电源，仪器初始化完成后用翻页键选择到（光度测量）按<ENTER>键进入光度测量主页面5.3 用<SET>键进入参数设定页面，按键与键使光标移动到测光方式选择吸光度后按<RETURN>键退出设置，你所选择的测光方式被应用5.4 在光度测量设定菜单下翻页键<选择数学>，按<ENTER进入数学计算界面。
在界面的底部提示信息处输入K和B系数。
5.5在光度测量设定菜单下翻页键<试样池>，按下<ENTER> 键进入试样设定界面。
按键与键使光标移动到相应的功能选项上，按<ENTER>键即可进入所选的相应的功能，分别设置试样池、使用样池数、空白溶液校正、试样池空白校正、试样空白、移动试样、系数设定和试样池复位。
5.6在光度测量设定菜单下翻页键<GOTO>键进入波长，在在界面的底部提示信息处输入波长，用数字键输入所需波长。
输入完毕后按<ENTER>键进入光度测量主页面。
仪器分析作业：荧光、紫外、红外
傅立叶变换红外光谱仪曹文芳 1014061420一、仪器结构傅立叶变换红外光谱仪的工作原理图固定平面镜、分光器和可调凹面镜组成傅立叶变换红外光谱仪的核心部件－迈克尔干涉仪。
由光源发出的红外光经过固定平面镜反射镜后，由分光器分为两束：50％的光透射到可调凹面镜，另外50％的光反射到固定平面镜。
可调凹面镜移动至两束光光程差为半波长的偶数倍时，这两束光发生相长干涉，干涉图由红外检测器获得，经过计算机傅立叶变换处理后得到红外光谱图。
IRPresting-21型傅立叶变换红外光谱仪具300入射迈克尔逊密闭型干涉仪，单光束光学系统，空冷陶瓷光源，镀锗KBr基片分束器，温度可调的DLATGS 检测器，波数范围7,800～350cm-1，S/N大于40,000∶1（4 cm-1，1分钟，2,100 cm-1附近，P—P），具有自诊断功能和状态监控器。
可收集中红外、近红外、远红外范围光谱。
二、实验原理原理概述：红外吸收光谱分析方法主要是依据分子内部原子间的相对振动和分子转动等信息进行测定。
一束具有连续波长的红外光通过物质，物质分子中某个基团的振动频率或转动频率和红外光的频率一样时，分子就吸收能量由原来的基态振(转)动能级跃迁到能量较高的振(转)动能级，分子吸收红外辐射后发生振动和转动能级的跃迁，该处波长的光就被物质吸收。
所以，红外光谱法实质上是一种根据分子内部原子间的相对振动和分子转动等信息来确定物质分子结构和鉴别化合物的分析方法。
将分子吸收红外光的情况用仪器记录下来，就得到红外光谱图。
红外光谱图通常用波长(λ)或波数(σ)为横坐标，表示吸收峰的位置，用透光率(T%)或者吸光度(A)为纵坐标，表示吸收强度。
三、操作步骤1 、开机前准备开机前检查实验室电源、温度和湿度等环境条件，当电压稳定，室温为21±5℃左右，湿度≤65%时才能开机。
2、开机始终保持红外光谱仪右下侧黄色灯亮（除湿器指示灯）；开机时，首先打开右下侧仪器电源开关，此时绿灯亮，稳定半小时，使得仪器能量达到最佳状态。
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一、设备名称：
RF-5301PC荧光分光光度计；
二、使用原理
1、荧光分光光度计
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
荧光是光致发光，任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。
荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。
荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。
由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。
有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的。
三、组成结构
光源、光件、样品池、检测器、数据处理器
1、荧光分光光度计
图RF5301PC荧光分光光度计
主要是由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器以及数据处理系统几部分组成
1. 光源：
为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
2．激发单色器：
置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
3．发射单色器：
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。
筛选出特定的发射光谱。
4．样品室：
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。
测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
5．检测器：
一般用光电管或光电倍增管作检测器。
可将光信号放大并转为电信号
四、功能用途
1、荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器，扫描范围200-900nm，通常比紫外分光光度计检测灵敏度高2~3个数量级，能在紫外“力不能及”的领域发挥作用，是现代分析测试领域尤其是痕量分析领域一种应用广泛的重要分析仪器，在生命科学、医学及临检、药学及药理学、生化、食品、环保、公安等领域有广泛应用。
1.医学和临床检验———生物体试料的临床分析
2.药学和药理学———天然药物分析，药品质量控制和药物代谢的研究
3.生物化学———对于生物体内微量物质的测定
4.食品工业———食品中痕量组分的测定
5.污染物的分析———大气污染、环境卫生检测，食品污染物研究等
6.有机和无机化学———用吸光光度法不能测定的痕量组分分析
五、注意维护保养
1、仪器一定要安装在稳定牢固的实验台上，远离振动源。
2、氙灯寿命为500h，超过使用时间必须更换，否则易引起爆炸。
3、荧光分光光度计氙灯点亮后需一定时间稳定，故进行精密测试应在 30分钟以上。
关闭氙灯电源后，若要重新使用，请等待 60秒以后重新触发。
4、供试品测试完毕后应及时取出，长时间放置在样品室中会污染光学系统，引起性能下降。
样品室应保持干燥，应及时更换干燥剂。
六、仪器操作
现场具体操作
一、设备名称：UV2401紫外可见分光光度计
二、使用原理
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。
紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当入射光波长一定时，溶液的吸光度A
是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。
三、组成结构
主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。
四、功能用途
1 检定物质
根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。
这在药物分析上就有着很广泛的应用。
在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。
2与标准物及标准图谱对照
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。
如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。
这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。
3 比较最大吸收波长吸收系数的一致性
4 纯度检验
5 推测化合物的分子结构
6 氢键强度的测定
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
7 络合物组成及稳定常数的测定
8 反应动力学研究
9 在有机分析中的应用
有机分析是一门研究有机化合物的分离、鉴别及组成结构测定的科学，它是在有机化学和分析化学的基础上发展起来的综合性学科。
五、注意维护保养
1、样品池使用挥发性物质时比色皿要扣盖。
2、比色皿使用后要清理干净。
3、使用时要遵照使用手册来完成操作。
4、在更换保险丝或通电之间，应关闭电源开关断开电源线。
六、仪器操作
现场具体操作。