标准曲线制作与应用ppt课件
合集下载
标准曲线制作、检验、使用知识大全
每个标准点至少重复2次，这个重复是指从稀释开始。
标准曲线的截距检验和斜率检验分别考察 Y=a+bX中a和b与0的统计学差异，a与0有差 别说明有试剂空白或系统误差，而b若与0没差 别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。日 常工作中我们通常用相关系数来作为标准曲线 好坏的标准，这点有一定道理，但并不全面。
每个标准点至少重复2次，这个重复010《基于标准样 品的线性校准》中关于失拟检验的问题，这 里的失拟检验是要看曲线拟合后剩下残差与 实验数据本身随机误差（变异）之间的差别， 同样采用F检验，此时失拟检验P应该>0.05， 也就是说残差应该跟实验测定中的随机误差 （变异）没有差别，你要看每次测定的随机 误差（变异）就必须多次测定同一浓度，因 此失拟检验要求每个浓度点至少重复2次。
标准曲线需要减掉试剂空白来 做吗？
先从原理上讲：判断两条或多条 标准曲线的差异，须检验残差， 截距和斜率三项，分别有不同的 统计学参数，残差用F检验，截 距和斜率采用较为复杂的统计量。
从实际操作讲：多用协方差分析检验截距和斜率的差异，以 SPSS为例：
一．先重新整理数据,将y2数据列加到y1下面,变成一个变量y;将x2数据列加到x1下面,变成一个变量x; 然后再设定一个新的分组变量group,原来第1组值为1,第2组值为2。 二．
决定系数是相关系数的平方，就是我们经常在 仪器软件中看到的R2或Fit，它提示的是我建立 的回归方程所解释X对Y变化占Y变量的比值， 比如决定系数是0.99也就是说我这个回归方程 可以解释Y变化的99%，剩下的1%就是残差。 前面提到的精密度（线性检验）就是用这两部 分的变化做F检验，由于统计检验的临界值比 较大，通常0.90以上的相关系数都会通过这个 F检验，当然还与实验点数（自由度）有关。
硫酸铜标准曲线实验ppt
硫酸铜标准曲线的绘制原理
绘制硫酸铜标准曲线，需要准备不同浓度的硫酸铜溶液，并在一定波长下测量其 吸光度或荧光强度。
将不同浓度的硫酸铜溶液与其对应的吸光度或荧光强度绘制成曲线图，即可得到 硫酸铜的标准曲线。
03
实验步骤
硫酸铜溶液的配制
准备所需试剂：无水硫酸铜、浓硫酸、去离子水等。 加入适量的浓硫酸，搅拌至溶解完全。
误差来源
整理实验数据，包括硫酸铜浓度、吸光度等 。
分析实验过程中误差的来源，如测量误差、 操作误差等。
误差传递
数据可靠性
研究误差在吸光度和含量计算过程中的传递 ，评估结果的可靠性。
通过重复实验、数据验证等方法提高数据可 靠性，降低误差影响。
05
实验结论
硫酸铜标准曲线的绘制结果
线性关系良好
通过线性回归分析，得到硫酸铜浓度与吸 光度之间具有较好的线性关系，R^2值大 于0.99，表明线性关系良好。
硫酸铜含量的计算
准备所需试剂：待测硫酸铜溶液。 使用分光光度计测量待测溶液的吸光度。
将待测硫酸铜溶液稀释至适当浓度。
根据标准曲线的线性关系，计算待测溶液中硫酸铜的 含量。
04
实验数据分析
标准曲线的线性拟合
1 2
线性拟合
通过最小二乘法对硫酸铜浓度与吸光度进行线 性拟合，得到标准曲线。
线性范围
确定硫酸铜浓度的线性范围，保证线性拟合的 可靠性。
建议与展望
本实验的不足之处及改进措施
要点一
控制变量
要点二
标准化操作
在实验过程中，应尽可能减少其他变 量的影响，如温度、湿度等，以保证 实验结果的准确性。
对于关键步骤和操作方法，应建立更 加严格的标准，以提高实验的可重复 性和可靠性。
任务3-工作曲线法定量分析
测定标准样品
按照标准样品浓度顺序，依次进行测定，记录 数据。
绘制工作曲线图
01
02
03
确定坐标轴
选择合适的横坐标（如浓 度）和纵坐标（如测量 值）。
绘制工作曲线
根据整理好的数据，将标 准样品浓度作为横坐标， 对应的测量值作为纵坐标， 绘制散点图。
拟合曲线
根据散点图，选择合适的 数学模型（如线性回归、 多项式回归等）进行拟合， 得到工作曲线方程。
03
根据工作曲线法优化工艺参数，提高产品质量 和生产效率。
案例二：质量控制中的应用实例
在质量控制中，利用工作曲线法检测产品中关键成分的含量。 通过工作曲线法建立标准曲线，快速准确地测定产品中成分的含量。 利用工作曲线法对质量控制过程进行监控，确保产品质量稳定可靠。
案例三：设备维护中的应用实例
01
够更准确地反映待测样品的浓度。
操作简便
03
工作曲线法操作简便，只需要按照标准样品绘 制工作曲线，然后根据待测样品与标准样品的
响应值进行比较即可得出结果。
适用范围广
02
工作曲线法适用于多种类型的样品和元素，可 以根据不同的需求选择不同的标准样品和绘制
不同的工作曲线。
可重复性强
04
由于工作曲线法基于标准样品，因此每次分析 都可以使用相同的工作曲线，提高了分析的可
在设备维护中，利用工 作曲线法监测设备的运 行状态和性能变化。
02
通过工作曲线法分析设 备性能参数与运行状态 之间的关系，预测设备
故障和寿命。
03
根据工作曲线法制定设 备维护计划，提高设备 运行效率和可靠性。
06
结论与展望
结论
工作曲线法是一种有效的定量 分析方法，能够准确测定物质 浓度与响应值之间的关系，适
血清ALT标准曲线法课件
7-1 如何使图形变得饱满？
7-2 如何使图形变得饱满？
7-3 如何使图形变得饱满？
7-4 如何使图形变得饱满？
7-5 如何使图形变得饱满？
7-6 如何使图形变得饱满？
7-7 如何使图形变得饱满？
8.绘制出标准曲线：先点击图上的标准值点，然后 按右键，点击“添加趋势线”。如图8：
9.本例是线性关系，在类型中选“线性”，如图9：
❖ 【思考题】
❖ 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？
❖ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？
谢谢！
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL)
空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管
校准品
0 0.05
0.1 0.15
0.2 0.25
丙氨酸氨基转移酶基质 液
0.5 0.45
0.4 0.35
【实验原理】
朗伯-比尔定律：当一束单色光 通过有色溶液时，吸光度A与 溶液的浓度C和溶液的厚度L 的乘积成正比关系 A=KCL
式中K为一常数，其大小随溶液的性质和 入射光的波长而定
朗伯-比尔定律应用
标准品法测定未知样品含量
A标准=KC标准L A测定=KC测定L
C测定=
A测定 A标准
×C标准
朗伯-比尔定律应用
0
47
95
162
250
333
A1
A2
A3
A(平均值)
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL)
空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管
校准品
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
丙氨酸氨基转移酶基质 液
实验七标准曲线制作(AST赖氏法)(精)
AST L 天门冬氨酸 酮戊二酸 草酰乙酸 L 谷氨酸
经60分钟反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反 应，并与反应液中的二种α -酮酸生成相应的 2,4-二硝基苯腙。在碱性条件下，两种苯肼的 吸收光谱曲线有差别，在500nm～520nm处 差异最大，草酰乙酸生成的苯腙的呈色强度显 著大于α -酮戊二酸苯腙。据此可用比色法测 定AST活力。
标准曲线制作（AST赖氏法）
【实验要求】 掌握血清天冬氨酸氨基转移酶测定（赖氏法） 的原理 熟悉操作方法及标准曲线的绘制； 了解实验注意事项，方法评价及临床意义。 【实验任务】 一大组绘制二条标准曲线 2个同学一组测出样品管中吸光度值，并在曲 线上查值。
【实验原理】
AST催化天门冬氨酸与α -酮戊二酸间的氨基移 换反应，生成草酰乙酸和谷氨酸：
【注意事项】
1. 本法的缺点是标本AST活性高时，草酰乙酸对AST有反馈 抑制，使测定结果偏低；酮血症中乙酰乙酸及β-羟丁酸，因 设对照管不会引起测定结果假性增高。 2. 血清中AST在室温下可保存2天，在4℃冰箱可保存1周，在 -25℃可保存1个月。严重溶血、黄疸及脂血血清可增加测定 的吸光度。
【实验评价】
1.本法为终点法，难以确定酶促反应30～60min内产物生成 量与时间成正比。同时也存在底物和2，4-二硝基苯肼用量不 足的问题，由于标本AST活性高时，草酰乙酸对AST显示反馈 抑制，使AST活性下降，测定结果偏低。 2.重复性差 血清中含有多种酶对AST测定产生负干扰现象， 如耦联转氨基作用，即AST作用生成的产物草酰乙酸会不可 逆地转变为丙酮酸而成为ALT的底物影响AST的测定；产物旁 路效应，生成的草酰乙酸可被血清内源性苹果酸脱氢酶催化 而消耗，草酰乙酸自发转变成的丙酮酸可被血清中的LD催化。 本法最适条件下的变异系数为8%，常规条件下的变异系数＜ 16%。 3.操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。
经60分钟反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反 应，并与反应液中的二种α -酮酸生成相应的 2,4-二硝基苯腙。在碱性条件下，两种苯肼的 吸收光谱曲线有差别，在500nm～520nm处 差异最大，草酰乙酸生成的苯腙的呈色强度显 著大于α -酮戊二酸苯腙。据此可用比色法测 定AST活力。
标准曲线制作（AST赖氏法）
【实验要求】 掌握血清天冬氨酸氨基转移酶测定（赖氏法） 的原理 熟悉操作方法及标准曲线的绘制； 了解实验注意事项，方法评价及临床意义。 【实验任务】 一大组绘制二条标准曲线 2个同学一组测出样品管中吸光度值，并在曲 线上查值。
【实验原理】
AST催化天门冬氨酸与α -酮戊二酸间的氨基移 换反应，生成草酰乙酸和谷氨酸：
【注意事项】
1. 本法的缺点是标本AST活性高时，草酰乙酸对AST有反馈 抑制，使测定结果偏低；酮血症中乙酰乙酸及β-羟丁酸，因 设对照管不会引起测定结果假性增高。 2. 血清中AST在室温下可保存2天，在4℃冰箱可保存1周，在 -25℃可保存1个月。严重溶血、黄疸及脂血血清可增加测定 的吸光度。
【实验评价】
1.本法为终点法，难以确定酶促反应30～60min内产物生成 量与时间成正比。同时也存在底物和2，4-二硝基苯肼用量不 足的问题，由于标本AST活性高时，草酰乙酸对AST显示反馈 抑制，使AST活性下降，测定结果偏低。 2.重复性差 血清中含有多种酶对AST测定产生负干扰现象， 如耦联转氨基作用，即AST作用生成的产物草酰乙酸会不可 逆地转变为丙酮酸而成为ALT的底物影响AST的测定；产物旁 路效应，生成的草酰乙酸可被血清内源性苹果酸脱氢酶催化 而消耗，草酰乙酸自发转变成的丙酮酸可被血清中的LD催化。 本法最适条件下的变异系数为8%，常规条件下的变异系数＜ 16%。 3.操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。
取代度标准曲线制作
标准曲线的制作
• 1 称取树脂 • 注意称量的量，间隔不能太大也不能太小，尽量多 取几组。可从0~20mg之间进行取样。树脂要取取代 度准确标准的树脂。 • 2 脱保护 • 每组加1ml的20%pip/DMF，摇床反应30Min。 • 3 定溶 • 每组定溶至100ml • 4 测ABS • 5 做标准曲线
5
0 0 5 10 M 15 20
计算
• 由Sub=ABS*100/7.75m • 设系数7.75为X，则 X=ABS*100/sub*m • 而由上图可知ABS*100/m=1.1486 • Sub=0.148 • 则X=1.1486/0.148=7.76
分析
• 由图可得出，当称取树脂质量为0-5mg 之间和17mg以上时，得到的点就相对比 较偏离标准曲线。所以在测定取代度称 取树脂的时候我们选择的量一般是在515mg。
ABS和m的数量关系
M(mg)
ABS*100
0 0 2.04 3.3 4.03 6.2 6.69 7.7 9.42 11.2 12.40 15.83 14.1 18.1 17.59 19.7
ABS和质量的关系图 标准曲线
25 y = 1.1486x R 2 = 0.9889 20
ABS*100
15 sub=0.148 10
树脂取代度测定中系数的 确定
• Sub=ABS*100/7.75m • 7.75？ • 怎么来的呢？ห้องสมุดไป่ตู้
• 由sub=ABS*100/7.75m可知，要确定 7.75这个系数，那么就需要固定其他三 个量中的一个，然后找出其他两个变量 之间的关系。我们选择的是固定sub这个 数值，然后做标准曲线找出ABS和m之 间的关系。下面就来介绍下怎么来做这 个曲线。
感谢您的倾听
临床药理学实验 ppt课件
病例讨论1
患者男,75岁。有帕金森病史3年，服用美多巴超过半年。美多巴剂 量早250mg、中、晚各125mg。入院前连续4个月无明显诱因出现反复 头昏,心前区和胸骨后烧灼感,恶心,腹部饱胀不适,大便干结,焦虑不 安,失眠，每次发作几小时至1d不等,可逐渐自行缓解。 入院时检查:T36.7℃,P 73次/min,R 20次/min,BP 130/80mmHg。焦 虑病容,神清,慌张步态,行动缓慢,上肢轻微静止震颤,语声低微,语 速缓慢,肌肉僵直,颈略强直,双肺未闻及干湿鸣,心界不大,HR 73次 /min,律齐,各瓣膜听诊区未闻及杂音,腹部平软,无压痛,反跳痛,肝、 脾肋下未及,肠鸣音5次/min,双肾区无叩痛,双下肢不肿,病理征未引 出。入院后三大常规正常,肝、肾功,电解质、血脂正常。胸片:心肺 未见异常;B超:前列腺明显肿大;床旁心电图:窦性心律,电轴不偏,P 波略低平,无ST-T的改变。胃镜:浅表性胃炎,Hp,阴性。 入院后患者无规律地反复出现上述症状,对症治疗：胃粘膜保护、增 强胃动力、通便、抗抑郁等，均无效。后调整美多巴剂量：美多巴 总量500mg/d不变,平分1次/6h服用；总量调整为375mg/d，1次/8h平 分服用，上述症状消失两日后又复发；总量375mg/d，1次/4h平分服 用,以上症状消失,持续7d未再出现。患者轻微震颤等PD症状无加重。 26 ppt课件 好转出院。
ppt课件 17
3.样品处理 10mL具塞试管：血浆0.5mL，加人2mol/L HCL100μL，40μL内标液（吉非罗齐or卡 马西平）。 振荡30秒，加乙醚5.0mL，混旋2min，静 置10min 将有机相4mL转移至10mL刻度离心试管中 37°C水浴挥干，加流动相100μL复溶，进 样20μL 用内标法峰面积定量分析。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)ppt课件
血糖的测定
(葡萄糖氧化酶法)
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
1
一、实验目的和要求：
1. 掌握酶联法测定血糖含量的基本原理。 2. 熟悉分光光度计的操作。 3. 掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。 4. 复习血糖的来源、去路及其调节的有关理
论知识。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
步骤：
过氧化物酶
醌亚胺 + 4H2O
空白管
标准管
样品管
工作液 蒸馏水
标准液 （10mM）
样品
1.5 mL 0.03mL
1.5 mL
1.5 mL
0.03mL
0.03mL
取3根试管，分别加入试剂混合均匀后，37摄氏度孵育10min，505nm比色， 以空白管试剂调零，分别读取标准管和样品管的吸光值，并计算样品的实际浓 度。
结果：请记录实验数据并列出计算公式
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
9
葡萄糖标准溶液的配制
配制10mmol/L葡萄糖溶液：
1. 准确称量0.18g葡萄糖粉末； 2. 用双蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
10
标准曲线
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
11
五、实验结果：
【计 算】 • 待测样品中葡萄糖浓度（mmol/L）
＝ ——测定—管—吸—光—度 ×10
标准管吸光度
＝ —— ×10
A样 A标
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
12
空白管标准管样品管工作液15ml15ml15ml蒸馏水003ml标准液10mm003ml样品003ml取3根试管分别加入试剂混合均匀后37摄氏度孵育10min505nm比色以空白管试剂调零分别读取标准管和样品管的吸光值并计算样品的实际浓葡萄糖氧化酶葡萄糖酸过氧化物酶醌亚胺4h结果
(葡萄糖氧化酶法)
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
1
一、实验目的和要求：
1. 掌握酶联法测定血糖含量的基本原理。 2. 熟悉分光光度计的操作。 3. 掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。 4. 复习血糖的来源、去路及其调节的有关理
论知识。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
步骤：
过氧化物酶
醌亚胺 + 4H2O
空白管
标准管
样品管
工作液 蒸馏水
标准液 （10mM）
样品
1.5 mL 0.03mL
1.5 mL
1.5 mL
0.03mL
0.03mL
取3根试管，分别加入试剂混合均匀后，37摄氏度孵育10min，505nm比色， 以空白管试剂调零，分别读取标准管和样品管的吸光值，并计算样品的实际浓 度。
结果：请记录实验数据并列出计算公式
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
9
葡萄糖标准溶液的配制
配制10mmol/L葡萄糖溶液：
1. 准确称量0.18g葡萄糖粉末； 2. 用双蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
10
标准曲线
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
11
五、实验结果：
【计 算】 • 待测样品中葡萄糖浓度（mmol/L）
＝ ——测定—管—吸—光—度 ×10
标准管吸光度
＝ —— ×10
A样 A标
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
12
空白管标准管样品管工作液15ml15ml15ml蒸馏水003ml标准液10mm003ml样品003ml取3根试管分别加入试剂混合均匀后37摄氏度孵育10min505nm比色以空白管试剂调零分别读取标准管和样品管的吸光值并计算样品的实际浓葡萄糖氧化酶葡萄糖酸过氧化物酶醌亚胺4h结果
校准曲线的绘制
• 2、检测器光能也在不断的衰弱，因此其每 天的相应值也有所不同，其峰面积也有差 异。
• 基于以上原因，原则上应该是每天都要进 行标准曲线校正的。
• 标准曲线不要每次都做，但是每次必须进 标准品样品；因为每次你的流动相和原来 的不可能完全一样，同时仪器的状态也在 变化，所以不同批次间的保留时间是不一 致的，所以你必须用随行标准品来定位与 定量。
• 我们一般的做法是，根据检测的频率来做， 如果该项目天天都要检测，并且检测量较 多时，要求至少每周做一次曲线。如果检 测量上，一个月都没有几单的话，就一个 月做一次曲线。当然，仪器如果出现故障 并大修后回来的，经过检定后，需要重新 做曲线。
9、标准曲线是否必须过原点
标准曲线不一定非要过原点，只要线性好就可以了。因为做空白 的话基本上不会过原点。过原点是强制过的，实际曲线可能不过， 就会造成误差。不过原点是因为有系统误差。 针对是否过原点(0，0)问题，可以从原点(0，0)代表的意义来考虑： 即所测组分浓度为零的时候，信号响应值（液相色谱也就是峰高 或者峰面积）是否也为零。通常来说色谱分析是属于这种情况的， 因而可以把（0，0）点作为一个浓度水平计入标准曲线（甚至不 需要真的去配一个浓度为零的标准溶液来进样），这也是单点法 定量的一个依据；而类似的情况在光谱法测定时就讲不通了，浓 度为零的标准溶液（本底）响应信号（吸光度）往往不是零，这 个时候标准曲线就不一定过原点了。
4、标曲R值是几个9才合格？
• 实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建 立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范 围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空 白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法， 线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系 数不应低于0.99。
• 基于以上原因，原则上应该是每天都要进 行标准曲线校正的。
• 标准曲线不要每次都做，但是每次必须进 标准品样品；因为每次你的流动相和原来 的不可能完全一样，同时仪器的状态也在 变化，所以不同批次间的保留时间是不一 致的，所以你必须用随行标准品来定位与 定量。
• 我们一般的做法是，根据检测的频率来做， 如果该项目天天都要检测，并且检测量较 多时，要求至少每周做一次曲线。如果检 测量上，一个月都没有几单的话，就一个 月做一次曲线。当然，仪器如果出现故障 并大修后回来的，经过检定后，需要重新 做曲线。
9、标准曲线是否必须过原点
标准曲线不一定非要过原点，只要线性好就可以了。因为做空白 的话基本上不会过原点。过原点是强制过的，实际曲线可能不过， 就会造成误差。不过原点是因为有系统误差。 针对是否过原点(0，0)问题，可以从原点(0，0)代表的意义来考虑： 即所测组分浓度为零的时候，信号响应值（液相色谱也就是峰高 或者峰面积）是否也为零。通常来说色谱分析是属于这种情况的， 因而可以把（0，0）点作为一个浓度水平计入标准曲线（甚至不 需要真的去配一个浓度为零的标准溶液来进样），这也是单点法 定量的一个依据；而类似的情况在光谱法测定时就讲不通了，浓 度为零的标准溶液（本底）响应信号（吸光度）往往不是零，这 个时候标准曲线就不一定过原点了。
4、标曲R值是几个9才合格？
• 实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建 立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范 围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空 白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法， 线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系 数不应低于0.99。
线性标准曲线应用
标准曲线的制作
标准曲线制作的注意事项
前言
标准曲线是做什 么的呢？
0.5 0.45 0.4 0.35
PREFACE
y = 0.024x - 0.023 R² = 0.998
吸光度
方法验证 物质的量或浓度 的测定
0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 5 10 15 20 25
浓度
标准曲线的制作 标准曲线制作的 注意事项
0.0313 0.0712
测定
读或测两次，求其平均值，以减少 仪器不稳定而产生的误差
20
标准曲线的绘制
手工绘制、仪器绘制、软件绘制、表格绘制等方法
标准曲线的定义
标准曲线的要求
手工绘图
标准曲线的制作 标准曲线制作的 注意事项
21
电子表格绘制：
取样体积
1.0
2.0
IN峰面积
9.0000 8.8000 8.6000 8.4000 8.2000 8.0000 0.04, 7.86
7.8000
7.6000 0.0000
0.2000
0.4000
0.6000
0.8000
1.0000
1.2000
1.4000
1.6000
IN进样量
y = 0.936x + 7.814 R² = 1
3.0
4.0
5.0
浓度（ug/ml)
1.972
0.0313
3.944
0.0712
7.888
0.1561
11.832
0.2672
19.72
0.4572
标准曲线的定义
吸光度A
标准曲线的要求
2023版GB5009.15 培训课件PPT
5~120 30~50 450~650 15~30 1500~2000 4~5
➢ 标准曲线的制作
按质量浓度由低到高的顺序分别将 10 μL 标准系列溶液和 5 μL 磷酸二氢铵-硝酸钯溶液(可根据所使用的仪器确定最佳进样量)，同 时注入石墨管，原子化后测其吸光度值，以质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制作标准曲线。
第一法 石墨炉原子吸收光谱法
2023版
测定： 2023版标准中，仪器参考条件变化；修改了基体改进剂，将2014版中使用 的磷酸二氢铵溶液(10g/L)改为磷酸二氢铵-硝酸钯混合溶液。如下：
➢ 仪器参考条件：
干燥 元素 波长nm 狭缝nm 灯电流mA
温度℃ 时间s
灰化 温度℃ 时间s
原子化 温度℃ 时间s
鲜(湿)试样：蔬菜、水果、肉类、鱼类及蛋类等，用 食品加工机打成匀浆或碾磨成匀浆，储于洁净的塑 料瓶中，并标明标记，于-16 ℃~-18℃冰箱中保存备 用。
液态样品：软饮料、调味品等样品摇匀。
液态试样：按样品保存条件保存备用。含气样品使 用前应除气。
半固态样品：搅拌均匀。
7
第一法 石墨炉原子吸收光谱法
1.
2. 盐酸(HCl)：优级纯
2.
3. 高氯酸(HClO4)：优级纯
3.
4. 过氧化氢（H2O2，30%）
4.
5. 磷酸二氢铵 (NH4H2PO4)
硝酸溶液(1%):取 10.0 mL硝酸加入 100 mL水中，稀释至 1000 mL。 盐酸溶液(1+1):取 50 mL盐酸馒慢加入到 50 mL水中。 硝酸-高氯酸混合溶液(9+1):取 9份硝酸与1份高氯酸混合。 磷酸二氢铵溶液（10g/L）:称取 10.0 g 磷酸二氢铵，用100mL 硝酸溶液(1%)溶解后定量移入 1000 mL 容量瓶，用硝 酸溶液(1%)定容至刻度。
➢ 标准曲线的制作
按质量浓度由低到高的顺序分别将 10 μL 标准系列溶液和 5 μL 磷酸二氢铵-硝酸钯溶液(可根据所使用的仪器确定最佳进样量)，同 时注入石墨管，原子化后测其吸光度值，以质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制作标准曲线。
第一法 石墨炉原子吸收光谱法
2023版
测定： 2023版标准中，仪器参考条件变化；修改了基体改进剂，将2014版中使用 的磷酸二氢铵溶液(10g/L)改为磷酸二氢铵-硝酸钯混合溶液。如下：
➢ 仪器参考条件：
干燥 元素 波长nm 狭缝nm 灯电流mA
温度℃ 时间s
灰化 温度℃ 时间s
原子化 温度℃ 时间s
鲜(湿)试样：蔬菜、水果、肉类、鱼类及蛋类等，用 食品加工机打成匀浆或碾磨成匀浆，储于洁净的塑 料瓶中，并标明标记，于-16 ℃~-18℃冰箱中保存备 用。
液态样品：软饮料、调味品等样品摇匀。
液态试样：按样品保存条件保存备用。含气样品使 用前应除气。
半固态样品：搅拌均匀。
7
第一法 石墨炉原子吸收光谱法
1.
2. 盐酸(HCl)：优级纯
2.
3. 高氯酸(HClO4)：优级纯
3.
4. 过氧化氢（H2O2，30%）
4.
5. 磷酸二氢铵 (NH4H2PO4)
硝酸溶液(1%):取 10.0 mL硝酸加入 100 mL水中，稀释至 1000 mL。 盐酸溶液(1+1):取 50 mL盐酸馒慢加入到 50 mL水中。 硝酸-高氯酸混合溶液(9+1):取 9份硝酸与1份高氯酸混合。 磷酸二氢铵溶液（10g/L）:称取 10.0 g 磷酸二氢铵，用100mL 硝酸溶液(1%)溶解后定量移入 1000 mL 容量瓶，用硝 酸溶液(1%)定容至刻度。
总糖和还原糖的测定及葡萄糖标准曲线的绘制-3,5-二硝基水杨酸法
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
实验一、总糖和还原糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸法
一、实验目的
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理；
2、学习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原
糖的方法。
二、实验原理
还原糖是指含有自由醛基或者酮基的糖类， 单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还
原糖；利用糖的溶解度不同，可将植物样
品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来；
滤纸过滤，取10ml滤液用蒸馏水定容至 100ml，成稀释1000倍的总糖水解液，混匀, 取1ml总糖水解液，测定其还原糖的含量
3、制作葡萄糖标准曲线及还原糖、总糖 含量的测定。
取8支洁净的试管，分别用记号笔标上0～ 7号，按照下表进行操作。其中0～5管，用于 标准曲线的制作,以吸光度为纵坐标，各标准 液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线 （用Excel表制作）。
试管容量瓶三角烧瓶量筒吸管移液管洗耳球玻棒洗瓶漏斗离心管六凹反应盘ph试纸114四实验试剂1标准葡萄糖溶液10mgml2dns试剂36mollhcl46mollnaohki溶液五操作1样品中还原糖的提取准确称取05g山芋粉置于100ml三角烧瓶中加3ml蒸馏水调成糊状再加30ml蒸馏水50水浴30min不时搅拌转移至50ml离心管中4000rpm5min上清液1沉淀加20ml蒸馏水洗涤沉淀4000rpm5min上清液2沉淀弃置于容量瓶中蒸馏水定容至100ml混匀取1ml即可进行还原糖的测定
标准曲线制作与应用
准曲线制作与应用
• 标准曲线制作 • 标准曲线应用 • 标准曲线制作中的注意事项 • 标准曲线制作与应用实例
01
标准曲线制作
实验原理
01
02
03
线性关系
标准曲线制作基于线性关 系原理，通过已知浓度的 标准品，在相同条件下进 行测定，绘制标准曲线。
浓度与响应值关系
标准品的浓度与响应值之 间应呈线性关系，通过回 归分析得到标准曲线方程。
标准曲线在临床诊断中的应用
诊断指标确定
标准曲线用于确定临床诊断的阈值和 参考范围。通过制作标准曲线并分析 曲线的相关参数，可以确定不同指标 的正常范围和异常范围，为临床诊断 提供参考依据。
疾病监测
标准曲线用于监测疾病的进展和治疗 效果。通过定期检测患者的指标并制 作标准曲线，可以评估病情的变化和 治疗效果，为临床医生制定治疗方案 提供依据。
确保实验条件一致，如 温度、pH值、反应时间
等。
按照相同条件分别测定 标准品的响应值，绘制
标准曲线。
通过回归分析，得到标 准曲线方程及相关系数。
实验结果
标准曲线方程
01
通过线性回归分析得到的方程，描述浓度与响应值之间的关系。
相关系数
02
表示浓度与响应值之间线性关系的密切程度，通常在0.99以上
表示关系较好。
实例二：标准曲线在方法学评价中的应用
总结词估检 测方法的再现性。通过与其他实验室 或机构进行合作，使用相同的检测方 法制作标准曲线，可以了解不同实验 室或机构之间的结果再现性情况，从 而评估该方法的准确性和可靠性。
实例三：标准曲线在临床诊断中的应用
总结词：临床诊断
数据处理与分析注意事项
数据处理要准确
• 标准曲线制作 • 标准曲线应用 • 标准曲线制作中的注意事项 • 标准曲线制作与应用实例
01
标准曲线制作
实验原理
01
02
03
线性关系
标准曲线制作基于线性关 系原理，通过已知浓度的 标准品，在相同条件下进 行测定，绘制标准曲线。
浓度与响应值关系
标准品的浓度与响应值之 间应呈线性关系，通过回 归分析得到标准曲线方程。
标准曲线在临床诊断中的应用
诊断指标确定
标准曲线用于确定临床诊断的阈值和 参考范围。通过制作标准曲线并分析 曲线的相关参数，可以确定不同指标 的正常范围和异常范围，为临床诊断 提供参考依据。
疾病监测
标准曲线用于监测疾病的进展和治疗 效果。通过定期检测患者的指标并制 作标准曲线，可以评估病情的变化和 治疗效果，为临床医生制定治疗方案 提供依据。
确保实验条件一致，如 温度、pH值、反应时间
等。
按照相同条件分别测定 标准品的响应值，绘制
标准曲线。
通过回归分析，得到标 准曲线方程及相关系数。
实验结果
标准曲线方程
01
通过线性回归分析得到的方程，描述浓度与响应值之间的关系。
相关系数
02
表示浓度与响应值之间线性关系的密切程度，通常在0.99以上
表示关系较好。
实例二：标准曲线在方法学评价中的应用
总结词估检 测方法的再现性。通过与其他实验室 或机构进行合作，使用相同的检测方 法制作标准曲线，可以了解不同实验 室或机构之间的结果再现性情况，从 而评估该方法的准确性和可靠性。
实例三：标准曲线在临床诊断中的应用
总结词：临床诊断
数据处理与分析注意事项
数据处理要准确
数学标准曲线制作与运用PPT课件
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 （四）作图：7、再点“下一步”操作，出 现：
第13页/共37页
标准曲线的制作与运用 三、标准曲 线的制作
（四）作 图：8、 点“完成” 操作，散 点图在工 作表中出
第14页/共37页
标准曲线的制作与运用 三、标准曲线的制作 （四）作图：9、用鼠标左键选中作图点
第22页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
第23页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
第24页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
第25页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
第26页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用 • 如何用Excel求“蛋白质浓度”
第27页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用
• 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
第28页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用
• 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
第29页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用
• 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
第30页/共37页
标准曲线的制作与运用 四、标准曲线的运用
• 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值
第15页/共37页
标准曲线的制作与运用 三、标准曲 线的制作
（四）作 图：10、 选定作图 点后，再 点鼠标右 键并选中 “添加趋
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
的多布标准点。
.
6
二.标准曲线的制作
1 标准曲线的表达式
标准曲线应是一条通过原点的直线 ,如果坐标上各浓度点 基本在一条直线上可不进行回归处理 ,但在实验中不可避免地 存在测定误差 ,往往会有一、二点偏离直线 ,此时可用最小二 乘法进行回归分析 , 然后绘制曲线 ,通常称为回归直线 ,而代表回
.
7
.
2
一.相关名称简介
2 标准曲线定义
标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的 函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。
在分析化学实验中，常用标准曲线进行定量分析，通常 情况下的标准工作曲线是一条直线。
.
3
一.相关名称简介
3 坐标
标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准
度点是最佳选择，这样对该标准曲线覆盖的浓度范围内，对
于所有的浓度所提供的信息量都是相同的。奇数点的设置来
.
18
三.相关曲线及应用
源于相关信息，在已知该浓度范围先确定中间点，然后在中
间点左右分布对称的标准曲线点，所以出来的总是奇数个点。
正如强调，点多点少，最后影响的是标准曲线所查出样品理
化属性的不确定度，不确定度是否符合要求呢，这就是在判
法。用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试
样中被测物质的含量，制作标准曲线实验点7个较好，不能任
意延长。
.
5
一.相关名称简介
4 点分布
从不确定度理论推算样本的不确定度时，有二个重要的
结论：一、标准曲线的重心点处，所查出来的样品不确定度
最小。二、标准的点数越多，样品的不确定度越小。基于这
两个结论的标准曲线的做法应该是：在样品浓度的附近尽量
浅谈分光光度法--
标准曲线的制作与应用
一.相关名称简介 二.标准曲线的制作 三.相关曲线及应用
.
1
一.相关名称简介
1 分光光度法
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长
范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分
析的方法。光区包括：紫外光区（200～400nm）、可见光区
（400～760nm）、红外光区（0.8-100 um）。
.
16
三.相关曲线及应用
1 实用性
的响应对于标准和样品是一视同仁；同时我们也要求我的样 本跟标准基体匹配。所以最好的标准是基体匹配标准，最好 的标准曲线是工作曲线。
.
17
三.相关曲线及应用
2 现实
现有方法趋向于标准曲线适用于较宽的样品浓度范围。
在较宽的浓度跨度和有限的标准点的情准曲线的制作
在的 , 因此截距一般不为零。
3 影响标准曲线线性关系的因素
（1）分析法自身的精密度 （2）测定用仪器的精密度
（3）易挥发的溶剂所引起的测定溶液浓度的改变（4）污染
（5）分析人员操作的影响 .
11
二.标准曲线的制作
玉米浆中溶磷标准曲线
.
12
二.标准曲线的制作
玉米浆中溶磷标准曲线
二.标准曲线的制作
归直线方程叫回归方程 ,表达式为 : y = kx + b (式中 : k为直线 斜率, b为 y 轴上的截距 , x 为被测溶液的浓度, y 为吸光度 , 是多次测定结果的平均值 ) 。
2 标准曲线的参数
标准曲线有 3个参数 , 即相关系数 r, 斜率 k和截距 b。
.
8
二.标准曲线的制作
.
9
二.标准曲线的制作
率出现异常数据 (超过相当偏差的2.5%)时 ,就要寻找原因。
2.3 截距 (b) :截距是评价标准曲线准确度的 , 是实验误差在 y
轴上 (或 x轴上 )的反映, 当用扣除空白值吸光度的数值为 y 值
进行回归时 , 理论上 b 值应为零 , 但实际上截距等于零的情况
是很罕见的 , 当系统误差减至允许程度后, 随机误差总是存
断样品的结果是否超标或符合限值的时候有重要意义了。
.
19
Thanks!
.
20
2.1 相关系数 (r) :相关系数是表示变量 x 与 y 之间的线性关系
的密切程度。如果 r = 1 则所有点都落在一条直线上, y 与 x完
全呈现线性关系 , 在分析中总存在随机误差, 一般, r≥0. 999。
2.2 斜率 (k) :某种分析方法的斜率在实验条件基本一致的情况
下是相对稳定的 ,斜率是检验分析方法灵敏度的 ,因此当斜
.
13
三.相关曲线及应用
总砷标准曲线制作
.
14
三.相关曲线及应用
总砷标准曲线应用表格
.
15
三.相关曲线及应用
1 实用性
这是做标准曲线的重要前提，这个问题实际很简单，就
是这样一个问题：我的样品的仪器响应能否用我们所建立的
标准曲线来推导其理化属性？答案建立在仪器响应的特异性
和标准系列和样品的匹配性上面。一方面我们总是力求仪器
溶液的浓度)，称为普通变量，纵坐标(Y)表示仪器的响应值
(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。当
X取值为X1, X2,…Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1,
Y2, …Yn。
.
4
一.相关名称简介
将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表
示X与Y之间的直线线性关系，这就是常用的标准曲线制作方