实验六 丝状真菌形态特征观察.
丝状真菌的鉴定
鉴定得分
数量及 百分比(%)
使用布鲁克丝状真菌库
v1.0 ≥2.0 ≥1.7 ＜1.7 错误
联合布鲁克和BMU数据库 ≥2.0 ≥1.7 ＜1.7 错误
55 67 37 7
90 104 0 7
(49.5) (60.4) (33.3) (6.3) (81.1) (93.7) (0) (6.3)
111株毛霉：根霉属(48)，毛霉属(41)，横梗霉属(11)，根毛霉属(4)，小 克银汉霉属(5)，共头霉属(2)
染色：乳酸酚棉兰染色
02 丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定
MALDI-TOF MS鉴定丝状真菌
样品制备 ➢ 直接转移法 ➢ 甲酸提取法—推荐
数据库 ➢ 商业数据库 ➢ 补充数据库
其他影响因素 ➢ 黑色素抑制 ➢ 沙氏葡萄糖液体培养基旋转培养
MALDI-TOF MS-毛霉目真菌的鉴定
• Centraalbureau voor Schimmelcultures (hppt://www.cbs.knaw.nl)
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
毛霉目真菌-直接镜检
孢囊孢子
柱孢囊
囊轴
囊托
顶囊 孢囊梗
匍匐菌丝
单孢囊
假根
厚壁孢子
粉孢子
毛霉目基本结构
接合孢子 茎孢子
Lichtheimia
横梗霉（Lichtheimia）, 毛霉（Mucor）, 根毛霉（Rhizomucor）和根霉（Rhizopus）的孢子囊特征
丝状真菌
丝状真菌（霉菌）分离筛选方法霉菌生长在偏酸性有机质丰富的环境中，种类多，形态各异，细胞结构多样。
霉菌是一些丝状真菌统称，同酵母菌一样不是分类学的名词。
一.丝状真菌（霉菌）分离筛选1.培养基：1.1 PDA 培养基： 马铃薯一葡萄糖培养基（同酵母）并添加80%乳酸数滴（5mL/L ）或0.05 %去氧胆酸钠以抑制细菌生长，葡萄糖改为蔗糖。
注：土壤适于马丁或马玲薯一葡萄糖培养基 ，河泥 霉变材料 生物膜适用于查氏 马丁培养基或PDA 培养基1.2 察氏培养基：蔗糖30g/L FeSO 4 0.01g/L NaNO 32.0g/L MgSO 4 0.5g/L KC1 0.5g/L K 2HPO 4 1.0g/L PH6.7-7.01.3马丁培养基： 葡萄糖10g/L 蛋白胨5g/L KH 2PO 41g/L MgSO 40.5g/L 孟加拉红（0.1%）3.3mL 灭菌后使用前加入。
临用时每升培养基加入 1.0%链霉素 3.0mL PH 自然。
1.4特定培养基：橘皮培养青霉 甜酒曲培养根霉。
2.分离纯化：混菌和涂布法将样品梯度稀释（10-4、10-5、10-6），混菌和涂布于平板，25-28℃倒置培养3-7d ， 挑取不同典型单菌落孢子或菌丝进行反复划线纯化。
据菌落质地、颜色是否纯培养物，若有杂菌重复纯化一次。
对于形成固定菌落的（青霉 曲霉等）可用稀释平板混菌法分离纯化，菌落不定型蔓延繁殖的（根霉 毛霉），两菌落及易接触混杂，分离时采取较高稀释度或以培养16-24h 内生长菌丝接种。
根霉菌分离筛选：属于毛霉目，蔓延繁殖，没有一定的菌落形态，易与其他霉菌混生，故分离时采取大稀释度，早移植，可在培养基添加0.1℅去氧胆酸钠，防止蔓延。
可利用形态特征鉴别。
样品：酒药 培养基：葡萄糖豆芽汁培养基（豆芽汁100mL ，酵母膏2g 葡萄糖3g PH 自然。
豆芽汁制备：黄豆100g ，加水1000mL ，煮30-40min ，取汁备用）。
丝状真菌-霉菌
霉菌菌丝的延伸过程
顶端
亚顶端
菌丝的结构与生长具有极 性；
菌丝可分为顶端、亚顶 端以及成熟区；在顶端之 后，细胞壁逐渐加厚而不 再生长；
菌丝在光学显微镜下是 均匀的，但厚壁的休眠 孢子，如接合孢子、厚 壁孢子则有明显的纹饰。 隔膜与菌丝细胞壁成分 相似。
成熟区
隔膜
粗糙脉孢菌（菌丝尖端的成熟过程及 细胞壁成分的变化）
显微镜下的无隔菌丝与有隔菌丝
无隔菌丝
有隔菌丝
菌丝体及其各种分化形式
许多菌丝分枝连接，相互交织在一起所构成的形态
称菌丝体（mycelium)。
营养菌丝：密布在固体营养基 质内部，吸取营养物质
菌丝体
气生菌丝：伸展到空间
营养菌丝的特化形态
（1）吸取养料：假根、吸器 （2）附着：附着胞、附着枝 （3）休眠：菌核、菌索 （4）捕食线虫：菌网、菌环 （5）延伸：匍匐枝
丝状真菌——霉菌
一、霉菌分布及与人类的关系
二、霉菌的细胞形态和构造
三、霉菌的菌落
霉菌分布及与人类的关系
工业 生产 医疗 实践
食品 制造
基础 研究
霉菌分布与人类的关系
毛癣菌等引 起灰指甲
霉菌的细胞形态和构造
霉菌的菌体由分枝或不分枝的菌丝（hyphae)构 成。菌丝是真菌营养体的基本单位。 菌丝是一分枝的中空管状物，是由孢子萌发后延 伸而来，或由一段菌丝细胞增长出来。直径一般3 ～10μm，有分枝，有隔膜或无隔膜。多数真菌菌 丝中在5－6m之间。
重点
（1）掌握菌丝的延伸过程具有极性及延伸过 程中细胞壁成分变化 （2）掌握各种菌丝体形态 （3）掌握霉菌菌落特征
假根
吸器
菌网
菌环
附着胞
真菌的观察实验报告
真菌的观察实验报告真菌的观察实验报告一、引言真菌是一类特殊的生物，它们既不属于植物界，也不属于动物界，而是独立成为一个界。
真菌在自然界中广泛分布，包括了许多不同的种类，如霉菌、酵母菌和蘑菇等。
本实验旨在观察真菌的生长过程以及其对环境的适应能力。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 真菌培养基：包括蔗糖、琼脂和酵母粉等成分。
- 真菌菌种：选择了一种常见的霉菌菌种。
- 培养皿、移液管、显微镜等实验器材。
2. 实验方法：- 准备培养基：按照一定比例混合蔗糖、琼脂和酵母粉，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀后倒入培养皿中。
- 接种真菌：用移液管将真菌菌种均匀地滴在培养基上，然后将培养皿盖好。
- 观察生长过程：将培养皿放置在适宜的温度和湿度条件下，每隔一段时间观察真菌的生长情况，并记录相关数据。
- 显微镜观察：在适当的时间点，取出培养皿中的真菌样本，放在显微镜下观察其细胞结构和特征。
三、实验结果与分析开始实验后，我们观察到真菌在培养基上迅速生长，并形成了一片均匀的菌丝网络。
随着时间的推移，菌丝网络逐渐扩展，形成了更大的菌落。
在观察的过程中，我们还注意到一些有趣的现象。
首先，我们发现真菌的生长速度与温度和湿度密切相关。
在较高的温度下，真菌的生长速度明显加快，而在较低的温度下则相对缓慢。
这表明真菌对温度的适应能力较强。
另外，适宜的湿度也对真菌的生长起到重要的影响。
过高或过低的湿度都会抑制真菌的生长，而适宜的湿度则促进了其菌丝的扩展。
其次，通过显微镜观察，我们可以清晰地看到真菌的细胞结构。
真菌的细胞由菌丝组成，菌丝是一种细长的细胞结构，具有分枝和交叉的特点。
菌丝的末端通常会形成孢子或孢子团，这是真菌繁殖的一种方式。
通过观察不同时间点的样本，我们发现孢子的数量逐渐增加，这说明真菌在适宜的环境下能够迅速繁殖。
最后，我们还观察到真菌对光线的敏感性。
在实验过程中，我们将一部分培养皿放置在光照充足的环境下，而另一部分则放置在黑暗中。
真菌形态观察实验报告
真菌形态观察实验报告真菌形态观察实验报告引言：真菌是一类生物体，常见于自然界中的各种环境中，包括土壤、水体、空气等。
真菌的形态多样，有的呈现菌丝状，有的形成孢子团，还有的形成菌盖和菌柄。
为了更好地了解真菌的形态特征，我们进行了一系列的实验观察。
实验一：真菌的菌丝观察我们从周围的环境中采集了一些土壤样品，并在实验室中进行了菌丝观察。
首先，我们将土壤样品放入培养皿中，加入适当的培养基，然后在恒温箱中进行培养。
经过几天的培养，我们观察到了菌丝的形成。
菌丝呈现出细长的线状结构，有的呈现分枝状，有的呈现网状。
通过显微镜观察，我们还发现菌丝表面覆盖着一层透明的物质，这是真菌分泌的黏液，有助于菌丝的生长和营养吸收。
实验二：真菌的孢子观察为了观察真菌的孢子形态，我们选择了一种常见的黑曲霉进行实验。
我们将黑曲霉菌丝划过培养基，经过一段时间的培养，我们观察到了大量的黑色孢子形成。
这些孢子呈现出圆形或卵形，表面光滑，颜色深黑。
通过显微镜观察，我们发现孢子内部含有丰富的营养物质，这些孢子可以在适宜的环境下发芽，形成新的菌丝。
实验三：真菌的菌盖和菌柄观察为了观察真菌的菌盖和菌柄结构，我们选择了一种常见的蘑菇进行实验。
我们将蘑菇培养在适宜的环境中，经过一段时间的生长，我们观察到了蘑菇的形成。
蘑菇的菌盖呈现出圆形或伞状，表面光滑，颜色多样。
菌盖下面有许多垂直向下延伸的菌柄，菌柄呈现出圆柱形，表面光滑。
通过显微镜观察，我们发现菌柄内部有空心结构，这有助于蘑菇的支撑和养分输送。
结论：通过以上的实验观察，我们对真菌的形态特征有了更深入的了解。
真菌的菌丝呈现出细长的线状结构，有的呈现分枝状，有的呈现网状。
真菌的孢子呈现出圆形或卵形，表面光滑，颜色深黑。
真菌的菌盖呈现出圆形或伞状，表面光滑，颜色多样。
菌盖下面有许多垂直向下延伸的菌柄，菌柄呈现出圆柱形，表面光滑。
这些形态特征不仅有助于真菌的生长和繁殖，也为我们研究真菌的分类和进化提供了重要的参考。
【珍藏课件】徐和平：常见丝状真菌鉴定
【珍藏课件】徐和平：常见丝状真菌鉴定真菌是真核细胞型微生物，其种类繁多，自然界估计多达150万种，分类系统较多，根据形态可分为单细胞和多细胞两类。
单细胞真菌主要为酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌有菌丝和孢子组成，菌丝分枝交织成团形成菌丝体，并长有各种孢子，这类真菌被称为丝状真菌，俗称霉菌。
观察其形态、颜色变化以及真菌不同时期的镜下特征对于正确鉴定真菌具有重要意义。
徐和平老师在真菌学方面拥有丰富的临床经验，今天徐和平老师主要分享常见的丝状真菌鉴定。
温馨提示：因本帖中主要是授课视频和大量图片，建议在WIFI环境下学习！文末有干货！曲霉的基本结构：菌丝：有隔、透明，足细胞分生孢子梗：长短、颜色、表面粗糙程度分生孢子头：顶囊、小梗（瓶梗和梗基）、分生孢子其他结构：壳细胞、闭囊壳、厚壁孢子回顾公益学术活动提到真菌学检验，我们必然想到真菌学青年专家、北京协和医院的王澎老师，她曾多次做客“临床微生物论坛”和“QQ大讲堂”，参与公益学术活动，王澎老师已经离开我们一百多天，但她的音容笑貌仍然深深的印在我们的脑海里，她的学术造诣值得我们去研究学习。
下面就回顾一下2016年4月份她的网络公益讲座：《临床罕见真菌感染病例实验室诊断分享》2016年5月份网络公益讲座：《真菌形态学鉴定思路》践行公益活动之助学山区儿童本人系洛阳市第一中医院检验科陈众，为了帮扶河南省洛阳市嵩县旧县镇龙潭村山区学龄儿童，文末设置二维码所收集到费用均用于公益活动，若有大额资金，将交由村委会统一管理。
活动接受社会监督，资金用途将予以公示。
驻村第一书记：宋军利：138****0002洛阳市第一中医院纪律监察室：*************2016年12月份送物资时拍摄2017年5月2日再次来到龙潭村看望孩子们参与公益活动，可以扫描二维码转账，并注明系公益捐款本文编辑：陈众视频来源：。
实验一：丝状真菌生长的测定
所用显微镜的目镜测微尺，并计算每一格的长度。在菌落边缘选 择单根菌丝的顶端在低倍镜下聚焦，然后将目镜测微尺与菌丝平 行，并选择菌丝开始出现侧枝的部位与目镜测微尺上的一条线重 合，这个点即为“参照点”。每隔一定的时间测量一次菌丝生长 的长度，观察数次后，根据时间和延长生长的长度划一条生长曲 线，并求出生长速度（毫米/小时）。
③ 每日测定生长距离，并计算生长率。
三、结果记录： 1）每个方法作一张表格，记录每次不同时间丝
状真菌生长情况。
2）菌落生长速度的测定： ① PDA无菌平板，将待测菌株点接于培养基 平板上。 ② 每天测量菌落的半径 ③ 记载时间和生长量，在一定限度内生长量 与时间成直线关系。
3）直接生长速度的测定： ① PDA培养基倾注入“U形”培养管中，注入 培养基的量，达到培养管直径的一半，另一端用塞 子塞好；
②
一、概念
丝 状 真 菌 （ filamentous fungi ） ， 俗 称 霉 菌 （ mould, mold），通常指那些菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体 结构的真菌。
一、测定方法 1）菌丝生长的测定：
① 马铃薯（PDA）培养基倒平板，冷却（无菌操作）。
配方：葡萄糖 20克 ，琼脂 20克，削皮马铃薯 200克煮汁 定容至1000ml，pH自然，115℃灭菌30分钟； ② 待测菌株点接于培养基平板中心，倒置28℃度培养； ③ 待菌落长出后，将平板翻置于显微镜镜台上，同时校对
实验五 放线菌、真菌形态观察及各类微生物菌落特征观察(生科)
孢子丝
气生菌丝
营养菌丝
气生菌丝
孢 子 丝
分 生 孢 子
三 酵母菌形态观察
1 实验要求 2 实验原理
3 实验材料
4 操作步骤
1 实验要求
学习并掌握水浸片法制备标本片的方法
观察酵母菌的菌体形态特征及出芽生殖
按要求绘酵母菌形态图
2 实验原理
真菌形态结构比细菌复杂。习惯上，真菌可分为酵母 菌和霉菌。 酵母菌是单细胞构造，个体形态多为卵圆形、圆柱形，
记录表。
2 绘出放线菌形态图 3 绘出酵母菌形态图 4 绘出黑根霉形态图
实验五 放线菌、真菌形态观察 及各类微生物菌落特征观察
实验内容
一 各类微生物菌落特征观察
二 放线菌形态观察
三 酵母菌形态观察
四 霉菌形态观察
一 各类微生物菌落特征观察
1 实验目的要求
2 实验原理
3 实验步骤
1 实验目的要求 （1）观察细菌、放线菌、酵母菌、霉菌等微生
物菌落的形态特征。
（2）总结几类微生物菌落的一般特征并能识别。
2 实验原理
菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成
的肉眼可见的群体。 粘质 沙雷 氏菌
沙 门 氏 菌
铜绿 假单 胞菌
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细胞形 态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态的集 中反映，因此，每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可 通过这些特征差异区分和识别之。
4 操作步骤
（1） 在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染液，用 拨针以无菌操作方式挑取少许根霉菌丝在染液
中铺展开，盖上盖玻片。
（2） 用低倍镜观察菌丝结构及孢子形态。
（3） 绘出黑根霉形态图
实验五 放线菌、真菌形态观察及各类微生物菌落特征观察(生科)
4 实验步骤
1 实验要求
学习并掌握印片法制备标本片的方法
观察放线菌各部分菌丝特征
巩固显微镜油镜的使用
按要求绘放线菌的形态图
2 实验原理
放线菌形态结构介于细菌与真菌之间，菌体由无隔、 分支状菌丝构成，可分为基内菌丝和气生菌丝两类， 基内菌丝伸入营养基质内；气生菌丝位于营养基质 上方。在发育过程中，气生菌丝分化形成孢子丝， 孢子丝产生孢子。孢子丝形态因菌种不同而不同，
4 操作步骤
（1） 在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染液，用 拨针以无菌操作方式挑取少许根霉菌丝在染液
中铺展开，盖上盖玻片。
（2） 用低倍镜观察菌丝结构及孢子形态。
（3） 绘出黑根霉形态图
孢囊孢子 孢子囊
孢子囊梗 匍匐枝 假根
足细胞 黑曲霉
青霉的帚状枝
实验报告：
1 填写细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌落的一般特征
特征。
表1 细菌、放线菌、真菌菌落形态特征观察
描述的特征 微生物种类 枯草杆菌
菌落特征
大小 表面 边缘 致密 程度 厚薄 程度 透明 程度 色泽
细菌 放线菌
八叠球菌
霉状芽孢杆菌
细黄链霉菌 5406放线菌 酵 母 菌 霉 菌 啤酒酵母
真 菌
毛霉 黑曲霉 青霉
二 放线菌形态观察
1 实验要求
2 实验原理
着生部位、排列方式以及孢子形态可作为真菌鉴定的重要依
据。菌丝特化形成假根等特化菌丝。 霉菌由于菌丝粗大，细胞易收缩变形，且孢子易飞散，制片 时常用乳酸石炭酸棉蓝染液，它一方面杀菌防腐，保持细胞
不变形，另一方面有染色作用。
3 实验材料
黑根霉平板菌落（每个学生必须自己制片）
丝状真菌形态观察
实验四 结 束
�
The major classes of fungi
Oomycetes(卵菌纲) Zygomycetes(接合菌纲) Ascomycetes(子囊菌) Basidiomycetes(担子菌纲) Deuteromycetes(半知菌纲)
观察霉菌的形态) 实验程序(观察霉菌的形态)
青霉, 青霉,黑曲霉观察
Mucor racemosus Geotrichum candidum Aspergillus niger Penicillium notatum Rhizopus oryzae
Several types of sexual spores
Oospores(卵孢子) Zygospores(接合孢子) Ascospores(子囊孢子) Basidiospores(担孢子)
实
验
四
丝状真菌形态的观察
丝状真菌形态的观察
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习观察丝状真菌形态的基本方法 加深理解丝状真菌的形态特征
实验材料
青霉, 丝状真菌培养物 :青霉,黑曲霉 水浸片法:根霉, 水浸片法:根霉,白地霉 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,酒精灯, 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,酒精灯, 镊子等. 镊子等. 乳酚油,碘液,酒精,蒸馏水等. 乳酚油,碘液,酒精,蒸馏水等.
囊轴columella 囊轴 囊托apophysis 囊托 孢子囊sporangium 孢子囊
匍匐菌丝stolon 匍匐菌丝 假根rhizoid 假根
孢子囊 sporangium
囊轴columella 囊轴
囊托apophysis 囊托 孢囊孢子sporangiospores 孢囊孢子
实验6
米，内径约1.3厘米，在两端5厘米处弯成45°角，如图所示。
在培养管中加入适量的溶化的琼脂培养基，达到培养管直径的一半，两端加 棉塞后灭菌。凝固后从一端接种，然后按时测定生长距离，并计算生长率。
二、测定菌丝干重法
顶端生长被认为是细胞壁水解、壁 的合成和壁的膨压之间的动力平衡
三、顶端生长的驱动力 对细胞质流、微管和电位势梯度的研究都支持和解释了泡囊移动现象。 第一，细胞质的流动驱使和带动泡囊移向顶端； 第二，泡囊借助于顶端和亚顶端区域之间水的电位势梯度而驱动； 第三，在菌丝细胞中，微管与菌丝生长方向平行，因此，可能微管运输泡囊 到菌丝顶端，如果菌丝顶端细胞有顶体的话，可能先运输到顶体部位，然后 由顶体直接运动这些泡囊到质膜。
实验六
一、实验目的
丝状真菌生长的测定
学习和掌握丝状真菌生长测定的三种方法。 二、实验原理 通过三种测定方法观察丝状真菌的生长，验证丝状真菌顶端延长生长 的机理。
一、菌丝顶端生长的泡囊学说
卵菌纲
接合菌纲
有隔真菌 蜜环菌菌丝顶端区域，顶端原生 质膜凹入部位，即为泡囊与原生 质膜的融合
菌丝顶端泡囊排列的主 要类型
的一条划线重合，这个点即为“参照点” 。
6．每隔一定时间（分钟）测量一次菌的生长长度。 7．观察五次后，根据时间和延长生长的长度绘制延长生长曲线，并求出生长速 度（mm/h）： L×10-3×60 S=
S：速度
t
= mm/h
t：时间 （min）
L：长度 （μm）
五、实验报告
上述方法要求严格按操作规程及时观察，认真记录，在报告中分别绘制生长曲线， 计算出生长速度。 六、思考题 1. 丝状真菌生长量的测定与细菌、酵母菌单细胞生物生长量的测定有何不同？
实验六丝状真菌形态特征观察.
实验六丝状真菌形态特征观察杨明轩生物111 1102040128一、实验目的1、观察并描述真菌菌落特征。
2、掌握制作水压片观察真菌的方法。
3、区分丝状真菌的军体特征及其形态特点。
二、实验原理毛霉和根霉都属于真菌的结合菌门。
菌落生长迅速，表面呈棉花样，初为白色，以后变灰至褐灰色。
菌丝单细胞无横隔，有分支，多核。
毛霉无假根；根霉有假根和匍匐死。
无性生殖产生孢囊孢子。
孢囊梗直接由菌丝体上长出，孢囊梗顶端膨大形成孢囊，孢囊成熟破裂后，露出囊轴，囊轴基部与孢囊梗连接处称为囊托。
毛霉无囊托，根霉的假根上方产生孢囊梗。
孢囊孢子呈球形、卵形或不规则形。
有性生殖形成接合孢子，常为异宗配合。
这些结构均可通过水压片进行观察。
很多青霉、曲霉及镰刀菌尚未发现它们的有性生殖阶段，称为半知菌。
这三种菌的无性生殖阶段均有特征性的分生孢子梗及分生孢子形态和分生孢子着生方式。
青霉菌落多为灰绿色，菌落质地绒状、絮状、绳状或束状，成熟后表面呈粉末状。
青霉菌丝可直接分化为分生孢子梗，其顶端具有对称或不对称的扫帚状分枝，其上着生几轮小梗，小梗顶端着生成串的球状或卵状的绿色分生孢子。
曲霉菌落呈绒毛状或絮状，表面有同心圆形的轮状带。
分生孢子梗长在厚壁的足细胞上，不分枝，顶端膨大呈球形、椭圆形或棍棒状顶囊。
其表面着生一层或两层小梗，下层为柱状初生小梗，上层为瓶装次生小梗，顶端着生成串的球状分生孢子。
镰刀菌菌落呈绒毛状，多为白色、粉红色或紫红色。
菌丝分隔有分枝。
具有两种分生孢子。
小型分生孢子梗分枝或不分枝，其顶端有链状或假头状着生的小型分生孢子。
大型分生孢子梗不分枝，其顶端着生镰刀状大型分生孢子多隔，单生或丛生。
三、实验材料1、菌种：毛霉(Mucor sp.)牛” “”型菌株、根霉(Rhizopussp.)、青霉 (Penicillium sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、镰刀菌(Fusarium sp.)2、浮载剂：乳酸酚溶液3、培养基：真菌培养基4、其他：无菌培养皿、载玻片、盖玻片、无菌水、擦镜纸、吸水纸、接种钩四、实验方法1、形态观察（1）直接观察：不打开培养皿盖，将培养皿置于载物台上，在低倍镜下直接观察。
实验一：丝状真菌生长的测定
2）菌落生长速度的测定： ① PDA无菌平板，将待测菌株点接于培养基 平板上。 ② 每天测量菌落的半径 ③ 记载时间和生长量，在一定限度内生长量 与时间成直线关系。
3）直接生长速度的测定： ① PDA培养基倾注入“U形”培养管中，注入 培养基的量，达到培养管℃培养箱中培养；
实验一 丝状真菌生长的测定
一、概念
丝 状 真 菌 （ filamentous fungi ） ， 俗 称 霉 菌 （ mould, mold），通常指那些菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体 结构的真菌。
一、测定方法 1）菌丝生长的测定：
① 马铃薯（PDA）培养基倒平板，冷却（无菌操作）。
配方：葡萄糖 20克 ，琼脂 20克，削皮马铃薯 200克煮汁 定容至1000ml，pH自然，115℃灭菌30分钟； ② 待测菌株点接于培养基平板中心，倒置28℃度培养； ③ 待菌落长出后，将平板翻置于显微镜镜台上，同时校对
③ 每日测定生长距离，并计算生长率。
三、结果记录： 1）每个方法作一张表格，记录每次不同时间丝
状真菌生长情况。
所用显微镜的目镜测微尺，并计算每一格的长度。在菌落边缘选 择单根菌丝的顶端在低倍镜下聚焦，然后将目镜测微尺与菌丝平 行，并选择菌丝开始出现侧枝的部位与目镜测微尺上的一条线重 合，这个点即为“参照点”。每隔一定的时间测量一次菌丝生长 的长度，观察数次后，根据时间和延长生长的长度划一条生长曲 线，并求出生长速度（毫米/小时）。
丝状真菌的鉴定
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
丝状真菌的鉴定
北京大学第一医院皮肤科
主讲人：余进
余进 主任医师
北京大学第一医院 教授、博士生导师
中国微生物学会临床微生物学委 员会青年委员会副主任委员及真 菌学组副组长
中国微生物学会医学微生物学与 免疫学专委会真菌学组副组长
01
目
02
03
录
04
05
丝状真菌形态鉴定
丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定 丝状真菌DNA测序鉴定 常见丝状真菌鉴定 总结
镰刀菌—直接镜检
镰刀菌形态特征
瓶梗
复出芽细胞
单瓶梗
复瓶梗
大分生孢子
小分生孢子
芽生孢子
厚垣孢子
足细胞
茄病镰刀菌Fusarium solani
尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum
层生镰刀菌 Fusarium proliferatum
轮状镰刀菌 Fusarium verticillioides
絮状表皮癣菌 Epidermophyton floccosum
05 丝状真菌鉴定总结
感谢聆听
少根根霉 Rhizopus arrhizus
不规则毛霉 Mucor irregularis
微小根毛霉 Rhizomucor pusillus
棘状小克银汉霉 Cunninghamella echinulata
丝状真菌地鉴定主要根据形态特征
丝状真菌地鉴定主要根据形态特征。
形态特征包括群体形态和个体形态。
1、群体形态群体形态即菌落的形态。
观察菌落形态时多采用固定的培养基，将固体培养基制成平板，以点植法接种，即用接种针尖沾取少量孢子点植在平板上适当的位置，例如中心，或三角形的三点。
然后于25－28℃培养一定时间（如2、4、7、10天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜、低倍镜、解剖镜等。
观察的要点一般包括下列几项：1）大小：它反映生长或发育速度，通常测量菌落的直径。
2）颜色：包括菌落表面子实体、气生菌丝、菌核的颜色和基内的颜色，还应注意培养基颜色的变化。
3）菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。
4）菌落的质地：即菌落外观呈毡状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状，有无成束状或绳状的气菌丝。
5）菌落的高度：菌落扁平或凸起，中心部分凸起或凹陷。
气生菌丝的高度。
6）菌落的边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。
7）渗出物：指菌落表面有无液滴、液滴的颜色和数量。
2、个体形态个体形态指菌丝的特征，子实体的形态(如孢子囊。
子囊壳、子囊、担子果等的形态)，孢子的形态（如孢囊孢子、分生孢子、芽孢子、节孢子、厚垣孢子、卵孢子、接合孢子、担孢子等）。
由于丝状真菌的个体大都较小，必须制成载片标本在显微镜下观察。
丝状真菌的制片比较简单，通常将乳酸苯酚（Lactophenol）液一滴，滴于载片上，再用解剖针挑取欲观察的培养物置此液滴内，并且用针尖将其分散开勿使成团，盖好盖片即得载片标本。
这种载片可保存数月，如盖片四周涂封漆则可保存数年。
1两种分生孢子, 大型分生孢子呈镰刀形，小型分生孢子呈椭圆形2孢子长方形，接连成链菌丝断裂为成串的节孢子3灰绿色，绒毛状，表面有绿色的孢子孢子圆球形，呈绿色孢子大小(μm)：3.03～4.26分生孢子梗顶端膨大，表面的产孢瓶体上成链的分生孢子。
丝状真菌简介
丝状真菌简介丝状真菌- 概述霉菌并不是一个生物分类学的名称，而是丝状真菌的通称，意即“发霉的真菌”。
丝状真菌的菌丝呈长管、分枝状，宽度2～10微米，可不断自前端生长并分枝，无横隔壁，具多个细胞核，并往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。
在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是丝状真菌。
丝状真菌常用孢子的颜色来称呼，如黑霉菌、红霉菌或青霉菌。
丝状真菌- 菌落特征A、形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或松或紧的形状。
B、菌落和培养基间的连接紧密，不易挑取，菌落正面与反面的颜色、构造，以及边缘与中心的颜色、构造常不一致。
C、菌丝有营养菌丝和气生菌丝的分化，而气生菌丝没有毛细管水，故它们的菌落必然与细菌或酵母菌的不同，较接近放线菌。
丝状真菌- 菌丝丝状真菌构成丝状真菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为2~10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。
菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
类型根据菌丝中是否存在隔膜，可把菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝：菌丝中无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核。
这是低等真菌（即鞭毛菌亚门和接合菌亚门中的霉菌）所具有的菌丝类型。
有隔膜菌丝：菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。
在隔膜上有1至多个小孔，使细胞之间的细胞质和营养物质可以相互沟通。
这是高等真菌（即子囊菌亚门和半知菌亚门中的霉菌）所具有的菌丝类型。
菌丝变态丝状真菌为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育的需要，许多丝状真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态和组织，这种特化的形态称为菌丝变态。
吸器:由专性寄生霉菌如锈菌、霜霉菌和白粉菌等产生的菌丝变态，它们是从菌丝上产生出来的旁枝，侵入细胞内分化成根状、指状、球状和佛手状等，用以吸收寄主细胞内的养料。
丝状真菌简介
丝状真菌简介丝状真菌- 概述霉菌并不是一个生物分类学的名称，而是丝状真菌的通称，意即“发霉的真菌”。
丝状真菌的菌丝呈长管、分枝状，宽度2～10微米，可不断自前端生长并分枝，无横隔壁，具多个细胞核，并往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。
在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是丝状真菌。
丝状真菌常用孢子的颜色来称呼，如黑霉菌、红霉菌或青霉菌。
丝状真菌- 菌落特征A、形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或松或紧的形状。
B、菌落和培养基间的连接紧密，不易挑取，菌落正面与反面的颜色、构造，以及边缘与中心的颜色、构造常不一致。
C、菌丝有营养菌丝和气生菌丝的分化，而气生菌丝没有毛细管水，故它们的菌落必然与细菌或酵母菌的不同，较接近放线菌。
丝状真菌- 菌丝丝状真菌构成丝状真菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为2~10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。
菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
类型根据菌丝中是否存在隔膜，可把菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝：菌丝中无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核。
这是低等真菌（即鞭毛菌亚门和接合菌亚门中的霉菌）所具有的菌丝类型。
有隔膜菌丝：菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。
在隔膜上有1至多个小孔，使细胞之间的细胞质和营养物质可以相互沟通。
这是高等真菌（即子囊菌亚门和半知菌亚门中的霉菌）所具有的菌丝类型。
菌丝变态丝状真菌为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育的需要，许多丝状真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态和组织，这种特化的形态称为菌丝变态。
吸器:由专性寄生霉菌如锈菌、霜霉菌和白粉菌等产生的菌丝变态，它们是从菌丝上产生出来的旁枝，侵入细胞内分化成根状、指状、球状和佛手状等，用以吸收寄主细胞内的养料。
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实验六丝状真菌形态特征观察
杨明轩生物111 1102040128
一、实验目的
1、观察并描述真菌菌落特征。
2、掌握制作水压片观察真菌的方法。
3、区分丝状真菌的军体特征及其形态特点。
二、实验原理
毛霉和根霉都属于真菌的结合菌门。
菌落生长迅速，表面呈棉花样，初为白色，以后变灰至褐灰色。
菌丝单细胞无横隔，有分支，多核。
毛霉无假根；根霉有假根和匍匐死。
无性生殖产生孢囊孢子。
孢囊梗直接由菌丝体上长出，孢囊梗顶端膨大形成孢囊，孢囊成熟破裂后，露出囊轴，囊轴基部与孢囊梗连接处称为囊托。
毛霉无囊托，根霉的假根上方产生孢囊梗。
孢囊孢子呈球形、卵形或不规则形。
有性生殖形成接合孢子，常为异宗配合。
这些结构均可通过水压片进行观察。
很多青霉、曲霉及镰刀菌尚未发现它们的有性生殖阶段，称为半知菌。
这三种菌的无性生殖阶段均有特征性的分生孢子梗及分生孢子形态和分生孢子着生方式。
青霉菌落多为灰绿色，菌落质地绒状、絮状、绳状或束状，成熟后表面呈粉末状。
青霉菌丝可直接分化为分生孢子梗，其顶端具有对称或不对称的扫帚状分枝，其上着生几轮小梗，小梗顶端着生成串的球状或卵状的绿色分生孢子。
曲霉菌落呈绒毛状或絮状，表面有同心圆形的轮状带。
分生孢子梗长在厚壁的足细胞上，不分枝，顶端膨大呈球形、椭圆形或棍棒状顶囊。
其表面着生一层或两层小梗，下层为柱状初生小梗，上层为瓶装次生小梗，顶端着生成串的球状分生孢子。
镰刀菌菌落呈绒毛状，多为白色、粉红色或紫红色。
菌丝分隔有分枝。
具有两种分生孢子。
小型分生孢子梗分枝或不分枝，其顶端有链状或假头状着生的小型分生孢子。
大型分生孢子梗不分枝，其顶端着生镰刀状大型分生孢子多隔，单生或丛生。
三、实验材料
1、菌种：毛霉（Mucor sp.）“＋”“－”型菌株、根霉（Rhizopus sp.）、青霉（Penicillium sp.）、
曲霉（Aspergillus sp.）、镰刀菌（Fusarium sp.）
2、浮载剂：乳酸酚溶液
3、培养基：真菌培养基
4、其他：无菌培养皿、载玻片、盖玻片、无菌水、擦镜纸、吸水纸、接种钩
四、实验方法
1、形态观察
（1）直接观察：不打开培养皿盖，将培养皿置于载物台上，在低倍镜下直接观察。
（2）制水压片：取一洁净的载玻片，于中央滴一滴乳酸酚溶液，用接种钩挑取少量菌丝及孢囊与染液中，用两根接种针将其拉松散，再轻轻盖上盖玻片，置于高倍镜下观察。
（桔青霉和黑曲霉要观察足细胞，在挑菌时应当挑取少量培养基）。
2、毛霉接合孢子观察
（1）培养：分别在已经倒好的马铃薯葡萄糖培养基的平皿背面中央画一条线，于线左右分别标“＋”“－”，然后取相应的毛霉菌株接种，并在26℃恒温箱中倒置培养7天。
（2）镜检：制作水压片，观察。
五、实验结果
菌落特征描述
菌种毛霉
（Mucor
sp.）
根霉
（Rhizopus
sp.）
青霉
（Penicillium.sp）
曲霉
（Aspergillus
sp.）
镰刀菌
（Fusarium
sp.）
菌丝
质地
棉絮状絮状绒状绒状绒状正面
颜色灰白色灰白色
中央灰绿色，
边缘灰白色
中央褐色，
边缘灰白色
中央粉红
色，
边缘白色
背面
颜色白色白色灰白色灰白色
中央粉红
色，
边缘白色
根霉、毛霉、青霉、曲霉和镰刀菌的菌落特征和形态结构差异
代表属菌落特征菌丝特征无性繁殖
毛霉属表面呈棉絮状，初为白色，后变灰至褐灰色。
多单细胞无横隔，有分枝，多
核。
有：孢囊梗，孢子囊，囊
轴，囊领。
孢囊孢子
根霉属菌落表面絮状，无色素。
有：匍匐丝，假根，孢囊梗与假
根对生，囊轴、囊托。
孢囊孢子
青霉属正面灰绿色，茸状，成熟后表面呈粉状。
分生孢子梗扫帚状分枝。
小梗多
轮。
分生孢子，绿色，
球形或卵形。
曲霉属中央为黑色的孢子，边缘白
色，为新生菌丝。
有同心圆形
的轮廓带。
角变现象。
孢囊梗、足细胞、顶囊；初生小
梗柱状；次生小梗瓶状。
分生孢子成链状排
列，球形。
镰刀菌属菌落白色、粉红色或紫红色，
绒状，产生紫红色色素。
菌丝分枝，有分隔。
厚垣孢子、小型分
生孢子链状或假头
状；大型分生孢子
镰刀状，单生或丛
生。