乳鼠肾细胞原代培养传代培养

乳鼠肾细胞的原代培养、传代培养

目的要求

一、了解细胞原代培养、传代（继代）培养的基本方法和操作过程。

二、初步掌握培养过程中的无菌技术。

三、掌握在例置相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。

用品

超净工作台

恒温培养箱

普通显微镜

例置相差显微镜

水浴箱、离心机

解剖剪、眼科剪

镊子（尖头、平头和有钩镊）

烧杯

培养瓶

离心管

吸管

血球记数板

酒精灯

单个仪器逐个弹出在屏幕上，小器械逐个弹出在超净台上

培养用品

RPM1 1640培养液（含小牛血清及青、链霉素）

试剂库弹出具体内容酒精冻存培养液胰蛋白霉---???

????75%PBS 0.25% RPM1 1640、0.25%胰蛋白霉、PBS ，冻存培养液微热字显示

动物细胞及细胞系

新生乳鼠（小鼠）

中国仓鼠卵巢细胞（CHO ）

人宫颈癌细胞（HELA ）

以上三个也为热字显示

乳鼠肾细胞原代培养

方法1—单层细胞培养法

所有组织中都有一定量的细胞间质（纤维和基质等），对细胞生长有妨碍作用，

用胰酶消化能出去间质，使组织松散成单个细胞或小的细胞团，细胞易于生长。 步骤

1．培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。

2．点燃酒精灯，用品按布局放置，安装吸管等

3．取材

取新生乳鼠一只，采用颈椎脱臼法处死，然后把这个小鼠进入盛有75%酒精的烧杯中2-3秒，随即携入超净工作台内。

在超净工作台内取出小鼠，置于消毒培养皿中

打开消毒器械包