动物细胞培养条件和培养基
动物细胞培养的条件
动物细胞培养的条件动物细胞培养是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选和基因工程等领域。
为了确保动物细胞培养的顺利进行，满足细胞生长和繁殖的需求，我们需要为细胞提供一系列适宜的条件。
本文将对动物细胞培养的条件进行详细阐述，以帮助读者更好地了解和掌握这一技术。
一、无菌和无毒的环境动物细胞对细菌、病毒等微生物非常敏感，这些微生物的存在会导致细胞污染和感染。
因此，在进行细胞培养时，首先要保证培养环境的无菌和无毒。
这可以通过以下措施实现：1.严格的操作规程：实验人员在进行细胞培养前应接受严格的培训，遵循无菌操作规程，确保实验过程中的污染风险降到最低。
2.高质量的培养容器和器材：使用一次性无菌培养容器和器材，可以有效减少细菌和病毒的传播途径。
3.消毒和灭菌：对实验器材和培养环境进行定期消毒和灭菌，确保无菌状态。
4.过滤器过滤：使用细菌和病毒过滤器，对培养液和气体进行过滤，防止微生物进入培养系统。
二、适宜的温度和pH值动物细胞的生长和繁殖需要在一定的温度和pH值条件下进行。
通常，人体细胞培养的适宜温度为36.5-37.5℃，过高或过低的温度都会影响细胞的生长和代谢。
此外，细胞培养液的pH值也非常重要，一般控制在7.2-7.4范围内，以保持细胞内外环境的稳定。
三、营养物质的供应动物细胞培养过程中，需要提供充足的营养物质，以满足细胞的生长和代谢需求。
常用的培养基含有以下成分：1.糖：糖是细胞能量的主要来源，通常使用葡萄糖或果糖作为能源。
2.氨基酸：氨基酸是蛋白质合成的基本单位，细胞需要从培养基中摄取氨基酸来合成自身所需的蛋白质。
3.促生长因子：某些细胞需要特定的生长因子来促进其生长和分化，如表皮生长因子、胰岛素等。
4.无机盐和微量元素：细胞需要一定量的无机盐和微量元素，如钠、钾、钙、镁、铁等，以维持细胞内外环境的稳定。
5.血清或血浆：血清或血浆中含有丰富的生长因子和营养物质，可以促进细胞生长和分化。
动物细胞培养
动物细胞培养简介动物细胞培养是一种在体外控制环境下培养和繁殖动物细胞的技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选、疾病治疗等领域。
动物细胞培养是通过提供适当的养分和生长条件，使细胞可以在无体内环境的情况下生长和繁殖。
培养基选择动物细胞培养的首要任务是提供合适的培养基，以满足细胞的生长和繁殖需求。
培养基通常由基础培养液和补充物组成。
基础培养液提供细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等。
补充物则包括生长因子、激素、抗生素等，以促进细胞生长和抑制细菌的污染。
常用的培养基有DMEM（Dulbecco最小培养基）、RPMI （Roswell Park红斯威尔纸培养基）、MEM（最小必需培养基）等。
选择适合特定细胞类型和研究目的的培养基对细胞的生长和研究结果至关重要。
细胞分离和传代在动物细胞培养过程中，细胞通常需要经过分离和传代的步骤，以保持细胞的健康状态并扩散细胞数量。
细胞分离细胞分离是将细胞从组织中分离出来的过程。
常用的细胞分离方法包括胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法、机械剪切法等。
分离得到的细胞可以直接用于培养，也可以进行进一步的传代。
细胞传代细胞传代是将已培养细胞进行分离并移植到新的培养皿中的过程，以维持细胞的持续生长。
传代可以通过机械分离、胶原酶等酶处理或稀释离心等方法进行。
传代过程中需要注意的是细胞的密度和周期，以避免细胞过度生长或死亡。
培养条件在动物细胞培养过程中，提供适当的培养条件对细胞的生长和繁殖至关重要。
温度和湿度动物细胞通常在37℃下生长，因此培养箱和孵育器需要保持恒定的温度。
同时，湿度的控制也是必要的，以避免细胞脱水。
CO2和pH值大多数动物细胞需要CO2的存在来维持酸碱平衡。
因此，在培养过程中，需要添加适量的CO2到培养箱中，以维持合适的pH值。
一般来说，细胞培养需要在5% CO2下进行，pH范围为7.2-7.4。
搅拌和通气为了促进细胞的生长和分裂，培养基需要定期搅拌以保持养分的均匀分布。
动物细胞的培养条件和培养基
• 2、合成培养基：优点是成分明确，组分稳定，可 大量生产供应。动物细胞培养中常用的有BME、 MEM、DMEM、HAM F12、RPMI 1640以及 ISOCOV、199和McCoy等。
• 缺点：无法替代一些未知成分。 • 解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补
的胎牛血清。
• 血清的作用机制可能为：（1）提供有利于细胞生 长增殖所需要的各种生长因子和激素；（2）提供 有利于细胞贴壁所需要的贴附因子和伸展因子； （3）提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结 合蛋白；（4）提供细胞生长所必须的脂肪酸和微 量元素。
• 3、无血清培养基
• 无血清培养基的优点如下：①提高了细胞培养的可 重复性，避免，避免了由于血清批之间差异的影响； ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生 物污染的危险；③供应充足、稳定；
动物细胞的培养条件和培养基
• 为了使细胞培养在体外培养成功，需要一些 基本条件：
（1）绝对无菌操作； （2）足够的营养供应，排除有害物质包括极其
微量的离子掺入； （3）适量氧气供应；
（4）随时清除细胞代谢中产生的有害产物； （5）有良好的适于生存外界环境，包括pH、渗透
压和离子浓度等； （6）及时分种，保持合适的细胞密度。
6、空气
二、动物细胞培养基的 种类和组成
• 细胞种系不同对培养基的要求亦有差异，主要 有三类：天然培养基、合成培养基和无血清培 养基。 1、天然培养基：在细胞培养的早期阶段使用的 培养基，主要为来自天然的材料如血浆凝块、 血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
• 优点：营养价值高 • 缺点：成分复杂、来源有限、成本较高
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
动物细胞培养的条件与方法
动物细胞培养的条件与方法动物细胞培养是生物科学研究中重要的一部分，可以为细胞生物学、分子生物学和生物医学研究提供重要的实验材料和平台。
在动物细胞培养过程中，为了保证细胞的生长和繁殖，需要创造适宜的条件和选择合适的方法。
本文将介绍动物细胞培养的条件和方法，并探讨其在生物科学研究中的应用。
一、细胞培养的条件1. 培养基培养基是细胞培养中必不可少的基础物质，它提供了细胞所需的养分和生长因子。
常用的细胞培养基包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）、RPMI（Roswell Park Memorial Institute）、MEM （Minimum Essential Medium）等。
这些培养基中含有适宜的氨基酸、糖类、维生素、微量元素等成分，能够满足细胞正常的生长和代谢需求。
2. pH值和温度细胞培养的过程中，pH值和温度的控制非常重要。
一般来说，细胞培养的pH值范围为7.2-7.4，温度常在37摄氏度左右。
过高或过低的pH值或温度都可能导致细胞受损或死亡。
3. CO2浓度大部分哺乳动物细胞需要适量的CO2浓度来维持其生长和代谢的平衡。
一般情况下，细胞培养使用的培养箱或培养器会控制CO2浓度在5%左右。
CO2的存在可以帮助维持培养基的酸碱平衡，有利于细胞的正常生长。
4. 营养物质和血清除了基础培养基外，细胞培养中的营养物质和血清也是细胞正常生长所必需的。
营养物质主要包括氨基酸、葡萄糖、维生素等，而血清则是提供生长因子和其他重要成分的来源。
细胞培养中常用的血清包括胎牛血清（FBS）和新生牛血清（NBS）等。
二、细胞培养的方法1. 传代培养传代培养是细胞培养中常用的方法之一，可以使细胞持续增殖。
具体步骤包括将细胞从原培养瓶中解离并收集，然后经过计数后按照一定比例重新接种到新的培养瓶中。
传代培养的频率取决于细胞的生长速度和需求。
2. 凝胶培养凝胶培养是一种将细胞培养在凝胶基质中的方法。
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
生物动物细胞培养知识点
生物动物细胞培养知识点
1. 培养基：生物动物细胞必须在合适的培养基中生长和繁殖。
常用的培养基包括DMEM、RPMI 1640和MEM等。
2. 细胞传代：当细胞密度达到一定程度后，需要进行传代，即将细胞分离并移植到新的培养皿中继续生长。
3. 培养条件：生物动物细胞需要适宜的培养条件才能正常生长。
包括温度、湿度、氧气含量、营养物质等。
4. 细胞病毒污染：生物动物细胞培养容易出现细胞病毒污染，需要采取相关的预防措施，如定期检测、消毒鉴定等。
5. 细胞凋亡：细胞凋亡是一种自我调节的程序性死亡，常出现在细胞密度达到一定程度后。
6. 细胞形态：生物动物细胞的形态和生长状态需要定期观察和记录，以便及时发现和处理问题。
7. 细胞株的建立：通过限制性稀释或筛选，可以获得单克隆的细胞株，方便后续的实验研究。
8. 细胞的鉴定：眼睛观察、免疫细胞化学等方法可以用于鉴定不同类型的生物动物细胞。
9. 细胞破裂：细胞在处理过程中需要破裂释放细胞内物质，通常使用机械方法或超声波等物理方法来破裂细胞。
10. 细胞冻存：为了保存细胞，需要进行冷冻保存，通常在添加冷冻保护剂后，将细胞悬浮液分装于-80°C冰冻保存。
动物细胞的培养条件
动物细胞的培养条件动物细胞培养是生物医学研究的重要技术之一，为了维持细胞正常的生长和功能，需要满足以下条件：一、无菌环境动物细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免微生物污染。
培养箱、培养器具、操作环境和实验人员的双手等都需要经过严格的消毒灭菌处理，以确保细胞生长环境的无菌。
二、营养物质动物细胞生长需要充足的营养物质，包括氨基酸、维生素、糖、脂肪酸等。
培养基是提供这些营养物质的溶液，它需要根据不同细胞类型的需求进行定制，以支持细胞的正常生长和功能。
三、温度和PH值动物细胞生长需要稳定的温度和酸碱度（PH值）。
大多数动物细胞在温度为37°C左右时生长最好，而适宜的PH值范围为7.2-7.4。
因此，在细胞培养过程中，需要使用温度调节器和酸碱度调节器来维持适宜的温度和PH值。
四、气体环境动物细胞生长需要充足的气体环境，主要是氧气和二氧化碳。
培养箱中的气体环境可以通过调节氧气和二氧化碳的浓度来控制，以支持细胞的正常生长和代谢。
五、细胞贴壁动物细胞培养通常需要在固相表面（如玻璃、塑料等）上进行贴壁生长。
在贴壁过程中，细胞会通过表面受体与培养基中的生长因子等物质相互作用，进而维持细胞的生长和功能。
为了使细胞能够顺利贴壁生长，需要选择适当的细胞接种浓度和培养基。
六、传代培养动物细胞在培养过程中会不断分裂增殖，当培养瓶中的细胞密度达到一定程度时，需要进行传代培养，即将细胞分散并重新接种到新的培养瓶中。
传代培养需要注意细胞的分散度和接种密度，以维持细胞的正常生长和功能。
七、血清和血浆动物细胞培养还需要添加血清或血浆等天然成分，以提供丰富的营养物质和生长因子等，促进细胞的生长和分化。
不同类型的细胞可能需要不同类型的血清或血浆，选择和使用这些天然成分时需要谨慎处理，避免对细胞产生不良影响。
动物细胞组织培养(精)
将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然 后继续增殖。 这样的过程叫做传代培养
8、如何理解原代培养和传代培养？ 在第一培养瓶中培养就是原代培养，之 后转移到其它培养瓶中培养就是传代培 养 9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 不都能 10、有些为何能一直传下去？ 发生突变，朝着癌细胞方向发展 11、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50部分 细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分 还发生突变向癌细胞方向发展
4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮 液利于培养，使每个细胞与培养液接触
5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成 新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因 为动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度 的提高而逐渐受到抑制
6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再 分裂、增殖？ 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象 叫接触抑制。 7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应 该怎样办？
?）
防止培养过程中污染 防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害
(2)、培养基 成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等
种类： 天然培养基：主要取自动物血清，组织提取液，营 养价值高，成分复杂 合成培养基：人工配置，成分明确，便于控制试验 条件
和植物组织培养基相比有何独特之处？
液体培养基 、成分中有动物血清等
(3)、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 (4)、气体环境 O2和CO2
4.动物细胞生长特性：
细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴 附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。
2.2 动物细胞工程
第2章细胞工程第2节动物细胞工程一、动物细胞培养1.概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
2.原理：细胞增殖3.地位：动物细胞工程的基础4.关键操作：原代培养和传代培养。
（一）动物细胞培养的条件1.营养（1）成分①已知成分将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
①未知成分使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。
（2）培养基的物理性质培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。
2.无菌、无毒的环境①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；①在无菌环境下进行操作；①还需要定期更换培养液。
3.温度、pH和渗透压（1）适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5①为宜。
（2）适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。
（3）适宜的渗透压：维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。
4.气体环境（1）组成：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
（2）气体作用：①O2：O2是细胞代谢所必需的；①CO2：CO2的主要作用维持培养液的pH。
（二）动物细胞培养的过程①原代培养：将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。
①传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养；①细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁；①接触抑制：当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
1.取动物组织（1）取材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
（2）取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。
2.制成细胞悬液（1）制成细胞悬液的步骤：①将组织分散成单个细胞；①用培养液将细胞制成细胞悬液。
（2）将组织分散成单个细胞的原因：①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；①能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
动物细胞组织培养
2.3动物细胞工程
动物细胞培养
1、定义:
动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将 它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中让这些 细胞生长和增殖。
2、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛， 分化程度低，容易培养。
3、动物细胞培养条件：
(1)、无菌、无毒的体外环境
9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 不都能
10、有些为何能一直传下去？
发生突变，朝着癌细胞方向发展
11、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50部分 细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分 还发生突变向癌细胞方向发展
植物组织和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮 液利于培养，使每个细胞与培养液接触
5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成 新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因 为动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度 的提高而逐渐受到抑制
6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再 分裂、增殖？
(3)培养首先在 B瓶中进行。瓶中的培养基
成分有 _葡__萄_糖__、_氨基酸、无机盐、维生素和动物_血_清_等。在此
瓶中培养一段时衰老死亡，到这时的培养称为
动物细胞培养的基本条件
动物细胞培养的基本条件
1. 培养基，动物细胞培养需要使用含有营养物质的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI 1640等。
培养基中通常含有氨基酸、糖类、维生素、无机盐、生长因子和血清等成分，以支持细胞的生长和增殖。
2. 温度，动物细胞通常在37摄氏度的温度下培养，这是因为这个温度符合动物体内的生理条件，有利于细胞的正常生长和代谢活动。
3. pH值，培养基的pH值通常在7.2-7.4之间，这个范围有利于细胞的生长和代谢，维持细胞内外环境的稳定性。
4. 湿度，细胞培养需要在恒定的湿度下进行，通常采用5%二氧化碳培养箱来维持适当的湿度和CO2浓度，以维持培养环境的稳定。
5. 无菌条件，动物细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞受到外源微生物的污染，通常在无菌工作台或生物安全柜中进行操作。
6. 细胞密度，在培养过程中，需要控制细胞的密度，避免细胞
过度增殖或过度稀释，通常通过离心和重新悬浮来调节细胞密度。
总的来说，动物细胞培养的基本条件包括适当的培养基、温度、pH值、湿度、无菌条件和细胞密度等因素，这些条件的合理控制对
于维持细胞的生长和稳定的培养环境至关重要。
通过严格控制这些
基本条件，可以有效地进行动物细胞培养实验，为细胞生物学和生
物医学研究提供可靠的实验基础。
高中生物 选修3 第2章 第2节 动物细胞培养
的及时排出。
提示 (1)营养 (2)代谢物
,因为这些组织或
4.动物细胞培养时,用胰蛋白酶把细胞分散成单个细胞,用胃蛋白酶行吗? 胰蛋白酶对细胞有伤害吗?怎么解决这个问题? 。 提示 不行,因为动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,胃蛋白酶在此环境中没 有活性。用胰蛋白酶处理细胞时,作用时间长了会损伤细胞膜蛋白。要控 制好胰蛋白酶的作用时间
[归纳提升] 1.动物细胞培养过程分析 (1)培养流程
(2)酶处理 ①用酶“两次”处理的目的:第一次使用的目的是使组织细胞分散开;第二次 使用的目的是使细胞从瓶壁上脱离下来,分散后继续培养。 ②使细胞分散开的原因:一是能保证细胞所需要的营养供应;二是能保证细 胞内有害代谢物的及时排出。 ③不能用胃蛋白酶处理:由于大多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,而 胃蛋白酶发挥作用的最适pH为2.0左右,因此不能用胃蛋白酶使细胞分散 开。
取材
新鲜的组织
植物器官、组织或细胞
培养对象
分散的单个细胞
离体的植物器官、组织或细胞
过程
原代培养、传代培养 脱分化、再分化
细胞分裂、生 (1)贴壁生长
(1)脱分化:形成愈伤组织
长、分化特点 (2)接触抑制
(2)再分化:形成根、芽等
3.培养条件的分析 (1)添加血清的作用:血清中含有多种维持细胞正常代谢和生长的物质,如 蛋白质、氨基酸、未知的促生长因子等。细胞培养时,一般需添加 10%~20%的血清。 (2)气体环境:CO2维持培养液的pH,O2维持细胞有氧呼吸。 特别提醒 (1)培养动物细胞时没有脱分化的过程,因为高度分化的动物细 胞发育潜能变低,失去了发育成完整个体的能力。 (2)不是所有的细胞在增殖过程中都存在接触抑制。例如,癌细胞增殖时不 存在接触抑制,所以在培养瓶中可以形成多层细胞。
动物细胞培养的技术
动物细胞培养的技术动物细胞培养的技术动物细胞培养是一种重要的生物技术，它可以用于研究细胞生物学、药物筛选、疾病模型构建等领域。
本文将介绍动物细胞培养的基本原理、培养条件和常用技术。
一、动物细胞培养的基本原理动物细胞培养是将动物体内的细胞分离出来，通过提供适当的培养基和培养条件，使细胞在体外继续生长和繁殖的过程。
培养基是一种含有营养物质、生长因子和调节因子的液体或凝胶，能够提供细胞所需的营养物质和环境。
二、动物细胞培养的培养条件1. 培养基的选择：根据不同的细胞类型和研究目的，选择适合的培养基。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等。
2. 温度和湿度：一般情况下，动物细胞培养的温度为37摄氏度，湿度保持在95%以上。
3. CO2浓度：大多数动物细胞需要在含有5% CO2的培养箱中培养，以维持细胞内酸碱平衡。
4. 培养器具的消毒：培养器具必须经过高温高压灭菌处理，以防止细菌和真菌的污染。
三、动物细胞培养的常用技术1. 细胞的分离：将动物组织切碎，加入胰酶等消化酶，使细胞从组织中分离出来。
2. 细胞的传代：当细胞达到一定密度时，需要将细胞进行传代，以保持细胞的生长状态。
传代时，将细胞从原来的培养瓶中取出，经过消化和离心，将细胞重新分散到新的培养瓶中。
3. 细胞的冻存：为了长期保存细胞，可以将细胞冻存。
冻存细胞前，需要添加冻存液，将细胞缓慢冷却至低温，然后存放在液氮中。
4. 细胞的检测：通过显微镜观察细胞的形态和数量，使用细胞计数板进行细胞计数，以评估细胞的生长状态和纯度。
动物细胞培养技术的应用非常广泛。
在药物研发中，可以通过培养细胞构建疾病模型，用于药物筛选和毒性测试。
在生物学研究中，可以利用细胞培养技术研究细胞的生长、分化和凋亡等过程。
此外，动物细胞培养还可以用于生物工程和组织工程领域，用于生产重组蛋白和构建人工组织。
总结起来，动物细胞培养是一项重要的生物技术，它为细胞生物学研究和药物开发提供了有力的工具。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养是指从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长、繁殖并维持其结构和功能的一种技术。
二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境细胞培养必须在无菌条件下进行，以防止微生物的污染。
这包括对培养器具的严格消毒、操作过程中的无菌操作技术以及使用无菌的培养基和试剂。
2、合适的培养基培养基提供了细胞生长所需的营养物质，包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
此外，还可能添加血清、生长因子等促进细胞生长和增殖的成分。
3、适宜的温度和气体环境一般来说，动物细胞培养的温度在 37℃左右，同时需要一定的气体环境，如 95%的空气和 5%的二氧化碳，以维持培养基的酸碱度平衡。
4、合适的培养容器常见的培养容器有培养瓶、培养皿、多孔培养板等，其材质和表面特性会影响细胞的附着和生长。
三、动物细胞培养的基本流程1、取材从动物体内取出需要培养的细胞或组织，如从胚胎、器官或肿瘤组织等。
取材过程要尽量减少对细胞的损伤。
2、原代培养将取出的组织或细胞分散成单个细胞，接种到培养容器中进行初次培养。
这一阶段的细胞称为原代细胞。
3、传代培养当原代细胞生长到一定密度后，需要将其分成若干份，重新接种到新的培养容器中继续培养，这个过程称为传代培养。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，可以将细胞在低温下冻存。
当需要使用时，再进行复苏，使其恢复生长和增殖能力。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产例如，利用动物细胞培养技术生产疫苗、抗体、激素等生物制品。
疫苗的生产可以通过培养病毒感染的细胞，收获病毒制成疫苗；抗体的生产则是通过培养能产生特定抗体的细胞来实现。
2、基因工程和细胞工程在基因工程中，动物细胞可以作为受体细胞，用于导入和表达外源基因。
在细胞工程中，细胞培养技术是细胞融合、细胞克隆等技术的基础。
3、药物筛选和毒性测试培养的动物细胞可以用于筛选新的药物，评估药物的疗效和毒性。
动物细胞培养的条件与方法
动物细胞培养的条件与方法动物细胞培养是现代生物研究和医学技术的重要手段之一。
通过动物细胞培养，可以对细胞进行研究，探索其功能与特性，并为药物研发、组织工程等领域提供基础支持。
然而，要成功进行动物细胞培养，需要满足一定的条件并采用适当的方法。
本文将对动物细胞培养的条件和方法进行探讨。
一、培养环境的条件在进行动物细胞培养之前，首先需要提供适宜的培养环境，包括培养基、温度、湿度、气体和培养容器等条件。
1. 培养基：培养基是支持细胞生长和繁殖所必需的，它提供了细胞所需的营养物质和生长因子。
常用的培养基有DMEM、RPMI 1640、MEM等，不同种类的细胞需要采用相应的培养基。
此外，培养基中还需添加适当浓度的血清、抗生素等。
2. 温度：细胞培养的温度通常为37℃。
这是因为37℃是体内细胞正常生长的温度，也是大多数动物细胞培养的最佳生长温度。
3. 湿度：保持培养环境的适宜湿度是细胞培养的重要条件之一。
细胞培养箱通常提供一定的湿度控制功能，保持培养箱内大气中的水分不蒸发。
4. 气体：细胞培养通常需要提供含有5% CO2的空气，以维持细胞培养环境的酸碱平衡。
5. 培养容器：培养容器应选用无毒、无菌的材料，如培养皿、培养瓶等。
常用的培养容器有塑料培养皿、细胞培养板等。
二、动物细胞培养的方法动物细胞培养的方法多种多样，常见的方法包括原代培养和细胞系培养。
1. 原代培养：原代培养是从组织或器官中直接分离细胞并进行培养。
其主要步骤包括组织切割、消化酶处理、细胞筛选和培养等。
原代培养通常用于研究组织的特性和功能，如动物胚胎细胞、肿瘤细胞的原代培养。
2. 细胞系培养：细胞系培养是通过原代培养获得的细胞，经一系列传代操作形成可长期稳定增殖的细胞系。
其主要步骤包括细胞解剖、细胞分离、细胞悬浮培养和细胞传代等。
细胞系培养常用于药物筛选、疾病研究和生物工程等领域。
在动物细胞培养过程中，还需注意以下几点：1. 避免细胞感染：细胞培养过程中，必须保持无菌操作，避免细胞受到细菌、真菌或病毒的污染。
动物细胞的培养和生长技术
动物细胞的培养和生长技术，是生物学领域的一项重要技术。
它可以帮助生物学家更好地研究动物细胞的特性、生长过程和功能，从而为人们提供更好的医学支持和药物研发。
一、动物细胞的培养培养动物细胞需要选择合适的培养基和培养条件。
培养基是指一种能够满足细胞生长、分化和代谢等需要的营养液。
目前用于动物细胞培养的细胞培养基主要有两种，一种是定义培养基，另一种是复合培养基。
定义培养基是经过精确调配的，其中的各种元素和成分时不变的，能够精确控制细胞的生长与变化。
复合培养基则是将多种培养基成分混合在一起，适用于培养某些难以生长的细胞。
在选取培养基的时候，要考虑到细胞的来源和需求。
例如，不同种类的细胞需要的培养基成分可能有很大的不同，因此需要选择适合这种细胞生长的培养基。
二、动物细胞的生长动物细胞的生长是一个复杂的进程，需要合适的条件和环境。
在培养细胞的过程中，要注意控制以下几个方面：1、温度动物细胞生长的温度范围为37℃左右。
在培养细胞的过程中，需要控制好恒温箱的温度，以保证细胞的正常生长。
2、CO2在体内温度和CO2浓度相对稳定的情况下，细胞可以正常生长和分裂。
因此，在培养细胞的过程中，要控制好CO2浓度，一般设置为5%左右。
3、pH值动物细胞对pH值的适应范围比较窄，一般在7.2~7.4之间。
在培养细胞的过程中，要注意保持培养基的pH值，以避免对细胞生长产生不良影响。
4、细胞密度细胞密度是指每个培养皿中细胞的数量。
在培养细胞的过程中，要注意控制细胞密度的大小，避免出现超过存活数量以及空缺的情况。
三、动物细胞的常见培养技术1、单层培养单层培养是将细胞分散在培养皿表面上并逐渐生长成一层的技术。
这种技术适用于很多不同类型的细胞，如K562、HEK293等。
2、悬浮培养悬浮培养是将细胞在培养基中悬浮生长的技术，适用于一些不适合单层培养的细胞，如白细胞、淋巴细胞等。
3、三维培养三维培养是用一些支撑材料和培养基构建三维细胞组织的培养技术。
动物细胞培养原理
动物细胞培养原理
动物细胞培养是一种重要的生物技术，它在医学、药物研发、基因工程等领域发挥着关键作用。
动物细胞培养的原理主要包括细胞培养基、培养条件、细胞凋亡等方面。
细胞培养基
细胞培养基是支持细胞生长和增殖所必需的培养液。
它含有多种营养物质，如氨基酸、糖类、维生素、生长因子等，以满足细胞生长的需要。
培养基的配方因细胞类型不同而异，可以根据具体需要进行调整。
培养条件
在动物细胞培养中，培养条件对细胞生长起着至关重要的作用。
温度、CO2浓度、湿度等因素都会影响细胞的生长情况。
通常情况下，培养箱会提供恒定的温度和CO2浓度，以保持细胞在最适宜的环境中进行增殖。
细胞凋亡
细胞凋亡是细胞正常生命周期的一部分，它是一种机制，可以帮助维持细胞数量的稳定。
在细胞培养过程中，细胞的凋亡情况也需要被考虑进去，过多或过少的凋亡都会影响细胞培养的质量。
动物细胞培养是一门复杂而又重要的技术，它的原理涉及到多个方面，需要在实验中不断探索和改进。
通过对细胞培养原理的深入了解，我们可以更好地利用这一技术，从而为生命科学领域带来更多的突破和进步。
动物细胞培养所需的基本条件
血清培养基的优点：
含有丰富的利于细胞生长的成分
血清培养基缺点：
（1）动物血清来源有限，价格高，不宜大量使用
（2）动物血清成分复杂且成分不稳定，使生长过程不易检测控制。
（3）虽然血清对细胞生长有效，但会对后期培养产物的分离、提纯以及检测造成一定困难。
血清的生物功能
1.提供基本营养物质：氨基酸、
维生素、无机物、脂类物质、
养。
❖
⑴氨基酸：培养基提供必需的12种氨基酸
⑵维生素：B族维生素
⑶糖类：大多以葡萄糖为碳源
⑷无机盐
⑸其它成分：嘌呤，嘧啶以及抗氧化剂
⒊无血清培养基
①提高重复性
②减少微生物污染
③供应充足稳定
④产品易纯化
⑤避免血清因素对细胞的毒性
⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰
❖
无血清培养基(Serum free medium,SFM)是不含血清的动物细胞培养基，由基础培养基和添加组分组成。试图
核酸衍生物等，是细胞生长
必须的物质。
2.提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺
皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇
激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如
成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板
生长因子等。
3.提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的
低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、
以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细
对于大多数动物组织而言，在植块培养1～3天 后，即有细胞从植块向外迁移，随着培养时间 的推移，迁出的
细胞会越来越多，而且迁出的细胞不断分裂繁殖，逐渐涨满支持物表面
组织块培养法
❖
使用组织块培养法，外植块能在一定限度内保持其原有的组织结构，有利于适应外界培养环境，操作简便，是
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动物细胞培养条件和培养基
一、提高产量、降低成本和改 进质量方面的研究
为了提高产量,要提高细胞表达水平。 为降低成本，须改进培养基配方。 为改进产品质量，关键是糖基化质量。 改进工艺，生产设备等
动物细胞培养条件和培养基
二、转基因动物的研究
自1982年Palimiter提出用转基因 动物来生产药用蛋白以来，发展迅 速。 优点：产量高成本低质量与天然一 样。 现还有不成熟之处。对动物和人的 健康的影响。
动物细胞培养条件和培养基
⒉主要参数的检测和控制方法
⑴ 温度 ⑵ pH ① 在培养初期，控制进氧量 ② 当细胞密度提高后控制
NaHCO3的量
动物细胞培养条件和培养基
⑶溶氧 ⑷搅拌 ⑸进出液流量 ⑹其它
动物细胞培养条件和培养基
第七节 动物细胞制药的前 景与展望
一、提高产量降低成本和改进质 量方面的研究
依培养器和方式: 静止培养、旋转培养、 搅拌培养、微载体培养、 中空纤维培养、 固定床或流化床培养
动物细胞培养条件和培养基
从生产实际分为: 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养
动物细胞培养条件和培养基
⒈悬浮培养 让细胞自由的悬浮于培养基内 生长繁殖。
⒉贴壁培养 让细胞贴附在某种基质上生长 繁殖的培养方法。
动物细胞培养条件和培养基
无血清培养基加入添加剂 ⑴生长因子和激素 ⑵结合蛋白 ⑶贴附因子和伸展因子 ⑷有利细胞生长的因子和元素
动物细胞培养条件和培养基
第五节 动物细胞培养方 法和操作方式
一、动物细胞大规模培养的方法 依细胞种类:
原代培养、 传代培养 依培养基: 液体培养、 固体培养
动物细胞培养条件和培养基
⒈搅拌式生物反应器 ⒉气升式生物反应器 ⒊中空纤维式生物反应器 ⒋透析袋或膜式生物反应器
⒌固定床或流化床式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
⒈搅拌式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
⒉气升式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
⒊中空纤维式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
平床式中空纤维式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
动物细胞培养条件和培养基
添加小牛血清的作用 ⑴提供生长因子和激素 ⑵提供贴附因子和伸展因子 ⑶提供结合蛋白 ⑷提供必需脂肪酸和微量元素
动物细胞培养条件和培养基
⒊无血清培养基 ①提高重复性 ②减少微生物污染 ③供应充足稳定 ④产品易纯化 ⑤避免血清因素对细胞的毒性 ⑥减少血清中蛋白对生物测定 的干扰
二、动物细胞的培养 基的种类和组成
分3类: ⒈天然培养基 ⒉合成培养基 ⒊无血清培养基
动物细胞培养条件和培养基
⒈天然培养基
血清、羊水、腹水等,成分复杂、 成分不稳定
⒉合成培养基
DME、 MEM、 DMEM、 HAM F12、 RPMI1640
动物细胞培养条件和培养基
⑴氨基酸 ⑵维生素 ⑶糖类 ⑷无机盐 ⑸其它成分 添加小牛血清：
第四节 动物细胞的培养 条件和培养基
细胞体外培养基本条件: ①无菌 ②营养充足,止有害物质 ③氧气
动物细胞培养条件和培养基
④随时清除代谢有害物质 ⑤良好的生存外环境 ⑥及时分种
动物细胞培养条件和培养基
一、动物细胞的培养条件 ⒈器材的清洗和消毒
⑴器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 ⑵器材的消毒灭菌 物理消毒 化学消毒
动物细胞培养条件和培养基
动物细胞培养条件和培养基
动物细胞培养条件和培养基
⒉ 水质 :电阻值大于18MΩ, 去热原。
⒊ pH:7.2～7.4 ⒋ 渗透压:290～300mOsm/kg ⒌ 温度:37±0.5 C ⒍ 空气:氧的饱和质60%,氧分压
4～0.7kPa
动物细胞培养条件和培养基
动物细胞培养条件和培养基
动物细胞培养条件和培养基
⒋透析袋或膜式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
⒌固定床或流化床式生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
CellGen plus生物反应器
动物细胞培养条件和培养基
二、动物细胞生物反应器的 检测控制系统
⒈ 培养过程需检测的物化参数 直接在线检出 取样离线检测 检测后计算
⒉ 主要参数的检测和控制方法
⒊贴壁-悬浮培养
动物细胞培养条件和培养基
⒊贴壁-悬浮培养 ⑴微载体培养 ⑵包埋和微囊培养 ⑶结团培养
动物细胞培养条件和培养基
二、动物细胞培养的操作 方式
⒈分批式操作 ⒉半连续式操作 ⒊灌流式操作
动物细胞培养条件和培养基
第六节 动物细胞生物反应 器及其检测控制系统
一、动物细胞生物反应器的类型及 其基本结构