胶体金、免疫荧光
免疫胶体金测试原理
免疫胶体金的制备原理
胶体金是氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下， 金离子还原后聚合成的一定大小的金颗粒，它由一个基础的晶核（11 个金原子形成的二 十面体）和包围在外的双离子层构成（内层为负离子层 AuCl2－，外层是带正电荷的 H ＋）。由于静电作用，金颗粒之间相互排斥而悬浮成为一种稳定的胶体状态，形成带负 电的疏水胶溶液，故称胶体金。
双抗原夹心法
双抗原夹心法的特点在于包被和标记均为抗原，检测时，样品中的待检抗体首先与 标记抗原结合，再与包被抗原结合。其质控线应包被标记抗原的多抗，但实际检测中， 质控线的效果往往不好。
双抗原夹心法检测抗体的优点在于它检测的是总抗体，即样本中的 IgG、IgM、IgA 等特异性抗体均可作为搭桥抗体产生阳性结果，其对人兽共患病的检测更有价值，既可 检测人血清抗体，亦可检测动物血清抗体，从而实现用同一种检测试剂检测不同种属的 抗体。另外，双抗原夹心法的特异性和敏感度易于控制，并且可达到很高的水准。
免疫胶体金技术在医学检验中的应用研究
免疫胶体金技术在医学检验中的应用研究摘要：目的探讨免疫胶体金技术在医学检验领域的应用价值及发展前景。
方法随机选择本院2016年1月至2017年1月期间诊疗的500例患者, 结合免疫胶体金技术的运用, 对患者疾病类型予以加以诊断。
结果 500例患者中, 妊娠134例,包含早孕25例、梅毒47例;急性心肌梗死120例;蛋白尿患者23例;急性脑梗死78例;冠心病56例;脑膜炎40例;其它49例。
结论医学检验中, 免疫胶体金技术能够更好提高患者疾病诊断率, 为后续治疗工作的开展提供条件, 值得推广。
关键词：免疫胶体金技术; 医学检验; 应用与进展;胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，使其具有光吸收性、呈色性和胶体性等特点。
而免疫胶体金技术 (Immune colloidal gold technique) 作为胶体金标记物, 将硝酸纤维素膜定义为固相载体, 依据滤膜的微孔滤过原理, 以此实现对抗原抗体的测定[1]。
鉴于此, 随机选择本院2016年1月至2017年1月期间诊疗的500例患者为研究对象, 探讨免疫胶体金技术在医学检验领域的应用价值及发展前景。
详细总结如下。
1 资料与方法1.1 一般资料随机选择本院2016年1月至2017年1月期间诊疗的500例患者, 男性患者283例、女性患者217例;最小年龄为15岁, 最大年龄为82岁, 年龄中位数为(48.5±3.5) 岁。
纳入标准:无任何禁忌症;自愿参与本次研究, 且已签署知情同意书;患者均具有自理能力。
1.2 方法于清晨对患者静脉血、尿液、粪便予以采集, 待相关处理完成后, 经免疫胶体金检验技术的运用, 对患者疾病类型加以诊断。
1.3 结果500例患者中, 妊娠134例, 包含早孕25例、梅毒47例;急性心肌梗死120例;蛋白尿患者23例;急性脑梗死78例;冠心病56例;脑膜炎40例;其它49例。
免疫组化常用方法介绍及个人经验总结
免疫组化常用方法介绍及个人经验总结1 、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。
2 、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
3 、分类1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。
2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。
与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。
3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP 法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。
4 、目前几种常用免疫组化方法简单介绍1）免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。
它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。
当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。
由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。
荧光免疫标记技术
适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体溶液，此法标记抗体比较 均匀，非特异性染色也比较少。
【主要试剂与器材】 1．器材 （1）铁立架、蝴蝶夹、层析柱、洗脱瓶、搅拌器、磁棒、
紫外分光光度计 （2）烧杯、试管、滴管、吸管、洗耳球、pH试纸、黑纸 2．试剂 （1）抗体 （2）异硫氰基荧光黄（FITC） （3）葡聚糖凝胶（Sephadex G-25） （4）pH9.5，0. 5M 碳酸缓冲液 （5）pH7.0，0.005M 磷酸缓冲液
免疫标记技术的应用 标记物与抗原、抗体的连接技术； 标记后的抗原、抗体进行特异性检测的实验设计原理 以及相应的检测仪器的使用方法。
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）
是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应 的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量 的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗 体结合部位，检测出抗原或抗体。
荧光免疫标记技术
免疫标记（immunolabelling technic）
是指用一些易测定的、具有高度敏感性的标记物质：荧光素、放射 性核素、酶、胶体金、生物素、铁蛋白及化学（或生物）发光剂等作为 追踪物，标记特异性的抗原、抗体分子进行的抗原、抗体反应。
通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原、抗体的性 质与含量。并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微 镜和发光免疫测定仪等精密仪器对试验结果直接镜检观察或进行自动化 测定。
免疫荧光技术- 基本原理
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微 示踪的精确性相结合。
以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不 影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原。
比较几种免疫检测的异同
免疫学课后作业比较几种免疫标记技术的异同。
答：根据标记物种类的不同，免疫标记技术可以分为放射免疫分析、酶标记免疫分析、荧光标记免疫分析、化学发光标记免疫分析、胶体金标记免疫分析技术，它们之间具有相同点，也有不同之处，现将其归纳如下。
一、相同点主要包括以下几个方面：1、均具有高特异性。
五种免疫标记技术的免疫技术都是采用抗原抗体反应，而抗原与抗体的结合是一一对应、特异性结合的，故它们都具有非常高的特异性。
2、均具有高灵敏性。
由于五种免疫标记技术的标记技术均采用示踪物标记，例如酶、放色性核素、荧光素、胶体金以及致密物质等，当与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，只需测定复合物中的标记物，通过化学或物理的手段使不见的反应放大，转化为可见的、可测知的光、色、电、脉冲等信号，并可借助仪器精密测定，从而间接测出微量的抗原或抗体。
3、检测对象相同。
除了放射免疫技术只能检测抗原外，其他四种免疫标记技术均可检测抗原或者抗体，即通过已知抗原(或抗体)特异性结合待测抗体（或抗原），从而定性或定量地测出抗体或抗原。
4、免疫标记的程序基本相同。
其包括纯化抗原或抗体、确定标记物质（即决定了最终的检测方式）、进行标记、对标记产物分离纯化和分析鉴定等一系列程序。
二、不同点主要包括以下几个方面：1、检测原理不一样。
首先，酶免疫技术是以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原-抗体反应的特异性和酶催化底物反应高效性和专一性结合起来的一种免疫方法，其对作为标记用的酶具有特定的要求，如活性高、纯度高等；放射免疫标记技术是以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法；免疫荧光技术是以荧光素作为标记物与已知的抗体或抗原结合，然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和坚定未知的抗原，其对用于标记的荧光素也有特定的要求，如荧光效率高，与蛋白质结合稳定，易于保存等；发光免疫分析技术是将发光分析与免疫反应相结合而建立的一种新型超微量分析技术，它是使用发光剂标记抗体（或抗原），通过发光检测抗原（或抗体）反应的免疫分析方法；免疫胶体金标记技术则是以胶体金作为示踪标记物，而胶体金在碱性环境中带负电荷，与抗体蛋白质分子的正电荷基团因静电而形成牢固结合应用于抗原抗体反应的一种新型免疫检测方法。
免疫胶体金技术在医学检验领域的运用
免疫胶体金技术在医学检验领域的运用摘要：免疫胶体金技术在医学领域中，具有广泛的运用前景。
文章对免疫胶体金技术进行介绍，同时探究了该项技术在医学检验领域的运用开展简单分析，对免疫胶体金技术的定性、定量的检测进行分析，并对该技术医学方面开展详细阐述。
关键词：免疫胶体金技术；医学检验；领域免疫胶体金技术是将胶体金作为示踪物，并放于硝酸纤维素载体中行过滤（滤膜），毛细血管作用下标记抗体（抗原），可在滤膜上特异性与配体结合，以此产生了显色（阳性）。
所以采用这种方法可进行抗原、抗体的定性、定量、半定量的检测[1]。
1 免疫胶体金技术检测分析1.1 定性检测免疫胶体金技术运用成熟，主要包括斑点免疫金渗滤-DIGFA、胶体金免疫层析-GICA这两种方法。
在医学领域中，这两种方法运用都比较成熟，主要优势在于有着较高的灵敏度，且检验时间不长，同时操作简单，在医学领域中常用[2]。
1.2 定量及半定量检测胶体金本身颜色为粉红或红色，可以通过肉眼及光学传感器，对检测色彩深浅度判断，达到定量以及半定量检测目的[3]。
2 免疫胶体金技术在医学领域中的运用2.1 DIGFADIGFA称之为斑点免疫金渗滤-DIGFA。
初次的筛选实验过程中，斑点免疫金渗滤-DIGFA是一种有效的方法。
在症状诊断中运用较好，且效果得到了肯定，目前运用前景好。
有研究人员在血清梅毒抗体检验方法选择时，运用斑点免疫金渗滤-DIGFA的特异度达到了百分百，灵敏度也高达94%。
效果明显。
同时，在粪便隐血检验运用中，与常用的邻苯胺法相比，斑点免疫金渗滤-DIGFA灵敏度以及抗干扰力更理想[4]。
2.2 GICAGICA称之为胶体金免疫层析-GICA。
在免疫层析检验法兴起的时代下，该方法起源上个世纪90年代末，使用者运用该技术进行阴道的念珠菌检测，具有极高的灵敏度以及特异性，这表现出的检验性质与传统的技术相比，效果更优。
该方法的现场检测可快速开展，效果好。
有研究者在诊断急性心肌梗死时，运用心肌三联胶体金法、心肌酶谱检测法，肌酸激酶同工酶灵敏度96.3%、肌钙蛋白灵敏度85.2%、肌红蛋白灵敏度100%，这说明了胶体金免疫层析技术联合运用法，在临床上诊断心肌梗死价值更实用，效果更好。
被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值
应用研究被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值王居鹏1，2，朱黎娜2，马明坤2，陈慧3，郭素香3，任丽1△摘要：目的分析被动凝集法（PA）、间接免疫荧光法（IFA）和胶体金法（GICT）联合检测对儿童肺炎支原体（MP）感染的诊断价值。
方法选取进行MP抗体检测的患儿617例，以临床诊断为判断标准，分为MP感染组（345例）和非MP感染组（272例）。
所有患儿均经PA检测MP总抗体，经IFA和GICT检测MP-IgM抗体。
分析PA、IFA和GICT 这3种方法单独检测及两两联合检测与临床诊断的一致性，受试者工作特征（ROC）曲线评价其对MP感染的诊断价值，分析PA联合IFA检测2组患儿抗体情况。
结果MP感染组PA检测MP总抗体、IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性率较非MP感染组高（P＜0.01）。
PA检测MP总抗体的阳性检出率高于IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性检出率（P＜0.01）。
PA联合IFA与临床诊断为中度一致（Kappa值=0.41，P＜0.05）。
3种方法单独检测和两两组合检测中PA联合IFA的曲线下面积、敏感度、总符合率、阴性预测值最高，阴性似然比最低。
GICT单独检测特异度最高。
IFA单独检测阳性预测值和阳性似然比最高。
当MP-IgM抗体阳性时，MP感染组23.44%的患儿总抗体滴度＜1︰160，非MP感染组47.22%的患儿总抗体滴度≥1︰160。
当MP-IgM抗体阴性时，MP感染组91.91%的患儿MP总抗体滴度≥1︰160，非MP感染组有73.50%的患儿总抗体滴度＜1︰160。
结论PA和IFA联合检测可为临床诊断儿童MP 感染提供更客观、准确的检测结果。
关键词：肺炎支原体；儿童；胶体金；免疫球蛋白M；荧光抗体技术，间接；被动凝集法；间接免疫荧光法中图分类号：R446文献标志码：A DOI：10.11958/20212561Diagnostic value of particle agglutination,indirect immunofluorescence assay and immunecolloidal gold technique combined detection for Mycoplasma pneumoniae antibody inchildren with Mycoplasma pneumoniae infectionWANG Jupeng1,2,ZHU Lina2,MA Mingkun2,CHEN Hui3,GUO Suxiang3,REN Li1△1Department of Clinical Laboratory,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical ResearchCenter for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Tianjin's Clinical Research Center for Cancer, Tianjin300060,China;2Department of Clinical Laboratory,3Department of Pediatrics,Second TeachingHospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine△Corresponding Author E-mail:*************.cnAbstract:Objective To analyze the diagnostic value of particle agglutination(PA),indirect immunofluorescence assay(IFA)and immune colloidal gold technique(GICT)combined detection for Mycoplasma pneumoniae(MP)infection in children.Methods A total of617children were selected for MP antibody detection,and children were divided into the MP infection group(345cases)and the non-MP infection group(272cases)based on clinical diagnosis.All the children were detected MP total antibody by PA,and MP-IgM antibody by IFA and GICT.The consistency of PA,IFA and GICT detection alone or in combination with clinical diagnosis was analyzed.The diagnostic value of receiver operating characteristic(ROC) curve in the diagnosis of MP infection was evaluated,and the antibody detection of PA combined with IFA was analyzed.Results The positive rate of total MP antibody detected by PA and MP-IgM antibody detected by IFA and GICT was higher in the MP infected group than those in the non-MP infected group(P＜0.01).The positive rate of total MP antibody detected by PA was significantly higher than MP-IgM antibody detected by IFA and GICT(P＜0.01).PA combined with IFA was moderately consistent with clinical diagnosis(Kappa=0.41,P＜0.05).The area under the curve of the diagnostic value,基金项目：国家自然科学基金资助项目（81904250）；天津市教委科研计划项目（2019KJ045）作者单位：1天津医科大学肿瘤医院检验科（邮编300060），国家肿瘤临床医学研究中心；天津市“肿瘤防治”重点实验室；天津市恶性肿瘤临床医学研究中心；2天津中医药大学第二附属医院检验科，3儿科作者简介：王居鹏（1990），男，主管技师，主要从事临床免疫学相关研究。
关于研究蛋白质细胞定位的几种方法
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的晶体结来自构window._bd_share_config={"mon":{"bdSnsKey
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不起那天都讲了什么，也不记得自己做了什么，但是，自始至终木子都没有和袁
体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的 樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗 粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫 电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物 学的各个方面，并取得了可喜的进展。胶体金是 由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸等作用下， 聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成 为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。免疫胶体 金标记电镜技术广泛应用于细胞及组织内蛋白 的定位研究，是利用胶体金在碱性环境中带负电
poct检测原理
poct检测原理
POCT具有空间小、使用方便、高效以及准确度高等多项优势，并且价格普遍偏低，对于疾病预防、确定病因和预后效果、提高治疗有效性和减少医疗成本有重大意义，能满足各级各类医疗机构临床检测需要，尤其是在国家大力推进分级诊疗和第三方检测的时候，成本低、效率高的POCT产品对基层医疗卫生机构和第三方检测机构更具吸引力。
POCT作为传统检验实验室检验方法的补充，具备检测时间短、空间不受限制和操作简单三大特色。
随着科学发展和检测技术的不断革新，POCT产品大致经历了定性、半定量、全定量和自动化共四代产品。
POCT的技术原理主要有：干化学、胶体金、免疫荧光、微流控芯片、化学发光、生物传感器、生物芯片等。
其中，干化学逐步被替代，胶体金和免疫荧光成为市场主流技术，而微流控则为未来发展的方向。
POCT技术的基本原理大致可分为四类：
（1）把传统方法中的相关液体试剂浸润于滤纸和各种微孔膜的吸水材料内，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质型基质上，成为各种形式的诊断试剂条。
（2）把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的设备。
（3）把上述二者整合为统一的系统。
（4）应用生物感应技术，利用生物感应器检测待测物。
POCT（即时检验）近年来发展迅速快，主要得益于一些新技术的应用。
POCT产品的发展经历了第一代定性检测（试条试纸）；第二代半定量（色板卡比色或半定量仪器阅读）；第三代全定量系统（手工操作）；第四代技术平台（自动化信息化智能化）。
胶体金法和免疫荧光法检测血浆肌钙蛋白I的比较
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胶 体 金 法 和 免 疫 荧 光 法 检 测 血 浆肌 钙 蛋 白 Ｉ 比较 的
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荧光胶体金法
荧光胶体金法1.抗体的荧光标记法荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素-蛋白质结合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。
当它与相应的抗原特异结合后，借助于荧光显微镜观察呈现明亮的特异荧光。
实验中常用异硫氰基荧光黄（fluorescein isothiocyanate, FITC）作为标记物，在碱性溶液中，FITC上的化学基团异硫氰基（-N=C=S）与抗体蛋白自由氨基（主要是赖氨酸的ε-氨基）结合，形成荧光抗体，以测定细胞相应抗原的存在。
FITC具有很高的量子产量（发射光与吸收光的比值,0 .85），而且形成的偶联物的稳定性很好。
FITC是应用最广的荧光染料，流式细胞仪就按FITC 的特性，设计了激光波长为488 nm,很接近于FITC的最大激发波长492nm）。
作为标记的荧光素应符合以下要求：应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。
荧光效率高,与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。
荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。
与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质，与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
标记方法简单、安全无毒。
操作步骤：用碳酸氢钠缓冲液pH9.8稀释抗体为1-5mg/ml，或抗体对该缓冲液充分透析，以足以使赖氨酸不解离（去其正电荷），但注意保持大部分蛋白质仍未变性；将透析袋放入100ml 含0 .1 mg/ml 的pH9.8碳酸氢钠缓冲液（新配制）的烧杯中，用铝铂包烧杯以避光，4℃搅拌过夜；上述抗体液对PBS在4℃透析以终止反应。
其间至少更换PBS液三次，直致480nm 的吸收为零；加入0.5g/L 的叠氮钠。
此后，结合物在4℃避光保存，或分装后在－20℃冻存。
荧光偶联质量的检测：用标准免疫荧光染色试验以测定偶联率。
或用F/P值测定对其FITC标记质量进行鉴定。
免疫胶体金技术在食品检测中研究进展
免疫胶体金技术在食品检测中研究进展作者：李凌慧李坤罗鹏宇程冰晓韩瑜来源：《食品界》2017年第10期疫胶体金技术是继免疫荧光技术、免疫酶技术、放射免疫技术这三大免疫标记技术之后方便快捷被并且广泛应用的免疫标记技术。
早在1857年，Michael Faraday首次制备出纳米金溶胶，他的研究为胶体金溶胶的发展与应用提供了基础[1]。
1952年，KOLETSKY，S和GUSTAFSON，G提出了胶体金这一概念，研究了放射性胶体金对大鼠肝脏的损害。
我国艾克庄在1982年研究多发性硬化症脑脊液蛋白的电泳时用到了胶体金曲线测定法。
免疫胶体金技术利用抗原抗体的特异性反应，通过金标示踪物的直观显色变化而确定实验结果。
免疫胶体金技术不需要特殊大型设备和试剂、稳定性强、操作简单、成本较低、结果直观，所以在快速检测方面具有极大优势。
民以食为天，恶性食品问题事件频发，越来越多的人开始关注食品安全问题，食品安全的隐患最多就是农兽药残留与食品自身天然存在的有害物质如生物毒素、食源性致病菌等，因此探究出一种快速、经济、准确的食品安全检测技术对人类来说是一个挑战。
本文就免疫胶体金技术在检测食品中有害物质的研究应用展开综述。
免疫胶体金技术快速检测食品中抗生素抗生素如林可霉素、氯霉素、庆大霉素等若引入食品中其残留会通过食物链进入人体中，长期食用含有超标抗生素的食品会对人体健康带来极大的隐患。
刘淑华等用胶体金免疫层析法检测牛奶中新霉素的残留含量，检测结果重复性较好，并且表明牛奶样品不需要进行稀释就可以直接检测，检测时间只有3～5分钟，牛奶中新霉素的检测限为200μg/L。
李利芬等用胶体金法定性检测牛奶中林可霉素残留，采用两种方法进行定性检测，方法一林可霉素的检出限为40nk/mL，方法二林可霉素检出限为100nk/mL。
陶光灿等用胶体金免疫层析法测定了猪肉、鸡肉等动物组织中氯霉素的残留含量，方法特异性好，与其他抗生素无交叉反应，结果显示，所检测的动物组织中氯霉素的检测限均为0.3μg/kg。
免疫荧光介绍
免疫荧光介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。
利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。
一、基本原理及特点：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。
在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。
国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。
由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。
免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育及荧光检测等。
细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。
带你了解免疫荧光微生物检测
带你了解免疫荧光微生物检测免疫荧光法是生物医学领域里至关重要的检测技术之一，它能迅速地检测到各种样品中所存在的微生物，其中包括但不仅限于血液，体液，食物及环境。
用特异性抗体鉴定细胞表面特征以达到检测微生物目的，是高灵敏，高精度和快速检测手段。
它将免疫学方法与荧光标记技术相结合，探索特异性蛋白抗原的细胞分布规律，能对对细胞抗原的高精度定位，为疾病预防提供了一种新手段，被广泛应用于检测和鉴定食品、药品、化妆品等产品中的病原微生物。
不仅具有快速检验的特点，而且在敏感度和特异度方面均表现出较高的水平，因此已成为诊断学中最为常用的方法之一，那你知道免疫荧光法的基本原理是什么吗？检测范围以及有点有哪些吗？免疫荧光检测微生物的价值是什么吗？下面我们一起了解一下。
一、免疫荧光法的基本原理免疫荧光法是一种分子生物学的检测技术，其基本原理在于将已知的抗原或抗体标记上的荧光素制成荧光标记物标记的抗体与微生物的表面抗原结合，然后利用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体），从而生成荧光标记的免疫复合物。
该原抗体复合物含有荧光素，当荧光素受到激发光的照射时，会发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），从而可以清晰地看到荧光所在的细胞或组织，进而确定抗原或抗体的性质和位置。
随着生物分析和分子生物学研究的发展，免疫分析法已经成为了现代临床医学检验的一个非常有前景的手段之一。
二、检测范围及优点1.检测范围（1）血清学检测。
可以采用免疫荧光技术来检测血液中的微生物。
血液样本可用于检测多种血清反应，包括但不限于肝炎病毒、艾滋病病毒、莱姆病等疾病的检测。
（2）微生物特异性抗原的检测。
利用酶联免疫技术，以大肠杆菌为指示菌制备了一种可用于生物传感器的快速检测方法，并对影响灵敏度的各种因素进行了研究。
微生物特异性抗原的探测是免疫荧光技术领域中备受瞩目的另一项重要研究。
在本研究中我们采用了一种简单而又实用的方法对这些菌进行定性检测。
胶体金免疫层析技术
流速(S/4cm) 180 135 75
◊ 蛋白吸附能力： ◊ 样本过滤：
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◊ 滤膜 ◊ 分子杂交 ◊ 核酸、蛋白转印 ◊ 免疫层析
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是机体识别“自身”与“非己”抗原，对
自身抗原形成天然免疫耐受，对“非己” 抗原产生排斥作用的一种生理功能。正常 情况下，这种生理功能对机体有益，可产 生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和 稳定的免疫保护作用
◊ 特异性，灵敏度不断提高
HCG 检测 早期HCG检测条特异性 与LH等交叉 特异性检测HCG
样本 尿液 尿液，血清，全血
◊ 半定量，定量检测：
银染色胶体金免疫层析技术； 免疫荧光技术；
时间分辨荧光技术
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18
谢谢
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19
项目 早孕检测 毒品检测 疾病检测
所占百分比 90%以上 80-90% 30-40%
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◊ 快速，定性 10分钟以内就可得到检测结果。
◊ 无需设备 一根检测条就能完成检测
◊ 准确、灵敏 灵敏度可以达到10-9数量级
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◊ 应用范围不断扩大
疾病诊断，食品安全，药物检测，DNA检测
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3
什么叫胶体金：
胶体金是一群以 胶体状态，粒径在 微米级以下的悬浮 于水溶液中的金的 颗粒。
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4
古代： 用于提炼长生不老药物； 玻璃染色。
近现代： 19世纪50年代由Michael Faraday第一次人工合成纯胶体
金 1971年胶体金被 第一次用于电镜免疫胶体金染色法(IGS)
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临床免疫学检验(名解及答题)
临床免疫学检验【名词解释】1、enzyme immunoassay（EIA）酶免疫分析技术，是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将酶高效催化反应的专一性和抗原抗体反应的特异性相结合的一种免疫标记检测技术。
2、colloidal gold immunoassay胶体金免疫技术，是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种标记免疫测定技术。
3、immunoblot test（IBT）免疫印迹试验，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术。
4、precipitation reaction沉淀反应，指可溶性抗原与相应抗体在适当的条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。
5、agglutination reaction凝集反应，指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
6、immunogen免疫原，指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。
7、adjuvant （immunoadjuvant）佐剂（免疫佐剂），指预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质。
8、hapten半抗原，指仅有抗原性而无免疫原性的物质。
如多糖、多肽、类脂和核酸等物质。
9、monoclonal antibody（McAb）单克隆抗体，设法将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。
10、Polyclonal antibody（PcAb）多克隆抗体，亦称免疫血清，用抗原以不同途径免疫动物，从动物血清中获取抗体，该类含有抗体的血清称为抗血清。
由于免疫动物的抗原往往具有多种抗原表位，可激活体内多个B细胞克隆产生针对抗原多种表位的混合抗体，因而抗血清也称为多克隆抗体。
11、tumor antigen肿瘤抗原，指细胞癌变过程中新出现的或异常表达的抗原物质。
胶体金法和荧光免疫层析法
胶体金法和荧光免疫层析法
胶体金法：
胶体金法是一种常用的微生物检测方法，它利用特殊表面化学反应将特异性抗原与金色磁性纳米粒连接起来，使特异抗原凝聚成簇，从而使得检测结果很容易被识别。
该方法的优势在于其高灵敏度、快速和简单的操作方式，因此广泛应用于微生物检测、病毒检测和生物标志物检测等方面。
荧光免疫层析法：
荧光免疫层析法是一种利用荧光技术对微生物抗原进行检测的方法。
它利用特异性抗原免疫复合物以及特异性抗体，用特异性抗体将特异性抗原复合物与荧光标记物结合起来，然后在荧光免疫层析板上形成一个特定的反应位置，从而实现对特异性抗原的检测。
荧光免疫层析法的优势在于它的高灵敏度、快速、准确、可靠，因此广泛应用于微生物检测、病毒检测和生物标志物检测等方面。
胶体金免疫层析技术
◊ 特HCG异检性测 ，灵灵敏敏度度不断特提异性高
早期HCG检测条 2000mIU
与LH等交叉
现在HCG检测条
20mIU 特异性检测HCG
样本 尿液 尿液，血清，全血
◊ 半定量，定量检测：
银染色胶体金免疫层析技术； 免疫荧光技术；
The END
谢谢
谢谢
1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用
胶体金的结构：
+ 胶体金结构：
胶体金颗粒由一个基础金核 （原子金Au）及包围在外的双 离子层构成，紧连在金核表面 的是内层负离子（AuC12－）， 外层离子层H+则分散在胶体间 溶液中，以维持胶体金游离于 溶胶间的悬液状态。
胶体金的性质
∆染色—不同粒径，不同颜色
粒径 2～5nm 10～20nm 30～80nm
颜色 橙色的 酒红色 紫红色
∆ 胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性
∆吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳 定迅速的吸附蛋白
胶体金的应用
+ 胶体金在电镜水平的应用 + 胶体金在光镜水平的应用 + 胶体金在流式细胞仪中的应用 + 免疫印迹技术
胶体金发展历史
古代： 用于提炼长生不老药物； 玻璃染色。
近现代： 19世纪50年代由Michael Faraday第一次人工合成纯胶体
金 1971年胶体金被 第一次用于电镜免疫胶体金染色法(IGS)
观察沙门氏菌 1974年Romano将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上， 建立了间接免疫胶体金染色法
基因工程指按人们意愿设计，通过改造基因 或基因组而改变生物的遗传特性，从而获 得新的品种货或产品。
意义：可以稳定的获得人类所要的蛋白。
免疫胶体金技术的基本原理
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。
2功能编辑本段常用的免疫胶体金检测技术：（1）免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。
（2）免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。
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注意事项
（1）打开层析条包装后应在1h 内应用。 （2）将层析条插入样品中，样 品的液面不能超过试剂条的标记 线。
思考题
1、试述一步金法早早孕妊娠 诊断实验原理 2、金标法的优缺点？
实验结果讨论
试剂条质控线与测试线的色带可因 尿中hCG含量多少而显现出颜色深浅， 结果判定按上述标准进行。
对照线与检测线均不出现色带，表明 发生检测错误应重试；当HCG浓度很高 时检测线很明显，对照线可能变得很 弱，为正常结果； 子宫肿瘤、葡萄胎或更年期病人，因 尿中HCG含量较高，可能会出现阳性结 果。
实验原理
早早孕检测试剂采用双抗体夹心一步法 技术，以胶体金为指示标记，检测尿液 中HCG浓度。
原理ห้องสมุดไป่ตู้
实验方法
将试纸条从冰箱中取出，置室温 下放置一定时间，让其充分复温。 取出试纸条，将有箭头的一端插 入尿液中，其深度不得超过标志 线，约5s后取出平放，5min内观 察结果。
结果判断
T C
阳性 阴性
无效
实验结果
结果报告 待测标本HCG检测
性
阳性：两条紫红色条带出现。一条 位于测试区（T）内，另一条位于质 控区（C）。表明已怀孕 阴性：仅质控区（C）出现一条紫红 色条带，在测试区（T）内无紫红色 条带出现。表明未怀孕。
实验结果
弱阳性：5min内测试区（T）出现的 红色条带颜色浅于质控区的条带。表 示可疑，2天后重新检查，以免漏检 无效：测试区，质控区均无红色条带 标明试验失败或者试条失效。
实验七、胶体金、免疫荧光
实验内容
录像
一步金法早早孕妊娠诊断
一步金法早早孕妊娠诊断
实验原理 实验方法 实验结果与讨论 思考题
胶体金免疫层析
实验所用试剂全为干试剂，多个 试剂被结合在一个约6mm*70mm的 塑料板条上，试纸条两端附有吸 水材料，成为单一试条，实验过 程短，是“床边检验”的主要方 法之一。