流式细胞仪的应用ppt

6 在器官移植中的作用
FCM通过检测受者血清中抗供者的抗HLA的抗体，根据 抗体的种型、效价、靶抗原和器官移植的类型不同， 抗体介导的排斥反应也有所不同，FCM比传统方法更 灵敏、操作时间更短并可同时检测细胞亚型、分辨出 IgG和IgM抗体。巨细胞病毒（CMV）能在白细胞内繁 殖并合成CMV特异性蛋白，通过FCM检测CMV特异性抗 原及其抗原分泌量，这种技术用于CMV感染检测时感 染后4h便可检出T淋巴母细胞中CMV-DNA，从而可快速、 准确地反映CMV在移植受者中的早期感染状况，对预 防和减少感染具有重要意义 ［8］ 。以FCM监测肾移 植受体CD8 + 、CD38 + 、T细胞亚群的变化也可监测 CMV感染 ［9］ 。
T淋巴细胞检测
CD8+Ts淋巴细胞检测
B淋巴细胞检测
NK细胞检测
3 白细胞分类分析
利用FCM的体积测定和细胞结构测定来检测 每个白细胞的光散色强度，它与细胞体积、 细胞膜结构、细胞核形状、细胞质性状等 多种因素有关，经过分析可得到中性粒细 胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞 的检测结果。这种方法应用于血细胞计数 速度快、结果准确，大大提高了临床实验 室的工作效率 ［5］ 。
9 在肿瘤诊断中的作用
通过DNA含量分析的细胞周期分布，可反映 肿瘤细胞的增殖状态，对治疗及预后有十 分重要的意义。近年来，流式细胞测量法 DNA分析越来越多地应用于实体瘤患者。 DNA非整倍体的出现率和癌变与不典型增生 程度密切相关。DNA非整倍体可能是癌前病 变发生早期癌变的一个早期指标 ［12］ 。
8 在白血病诊断中的作用
白血病是白细胞在分化到某个阶段受阻后 异常增殖的结果，利用白细胞分化不同阶 段出现的细胞表面标志可以对白血病进行 免疫分型。过去对造血细胞和免疫细胞分 类主要是依据细胞形态学和细胞免疫化学 染色来进行的，现在将多种检测手段相结 合，可为临床诊断、治疗监测和预后提供 更多、更有力的依据。通过FCM检测各种急 性白血病细胞表面抗原的表达，对临床诊 断尤为重要 ［11］ 。
信号检测--荧光信号
流式细胞术的操作流程
流式细胞仪检测范围
1 对细胞抗原的检测
各种血细胞都有相应的抗原表达方式，并且不同成熟阶 段表达的抗原种类也不完全相同。通过免疫荧光标记技 术将细胞表面抗原同标记有特异染料的一种以上单克隆 抗体结合后，在流式细胞仪同一激光光源激发下产生几 种特异荧光色，由荧光检测器对每个细胞的体积、结构、 荧光种类及性质等多种参数同时测定，分析得到细胞群 体的多种表面抗原的表达情况。FCM也可用于特异性细 胞质内或细胞核上抗原的检测，并协同其他实验指标预 示疾病的预后［2］ 。FCM也为网织红细胞计数提供了 快速、准确的测试手段，可通过某些染料与网红中RNA 结合，在FCM测量时发出特定颜色的荧光，进行单参数 定量RNA。
5 病毒抗体检测
利用吸附有病毒抗原的聚苯乙烯微球作为 载体的病毒抗体FCM分析技术已广泛应用。 结合流式细胞仪与微球杂交法可同步检测 同一反应管中HIV、HCV、HBV的数目和种类， 其基本原理为将检测不同病原体的探针分 别包被微球，流式细胞仪分辨特异性结合 后发出的不同强度的荧光。当用FCM技术检 测HCV核心抗原、NS 3 抗原抗体时，其灵 敏度比酶标免疫技术高5倍左右 ［7］
2 对淋巴细胞及其亚群的分析
FCM进行淋巴细胞及其亚群的分析，分类更 客观、准确。使用流式细胞仪的绝对计数 系统，即加入已知数量的荧光微球，通过 仪器测定时收获的细胞数量和微球数量及 血液标本用量，直接得到每微升全血中T淋 巴细胞亚群的绝对计数（个/μl）［3］ 。 用FCM检测PBMC中p24、p24nef、p18等HIV 抗原阳性的CD4 + 细胞数可监测体内HIV复 制情况，结果表明HIV抗原阳性细胞与CD4 + 细胞数量负相关 ［4］ 。
流式细胞术的应用
流式细胞术（Flow cytometry，FCM）是一种近年发 展起来的比较先进的技术，它利用流式细胞仪对特定 细胞群体进行分选或对生物微粒进行多参数快速定量 分析［1］ 。FCM集激光技术、电子物理技术、光电 测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单 克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。 FACSCalibur性能卓越，不仅通过其用户友好的整体 设计帮助临床医生快速实现常规免疫表型，CD4T细胞 计数、DNA、网织红细胞、血小板等临床分析，其更 以其完美的三色分析功能成为遗传、肿瘤、血液、免 疫功能等诸多研究不可或缺的重要工具。
10 在微型生物学研究中的应用
从现有的微型生物核糖体RNA序列出发，设计分类专 用的核酸探针，它们能与核糖体RNA分子一些区域互 补，而这些RNA分子对于目标分类群是唯一的，通过 荧光标记寡核苷酸链探针与细胞内同源RNA序列结合， 目标种可被测出，它们的系统发育被确定。在这一研 究中，通过原位杂交，用FCM确定杂交信号，可定量 杂交信号强度，而细胞和特异探针杂交的平均荧光强 度与细胞和非特异探针杂交平均荧光强度的比率，能 计算和估测探针特异性和灵敏性。由此确定微型生物 DNA含量与倍体水平 ［13］
7 检测血小板自身抗体
FCM检测PAIgG与ELISA相比更简便省时，检 测中操作步骤少。由于血小板被抗体-荧光 素标记而显示阳性，所以不受其它种类细 胞或碎片的影响，重复性好，可检测成批 或单个标本，可直观地显示结合PAIgG量不 同的血小板群体，并可在同一份标本上同 时测定聚集和释放功能 ［10］ 。
4 病毒抗原的检测
FCM既可用于检测受染细胞内的病毒抗原，也可检测 受染细胞表面的病毒抗原。由于FCM检测的是单个细 胞，因此FCM检测受染细胞适用于血液、支气管灌洗 液、尿标本以及经酶消化过的组织细胞。同时由于 FCM为多参数分析，因此可在单个细胞中同时获得多 个分析参数并能定量检出受染细胞。当用不同荧光染 料标记不同的病毒抗原特异性抗体或将特异性病毒抗 体与不同大小的乳胶颗粒相联时，FCM可同时检测到 同一样本中的多种病毒或病毒抗原 ［6］ 。
流式细胞仪特点
开滦医院引进的BD公司FACSCalib来自r流式 细胞仪BD LSR
FACSAria
流式细胞仪的工作原理
信号检测--散色光
它反应细胞FSC（小角散 射)光它反应细胞的相对 大小和截面积的大小 SSC (90度角散射光)代表 细胞的颗粒度和精细结 构的变化 的物理特性,根据前侧向 散射光，可以把不同类 型的细胞群加以区分