白血病淋巴瘤免疫分型
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
CD13和/或CD33阳性 HLA-DR阳性 CD34阳性 CD11B，CD15等(+/-) >3%的幼稚细胞表达
MPO。
AML-M2（急性粒细胞白血病部分成熟型）
• 此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已 明显分化的细胞群体，至少已分化至早幼粒细胞或粒 细胞水平。
(immunology， I ) ( cytogenetics，C )
WHO分型(2001)
（MICM）
(morphology，M ) (immunology， I ) ( cytogenetics，C)
(molecular biology, M)
L1型
急淋
急
性
（ALL）
白
L2型 L3型
细 胞
M0: 微分化型髓系白血病；
标本来源
（1）外周血 （2）骨髓穿刺液， （3）骨髓活检标本 （4）淋巴组织穿刺
样本保存
要 求： •室温条件(16℃ -28℃ )存放； • 如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液 体（如 生理盐水或组织培养液）。
保存时间
1. 肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时； 2. EDTA抗凝标本，存放时限只有12 ～ 24小时，因为髓细胞
胞内染色 CD3\CD79a\MPO
可以确定白血病分CD7
B系：CD10、CD19、CD20 表面染色 髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33
非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR 泛白细胞标志：CD45
进一步 细分
其它 CD4、CD8、CD61、CD56、CD38 必要时可以加用
白血病免疫分型初筛方案
白血病免疫分型初筛方案白血病免疫分型初筛方案白血病是一种由于造血干细胞异常增殖引起的恶性血液病，其临床表现及预后差异较大。
对于白血病患者的治疗和预后判断，准确的分型至关重要。
近年来，随着免疫学研究的进展，白血病的免疫分型成为了一个重要且具有指导意义的方面。
本文将介绍白血病免疫分型的初筛方案，以及其对临床的意义和应用。
一、什么是白血病免疫分型？白血病免疫分型是通过检测白血病患者的免疫表型，即细胞上表达的抗原和细胞表面标记物，来确定白血病的类型和亚型。
目前，常见的白血病免疫分型方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫电镜等。
二、为什么需要白血病免疫分型？白血病患者的治疗和预后与其分型紧密相关。
不同类型的白血病具有不同的临床表现、生物学特点和预后，准确的分型对于指导个体化治疗非常重要。
免疫分型不仅可以帮助医生确定病情严重程度、制定个体化治疗方案，还可以对患者的预后做出评估。
对于一些疑难病例，免疫分型还有助于确定病理诊断和鉴别诊断，减少误诊和漏诊的发生。
三、白血病免疫分型的初筛方案目前，国际上广泛应用的白血病免疫分型初筛方案主要是基于流式细胞术。
这一方法具有快速、准确、多参数检测的特点，使得它成为了白血病免疫分型的首选工具。
白血病免疫分型的初筛方案通常包括以下几个方面的内容：1. 纵向免疫分型纵向免疫分型主要是通过检测白血病细胞表面的免疫表型，确定白血病的类型和亚型。
对于怀疑白血病的患者，医生通常会进行一系列免疫标记物的检测，如CD45、CD34、CD13、CD33、CD14、CD15等。
这些标记物可以帮助医生确定白血病患者的分型，指导后续的治疗和预后评估。
2. 横向免疫分型横向免疫分型则是通过比较不同类型的白血病细胞表面的免疫表型，辅助鉴别白血病的类型和亚型。
在横向免疫分型中，医生通常会检测同一类别不同亚型的白血病患者的共同抗原和独特抗原，以确定其具体的亚型。
3. 免疫细胞化学分析免疫细胞化学分析是一种通过检测白血病细胞内特定抗原的染色反应，来确定白血病的类型和亚型的方法。
白血病免疫分型
正常人血液白细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：单核细胞 R3：中性粒细胞 R4：嗜酸性粒细胞 R5：原始细胞
正常人骨髓有核细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：粒系细胞 R3：单核细胞 R4：原始细胞 R5：幼红细胞
白血病细胞的特性
白血病细胞的异常表现在： 抗原系列异常和时间异常
CD15
CD1a
CD64
2008年WHO细胞系别确定标准
髓系：MPO（流式细胞术、免疫组化或者细胞化 学） 或单核系分化（非特异性酯酶弥漫性阳性， 或者CD11c、CD14、CD36、CD64、溶酶体， 两个及以上阳性） T系：胞浆CD3（流式使用抗CD3ε链的抗体；免 疫组化使用的多克隆抗体会检测到非T细胞特异性 的CD3ζ链） 或胞膜CD3（MPAL中比较罕见） B系：CD19强表达加下述标志中至少一个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10 或CD19弱表达加下述标志中至少两个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10
髓片
POX染色
AML-M0
AML-M1
AML-M2
AML-M3
AML-M3v
AML-M4EO
AML-M4b
AML-M5b
AML-M6
AML-M7
AML免疫分型总结
192例AML病例中免疫分型结果示髓系抗原CD13、CD33、 MPO最常见，其次CD117也是髓系比较敏感的指标，在 原始细胞百分比高的AML亚型中有较高的阳性率。
白血病免疫分型---CD45-SSC设门
CD45是白细胞的共同抗原成分,所有人类白细胞均表达CD45，包括 淋巴细胞、单核细胞、多形核细胞、嗜酸、嗜碱性细胞、胸腺细胞、 脾细胞、扁桃腺细胞以及骨髓前体细胞。 造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高低紧密相关，即分化 程 度 高 的 细 胞 CD45 表 达 量 高 ， 分 化 程 度 低 的 细 胞 CD45 表 达 量 低 （淋 巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞，在红细胞中不表 达。 SSC是侧向角参数，反应细胞的颗粒度（成熟粒细胞>单核细胞>原 幼 细 胞 > 淋 巴 细 胞 ） 。 目 前 ， 国 际 上 采 用 CD45—SSC 设 门 （Gating），可将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分 型的准确性。
免疫分型
2．特点 (1)近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和 航空都获得了一定程度的发展。 (2)近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。 (3)地域之间的发展不平衡。 3．影响 (1)积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式， 一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的 联系，丰富了人们的生活。 (2)消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。
[串点成面·握全局]
一、近代交通业发展的原因、特点及影响 1．原因 (1)先进的中国人为救国救民，积极兴办近代交通业，促 进中国社会发展。 (2)列强侵华的需要。为扩大在华利益，加强控制、镇压 中国人民的反抗，控制和操纵中国交通建设。 (3)工业革命的成果传入中国，为近代交通业的发展提供 了物质条件。
急性白血病是由于白血病细胞生成紊 乱而导致，白血病细胞在癌变过程中， 丧失了正常细胞的系列专一性和分化 阶段规律性，在本质上有别于正常骨 髓细胞。
故白血病细胞往往停滞在细胞分化的某一抗原表 达阶段
应用此特点可进行免疫表型分析，以鉴别各种白血 病和淋巴瘤，辅助临床诊断、评估疗效和预后。
免疫分型的作用
细胞系列抗原的表达 ---B细胞系抗原
B细胞根据发育阶段可分为： B祖细胞 TdT、CD34、HLA-DR
前B细胞（可再分为前前B、前B）TdT、CD34、CD10、CD19、CD24
未成熟B细胞 CD19、CD24、CD20、CyCD22
成熟B细胞 CD19、CD24、CD20、CyCD22
二、水运与航空
1．水运 (1)1872年,
轮船正招式成商立局，标志着中国新式航运业的诞生。
(2)1900年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是
在列强排挤中艰难求生。
我国急性白血病免疫分型的四色方案
中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性白血病的重要依据之一。
因准确的诊断需要选择一定数量的抗体，涉及多个造血系列的抗原。
但目前国内甚至国际上没有规范化的方案可以借鉴。
而国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案，供参考。
本方案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性白血病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞白血病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进行鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),皮质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞白血病（APL）1.3急性髓细胞白血病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红白血病（AML-M6）z急性巨核细胞白血病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥大细胞白血病1.6 混合表型白血病1.7 对上诉急性白血病治疗后检测MRD的标志进行筛查2.抗体的选择：根据检测的目的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性白血病:对于急性髓细胞白血病，可以根据CD45/SSC图型进行初步判断。
髓系白血病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下方，且多数白血病细胞SSC较低（除去大颗粒APL患者）。
再根据CD34、CD117、CD38、HLA-DR、CD123的表达进行判断。
急性淋巴细胞白血病分型
急性淋巴细胞白血病分型
*导读：前体B--ALL：细胞形态学如L1或L2，免疫表型为B系：CD19、CD22、CD79a、CD10阳性，TdT^+。
占ALL中
80%~~85%。
……
急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是小儿时期最常见的类型，发病高峰年龄为3～4岁，男孩发病率略高于女孩，二者的比例约为1.1～1.6∶1。
【分型】
⒈按细胞大小(FAB、我国标准)
①L1 原幼淋细胞以小细胞为主，大细胞﹤0.25(25%)。
②L2 原幼淋细胞以大细胞为主0.25(25%)。
③L3 大细胞为主，胞质较多、深蓝色，多空泡呈蜂窝状，称BurKitt 型。
⒉按细胞表型(WHO标准)
①前体B--ALL：细胞形态学如 L1 或 L2，免疫表型为B系：CD19、CD22、CD79a、CD10 阳性，TdT^+。
占 ALL 中80%~~85%。
②前体T-ALL：细胞形态学如 L1 或 L2 ，免疫表型为T系：CD3、CD7、CD4、CD8阳性，TDT 亦可阳性，占 ALL 中 15%~~20% WHO将 L3 (BurKitt 型)归入成熟 B 细胞肿瘤中。
免疫分型
2.判断预后 有利于确认与表型有关的特定细胞遗传学异 常来预测肿瘤的生物学行为，有利于发现表型异 常来检测微小残留病。如白血病原始细胞表达多 药耐药基因MDR-1（一种跨膜转运泵，使化学药 物不能进入白血病细胞内），老年AML细胞 MDR-1阳性患者伴预后不良细胞遗传学表现的发 生率比阴性者高，而MDR-1阴性者治疗完全缓解 率高。
白血病免疫分型及应用
昆明市第一人民医院检验科 沈骅
白血病免疫分型理论基础
造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、 细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的
分化发育阶段密切相关，表现出与细胞系列及其
分化程度相关的特性。
正常血细胞中的抗原表达特点
1. 系列保守性
2. 时序性 3. 抗原表达量的模式化
淋巴瘤临床诊疗现状
在全世界，85%以上的非霍奇金淋巴瘤是成熟B细胞 肿瘤，两种最常见的类型是大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴 瘤，占所有非霍奇金淋巴瘤的50%。成熟B细胞肿瘤相似 于正常成熟B细胞各个分化阶段的细胞，并有不同的典型 形态和免疫表型。 在过去20年里白血病和淋巴瘤最有意义的治疗进步 主要在前驱B和T-ALL/LBL，前驱B-ALL中有些类型的治 愈率达80%，而另一些类型的肿瘤缓解率仍很低，肿瘤 的细胞遗传谱、基因型和免疫表型有助于预后的分类，这 些不同的预后分类促使人们创建了更有效的治疗方案，并 提高了不良预后组的肿瘤缓解率。
白血病细胞中的抗原表达特点
表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具 有以下特点： 1. 跨系表达
2. 时相混乱 3. 抗原表达量的改变 白血病髓系细胞抗原标志物表达情况
(TDT CD7)
WHO造血与淋巴组织肿瘤分类分型及标准新
WHO造血与淋巴组织肿瘤分类分型及标准福建医科大学附属第二医院血液科郭熙哲1997年来自美、欧、亚等各大洲的国际血液病学家和肿瘤学家组成的临床医师委员会与病理学家共同讨论，提出了世界卫生组织（WHO）造血与淋巴组织肿瘤分类法，通过2年的临床试用后，于1999年及2000年对新分类进行了修订，做了进一步的解释和认定，形成WHO 2001分类，下面就WHO关于造血与淋巴组织肿瘤分类分型及标准作简单的介绍。
WHO将髓系恶性病分为4类：急性髓系白血病（AML），骨髓增生异常综合征（MDS）,慢性骨髓增殖性疾病（CMPD）,骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病（MD/MPD）。
一、急性白血病<一>急性髓细胞白血病分类WHO是根据形态学，免疫表型，遗传学和临床特点来综合分类,WHO与FAB分类的显著不同点:<1>诊断AML时FAB要求骨髓原始细胞数≥30%，而WHO则为原始细胞数≥20%；<2>伴有特殊染色体类型AML如t(15；17)；t（8；21）；inV(16)和t(16；16)等.诊断时除单独列出外，BM（骨髓）原始细胞可≤20%； <3>由MDS(骨髓增生异常综合征)或MPD（骨髓增殖性疾病）转化而来及治疗相关性的AML （treatment related AML）单独列出；<4>免疫表型需用单克隆抗体，常用的特异单抗有:造血干/组细胞为CD34、HLA-DR；粒细胞为MPO、CD13、CD15、CD117、CD33；单核细胞为CD14等；<5>增加了AML新的病谱，分类具体如下：1. AML伴有重现细胞遗传学异常；此类AML不仅具有明确的形态学特点，而且其细胞遗传学的异常是预后比较好的标志，即CR率高，长期生存率及治愈倾向较大。
1.1 AML有t（8；21）（q22；q22）[AML-（（CBFα）/ETO）]：其细胞形态学的特点相当于我国AML分类的M2b，本型年轻患者较多，常有粒细胞肉瘤，骨髓原始粒细胞≤20%,免疫表型为粒细胞抗原：CD13+，CP33+，MPO+，CD34+，偶有CD19和CD45呈阳性，占AML发生率的15%。
白血病免疫分型的诊断标准
9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。
急性白血病和慢性淋巴增殖性疾患免疫分型的修订指南
国外 医学输 血 及血液 学分 册 ２０ 中第 ２ ０ ２， ５卷 第 ４期
・
译
文 ・
急 性 白血 病 和 慢 性 淋 巴增 殖 性 疾 患 免 疫 分 型 的 修 订 指 南
英 国血 液 学标 准 制 订 委 员会 （ Ｃ Ｈ） 般 血 液 学 专题 组 Ｂ Ｓ 一
作组 的 观点 并 得 到 Ｂ Ｈ 的批 准 。 Ｓ １ 标 本 采 集 和 保 存 条 件
２． 对 照 ２
如 果 仅 偶 尔检 测 少 量 标 本 ， 检 测 不 常 检 或
测 的 特 殊 抗 原 时 ， 一 个 Ｍｃ 每 Ａｂ都 需 设 阳 性 和 阴 性 对
照， 以监 测 免 疫 染 色 和 红 细胞 溶 解 操 作 的 可 靠 性 。在 采 用新 的 Ｍｃ Ａｂ和 ／ 新 批 次试 剂 时 及 校 准 或 维 修 机 器 后 或
胸 水 、 水 或 脑 脊 液 等 标 本 则 不 需 要 抗 凝 。送 中 心实 验 腹
室 的 样 本 ， 鲜 血 或 骨 髓 涂 片 应 采 集 当时 制 备 。 新 如 果标 本 不 在 当 地 实 验 室 检 测 而 要 送 交 中心 实 验
（ Ｌ Ｄ） 免 疫 分 型 指 南 。 过 去 的 ５年 里 ， 领 域 的 技 Ｃ Ｐ 的 该
格 系 别 特 异 性 的 ， 如 Ｃ ７是 一 个 Ｔ 细 胞 标 志 ， 部 分 比 Ｄ 但 急 性 髓 系 白血 病 （ ＡＭ Ｌ） 例 也 可 表 达 。 病
本 指 南 由 Ｂ Ｓ 选 聘 的该 领 域 五 位 专 家 组 成 的 工 Ｃ Ｈ 作 小 组 撰写 。 此 外 ， 稿 曾 经在 八 个 免 疫 分 型 领 域 前 沿 草 的英 国实 验 室 进 行 了 审 评 。 他 们 的 意 见 经 讨 论 认 为 可 取 的 收入 草 稿 。终 稿 得 到 Ｂ Ｓ 所 有 成 员 和 英 国 血 液 Ｃ Ｈ 学 会 （ Ｓ 委 员 会 的 认 同 。 本 指 南 代 表 Ｂ Ｈ 专 题 工 Ｂ Ｈ） ＣＳ
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
门位置处出现
白血病流式免疫分型举例
T-ALL
在CD45/SSC点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟 淋巴细胞比较CD45弱表达
Ta ng ca i xi a.00 1
R3
R4
R5 100
R1 R2
101
102
103
CD4 5 PerCP-Cy5.5
104
CD5、CD7、 cCD3、 CD34阳性
• 幼稚细胞群体的FSC和SSC信号与M0相似，Blasts >90%。
免疫分型 基础介绍
近年来白血病得免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少得重要标准之一、早年曾用过得荧光显微镜或APAAＰ方法基本被废弃。
国际上公认得通用得方法就是流式细胞术(FCM)。
流式细胞术白血病免疫分型就是利用荧光素标记得单克隆抗体(McAb)作分子探针,多参数分析白血病细胞得细胞膜与细胞浆或细胞核得免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
ﻫ1、流式细胞仪诊断白血病得依据⑴FＣM能快速,多参数,客观得定性又定量测定细胞膜、浆、核得抗原表达ﻫ⑵至今尚未发现白血病得特异抗原。
ﻫ⑶能用正常血细胞得单抗来进行免疫分型就是基于白血病形成得分化阻断学说。
即白血病细胞基因异常,分化受阻于某阶段形成不同亚型得白血病、这群细胞充盈于骨髓。
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞得过程中,细胞膜、细胞浆或胞核抗原得出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞得分化发育阶段密切相关,而且表现出与细胞系列及其分化程度相关得特异性。
因此,这些抗原得表达与否可作为鉴别与分类血细胞得基础。
白血病就是造血系统得恶性肿瘤,在形态上变化虽相当大,但仍能表达正常血细胞所具有得抗原,因而仍可依据其抗原得表达谱对白血病进行免疫分型。
2、流式细胞仪诊断白血病得意义ﻫ⑴骨髓血细胞就是形态学分型得基础,FCＭ白血病免疫分型就是对形态学分型得重要补充与进一步深化,国际白血病MIＣ分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都就是必不可少得,对下列情况意义更大:①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源得白血病。
②形态学为急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
③混合性白血病。
④部分髓系白血病。
目前,免疫分型对粒细胞与单核细胞白血病得鉴别尚有一定困难。
⑤慢性淋巴细胞白血病。
⑥微小残留白血病、⑵临床预测;可根据抗原得表达情况预测病情得预后:如白血病患者有ＣD7+与CＤ3４+共表达,预后不好。
⑶疾病监测:可监测病程得发展,疗效,可进行微小残留白血病得检测。
白血病淋巴瘤免疫分型 (2)
Burkitt 淋巴瘤和滤泡淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
44
评估慢性淋巴增殖性疾病(CLD)的抗体
First: CD5、CD19、kappa、lamda
CD3、CD20、CD23、CD10、CD45
B-cell：CD22、FMC7、CD11c、CD103、CD138 CD38、CD25、CD79b (约12-15Ab)
CD13/CD33；
结合临床情况，符合原始巨核细胞 的免疫表型。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
31
急性巨核细胞白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
32
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD7+ and/or CD2+
T-Lineage
2019年3月20日星期三6时4分52秒
9
FACS在血液病诊断中的应用
FACS在白血病MRD检测中的应用
2019年3月20日星期三6时4分52秒
10
2019年3月20日星期三6时4分52秒
11
2019年3月20日星期三6时4分52秒
12
2019年3月20日星期三6时4分52秒
13
2019年3月20日星期三6时4分52秒
血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
28
急性单核细胞白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中，可 以看出 R1 为成熟淋巴细胞， R3 为粒系， R4 为红系（ CD36+ 、 GLyA+ ） R5 为原始细胞 区域比例较低。而 R2 所占比例较大，通过 分析得出： 1、 CD45表达较强， SSC较大，为单核系的 特点。 2、 R2表达HLA-DR、CD4和CD14（部分表 达）、CD36、CD38、CD13/CD33； 3、不表达CD8，GLyA。 结合临床情况，符合急性单核细胞白血 病。 2019年3月20日星期三6时4分52秒
白血病免疫分型
白血病免疫分型白血病的免疫分型主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测，我们可以判断出白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型是诊断白血病的重要标准，对于白血病选择化疗药物以及估计预后是非常重要的。
白血病的免疫分型最早由欧洲提出来，它主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测从而判断出，白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型一般是对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测。
1、白血病的诊断需要骨髓穿刺、骨髓液免疫分型、染色体和基因检查以进一步诊断，骨髓细胞学诊断白血病的准确性仅为70%左右。
如果同时增加白血病的免疫分型，白血病的明确诊断准确率可以接近100%。
2、白血病免疫分型是指对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测，可以进一步区分急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病和慢性髓系白血病等类型。
同时还需要检查融合基因的染色体，以便对白血病诊断后的预后进行分层，并制定个性化的化疗方案。
建议平时多进行体育锻炼，增强自身免疫力。
急性白血病是造血干细胞的克隆性恶性疾病，发病时骨髓中异常的原始细胞大量增殖并浸润各种器官组织，正常造血受到抑制。
急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病，这两类还可分成多种亚型。
白血病的分型采用MIC分型，即形态学、免疫学和细胞遗传学结合的分型。
根据白血病细胞免疫学标志，不仅可将急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病进行区别，而且还可将T细胞和B细胞急性淋巴细胞白血病加以区别。
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Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
DNA
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Cytokines
+
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
+
DNA
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设门
9
08-编03辑3版07ppt
设门
全部 细胞
门内细胞
10
08-编03辑3版07ppt
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实验室数目(个)
ASCP(美国临床病理学家协会)流式临床应用调查
(cyt)CD22
TCRα/β
(cyt)IgM
TCRγ/δ
1
CD19
CD2
CD117
CD20
CD5
CD13
CD10
CD8
CD33
CD65
CD10
0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
CD15
CD1a CD64
*当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为急性混合细胞型白 血病。
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急性白血病的四大免疫类型
它们在细胞上的分布是不是很近? 它们是否在不同的细胞上表达不同? 他们表达强还是弱?
CD4 CD3
CD8
CD3
7
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抗原分布
表面,胞浆,核内
是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
140 120 100 80 60 40 20
0
CD4 Leuk Lymph CD34 DNA MDS
Ret B27 Mito NF Plat
流式临床应用
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血液肿瘤分类进程
13
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目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献
14
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白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的 抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化 发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细 胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原， 因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋 巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/ 淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗 原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正 常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/ 淋巴瘤细胞的存在。
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
淋巴细胞
M3、CML M4、M5
LGL CLL、ALL、CLD
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M0、M1、M2、 M4、M5、ALL
成熟红细胞、血小板 细胞碎片
M6、M7、MM Pre-B-ALL 非血液来源细胞
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B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
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单核细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
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非肿瘤T淋巴 细胞表型
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非肿瘤B淋巴 细胞表型
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非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
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非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
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T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
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粒细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
白血病/淋巴瘤免疫分型
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流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
单表型急性白血病 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 双表型/双克隆急性白血病 未分化型急性白血病
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初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
CD7+ and/orCD2+
CD19+
3
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CD45/SS示意图
4编辑版ppt来自实验对照的设计空白对照：ALL
阴性对照：常用同型抗体对照
单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校
正）
阳性对照：检测阴性时
5
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空白对照和阴性对照的比较：
6
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抗原表达
需要用多少的标志来确证感兴趣的细 胞群?
15
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细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40. 16 Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265编-辑28版0ppt
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
2
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散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
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白血病免疫分型
根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
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EGIL，1998年白血病积分系统
分值
B系
T系
髓系
2
CD79a
CD3
MPO