白血病淋巴瘤免疫分型
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单表型急性白血病 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 双表型/双克隆急性白血病 未分化型急性白血病
28
编辑版ppt
初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
CD7+ and/orCD2+
CD19+
(cyt)CD22
TCRα/β
(cyt)IgM
TCRγ/δ
1
CD19
CD2
CD117
CD20
CD5
CD13
CD10
CD8
CD33
CD65
CD10
0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
CD15
CD1a CD64
*当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为急性混合细胞型白 血病。
27
编辑版ppt
急性白血病的四大免疫类型
15
编辑版ppt
细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40. 16 Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265编-辑28版0ppt
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
白血病/淋巴瘤免疫分型
1
编辑版ppt
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
25
编辑版ppt
白血病免疫分型
根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
26
编辑版ppt
EGIL，1998年白血病积分系统
分值
B系
T系
髓系
2
CD79a
CD3
MPO
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
2
编辑版ppt
散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
3
编辑版ppt
CD45/SS示意图
4
编辑版ppt
实验对照的设计
空白对照：ALL
阴性对照：常用同型抗体对照
单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校
正）
阳性对照：检测阴性时
5
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空白对照和阴性对照的比较：
6
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抗原表达
需要用多少的标志来确证感兴趣的细 胞群?
淋巴细胞
M3、CML M4、M5
LGL CLL、ALL、CLD
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M0、M1、M2、 M4、M5、ALL
成熟红细胞、血小板 细胞碎片
M6、M7、MM Pre-B-ALL 非血液来源细胞
17
编辑版ppt
B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
140 120 100 80 60 40 20
0
CD4 Leuk Lymph CD34 DNA MDS
Ret B27 Mito NF Plat
流式临床应用
12
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百度文库
血液肿瘤分类进程
13
编辑版ppt
目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献
14
编辑版ppt
白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的 抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化 发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细 胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原， 因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋 巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/ 淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗 原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正 常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/ 淋巴瘤细胞的存在。
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
DNA
8
Cytokines
+
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
+
DNA
编辑版ppt
设门
9
08-编03辑3版07ppt
设门
全部 细胞
门内细胞
10
08-编03辑3版07ppt
11
编辑版ppt
实验室数目(个)
ASCP(美国临床病理学家协会)流式临床应用调查
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
20
编辑版ppt
单核细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
21
编辑版ppt
非肿瘤T淋巴 细胞表型
22
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非肿瘤B淋巴 细胞表型
23
编辑版ppt
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
24
编辑版ppt
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
它们在细胞上的分布是不是很近? 它们是否在不同的细胞上表达不同? 他们表达强还是弱?
CD4 CD3
CD8
CD3
7
编辑版ppt
抗原分布
表面,胞浆,核内
是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
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T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
19
编辑版ppt
粒细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
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初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
CD7+ and/orCD2+
CD19+
(cyt)CD22
TCRα/β
(cyt)IgM
TCRγ/δ
1
CD19
CD2
CD117
CD20
CD5
CD13
CD10
CD8
CD33
CD65
CD10
0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
CD15
CD1a CD64
*当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为急性混合细胞型白 血病。
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急性白血病的四大免疫类型
15
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细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40. 16 Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265编-辑28版0ppt
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
白血病/淋巴瘤免疫分型
1
编辑版ppt
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
25
编辑版ppt
白血病免疫分型
根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
26
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EGIL，1998年白血病积分系统
分值
B系
T系
髓系
2
CD79a
CD3
MPO
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
2
编辑版ppt
散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
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CD45/SS示意图
4
编辑版ppt
实验对照的设计
空白对照：ALL
阴性对照：常用同型抗体对照
单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校
正）
阳性对照：检测阴性时
5
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空白对照和阴性对照的比较：
6
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抗原表达
需要用多少的标志来确证感兴趣的细 胞群?
淋巴细胞
M3、CML M4、M5
LGL CLL、ALL、CLD
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M0、M1、M2、 M4、M5、ALL
成熟红细胞、血小板 细胞碎片
M6、M7、MM Pre-B-ALL 非血液来源细胞
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编辑版ppt
B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
140 120 100 80 60 40 20
0
CD4 Leuk Lymph CD34 DNA MDS
Ret B27 Mito NF Plat
流式临床应用
12
编辑版ppt
百度文库
血液肿瘤分类进程
13
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目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献
14
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白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的 抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化 发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细 胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原， 因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋 巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/ 淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗 原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正 常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/ 淋巴瘤细胞的存在。
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
DNA
8
Cytokines
+
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
+
DNA
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设门
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08-编03辑3版07ppt
设门
全部 细胞
门内细胞
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08-编03辑3版07ppt
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实验室数目(个)
ASCP(美国临床病理学家协会)流式临床应用调查
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
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单核细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
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非肿瘤T淋巴 细胞表型
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非肿瘤B淋巴 细胞表型
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非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
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非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
它们在细胞上的分布是不是很近? 它们是否在不同的细胞上表达不同? 他们表达强还是弱?
CD4 CD3
CD8
CD3
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抗原分布
表面,胞浆,核内
是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
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T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
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粒细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine