紫外可见分光光度法(鉴别、检查、含量测定)

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紫外分光光度法和荧光分析法

可见光区（400~760nm）
1 Beer-Lambort 定律A=log T =Ecl *A为吸收度；
*T为透光率； *E为吸收系数（以 E *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。
1% 1cm
表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值）
适用条件：入射光为单色光溶液是稀溶液固体、液体和气体样品在同一波长下，各组分吸光度具有加和性
吸收光谱
10-4-10-7g/ml
选择性
高
一般
应用
硫色素荧光法测定维生素B1
维生素B1 在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，在紫（365nm）
照射下呈蓝色荧光（435nm）通过与对照品荧光强度比较。即可测得供试品含量（课本260页）
荧光分光光度法测定维生素E
采用同步荧光扫描法测定血清中维生素E，有效的消除溶剂拉曼光谱的干扰，提高灵敏度和准确性。（课本277页）
双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两
束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度成正比（例子：课本366页）
其他
卡尔曼滤波法
偏最小二乘法小波变换
三波长分光光度法
系数倍率法
……
原理与紫外-可见法异同点
应用
原理
荧光 — 分子吸收电磁波后，从其最低激发态重新发射紫外线或可见光的现象利用某些物质被一定波长的光照射后所产生的，能够反映该物质特性的荧光来进行定性定量的分析方法——荧光分析法。

维生素C制剂的鉴别、检查、含量测定

维生素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定2010级药学一班陶磊2010102135[摘要]维生素C (Vitamin C ，Ascorbic Acid)又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，能够治疗坏血病并且具有酸性。

在化学结构上和糖类十分相似，有4种光学异构体，其中以L-构型右旋体生物活性最强。

ChP2010收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂、泡腾颗粒剂、注射剂和复方制剂维生素C银翘片〔1〕。

本文通过查阅文献资料总结了维生素C 原料药及各种剂型的鉴别，杂质检查，含量测定，并结合实验室实际情况确定实验方法。

[关键词]维生素C；鉴别；杂质检查；含量测定1仪器及试剂1.1仪器754型紫外可见分光光度计；高效液相色谱仪；电炉；250 mL碘量瓶；分析天平；电子天平；碱式滴定管；移液管等。

1.2试剂0.1 mol/L HNO3、硝酸银试液（0.1 mol/L AgNO3）、0.05 mol/L H2SO4、0.1 mol/L HCl、二氯靛酚钠、稀硝酸、草酸、氢氧化钠试液、氯化钙试液、盐酸、淀粉指示液、碘滴定液、0.05%亚甲蓝乙醇液、醋酸盐缓冲液（pH=3.5）、碱性酒石酸铜、标准铁溶液、标准铜溶液、醋酸铵、醋酸钠、醋酸、磷酸二氢钾, 均为分析纯; 甲醇、乙腈, 为色谱纯; 蒸馏水,维生素C 对照品等。

部分试剂的配制如下：（1）淀粉指示剂：称取0.5 g可溶性淀粉，加水5 mL搅拌均匀，缓缓加入100 mL沸水中，边加边搅拌，煮沸2 min，放冷，取上清液，应新鲜配制。

（2）稀醋酸：量取冰醋酸6 mL，加水定容至100 mL。

（3）碱性酒石酸铜：称取硫酸铜结晶6.93 g,加水溶解定容至100 mL；称取酒石酸碱钠34.6 g,氢氧化钠10 g,加水溶解定容至100 mL；用时等量混合。

2 方法2.1 鉴别2.1.1与硝酸银反应: 除维生素C钙、维生素C钠、维生素注射液、维生素C银翘片，其余制剂均可用此方法。

实验报告-紫外-可见分光光度法测铁的含量-

一、实验目的：
了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；了解分光光度计的构造；掌握分光光度计的正确使用方法；学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。

二、实验原理
邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。

在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其反应式如下：
Fe3+能与领二氮菲生成淡蓝色配合物（不稳定），故显色前加入还原剂：盐酸羟胺使其还原为Fe2+。

三、仪器及试剂
紫外可见分光光度计、铁标准溶液：含铁0.01mg/mL、0.1%邻菲罗啉水溶液、10%盐酸羟胺水溶液、1mol/lNaAc缓冲溶液（pH4.6）。

四、实验步骤
1．吸收曲线的绘制和测量波长的选择
吸取0.0mL和6.0mL 铁标准溶液分别注入两个50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔0.5nm测吸光度。

然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。

2、标准曲线的绘制
分别吸取铁的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在其最大吸收波长下，用1cm比色皿，以试剂溶液为空白，测定各溶液的吸光度，以铁含量(mg/50ml)为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

五、实验记录及数据处理
（1）绘制曲线图。

（2）。

紫外―可见分光光度计在药品检测中的应用[权威资料]

紫外―可见分光光度计在药品检测中的应用药品分析是保证药品安全有效的重要手段，在药品的研究、生产、流通、使用和监督管理等环节中均有举足轻重的作用，其主要内容包括性状分析、鉴别、检查和含量测定等方面。

高效液相色谱仪、气相色谱仪、紫外分光光度计等是制药生产中常用的检测仪器。

其中，紫外分光光度计由于准确度高、测定限度低、设备简便、仪器成本低、易于操作等优点，已成为制药生产中必备的检测设备之一，用于药物鉴别、检查和含量测定等。

紫外-可见分光光度法是通过测定物质在紫外-可见光区（200-760nm）产生紫外-可见吸收光谱，根据吸收光谱的特性，对该物质进行定性和定量分析的方法。

其理论基础为朗伯-比耳定律，溶液的吸光度和吸光物质含量、液层厚度乘积成正比。

对于一般的紫外分光光度法，其测量的相对误差在1%～3%。

随着大量心得显色剂的合成及应用，尤其是有关多元络合物和各种表面活性剂的应用研究，推进了元素测定的灵敏度的大幅提高。

采用预富集和示差法，适用质量分数从常量（1%～50%）到痕量（10-10～10-8）。

紫外-可见分光光度法由紫外分光光度法和可见分光光度法两种方法构成，这两种方法在测定的原理、仪器、操作等方面皆相同。

因此，统称为紫外-可见分光光度法，测定仪器一般采用紫外-可见分光光度仪。

在各国药典中，药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等很多项目中，都能见到紫外分光光度法的应用实例。

在制药生产中，紫外分光光度法应用最多的是药物含量的测定、药物杂质检测、药物稳定性考察、释放度、药物负载行为测定及物质结构鉴定等方面。

目前利用紫外分光光度计分析的药物品种有维生素、抗生素、解热药、去痛药、降血压药、安定药、镇咳药、滴眼药、磺胺类药、利尿药、某些妇科药、痢疾药、腹泻药、抗肿瘤药、抗结核药等。

1 紫外分光光度法应用于药物含量测定紫外-可见分光光度法由于灵敏度较高，不仅可用于常量组分的含量测定，也可用于测定微量组分、超微量组分以及多组分混合物同时测定等，在药物分析中主要用于原料药含量测定、制剂含量测定、含量均匀度和溶出度的检查等。

分光光度法在药品中应用全篇

比耳-郎伯定律适用范围：
1.溶液的浓度不能过高或过低，使测定结果的相对误差最小的最佳透射率为T=37%左右。
2.所用溶剂不得与测定物质有分子间缔合，生成复合物、异构化或出现酸碱平衡。
content
1
概述
2 分光光度法的基本原理
3 紫外分光光度计的使用
紫外－可见分光光度法
4
在药检中应用
二.分光光度法的基本原理
• 在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高，一般每1ml溶液中含有几微克（g）的物质即可测定，误差约为1-2%，在此区域内，物质对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁所致，同时伴有分子的振动和转动能级的变化，电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不如红外光区，故紫外-可见光区主要用于定量分析以及作为物理常数的测定。
小结：
紫外-可见分光光度法具有灵敏度和精密度高，操作简便、快捷等优点。已成为药品检验的一种不可替代手段。目前各国药典及药物标准中含量测定采用的方法以分光光度法最多。在医院制剂的质量控制中紫外-可见分光光度法也得到普遍的应用。
4
在药检中应用
四.紫外-可见分光光度法在药品检验中的应用
药典和药品标准中应用紫外-可见分光光度法的项目有吸收系数、鉴别、颜色检查、纯度检查、溶出度、含量均匀度检查和含量测定等等。
1.吸收系数：
药品的吸收系数是药品的理化特性常数，可作为药品生产过程中精制纯化的一种指标。对紫外区一定波长的光有特征吸收的药物进行精制时，应进行到产品在其特定波长测定吸收系数达到一个稳定的最大值时为止，因此吸收系数同其它物理常数一样，也可作为判断药品纯度的依据。
（nm）
（最小）
（最大）
313 （最小）

紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例.

(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
A 1 V D
含量%
E 1% 1cm
100
100 %
m
0.582 1 250 100
715 100
5 100% 99.05%
0.0411
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为 0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲氧苄啶标示量百分含量。
Байду номын сангаас
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
标示量%

cR

Ax AR

D
每支容量
100%
S
0.05134 0.420 25 100 2 25100 0.416 1 1 100% 103.7%
0.1
药物分析/药物的含量测定
紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例
制作人：谭韬
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含量

邻菲罗啉紫外可见分光光度法测定铁含量（详细）

邻菲罗啉紫外可见分光光度法测定铁含量一、仪器1．紫外可见分光光度计(UV-1800PC-DS)；配1cm石英比色皿2个（比色皿可以自带）；2．容量瓶：100mL1个；50mL11个；3．吸量管：5mL2支；10mL3支；二、试剂1．标准储备溶液：200μg·mL-1铁标准储备溶液。

2．未知液：未知浓度的铁标准溶液。

20μg·mL-13．其他：100g·L-1盐酸羟胺溶液、1g·L-1邻菲罗啉溶液、pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

三、实验操作1．吸收池配套性检查玻璃吸收池在600nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值。

2．标准使用溶液的制备用10mL吸量管移取200 ug/mL 铁的标准储备溶液10.00 mL 于100 mL 容量瓶中，配制成20 ug/mL浓度的标准使用溶液。

3．绘制吸收曲线选择测量波长⑴用10mL吸量管移取20 ug/mL 铁的标准溶液5.00 mL 于50 mL 容量瓶中，⑵用5mL吸量管依次加入然后加入5mL100g·L-1盐酸羟胺溶液，摇匀。

放置2min后，⑶用5mL吸量管加入5mL1g·L-1邻菲罗啉溶液，⑷用10mL吸量管加入10mLpH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，⑸用蒸馏水稀释至刻度线摇匀。

⑹用1cm吸收池，以试剂空白为参比，在400~600nm间扫描其吸收曲线，并根据吸收曲线的吸光度确定最大吸收波长。

4．标准工作曲线的绘制⑴取50 mL容量瓶6只，分别移取（务必准确移取）20 ug/mL铁标准溶液2.0 mL，4.0 mL，6. 0mL ，8.0 mL ，10.0 mL于5只容量瓶中，不加铁标准溶液醅空白液作参比，⑵各加5ml盐酸羟胺溶液，摇匀经二分钟后，再各加10ml NaAc溶液及5ml 邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度线,充分摇匀,待测定。

紫外可见分光光度计测定食品中苯甲酸钠的含量

紫外可见分光光度计测定⾷品中苯甲酸钠的含量紫外可见分光光度计法测定⾷品中苯甲酸钠的含量⼀、实验⽬的1.进⼀步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV2550的操作。

2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。

3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。

⼆、实验原理为了防⽌⾷品在储存、运输过程中发⽣腐蚀、变质，常在⾷品中添加少量防腐剂。

防腐剂使⽤的品种和⽤量在⾷品卫⽣标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是⾷品卫⽣标准允许使⽤的主要防腐剂之⼀，其使⽤量⼀般在0.1%左右。

苯甲酸具有芳⾹结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。

根据苯甲酸（钠）在225nm处有最⼤吸收，测得其吸光度即可⽤标准曲线法求出样品中苯甲酸的含量。

三、仪器和试剂1.紫外可见分光光度计UV2550（⽇本岛津），1.0cm⽯英⽐⾊⽫，50ml容量瓶。

2.NaOH溶液（0.1mol/L）3.苯甲酸钠标准溶液的配制(1)苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过⼲燥的苯甲酸钠1.000g（105℃⼲燥处理2h）于1000mL容量瓶中，⽤适量的蒸馏⽔溶解后定容。

该贮备液可置于冰箱保存⼀段时间。

(2)苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加⼊蒸馏⽔稀释定容。

(3)系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于6个50mL容量瓶中，各加⼊0.1mol/LNaOH溶液1.00mL后，⽤蒸馏⽔稀释定容。

得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。

4.市售饮料的配制准确移取市售饮料0.5ml于50mL容量瓶中，⽤超声脱⽓5min驱赶⼆氧化碳后，加⼊0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，⽤蒸馏⽔稀释定容。

紫外可见分光光度法测定维生素B12含量

紫外可见分光光度法测定维生素B12含量作者:作者：靳月琴郭丽敏宋建荣杨金香刘海林陈文斌作者单位：长治医学院化学综合实验室(046000)【摘要】目的：探讨维生素B12片剂中维生素B12的含量测定方法。

方法：紫外可见分光光度法。

样品以标准曲线法为测定含量依据，在361 nm的波长处测定吸光度。

结果：维生素B12在5 μg/mL～100 μg/mL浓度范围线性关系良好。

回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。

结论：测定的5个不同批号样品其含量均在标示范围之内,该方法简便、准确、灵敏度高。

【关键词】紫外可见分光光度法；维生素B12片剂；含量测定The Content Measurement of V-B12 by UV-VisJin Yueqin,Guo Limin，Shong Jianrong,et al.Department of Chemistry Complex Laboratory of Changzhi Medical CollegeAbstract Objective：The measurement method of V-B12 content in tablet is established.Methods：UV-Vis The absorption is measured at 361 nm according to calibration carve method.Results：The linear range is in 5 μg/mL～100 μg/mL and the regression equation is Y=0.0193X+0.048,r=0.9937.Conclusion：The measurement is done in 5 kind of lot number and the result indicate that the V-B12 content in tablet corresponds with standard range. This method is simple, accurate and high sensitivity.Key words UV-Vis；V-B12 tablet；Content measurement维生素B12是含钴的有机药物，为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺，是唯一含有主要矿物质的维生素。

紫外分光光度法检测规程

紫外分光光度法检测规程目的：5. 程序：5.1. 定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。

5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。

5.2. 原理：物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。

有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。

通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。

紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。

朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1=ECL T式中：A 为吸收度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％１ｃｍ表示。

若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。

5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

5.3.2.为了满足紫外—可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

紫外-可见分光光度法标准操作程序

紫外-可见分光光度法标准操作程序1 简述紫外-分光光度法是通过被测物质在特定波长处或一定波长长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

本法的在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰化合物无吸收，则可用本法作检查。

物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的。

因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。

有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200-400nm)或可见光区(400-850nm)产生吸收。

通常使用紫外分光光度计的工作波长范围为190-900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。

紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。

朗伯－比尔（Lambert-beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：Ａ=log1/T=ECL式中Ａ为吸光度；Ｔ为透光率；Ｅ为吸收系数；Ｃ溶液浓度；Ｌ为光路长度。

如溶液的浓度（Ｃ）为1%（g/ml），光路长度(L)为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E 表示。

如溶液的浓度(C)为摩尔浓度(mol/L)，液层厚度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。

2 仪器紫外-可见分光光度计：主要由光源、单色器，样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。

色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。

紫外可见分光光度法(鉴别、检查、含量测定)

紫外-可见分光光度法紫外分光光度：紫外光区特定波长内的吸收度，被测物质或杂质的定性和定量紫外-可见分光光度计的工作波长：190-900nm近紫外区（氘灯）200-400nm 可见光区（碘钨灯）400-850nm定量分析:①最大吸收波长处测出吸收度②对照品或百分吸收系数算出被测物或杂质的含量双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度误差±0.5nm一、样品测定：⑴吸收系数测定:①按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定的方法配制供试液②在规定的波长测定其吸收度③计算吸收系数，应符合规定范围⑵鉴别与检查：按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定测定供试品在有关波长处的最大或最小吸收，或最大吸收峰值或最大或最小吸收的比值，应符合规定⑶含量测定：①对照品比较法㈠按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定的方法分别配制对照品和供试品溶液注：对照品中所测成分的量应在供试品中所测成分标示量的(100±100)%以内㈡用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品和对照品的吸收度②吸收系数法㈠按食品药品监督管理局标准的该药品项下规定的方法配制供试品溶液㈡在规定波长（±1nm）处测定其吸收度㈢按食品药品监督管理局标准的该药品在规定的条件下给出的吸收系数计算含量具体过程对照品比较法①调节波长测吸光度（吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内）②A样品的吸光度:A对照品的吸光度= C样品:C对照品(C为浓度，mg/ml)C样品=A样品的吸光度×C对照品/A对照品的吸光度C样品×A对照品的吸光度= A样品的吸光度×C对照品P﹪（所含物质占标示量的百分比）= C供试品-稀释后的对照品×A对照品的吸光度/ A 样品的吸光度×C对照品×供试品的标示含量例1奥硝唑含量（紫外分光光度计）：⑴对照品①取0.0113g奥硝唑溶于100ml的容量瓶中稀释至100ml②从容量瓶中取出5ml③再用蒸馏水稀释至50 ml在319nm处测得对照品A（吸光度）=0.465⑵供试品①取5ml供试品于100lml的容量瓶中稀释至100ml②从容量瓶中取出5ml③用蒸馏水稀释至25ml319nm处供试品A1=0.413 供试品A2=0.417⑶①P﹪（所含物质占标示量的百分比）=0.413供试品的吸光度ⅹ(0.0113g/100ml)对照品浓度ⅹ(5/50) / 0.465对照品的吸光度ⅹ(5ml/100ml) ⅹ(1/25ml)ⅹ0.5g﹪ml标示含量供试品浓度ⅹ 100﹪=100.36﹪注：0.5﹪（供试品的标示含量）表示100ml 0.5g②P﹪= P1﹪+ P2﹪ /2。

紫外可见分光光度法在药品检验中的应用

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三.分光光度法的基本原理
•在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高，一般每1ml溶液中含有几微克（g）的物质即可测定，误差约为1-2%，在此区域内，物质对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁所致，同时伴有分子的振动和转动能级的变化，电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不如红外光区，故紫外-可见光区主要用于定量分析以及作为物理常数的测定。
6
A
B
C E
D
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•光子能量与其传播频率和波长的关系：
E=h=h*C/ 其中:E—光子跃迁能量 h—普郎克常数（6.62619610-34J） —频率,每秒发出波的数目(单位：HZ)
C—光速（2.9979251010 cm/s）
1/—波数
由上式可以看出：光子能量与频率成正比，与波长成反比
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（2）.吸收系数法：
应用范围：
•单一成分药剂的测定。
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测定要求
• 分别配制供试品溶液和对照品溶液
• 对照品溶液所含对照品的量应为供试品溶液中被测组分标示量的10%以内。
• 所用溶剂、其它试剂、操作方法和条件都应保持一致。
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• 计算公式：
Cs=Cr*As/Ar
Cs：供试品溶液的浓度
As：供试品溶液的吸光度
Cr：对照品溶液的浓度
Ar：对照品溶液的吸光度
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四.紫外-可见分光光度计
1.基本构造：
稳压电源记录装置
光源
波长选择装置
样品池
检测器
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•光源：可见光光源常用钨灯；紫外光光源常用氘灯 •波长选择装置：一般简易的仪器，如比色计多采用滤光片来获得一定波长的光辐射。分光光度计则采用棱镜或衍射光栅为核心构成单色器，以获得纯度较高的单色光。 •样品池（吸收池）：玻璃吸收池仅适用于320nm以上波长的测定。水晶或熔融石英吸收池可用于200nm以上波长的测定。最常用的是光路长度为1cm的吸收池。 •检测器：紫外-可见光度计中作为检测器的光敏元件有光电池、光电管、光电倍增管和光敏二级管阵列等。

偏差要求--2010年版中国药品检验标准操作规范

1、紫外-可见分光光度法(P58～59)：含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。

吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。

作鉴别或检查可取样品1份。

吸收系数测定法样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份结果，对平均值的偏差应不超过±0.3%，否则应重新测定。

2、原子吸收分光光度法(P70)：供试品要求制备2份样品溶液，各测定3次。

取平均值从标准曲线上求得相应的浓度。

测定的相对标准偏差（RSD）应不大于3%，石墨炉法可适当放宽。

样品测定离散性大时应多测几次，以增加读数的可靠性。

《明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则》铬测定：由于微量测定，结果的偏差会较大，一般两份样品的相对偏差≤10%，取平均值即可。

3、荧光分析法（P73）：2份供试品测定结果，每份结果对平均值的偏差应在±1.5%以内，否则应重做。

4、火焰光度法（P75）：定量分析采用第一法或第二法时，要求制备2份供试品溶液，各测定3次，测定的相对标准偏差（RSD）应不大于5%。

样品测定离散性大时应多测几次，以增加读数的可靠性。

5、高效液相色谱法(P81)：供试品溶液与对照品溶液每份至少进样2次，由全部注样平均值（n ≥4）求得平均值，相对标准偏差（RSD）一般应不大于1.5%。

（此规定为05版药品操作规程上描述，10版无此规定）6、气相色谱法(P102)：精密称取供试品和对照品各2份，按-----。

每份校正因子测定溶液（或对照品溶液）各进样2次，2份共4个校正因子相应值的平均标准偏差不得大于2.0%。

多份供试品测定时，每隔5批应再进对照品2次，供试品测定完毕，最后再进行对照品2次，核对下仪器有无改变。

7、毛细管电泳法（P111）：标准品（对照品）溶液每份至少进样2次，由全部进样结果（n＞4），求得平均值，相对标准偏差（RSD）一般应不大于3.0%。

紫外分光光度法检验标准操作规程

依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求目的：建立紫外分光度法检验标准操作规程范围：用于成品、原辅料鉴别、检查和含量测定1．仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

为了满足紫外可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区2．检定2.1波长准确定2.1.1波长准确度的允差范围：双光束光栅型紫外一可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5mm。

单元束棱镜型350mm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm±4.8nm2.2吸收度准确度：精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/l）为空白，在235、257、313、350nm分别测定吸收度，然后换算成E1%1cm，测得值应符合下表中规定的允差范围（±1%），国际药典规定的允差亦为±1%。

分光光度法允差范围波长（nm）吸收强度吸收系数（E1%/1cm）允差范围235最小124.5123.3－125.7257最大144.0142.6－145.4313最小48.6248.3－49.11350最大106.6105.5－107.7分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和国国家计量检定规程JJ6682～90(双光束紫外可见分光光度计检定规程)执行，并应符合有关项下的规定。

日常常规测定主要是对以上两项时常检查。

3．样品测定操作法3.1 吸收系数测定(性状项下)按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长(参见4.8项)测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定的范围。

3,2鉴别及检查：按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最小及最大吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。

紫外分光光度法检测规程

紫外分光光度法检测规程目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。

2.依据：《中华人民共和国药典》（2000年版二部）附录。

3.范围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。

4.职责：QC检验员对本标准的实施负责。

5.程序：5.1.定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

5.1.1.定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。

5.1.2.对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。

5.2.原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。

有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。

通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。

紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。

朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1A=lg=ECLT式中：A为吸收度T为透光率E为吸收系数C为溶液浓度L为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收１％系数，以E１表示。

若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应ｃｍ吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。

5.3.仪器：5.3.1.紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。