人体科学翻译作业

2011--2012学年第一学期生命科学学院

《人体科学》

学号: 200974050135 姓名: 王珊班级:制药工程班

成绩：

1.根据所学人体科学的相关内容,选择与自己所学专业相关的一

篇外文文献进行翻译。

2.根据作业制作PPT，并进行相应的讲解。

莲根茎提取物对大鼠海马齿状回神经发生

和记忆的影响

Nelumbo nucifera rhizome

摘要：增强记忆，是一个普遍关注的问题，特别是对患有认知功能障碍的人。在这项研究中，我们使用大鼠进行逐步被动回避实验，通过免疫组织化学方法探讨在海马齿状回细胞的增殖和分化，调查了莲根茎提取物对学习和记忆功能的影响。莲根茎（MNR）的甲醇提取物增加了齿状回细胞增殖和分化，导致记忆功能及齿状回神经发生显著改善。在被动回避试验中，MNR处理大鼠的保留时间，显著高于对照组。使用Brd U，Ki - 67，和DCX进行免疫组化分析发现，在齿状回细胞中细胞增殖和细胞分化显著增加.这些结果表明，莲根茎提取物可改善与提高海马齿状回（DG）神经元的学习和记忆能力。

关键词：莲根茎，学习，记忆;神经再生;齿状回

记忆是一个涉及编码，存储并回顾事实和事件的信息记录的过程[7]。海马齿状回（DG）神经元已被确认为与学习和记忆有关的一个结构[25]，海马齿状回细胞介导的学习和记忆有明显的新的齿状回神经元[16]。齿状回是中枢神经系统的神经元集中的少数地区之一。在海马齿状回颗粒下区的神经祖细胞继续增殖，迁移到颗粒层，并分化成颗粒细胞[16].。大约1-2周后，这些新细胞成为了涉及学习功能的功能细胞[20]。

古往今来，在传统医学治疗神经退行性疾病中，许多药材已被用来改善记忆和认知功能[6]。一些植物的药理作用也已被记录[17].然而，草药和在齿状回神经细胞增殖之间的关系都还是未知数。莲根茎是韩国传统医学的一个流行的药草，已被认为是营养，镇痛，利尿，和利胆的有效药，并且已用于治疗痔疮，消化不良，腹泻[11]。

此外，莲根茎甲醇提取物，已报道具有药理和微生物活性，包括止泻，精神药理，利尿，解热，抗菌，抗真菌作用[15]。然而，据我们所知，以前没有报告描述莲根茎有增强记忆的效果。在这项研究中，我们调查新发现这种在被动回避试验中的莲根茎甲醇提取物具有学习和记忆的功能效果，而且在大鼠海马齿状回中，有增殖和分化。

莲根茎甲醇提取物在韩国培养。莲根茎在100◦C用70％的甲醇煮2小时，然后过滤。过滤后的溶液蒸发和冻干。保持在4◦C，莲根茎甲醇提取物（MNR）的最后产率为27.2％（81.6克）粉末。样品（MNR001）已存入在我们的实验室。每次实验前，将干浸膏溶解于蒸馏水，去离子水，并在室温下振荡2分钟。

大白鼠（5周大雄性，日本）被安置在韩国首尔庆熙大学内一个无特定病原体，而且12/12

h光/暗周期循环的动物护理和使用中心实验室。每天喂养标准的食物颗粒（普瑞纳公司，韩国汉城）和水。喂养7天后，接下来的16天，每天给大鼠填喂剂量为1.0克/公斤的莲根茎甲醇提取物。对照组（N =10）仅填喂溶剂。每天记录白鼠体重和食物摄入量。照顾动物和实验程序符合“实验动物护理和使用指南”（卫生属，教育和福利，NIH出版物，＃80-23，1996年）。

喂养14天后，修改后的被动回避试验用于评估莲根茎甲醇提取物对学习和记忆的影响[1]。逐步通过包括照明和由一个可以通过小鼠的门隔开的暗腔的被动回避装置。测试参数如下，训练实验：第一天，将大鼠放置在门打开的光室中，探索黑暗室1分钟后，将大鼠转移回它的笼子。反复进行训练，直至大鼠在被转移到照明室不到20秒便进入黑暗室。将实验动物不能进入黑暗室的大鼠排除。采集试验：第二天，训练24小时后，将大鼠放置在光室，大鼠全身立即进入黑暗室，将门关闭，以1.5毫安电流电击5秒，保留试验：24小时后，大鼠再次被放置在光室，以评估记忆保留，和测量四个爪子进入暗舱前的潜伏时间。暗室内没有电流电击。如果老鼠没有在300秒内切断记忆周期进入暗室，就记录它的延迟时间为300秒。4-5小时候后进行填喂过莲根茎甲醇提取物的行为测试。

为了评估海马齿状回细胞的增殖效果，BrdU（Sigma公司）摄取评估后保留测试[17]。大鼠在准备取脑组织前的2，4，20小时注射BrdU（50毫克/千克，IP）。用Zoletil 50（25毫克/千克，IP;维克，法国）麻醉，灌注4％多聚甲醛0.1M磷酸盐缓冲液（pH 7.4）丧生。断头取脑，在相同的固定液中后固定过夜，然后用20％的蔗糖在0.05M PBS中浸泡3天，3天后用30％的蔗糖在0.05M PBS中脱水。用低温恒温切片机（CM3000;莱卡，德国）切在水平面上做成冠状切片（40微米）。对于免疫组化法检测的BrdU，取海马齿状回区（隔十取一）。对脑切片进行预处理，在65◦C，在50％甲酰胺2 ×SSC试液中浸泡2小时，在37◦C，在2N 盐酸中浸泡30分钟，在25◦C，用0.1M硼酸（pH值8.5）冲洗10分钟。然后，4◦C，部分抗BrdU抗体（罗氏孵育过夜诊断，曼海姆，德国），用磷酸盐缓冲液（PBS）（0.3％TRITON X - 100，0.5mg/ml的牛血清白蛋白和1.5％正常山羊血清）以1:1000稀释。接下来，加孵育马抗鼠二抗（1:100;矢量，蒲安臣，美国加利福尼亚州）90分钟，最后用抗生物素蛋白 - 生物素过氧化物酶复合物（1:100;矢量）在室温下孵育 1 h。部分在0.02％3,3 - 二氨基tetrahydrochloride，0.01％H2O2，和0.04％中，进行约3分钟可视化氯化镍反应。在室温下，主要抗体用免疫组化法检测Ki - 67和双肾上腺皮质激素（DCX），自由浮动的部分孵育过夜：兔抗- KI - 67抗体（1:2000稀释州北部生物技术，普莱西德湖纽约，纽约州，美国）或1:1000稀释（BD Pharmingen公司，洛杉矶，加利福尼亚，美国）山羊抗- DCX抗体。

然后，每个抗体孵育部分，以下与BrdU相同的程序。每个孵育阶段结束后，部分用PBS洗三次，每次5分钟。随后安装部分明胶涂层幻灯片，用甲酚紫复染，并在光学显微镜下观察。BrdU或DCX免疫阳性细胞总数由颗粒层计数BrdU或DCX标记核。Ki-67免疫反映性细胞的数量在门区和齿状回的颗粒层之间的内环被计数[14]。区域和内在外缘长度，使用立体声调查软件(Microbrightfield，Williston，VT，美国)测量。在任何测量中都能观察到，齿状回颗粒状细胞层数的容量没有发生变化。每个样品使用双盲的方式进行了计算和分析，使用非参数Mann-Whitney测试分析了被动回避试验的原始数据。免疫组织化学研究数据分析使用学生的t-检验。

图1。MNR在被动回避试验中16天后的延迟反应的结果。对照组（N = 10 ）仅受到酶介物影响和MNR 作用组（N = 10 ）与口服MNR （1.0克/公斤/天）比较。P <0.01。

Fig. 1. Effects of 16 days ofMNR treatment on response latency in the passive avoidance test. The control group (n = 10) received vehicle only and theMNRgroup (n=10) was administered with MNR orally (1.0 g/kg/day). **p < 0.01.

在被动回避试验中用MNR处理的大白鼠显示，与控制组(93.25±28.99 s; p < 0.01; 图1)相比，处理组的延迟反应(224.50±58.62 s)显著增加。免疫组化显示，MNR治疗诱导的神经发生在海马齿状回。为了进一步研究细胞的增殖，我们分析了BrdU和Ki - 67的水平。分析发现BrdU -和Ki - 67免疫反应细胞数量显着增加。MNR处理组(10.9±2.9/mm)中用BrdU标记的细胞数显着高于控制组(4.0±1.1/mm; p < 0.01; 图2)。Ki-67标记的细胞也显著高于控制组(8.1±1.6/mm对3.7±0.8/mm; p < 0.01)。DCX免疫反应的细胞数量，细胞