关于最低检测限与线性范围试验讨论

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最低检测限确定的方法

最低检测限确定的最佳方法关于LOD和LOQ术语的定义，最常用的是1975年国际纯粹与应用化学联合会（IUPAC）所下的定义，它对LOD的定义是“检出限以浓度(或质量)表示，指由特定的分析方法能够合理地检测出并与统计学分析的空白背景能区分开的最低浓度(或质量)”。

这个术语虽然很直白，但也过于简单。

它有几个问题未回答，比如，统计分析的差别是什么意思？这里所指的“空白”，在分析中考虑了那些因素？留下这些因素由分析者自己判断，将会导致不同分析者给出的数据差别很大，从而失去数据间的比较意义。

LOD可分为两个部分，仪器检测限（instrumental detection limit,IDL）和方法检测限（method detection limit,MDL）。

仪器检测限（instrumental detection limit,IDL），可定义为在仪器上能稳定检出的与背景相区别的最小分析数量。

仪器的定量限（instrumental quantification limit,IQL），它可定义为用某一分析方法在仪器上能可靠的定量检出的最小数量。

这两条术语（IDL和IQL）只是定义了仪器的限量。

当我们分析诸如动植物组织或土壤、地下水等真实样品时，为了确定检测限，样品基质的干扰必须考虑。

这是因为真实样品基质中含有成百上千种各类化合物，这些化合物可能会以不同的方式干扰对目标药物的检测和定量。

方法检测限（method detection limit,MDL），这条术语适用于分析基质中某种成分的提取和测定方法。

MDL可定义为一种分析方法能稳定地从含基质的样品中检测出与背景相区别的（用一种特殊方法）最小数量。

当确定MDL时，所有基质中的干扰都必须考虑进来。

与此相似，方法定量限（method quantification limit,MQL）可定义为一种分析方法以某种稳定的方式从含基质的样品中（用一特殊方法）能定量检出的最小数量。

线性范围及检测限

线性与范围（li nearity and ran ge）分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力。

换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果（或测得的响应信号）成线性关系。

所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mg/L ~ mg /L、ug/ml ~ ug/ml等表示。

线性与范围的确定可用作图法（响应值Y/浓度X）或计算回归方程（Y = a+bX）来研究建立。

测定样品时所有生物药物分析方法都必须同时作标准曲线。

每次作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。

标准浓度应包括一定梯度的5-8个浓度（非线性者如免疫分析可适当增加）,每个浓度只需测定一次（免疫分析可测定两次并取均值）;标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120%，下限为样品最低浓度的80% （但应高于LOQ）;目前仍广泛采用相关系数（r）表示标准曲线的线性度、并控制r > 0.990。

对照品的LOQ必须包括在线性范围。

线性范围是指与检测器响应信号成线性关系的样品的含量范围一般情况下，标准曲线的最低和最高值是包含在线性范围内的，而且不同人做的标准曲线，他所取的最低和最高值也不会都相同，打个比方来说,A做5个点的标准曲线，所选择的标准样品的浓度分别为：1,5,10,15,20,那么最低最高值分别为1和20,而对于这种要检测的物质来说它的线性范围可能是10E5,要远大于制作标准曲线所选择的浓度范围•通常在建立一个新方法的时候可以通过文献查到一些物质的线性范围，而实际工作中，要确切知道某种物质的线性范围必要性可能也不大。

S/N=3时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的3倍，注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。

S/N=10是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的10倍时，注入液相色谱仪的对照品量。

检出限、测定限、最佳测定范围、校准曲线及分析空白

检出限、测定限、最佳测定范围、校准曲线及分析空白一、检出限1检出限为某特定分析方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。

所谓“检出”是指定性检出，即判定样品中存有浓度高于空白的待测物质。

检出限除了与分析中所用试剂和水的空白有关外，还与仪器的稳定性及噪声水平有关。

在灵敏度计算中没有明确噪声的大小，因而操作者可以将检测器的输出信号，通过放大器放到足够大，从而使灵敏度相当高。

显然这是不妥的，必须考虑噪声这一参数，将产生两倍噪声信号时，单位体积载气或单位时间内进入检测器的组分量称为检出限。

则：D=2N/S式中：N——噪声（mV或A）；S——检测器灵敏度；D——检出限，其单位随S不同也有三种：Dg=2N/Sg，单位为mg/mlDv=2N/Sv，单位为ml/mlDt=2N/St，单位为g/s有时也用最小检测量（MDA）或最小检测浓度（MDC）作为检测限。

它们分别是产生两倍噪声信号时，进入检测器的物质量（g）或浓度（mg/ml）。

不少高灵敏度检测器，如FID、NPD、ECD等往往用检出限表示检测器的性能。

灵敏度和检出限是两个从不同角度表示检测器对测定物质敏感程度的指标，前者越高、后者越低，说明检测器性能越好。

从而可见，测量方法的检出限于分析空白值、精密度、灵敏度密切相关。

是分析方法的一个综合性的重要计量参数。

2检出限的计算方法1）在《全球环境监测系统水监测操作指南》中规定：给定置信水平为95%时，样品测定值与零浓度样品的测定值有显著性差异即为检出限（D.L）。

这里的零浓度样品是不含待测物质的样品。

D.L=4.6σ式中：σ—空白平行测定（批内）标准偏差（重复测定20次以上）。

2）国际纯粹和应用化学联合会（IUPAC）对分析方法的检出限D.L作如下规定。

在与分析实际样品完全相同的条件下，做不加入被测组分的重复测定（即空白试验），测定次数尽可能多（试验次数至少为20次）。

算出空白观测值的平均值Xb和标准偏差Sb。

低检测限与线性范围试验

影响因素
仪器噪音
仪器本身的噪音水平会影响检测限，因此需要选择低噪音仪器。
样品基质
样品基质中的其他组分可能会干扰待测物的测量，需进行基质匹配或消除干扰。
测量方法
选择合适的测量方法，如光谱法、色谱法等，以提高检测灵敏度。
环境因素
环境温度、湿度等环境因素可能影响仪器的性能和稳定性，需进行控制。
联用技术
尝试与其他分离、富集技术联用，进一步提高目标组分的检出限和准确性。
标准化与规范化
制定该方法的操作规程和标准，推动其在行业内得到更广泛的应用和认可。
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生态毒理学研究
低检测限与线性范围试验在生态毒理学研究中用于检测环境中的有毒物质对生物体的影响。这些研究有助于了解有毒物质对生态系统的影响，并为环境保护和可持续发展提供科学依据。
放射性核素测量
低检测限与线性范围试验在放射性核素测量中用于精确测量放射性物质的活度和浓度。这些测量有助于核能安全、核废料处理和核医学等领域的研究和管理。
药物分析
01
药物质量控制
低检测限与线性范围试验在药物分析中用于药物质量控制，确保药物的
有效性和安全性。这些试验用于检测药物中的杂质、降解产物和溶剂残
留等，以确保药物的质量和稳定性。
02
药代动力学研究
低检测限与线性范围试验在药代动力学研究中用于测量药物在体内的浓
度。这些研究有助于了解药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，
验证仪器性能
在确定的线性范围内，对仪器进行验证，确保其性能理
对试验数据进行处理，包括数据清洗、异常值剔除等。
线性关系评估
根据标准曲线的斜率和截距，评估仪器与标准品之间的线性关系。

标准曲线的线性范围

标准曲线的线性范围标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度与响应值之间呈线性关系的范围。

在实际分析中，线性范围的确定对于准确测定样品的浓度至关重要。

本文将详细介绍标准曲线的线性范围的概念、确定方法以及实际应用。

标准曲线的线性范围概念。

标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度与响应值之间呈线性关系的范围。

在该范围内，样品的浓度与检测方法的响应值成正比，可以通过线性方程进行描述。

一般来说，线性范围越宽，检测方法对样品浓度的测定范围也就越广。

确定方法。

确定标准曲线的线性范围的方法有多种，常用的方法包括逐点法、最小二乘法、相关系数法等。

逐点法是最直观的确定方法，即通过一系列标准溶液的浓度与检测方法的响应值进行绘图，观察曲线的线性范围。

最小二乘法则是通过最小化实测值与拟合值之间的误差平方和来确定线性范围。

相关系数法则是通过计算相关系数来确定线性范围，相关系数越接近于1，线性范围越宽。

实际应用。

在实际分析中，确定标准曲线的线性范围对于准确测定样品的浓度至关重要。

首先，确定线性范围可以帮助选择合适的标准溶液浓度范围，避免溶液浓度过高或过低而导致测定结果不准确。

其次，确定线性范围可以帮助评价检测方法的灵敏度和准确性，为方法的优化提供依据。

最后，确定线性范围可以帮助验证检测方法的可靠性，确保在一定浓度范围内测定结果准确可靠。

总结。

标准曲线的线性范围是确定检测方法对浓度与响应值呈线性关系的范围，其确定方法包括逐点法、最小二乘法、相关系数法等。

在实际分析中，确定线性范围对于准确测定样品的浓度至关重要，可以帮助选择合适的标准溶液浓度范围、评价检测方法的灵敏度和准确性，以及验证检测方法的可靠性。

因此，对于每种检测方法，都应该进行严格的线性范围确定，确保测定结果的准确可靠性。

试验测试线性范围的确认

化学分析方法确认线性范围a)采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点（包括空白），浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多；对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98；对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99。

b)校准用的校准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围内并能覆盖该范围。

在理想的情况下，不同浓度的校准溶液应独立配置，低浓度的校准点不宜通过稀释校准曲线中高浓度的校准点进行配置。

c)浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%～150%，如需做空白时，则应覆盖关注浓度的0%～150%。

d)应充分考虑可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。

实验室应提供文献或实验数据，说明目标分析物在溶剂中、样品中和基质成分中的稳定性，并在方法中予以明确。

通常各种分析物在保持条件的稳定性都已有很好的研究，监测保存条件应作为常规实验室确认系统的一部分。

对于缺少稳定性数据的目标分析物，应提供能分析其稳定性的测定方法和确认结果。

检出限a)仪器检出限（IDL）：为用仪器可靠的将目标分析物信号从背景（噪音）中识别出来时分析物的最低浓度或量，该值表示为仪器检出限（IDL）。

随着一起灵敏度的增加，仪器噪声也会降低，相应IDL也降低。

b)方法检出限（MDL）：为用特定方法可靠的将分析物测定信号从特定基质背景中识别或区分出来时分析物的最低浓度或量。

即MDL就是用该方法测定出大于相关不确定度的最低值。

确定MDL时，应考虑到所有基质的干扰。

注：方法的检出限（LOD）不宜与仪器最低相应值相混淆。

使用信噪比可用来考察仪器性能但不适用于评估方法的检出限（LOD）。

c)确定检出限的方法1)目视评估法评估LOD目视评估法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。

即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约7次的独立测试，通过绘制阳性（或阴性）结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阀值浓度。

标准曲线的线性范围

标准曲线的线性范围标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度的响应是线性的。

在实际分析中，我们经常需要确定某种物质的浓度，而标准曲线的线性范围则是评价分析方法准确性和灵敏度的重要指标之一。

因此，了解和掌握标准曲线的线性范围对于科研工作者和实验人员来说至关重要。

首先，标准曲线的线性范围的确定是基于实验数据的分析。

在实验过程中，我们通常会选择一系列不同浓度的标准品，进行多次测定，然后利用测定结果绘制标准曲线。

通过观察标准曲线的线性部分，我们可以确定方法的线性范围。

一般来说，线性范围是指在这个范围内，物质的浓度与检测信号呈线性关系，也就是说浓度增加时，检测信号也会相应增加，且增加的比例是一致的。

其次，标准曲线的线性范围的确定需要考虑实际样品的浓度范围。

在选择标准曲线的线性范围时，我们需要考虑到实际样品中物质的浓度范围。

如果选择的线性范围过窄，可能会导致高浓度样品的测定结果偏离线性范围，影响测定的准确性；如果选择的线性范围过宽，可能会导致低浓度样品的测定结果不够准确。

因此，在确定标准曲线的线性范围时，需要充分考虑实际样品的特点，选择合适的线性范围进行分析。

此外，标准曲线的线性范围还需要考虑分析方法的灵敏度。

在确定线性范围时，我们需要考虑到分析方法的灵敏度是否足够。

如果选择的线性范围过窄，可能会导致低浓度样品的测定结果不够灵敏；如果选择的线性范围过宽，可能会导致高浓度样品的测定结果不够灵敏。

因此，需要根据分析方法的灵敏度选择合适的线性范围，以保证分析方法对不同浓度样品的检测都能够达到较好的灵敏度。

总之，标准曲线的线性范围的确定是一个综合考虑实验数据、实际样品特点和分析方法灵敏度的过程。

合理确定标准曲线的线性范围，对于保证分析方法的准确性和灵敏度具有重要意义。

因此，在进行分析方法的建立和优化时，需要充分重视标准曲线的线性范围的确定，以确保分析结果的准确可靠。

定量分析方法的方法学验证

定量分析方法的方法学验证定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。

验证内容有：线性、范围、准确度、精密度(包括重复性和重现性)、检测限、定量限和耐用性等。

一，线性线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。

应在规定的范围内测定线性关系。

可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品；以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。

必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。

回归方程的相关系数(r )越接近于1，表明线性关系越好。

用UV法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度 A 一般在0.3〜0.7，浓度点n = 5，用浓度C对A作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数r应大于0.9999。

用HPLC法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点n = 5〜7，用浓度C对峰高h或峰面积A或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合(如HPLC-ELSD )，建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数r应大于0.999。

线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。

二，范围范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。

对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。

三，精确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率(% )表示。

准确度应在规定的范围内测试。

用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。

1.测定方法的准确度可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。

仪器检出限和分析方法检出限

检出限、测定限、最佳测定范围、校准曲线及分析空白第一节：检出限1.检出限为某特定分析方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。

所谓“检出”是指定性检出，即判定样品中存有浓度高于空白的待测物质。

检出限除了与分析中所用试剂和水的空白有关外，还与仪器的稳定性及噪声水平有关。

在灵敏度计算中没有明确噪声的大小，因而操作者可以将检测器的输出信号，通过放大器放到足够大，从而使灵敏度相当高。

显然这是不妥的，必须考虑噪声这一参数，将产生两倍噪声信号时，单位体积载气或单位时间内进入检测器的组分量称为检出限。

则：D = 2N / S式中：N---噪声（mV或A）；S---检测器灵敏度；D---检出限，其单位随S不同也有三种：Dg=2N / Sg, 单位为mg/mlDv=2N / Sv, 单位为ml/mlDt=2N / St, 单位为g/s有时也用最小检测量（MDA）或最小检测浓度（MDC）作为检测限。

它们分别是产生两倍噪声信号时，进入检测器的物质量（g）或浓度(mg/ml)。

不少高灵敏度检测器，如FID、NPD、ECD等往往用检出限表示检测器的性能。

灵敏度和检出限是两个从不同角度表示检测器对测定物质敏感程度的指标，前者越高、后者越低，说明检测器性能越好。

从而可见，测量方法的检出限于分析空白值、精密度、灵敏度密切相关。

他是分析方法的一个综合性的重要计量参数。

2. 检出限的计算方法1）在《全球环境监测系统水监测操作指南》中规定：给定置信水平为95%时，样品测定值与零浓度样品的测定值有显著性差异即为检出限（D.L）。

这里的零浓度样品是不含待测物质的样品。

D.L = 4.6σ式中：σ—空白平行测定（批内）标准偏差（重复测定20次以上）。

2) 国际纯粹和应用化学联合会（IUPAC）对分析方法的检出限D.L作如下规定。

在与分析实际样品完全相同的条件下，做不加入被测组分的重复测定（即空白试验），测定次数尽可能多（试验次数至少为20次）。

化学发光免疫分析方法

化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。

其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。

化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。

化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。

免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。

化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。

待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。

一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为 3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。

（一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。

目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。

1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。

鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。

在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。

因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。

酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。

鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。

鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。

2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay，CLIA）由于热稳定性不是很好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。

定量分析方法的方法学验证

验证内容有：线性、范围、准确度、精密度（包括重复性和重现性）、检测限、定量限和耐用性等。

一，线性线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。

应在规定的范围内测定线性关系。

必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。

回归方程的相关系数 ( r ) 越接近于 1 ，表明线性关系越好。

用 UV 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度 A 一般在 0.3 ～ 0.7 ，浓度点 n ＝ 5 ，用浓度 C 对 A 作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数 r 应大于 0.9999 。

用 HPLC 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点 n ＝ 5 ～ 7 ，用浓度 C 对峰高 h 或峰面积 A 或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合（如 HPLC-ELSD ），建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数 r 应大于 0.999 。

线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。

二，范围范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。

对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。

三，精确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率 ( ％ ) 表示。

准确度应在规定的范围内测试。

用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。

1. 测定方法的准确度可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。

标准曲线线性范围

标准曲线线性范围标准曲线线性范围是指在一定的条件下，检测方法所能检测物质浓度的线性范围。

在实际的实验室工作中，我们经常需要对样品中的物质进行定量分析，而标准曲线线性范围的确定对于准确的定量分析至关重要。

因此，本文将就标准曲线线性范围的概念、确定方法以及应用进行详细介绍。

首先，标准曲线线性范围是指在一定的浓度范围内，检测方法所能检测物质浓度的线性范围。

一般来说，线性范围越宽，说明检测方法对于样品中物质浓度的测定范围越广。

而线性范围的确定需要通过实验数据来进行验证，一般来说，线性范围的确定是通过制备一系列不同浓度的标准溶液，进行测定后绘制标准曲线来确定的。

其次，确定标准曲线线性范围的方法一般有两种，一种是直接法，另一种是间接法。

直接法是指通过制备一系列不同浓度的标准溶液，进行测定后绘制标准曲线来确定线性范围。

而间接法则是通过对样品进行稀释，使其浓度适应已知的线性范围，然后进行测定，最后通过反算来确定线性范围。

这两种方法各有优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行确定。

在实际应用中，确定标准曲线线性范围对于定量分析具有重要意义。

首先，确定了标准曲线线性范围后，可以根据待测样品的浓度选择合适的稀释倍数，使其浓度适应已知的线性范围，从而保证测定结果的准确性。

其次，对于不同的检测方法和仪器，线性范围的确定也有所不同，因此在实际工作中需要根据具体情况进行合理选择。

总之，标准曲线线性范围的确定对于定量分析具有重要意义。

通过实验数据的验证，可以准确地确定检测方法所能检测物质浓度的线性范围，从而保证定量分析结果的准确性和可靠性。

因此，在实际工作中需要重视标准曲线线性范围的确定，并根据实际情况选择合适的确定方法，从而保证实验数据的准确性和可靠性。

关于IVD产品线性范围的建立与验证讨论

通过查表得到ADL临界值。
如ADL小于临界值，可认为多项式具有临床可接受的非线性，为二阶线性。如ADL
大于临界值，则为临床不可
接受的非线性。
4. 数据处理

精密度检验
计算最优拟合方程回归标准误 σ
L：样本数；R：重复测定次
数；C：常数，取值见下表；PctBnd:取5%。最优拟合方程阶数 1阶或2阶 3阶精密度界值常数C 6.3 6.5
分析测量范围：不经预处理能够准确定量的范围
样品中不含待测物概率≤95%或99.6%
功能灵敏度：能够准确定量
线性范围的建立与验证
CLSI EP6 及《中华人民共和国卫生行业标准——定量测定方法线性评价》对线性范围
的建立和验证作了详细要求。
总体流程
基本条件保证及误差确定
样本准备
检测方案
数据处理
简化的方法
生产、质管部：
以预期值为横坐标，测定值为纵坐标，建立回归方程y=bx+a ，将预期浓度代入方程，计算估算值。估算值与实测值平均差值应不大于声明的相对或绝对偏差，否则为不满足线性。
20 0 0 50 100 150
4. 数据处理
回归方程线性检验：临床标准的线性检验中使用了两个统计量，ADL（偏离直线平均差异， average deviation from linearity）和PctBnd（百分区界percent bound）。 ADL PctBnd
• 一般设定ADL≤5%为临床允许误差，即取PctBnd为5%，
yi: 各测量值 p(xi)：最优拟合方程拟合值 n：样本数乘以重复次数 d：最优拟合方程阶数
不精密度满足判断式时, 说明数据的精密度好可作线性评价。反之则表示数据的精密度差，不能作线性评价。

检出限、测定限、最佳测定范围介绍

一、检出限1.检出限为某特定分析方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。

所谓“检出”是指定性检出，即判定样品中存有浓度高于空白的待测物质。

检出限除了与分析中所用试剂和水的空白有关外，还与仪器的稳定性及噪声水平有关。

在灵敏度计算中没有明确噪声的大小，因而操D=2N/S式中：N---噪声（mV或A）；S---检测器灵敏度；D---检出限，其单位随S不同也有三种：Dg=2N/Sg, 单位为mg/mlDv=2N/Sv, 单位为ml/mlDt=2N/St, 单位为g/s有时也用最小检测量（MDA）或最小检测浓度（MDC）作为检测限。

它们分别是产生两倍噪声信号时，进入检测器的物质量（g）或浓度(mg/ml)。

不少高灵敏度检测器，如FID、NPD、ECD等往往用检出限表示检测器的性能。

灵敏度和检出限是两个从不同角度表示检测器对测定物质敏感程度的指标，前者越高、后者越低，说明检测器性能越好。

从而可见，测量方法的检出限于分析空白值、精密度、灵敏度密切相关。

他是分析方法的一个综合性的重要计量参数。

2.检出限的计算方法1）在《全球环境监测系统水监测操作指南》中规定：给定置信水平为95%时，样品测定值与零浓度样品的测定值有显著性差异即为检出限（D.L）。

这里的零浓度样品是不含待测物质的样品。

D.L = 4.6σ式中：σ—空白平行测定（批内）标准偏差（重复测定20次以上）。

2) 国际纯粹和应用化学联合会（IUPAC）对分析方法的检出限D.L作如下规定。

在与分析实际样品完全相同的条件下，做不加入被测组分的重复测定（即空白试验），测定次数尽可能多（试验次数至少为20次）。

算出空白观测值的平均值X b和标准偏差S b。

在一定置信概率下，被检出的最小测量值X L以下式确定：X L= X b+K’S b式中：X b——空白多次测得信号的平均值；S b ——空白多次测得信息的标准偏差；K’——根据一定置信水平确定的系数。

线性范围及检测限

线性与范围(l i n e a r i t y a n d r a n g e) 分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力。

换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果(或测得的响应信号)成线性关系。

所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mg／L ~ mg／L、 ug／ml ~ ug／ml等表示。

线性与范围的确定可用作图法(响应值Y／浓度X)或计算回归方程(Y＝a+bX)来研究建立。

测定样品时所有生物药物分析方法都必须同时作标准曲线。

每次作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。

标准浓度应包括一定梯度的5-8个浓度(非线性者如免疫分析可适当增加)，每个浓度只需测定一次(免疫分析可测定两次并取均值)；标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120％，下限为样品最低浓度的80％ (但应高于LOQ)；目前仍广泛采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制r≥0.9900。

对照品的LOQ必须包括在线性范围。

线性范围是指与检测器响应信号成线性关系的样品的含量范围.一般情况下,标准曲线的最低和最高值是包含在线性范围内的,而且不同人做的标准曲线,他所取的最低和最高值也不会都相同,打个比方来说,A做5个点的标准曲线,所选择的标准样品的浓度分别为:1,5,10,15,20,那么最低最高值分别为1和20,而对于这种要检测的物质来说,它的线性范围可能是10E5,要远大于制作标准曲线所选择的浓度范围.通常在建立一个新方法的时候可以通过文献查到一些物质的线性范围,而实际工作中,要确切知道某种物质的线性范围必要性可能也不大。

S/N=3时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的3倍，注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。

S/N=10是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的10倍时，注入液相色谱仪的对照品量。

实时荧光定量 PCR 检测 HBV DNA 的线性范围与最低检出限的验证

实时荧光定量 PCR 检测 HBV DNA 的线性范围与最低检出限的验证张运洪;秦维超;何玲;黄建军【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2014(000)017【摘要】目的：试用实时荧光定量 PCR 定量检测乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA），求出其线性范围与最低检出限，从而对本实验室检测 HBV DNA 的主要性能进行验证。

方法参照相关的文件，通过系列稀释高浓度标本得到超过厂家申明线性范围的系列浓度标本，进行线性范围的验证；通过系列稀释低浓度标本得到超过厂家申明最低检出限的系列浓度标本，进行最低检出限的验证。

结果 HBV DNA 检测的线性范围为8．58×102～8．41×107 IU/mL，最低检出限为4．07×102 IU/mL。

结论实时荧光定量 PCR 检测 HBV DNA 的线性范围与最低检出限达到预期要求，检测方法和验证方案简便、可行。

【总页数】3页(P2362-2363,2366)【作者】张运洪;秦维超;何玲;黄建军【作者单位】重庆市江津区中心医院检验科，重庆 402260;重庆市江津区中心医院检验科，重庆 402260;重庆市江津区中心医院检验科，重庆 402260;重庆市江津区中心医院检验科，重庆 402260【正文语种】中文【相关文献】1.罗氏Light Cycler480实时荧光定量PCR系统检测HBV-DNA性能验证 [J], 俞刚;陈瑜;张佳;钱菁菁;徐佳庆;蔡辉;董一波;陆峰泉;马蔡昀2.HBV-DNA实时荧光定量PCR检测试剂盒性能验证 [J], 杨佳佳;张彦懿;刘华伟;黄江渝3.Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪HBV-DNA检测系统的性能验证 [J], 王娇;钱军;石英;蔡旺喜;刘光忠4.实时荧光定量PCR HBV-DNA检测系统性能验证方法的探讨 [J], 李艳梅;江忠勇;李志强5.实时荧光定量PCR仪检测HBVDNA的性能验证及评价 [J], 李彩东;陈俏丽;田鹏飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。