ELISA
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➢将已知抗原吸附于固相载体， 酶标记二抗 ➢ 检测液相中未知抗体
酶
抗抗 体
酶标记 抗抗体
抗体
1.将抗原包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗体，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗抗体，则结 合为抗原-抗体-酶标记抗抗体 复合物。
4.酶催化底物并显色。
抗原
固相载体
间接法示意图
竞争法（Competitive ELISA)
➢抗原抗体反应的特性
特异性 最适比例
敏感性
➢1、 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗 体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补 关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检 物。
➢2、 最适比例
在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体 复合物（沉淀）的量见图。曲线的高峰部分是 抗原抗体比例最合适的范围，称为等价带。
乙肝标志物中抗HBs的 检测常采用本法
是检测抗体最常用的方 法,本法主要用于对病 原体抗体的检测而进行
传染病的诊断
优点
特异性高
受检标本不需稀 释，可直接用于 测定，因此其敏 感度相对高于间
接法 只要变换包被抗 原就可利用同一 酶标抗抗体建立
检测相应抗体
注意
不能检测小分子抗原及半抗 原
关键在于酶标抗原的制备， 应根据抗原结构的不同，寻
➢3、敏感性
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达 ng/ml水平
例如：用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定口 蹄疫抗体，其敏感度可达0.1ng/ml。
一、ELISA 的原理
• ELISA是以免疫学反应为基础，将抗 原、抗体的特异性反应与酶对底物的 高效催化作用相结合的一种敏感性很 高的实验技术。
（Enzyme linked Immunosorbent Assay，ELISA）
01 02
目录 03
04
原理 类型
应用 总结
➢抗原
凡是能刺激机体产生抗体和效应性淋巴细 胞并能与之结合引起特异性反应的物质称 为抗原。其抗原性包括免疫原性和反应原 性。
➢抗体
抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。 Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。 与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。
➢将已知抗体或抗原吸附于 固相载体，酶标记抗原或抗 体 ➢检测液相中的可溶性抗原 或抗体
1.将抗体包被在固相载体上。
2.如样品中含有抗原，则优先
竞争结合抗体，结合
为抗原抗体复合物。
酶
3.同时加入酶标记抗原，抗原
酶标记抗原 没有结合的位点酶标记抗原
抗原
去占据，则结合为酶标记抗
抗原
原-抗体复合物。
4.酶催化底物并显色。
抗体
固相载体
酶标抗原竞争法示意图
三、ELISA的应用
✓免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 ✓研究抗酶抗体的合成。 ✓显现微量的免疫沉淀反应。 ✓定量检测体液中抗原或抗体成份。
四、总结
双抗体夹 心法测抗
原 双抗原夹 心法测抗
体
间接法测 抗体
适用于
是检测抗原最常用的方 法，适用于检验各种蛋
白质等大分子抗原
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www.1ppt.com/shiti/ 教案下载：www.1ppt.com/jiaoan/
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找合适的标记方法。
1.关键抗原的纯度 2.另一种干扰因素为正常血 清中所含的高浓度的非特异
性抗体
竞争法测 小分子抗原如激素和药 快，只有一次保
抗原Biblioteka Baidu
物等ELISA测定多用此 法。
温洗涤过程
需要较多的酶标记抗原
思考
• 1.竞争法ELISA的结果如何判读？ • 2.实际生产生活中ELISA的应用举例。
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二、ELISA的类型：
双抗体夹心法测抗原（常用） • 夹心法
双抗原夹心法测抗体 • 间接法测抗体（常用）
竞争法测抗原 • 竞争法
竞争法测抗体
双抗体夹心（SandwichELISA)
➢将已知抗体吸附于固相载体，酶标 记一抗
➢检测液相中的可溶性抗原
酶 酶标记抗体
抗体 抗原
1.将抗体包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗原，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗体，则结合 为抗体-抗原-酶标记抗体复合 物。
4.酶催化底物并显色。
抗体
固相载体
双抗体夹心法示意图
酶 酶标记 抗原 抗原
抗体
1.将抗原包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗体，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗原，则结合 为抗原-抗体-酶标记抗原复合 物。
4.酶催化底物并显色。
抗原
固相载体
双抗原夹心法示意图
间接法（Indirect ELISA）
酶
抗抗 体
酶标记 抗抗体
抗体
1.将抗原包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗体，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗抗体，则结 合为抗原-抗体-酶标记抗抗体 复合物。
4.酶催化底物并显色。
抗原
固相载体
间接法示意图
竞争法（Competitive ELISA)
➢抗原抗体反应的特性
特异性 最适比例
敏感性
➢1、 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗 体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补 关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检 物。
➢2、 最适比例
在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体 复合物（沉淀）的量见图。曲线的高峰部分是 抗原抗体比例最合适的范围，称为等价带。
乙肝标志物中抗HBs的 检测常采用本法
是检测抗体最常用的方 法,本法主要用于对病 原体抗体的检测而进行
传染病的诊断
优点
特异性高
受检标本不需稀 释，可直接用于 测定，因此其敏 感度相对高于间
接法 只要变换包被抗 原就可利用同一 酶标抗抗体建立
检测相应抗体
注意
不能检测小分子抗原及半抗 原
关键在于酶标抗原的制备， 应根据抗原结构的不同，寻
➢3、敏感性
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达 ng/ml水平
例如：用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定口 蹄疫抗体，其敏感度可达0.1ng/ml。
一、ELISA 的原理
• ELISA是以免疫学反应为基础，将抗 原、抗体的特异性反应与酶对底物的 高效催化作用相结合的一种敏感性很 高的实验技术。
（Enzyme linked Immunosorbent Assay，ELISA）
01 02
目录 03
04
原理 类型
应用 总结
➢抗原
凡是能刺激机体产生抗体和效应性淋巴细 胞并能与之结合引起特异性反应的物质称 为抗原。其抗原性包括免疫原性和反应原 性。
➢抗体
抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。 Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。 与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。
➢将已知抗体或抗原吸附于 固相载体，酶标记抗原或抗 体 ➢检测液相中的可溶性抗原 或抗体
1.将抗体包被在固相载体上。
2.如样品中含有抗原，则优先
竞争结合抗体，结合
为抗原抗体复合物。
酶
3.同时加入酶标记抗原，抗原
酶标记抗原 没有结合的位点酶标记抗原
抗原
去占据，则结合为酶标记抗
抗原
原-抗体复合物。
4.酶催化底物并显色。
抗体
固相载体
酶标抗原竞争法示意图
三、ELISA的应用
✓免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 ✓研究抗酶抗体的合成。 ✓显现微量的免疫沉淀反应。 ✓定量检测体液中抗原或抗体成份。
四、总结
双抗体夹 心法测抗
原 双抗原夹 心法测抗
体
间接法测 抗体
适用于
是检测抗原最常用的方 法，适用于检验各种蛋
白质等大分子抗原
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找合适的标记方法。
1.关键抗原的纯度 2.另一种干扰因素为正常血 清中所含的高浓度的非特异
性抗体
竞争法测 小分子抗原如激素和药 快，只有一次保
抗原Biblioteka Baidu
物等ELISA测定多用此 法。
温洗涤过程
需要较多的酶标记抗原
思考
• 1.竞争法ELISA的结果如何判读？ • 2.实际生产生活中ELISA的应用举例。
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二、ELISA的类型：
双抗体夹心法测抗原（常用） • 夹心法
双抗原夹心法测抗体 • 间接法测抗体（常用）
竞争法测抗原 • 竞争法
竞争法测抗体
双抗体夹心（SandwichELISA)
➢将已知抗体吸附于固相载体，酶标 记一抗
➢检测液相中的可溶性抗原
酶 酶标记抗体
抗体 抗原
1.将抗体包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗原，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗体，则结合 为抗体-抗原-酶标记抗体复合 物。
4.酶催化底物并显色。
抗体
固相载体
双抗体夹心法示意图
酶 酶标记 抗原 抗原
抗体
1.将抗原包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗体，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗原，则结合 为抗原-抗体-酶标记抗原复合 物。
4.酶催化底物并显色。
抗原
固相载体
双抗原夹心法示意图
间接法（Indirect ELISA）