土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件(自制)
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共20张PPT)
耐高温菌种提取耐高温酶。
启示： 根据它对生存条件的要求，到相应的环境中去寻找
（二）实验室中目的菌株筛选
原理 ： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包
括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止
回答： 其他微生物生长。
1、在该配方中，为微生物生长提供碳 源和氮源的是什么物质？葡 只有萄能糖够、以尿尿素素
作为氮源的微生
C半固体培养基
D天然培养基
放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的 微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。
优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌；
难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
2．间接计数法： 最常用稀释平板计数法。
原理： 1个活菌→1个菌落
统计原则 ①选 30~300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质 地等等，都是区分细菌的重要手段。
4、鉴定： 筛选后必鉴定 鉴别培养基：不影响微生 物的生存
酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解 成氨→培养基碱性增强→ 酚 红变红→脲酶阳性
五、实验过程注意
1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前 都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤 10 g。将称好的土样倒入 盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰 旁进行。
4）实验时要对培养皿作好标记。 注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当
事先规划时间。
六、结果分析与评价
注意：菌落计数偏差
1、统计的菌落数比活菌的实际数目 低 。这是因为当 两个或多个细胞在一起时，每平克板样上品中观的察菌到株的数只是 一个
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件
培养基的种类情况
培养基
稀释倍数
103
104
105
106
平板1
242
210
202
102
选
择
平板2
250
240
86
98
培
养
平板3
310
250
198
120
基
平均数
162
106
牛肉膏蛋白胨 平板4
培养基
（对照）
菌落计数方法
例 不同浓度的平均菌落数
次 101
102
103
1 1365 164
20
2 2760 296
例：46（103）和296 （102）均在30～300之间，
则：46×103÷296×102≈1.6，
应取二者的平均值。
46×103÷296×102
(
0.1(ml)
) ÷2=3.775×105
3. 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释 度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
培养基配方三
1.4g 0.2g
Na2HPO4 葡萄糖
1.0g
琼脂
2.1g 10.0g 15.0g
（一）筛选菌株——尿素细菌的分离
1.原理：根据某种微生物的特殊营养要求或其对物理、化 学因素（营养、温度、pH等）的抗性而设计的。
2.功能：使混合菌群中的目的菌株变为优势菌，从而提高 该菌的筛选效果。
3.方法：利用选择培养基来实现。
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106
课题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件
〔1〕土样不同 〔2〕培育基被杂菌污染 〔3〕混入了其他的含氮物质
如何确定缘由究竟是什么？
二.实验的详细操作
㈠土壤取样
从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左
右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前
灭菌
都要 。
㈡制备培育基 制以备尿素为独一氮源 的选择培育基。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，
M代表稀释倍数。
本卷须知 ①为了保证结果准确，普通选择菌落数在30—3的00平板
上进展计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三 个以上的培育皿中，经涂布培育，计算出菌落平均数。
①从物理性质看此培育基属于哪类？ 固体培育基
㈡统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中 微生物的数量。
缺陷：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需求相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以察看。
2.间接计数法〔活菌计数法〕 ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培育基上 所构成的一个菌落是由一个单细胞繁衍而成的，即一 个菌落代表原先的一个单细胞。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
一、课题背景
1、尿素的利用：
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被之农 后作 才物 干吸被氨收植。物土利壤 用中 。的细菌将尿素分解成
2、细菌利用尿素的缘由：
脲酶
土3、壤反中响的式细：菌分解尿参素与是酚由红于指它示们剂能？合成 。
如何确定缘由究竟是什么？
二.实验的详细操作
㈠土壤取样
从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左
右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前
灭菌
都要 。
㈡制备培育基 制以备尿素为独一氮源 的选择培育基。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，
M代表稀释倍数。
本卷须知 ①为了保证结果准确，普通选择菌落数在30—3的00平板
上进展计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三 个以上的培育皿中，经涂布培育，计算出菌落平均数。
①从物理性质看此培育基属于哪类？ 固体培育基
㈡统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中 微生物的数量。
缺陷：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需求相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以察看。
2.间接计数法〔活菌计数法〕 ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培育基上 所构成的一个菌落是由一个单细胞繁衍而成的，即一 个菌落代表原先的一个单细胞。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
一、课题背景
1、尿素的利用：
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被之农 后作 才物 干吸被氨收植。物土利壤 用中 。的细菌将尿素分解成
2、细菌利用尿素的缘由：
脲酶
土3、壤反中响的式细：菌分解尿参素与是酚由红于指它示们剂能？合成 。
专题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt
收集不同类型和不同施肥方式的土壤样品，使用稀释平板法分离分解尿素的细菌。
02
土壤中分解尿素的细菌简介
土壤细菌的种类繁多，包括多种好氧性、厌氧性及兼性厌氧性的细菌。
土壤细菌在自然界的氮循环和物质转化中起到重要作用，如分解尿素等含氮有机物。
土壤细菌的种类与功能
分解尿素的细菌属于好氧性异养菌，能够利用尿素作为唯一氮源。
采集
将采集的土壤样品进行充分混合，避免样品中存在的差异对实验结果产生影响。
处理
培养基制备
制备尿素培养基，根据实验需求加入适量的酚红指示剂，以便更好地检测分解尿素的细菌。
接种
将处理过的土壤样品接种到尿素培养基上，接种量根据实验要求而定。
培养基的制备和接种
将接种后的培养基放入恒温箱中培养，每隔24小时将培养基转接到新鲜的培养基上，直到获得纯培养物。
未来研究方向
未来的研究应该进一步拓展分解尿素细菌的应用领域，例如在生物修复、污水处理等领域的应用，为环境保护和人类健康做出更大的贡献。
我们应该加强与国际同行之间的合作与交流，引进先进的技术和方法，推动我国在该领域的研究和发展。同时，也应该积极举办和参加国际会议和学术交流活动，提高我国在该领域的国际知名度和影响力。
分光光度计间接计数法
同位素标记法
利用同位素标记物掺入细菌细胞中，用仪器检测同位素标记物的放射性，以推算细菌数量。
要点一
要点二
流式细胞计数法
将样品细胞染色后，利用流式细
05
土壤中分解尿素的细菌的应用前景
促进农作物生长
土壤中分解尿素的细菌能够将尿素分解为氨和二氧化碳，为农作物提供营养，促进其生长。
这类细菌具有尿素酶，能够将尿素分解成氨，以供细胞利用。
土壤中分解尿素的细菌分离和计数ppt课件
A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
15
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。
稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可
2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共63张PPT)
跟踪练习 1. 分析下列培养基配方，回答有关问题。 MgSO4 KH2PO · 青霉素 琼脂 蒸馏水 FeSO4 NaNO3 成分 葡萄糖 4 7H2O 0.1万 1g 0.01 g 3g 0.5 g 15 g 1L 含量 30 g 单位 (1)根据物理性质，该培养基属于________ 固体 培养基；根据用途划 选择 培养基。根据培养基成分，所培养微生物的同化 分，则属于________ 作用的类型是________ 异养 。 (2)不论何种培养基，在各种成分溶化后，分装前，要进行的是 ________________ 。 调节pH
2．结果分析与评价 (1)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成 了氨。氨会使培养基的碱性增强，pH 升高。因此，我们可以通过检测 培养基 pH 的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细 菌后，如果该细菌能够分解尿素，则 p严格厌氧型：短时 间的有氧也会造成 生长停滞或死亡， 如某些甲烷杆菌兼 性厌氧型：无氧时 进行无氧呼吸，有 氧时进行有氧呼 吸，如酵母菌一般 厌氧型：有、无氧 都进行无氧呼吸， 如某些链球菌
典例精析 (多选)依据不同的划分标准，培养基的类型不同，作用也不 同。下表中划分培养基的依据和培养基的类型及作用，正确的匹配是 ( ) 为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌(目的菌)。有人做了如下图 实验：
3．对分解尿素细菌的鉴定 (1)原理 脲酶 CO2＋2NH3 CO(NH2)2＋H2O――→ 可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)方法 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细 菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。
许多细菌如变形杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌，可将尿中的尿素分 解成氨，其代谢类型大都属于异养厌氧型； 大肠杆菌可将大便中的尿素分解成氨，其代谢类型属于异养、兼 性厌氧型。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 PPT课件
25mL全营养LB固体培养基： 0.25g蛋白胨，0.12g酵母提取物，0.25g氯化钠和0.25g琼脂糖， 水25mL，灭菌。
方法步骤
❖ 土壤取样：从富含有机物、潮湿、PH≈7的土壤中取样。铲 去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
❖ 制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。牛肉 膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了 选择作用。
❖ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释 度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相 同吗？
附答案
❖ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能 统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值， 然后按课本旁栏的公式进行计算。
❖ 这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株 /kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本 中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放 线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此， 为获得不同类型的微生物，就需要按不同的 稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提 供选择培养的条件。
土壤中分解尿素的细菌的分离 与计数
实验重点:
❖ 筛选菌株 ❖ 统计菌落数目
目录
❖ 实验原理 ❖ 目的要求 ❖ 材料用具 ❖ 试剂配制 ❖ 方法步骤 ❖ 结果分析与讨论 ❖ 思考题 ❖ 附答案
一、
原理
分 离
使用专一培养 基（含有尿素） 可从土壤中分 离出分解尿素 的细菌。
统计菌落数目
稀释涂布法常 用来统计样品 中活菌的数目。
设置对照 以LB全营养 培养基做为以 尿素为唯一氮 源的选择性培 养基的对照， 来证明专一培 养基的选择作 用。
筛选菌株
❖ 实验室中微生物的筛选应用的原理
➢ 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、PH值等)，同时抑制或阻止其他微生物生 长。
方法步骤
❖ 土壤取样：从富含有机物、潮湿、PH≈7的土壤中取样。铲 去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
❖ 制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。牛肉 膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了 选择作用。
❖ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释 度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相 同吗？
附答案
❖ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能 统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值， 然后按课本旁栏的公式进行计算。
❖ 这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株 /kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本 中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放 线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此， 为获得不同类型的微生物，就需要按不同的 稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提 供选择培养的条件。
土壤中分解尿素的细菌的分离 与计数
实验重点:
❖ 筛选菌株 ❖ 统计菌落数目
目录
❖ 实验原理 ❖ 目的要求 ❖ 材料用具 ❖ 试剂配制 ❖ 方法步骤 ❖ 结果分析与讨论 ❖ 思考题 ❖ 附答案
一、
原理
分 离
使用专一培养 基（含有尿素） 可从土壤中分 离出分解尿素 的细菌。
统计菌落数目
稀释涂布法常 用来统计样品 中活菌的数目。
设置对照 以LB全营养 培养基做为以 尿素为唯一氮 源的选择性培 养基的对照， 来证明专一培 养基的选择作 用。
筛选菌株
❖ 实验室中微生物的筛选应用的原理
➢ 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、PH值等)，同时抑制或阻止其他微生物生 长。
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91.要及时把握梦想，因为梦想一死，生命就如一只羽翼受创的小鸟，无法飞翔。――[兰斯顿·休斯] 92.生活的艺术较像角力的艺术，而较不像跳舞的艺术；最重要的是：站稳脚步，为无法预见的攻击做准备。――[玛科斯·奥雷利阿斯] 93.在安详静谧的大自然里，确实还有些使人烦恼.怀疑.感到压迫的事。请你看看蔚蓝的天空和闪烁的星星吧!你的心将会平静下来。[约翰·纳森·爱德瓦兹]
[一]土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装 入事先准备好的信封中。
[二]样品的稀释
为什么分离不同的微生 物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量 和测定土壤中能分解尿 素的细菌的数量，选用 的稀释范围相同吗？
这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不 同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌 氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约 为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按 不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选 择培养的条件。
结果分析 与评价
1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出 一些菌落。 2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度 下，是否至少有两个平板的菌落数相近？ 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他 同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
94.对一个适度工作的人而言，快乐来自于工作，有如花朵结果前拥有彩色的花瓣。――[约翰·拉斯金] 95.没有比时间更容易浪费的,同时没有比时间更珍贵的了，因为没有时间我们几乎无法做任何事。――[威廉·班] 96.人生真正的欢欣，就是在于你自认正在为一个伟大目标运用自己；而不是源于独自发光.自私渺小的忧烦躯壳，只知抱怨世界无法带给你快乐。――[萧伯纳]
专题2 微生物的培养与应用
课题2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
两个主要目的：
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌。
尿素分子的立体结构
CO（NH2）2+H脲2酶O CO2+2NH3研究思路（一 Nhomakorabea筛选菌株
美国黄石国家公园的一个热泉
水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌
（二）设置对照
一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。
究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。 一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验， 如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方 案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养， 作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例 可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类 的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基。
（二）统计菌落数目
统计菌落数目的理论依据： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此， 恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为 了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都 涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的 平板进行计数。
[三]微生物的培养与观察
操作提示
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间
87.当一切毫无希望时，我看着切石工人在他的石头上，敲击了上百次，而不见任何裂痕出现。但在第一百零一次时，石头被劈成两半。我体会到，并非那一击，而是前面的敲打使它裂开。――[贾柯·瑞斯] 88.每个意念都是一场祈祷。――[詹姆士·雷德非]
89.虚荣心很难说是一种恶行，然而一切恶行都围绕虚荣心而生，都不过是满足虚荣心的手段。――[柏格森] 90.习惯正一天天地把我们的生命变成某种定型的化石，我们的心灵正在失去自由，成为平静而没有激情的时间之流的奴隶。――[托尔斯泰]
课题延伸
pH升高 指示剂（酚红）将变红
CO（NH2）2+H脲2酶O CO2+2NH3
相关链接
（一）空气中微生物总数的检测 （二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数
85.每一年，我都更加相信生命的浪费是在于：我们没有献出爱，我们没有使用力量，我们表现出自私的谨慎，不去冒险，避开痛苦，也失去了快乐。――[约翰·B·塔布] 86.微笑，昂首阔步，作深呼吸，嘴里哼着歌儿。倘使你不会唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一来，你想让自己烦恼都不可能。――[戴尔·卡内基]
注意：
统计的菌落数往往比活菌的实际数目 低。这是因为当两个或多个细胞连在一起 时，平板上观察到的只是一个菌落。因此 结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
显微镜直接计数也是测定微生物数量 的常用方法。
每克样品中的菌株数
＝（C÷V）×M
C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数
？
说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组， 因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平 板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可 能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实 例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增 强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组 的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
97.有三个人是我的朋友爱我的人.恨我的人.以及对我冷漠的人。 爱我的人教我温柔；恨我的人教我谨慎；对我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格] 98.过去的事已经一去不复返。聪明的人是考虑现在和未来，根本无暇去想过去的事。――[英国哲学家培根] 99.真正的发现之旅不只是为了寻找全新的景色，也为了拥有全新的眼光。――[马塞尔·普劳斯特] 100.这个世界总是充满美好的事物，然而能看到这些美好事物的人，事实上是少之又少。――[罗丹] 101.称赞不但对人的感情，而且对人的理智也发生巨大的作用，在这种令人愉快的影响之下，我觉得更加聪明了，各种想法，以异常的速度接连涌入我的脑际。――[托尔斯泰] 102.人生过程的景观一直在变化，向前跨进，就看到与初始不同的景观，再上前去，又是另一番新的气候――。[叔本华] 103.为何我们如此汲汲于名利，如果一个人和他的同伴保持不一样的速度，或许他耳中听到的是不同的旋律，让他随他所听到的旋律走，无论快慢或远近。――[梭罗] 104.我们最容易不吝惜的是时间，而我们应该最担心的也是时间；因为没有时间的话，我们在世界上什么也不能做。――[威廉·彭] 105.人类的悲剧，就是想延长自己的寿命。我们往往只憧憬地平线那端的神奇【违禁词，被屏蔽】，而忘了去欣赏今天窗外正在盛开的玫瑰花。――[戴尔·卡内基] 106.休息并非无所事事，夏日炎炎时躺在树底下的草地，听着潺潺的水声，看着飘过的白云，亦非浪费时间。――[约翰·罗伯克] 107.没有人会只因年龄而衰老，我们是因放弃我们的理想而衰老。年龄会使皮肤老化，而放弃热情却会使灵魂老化。――[撒母耳·厄尔曼] 108.快乐和智能的区别在于：自认最快乐的人实际上就是最快乐的，但自认为最明智的人一般而言却是最愚蠢的。――[卡雷贝·C·科尔顿] 109.每个人皆有连自己都不清楚的潜在能力。无论是谁，在千钧一发之际，往往能轻易解决从前认为极不可能解决的事。――[戴尔·卡内基] 110.每天安静地坐十五分钟·倾听你的气息，感觉它，感觉你自己，并且试着什么都不想。――[艾瑞克·佛洛姆] 111.你知道何谓沮丧---就是你用一辈子工夫，在公司或任何领域里往上攀爬，却在抵达最高处的同时，发现自己爬错了墙头。－－[坎伯] 112.「伟大」这个名词未必非出现在规模很大的事情不可；生活中微小之处，照样可以伟大。――[布鲁克斯] 113.人生的目的有二：先是获得你想要的；然后是享受你所获得的。只有最明智的人类做到第二点。――[罗根·皮沙尔·史密斯] 114.要经常听.时常想.时时学习，才是真正的生活方式。对任何事既不抱希望，也不肯学习的人，没有生存的资格。
[一]土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装 入事先准备好的信封中。
[二]样品的稀释
为什么分离不同的微生 物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量 和测定土壤中能分解尿 素的细菌的数量，选用 的稀释范围相同吗？
这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不 同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌 氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约 为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按 不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选 择培养的条件。
结果分析 与评价
1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出 一些菌落。 2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度 下，是否至少有两个平板的菌落数相近？ 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他 同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
94.对一个适度工作的人而言，快乐来自于工作，有如花朵结果前拥有彩色的花瓣。――[约翰·拉斯金] 95.没有比时间更容易浪费的,同时没有比时间更珍贵的了，因为没有时间我们几乎无法做任何事。――[威廉·班] 96.人生真正的欢欣，就是在于你自认正在为一个伟大目标运用自己；而不是源于独自发光.自私渺小的忧烦躯壳，只知抱怨世界无法带给你快乐。――[萧伯纳]
专题2 微生物的培养与应用
课题2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
两个主要目的：
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌。
尿素分子的立体结构
CO（NH2）2+H脲2酶O CO2+2NH3研究思路（一 Nhomakorabea筛选菌株
美国黄石国家公园的一个热泉
水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌
（二）设置对照
一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。
究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。 一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验， 如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方 案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养， 作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例 可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类 的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基。
（二）统计菌落数目
统计菌落数目的理论依据： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此， 恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为 了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都 涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的 平板进行计数。
[三]微生物的培养与观察
操作提示
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间
87.当一切毫无希望时，我看着切石工人在他的石头上，敲击了上百次，而不见任何裂痕出现。但在第一百零一次时，石头被劈成两半。我体会到，并非那一击，而是前面的敲打使它裂开。――[贾柯·瑞斯] 88.每个意念都是一场祈祷。――[詹姆士·雷德非]
89.虚荣心很难说是一种恶行，然而一切恶行都围绕虚荣心而生，都不过是满足虚荣心的手段。――[柏格森] 90.习惯正一天天地把我们的生命变成某种定型的化石，我们的心灵正在失去自由，成为平静而没有激情的时间之流的奴隶。――[托尔斯泰]
课题延伸
pH升高 指示剂（酚红）将变红
CO（NH2）2+H脲2酶O CO2+2NH3
相关链接
（一）空气中微生物总数的检测 （二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数
85.每一年，我都更加相信生命的浪费是在于：我们没有献出爱，我们没有使用力量，我们表现出自私的谨慎，不去冒险，避开痛苦，也失去了快乐。――[约翰·B·塔布] 86.微笑，昂首阔步，作深呼吸，嘴里哼着歌儿。倘使你不会唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一来，你想让自己烦恼都不可能。――[戴尔·卡内基]
注意：
统计的菌落数往往比活菌的实际数目 低。这是因为当两个或多个细胞连在一起 时，平板上观察到的只是一个菌落。因此 结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
显微镜直接计数也是测定微生物数量 的常用方法。
每克样品中的菌株数
＝（C÷V）×M
C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数
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说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组， 因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平 板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可 能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实 例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增 强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组 的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
97.有三个人是我的朋友爱我的人.恨我的人.以及对我冷漠的人。 爱我的人教我温柔；恨我的人教我谨慎；对我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格] 98.过去的事已经一去不复返。聪明的人是考虑现在和未来，根本无暇去想过去的事。――[英国哲学家培根] 99.真正的发现之旅不只是为了寻找全新的景色，也为了拥有全新的眼光。――[马塞尔·普劳斯特] 100.这个世界总是充满美好的事物，然而能看到这些美好事物的人，事实上是少之又少。――[罗丹] 101.称赞不但对人的感情，而且对人的理智也发生巨大的作用，在这种令人愉快的影响之下，我觉得更加聪明了，各种想法，以异常的速度接连涌入我的脑际。――[托尔斯泰] 102.人生过程的景观一直在变化，向前跨进，就看到与初始不同的景观，再上前去，又是另一番新的气候――。[叔本华] 103.为何我们如此汲汲于名利，如果一个人和他的同伴保持不一样的速度，或许他耳中听到的是不同的旋律，让他随他所听到的旋律走，无论快慢或远近。――[梭罗] 104.我们最容易不吝惜的是时间，而我们应该最担心的也是时间；因为没有时间的话，我们在世界上什么也不能做。――[威廉·彭] 105.人类的悲剧，就是想延长自己的寿命。我们往往只憧憬地平线那端的神奇【违禁词，被屏蔽】，而忘了去欣赏今天窗外正在盛开的玫瑰花。――[戴尔·卡内基] 106.休息并非无所事事，夏日炎炎时躺在树底下的草地，听着潺潺的水声，看着飘过的白云，亦非浪费时间。――[约翰·罗伯克] 107.没有人会只因年龄而衰老，我们是因放弃我们的理想而衰老。年龄会使皮肤老化，而放弃热情却会使灵魂老化。――[撒母耳·厄尔曼] 108.快乐和智能的区别在于：自认最快乐的人实际上就是最快乐的，但自认为最明智的人一般而言却是最愚蠢的。――[卡雷贝·C·科尔顿] 109.每个人皆有连自己都不清楚的潜在能力。无论是谁，在千钧一发之际，往往能轻易解决从前认为极不可能解决的事。――[戴尔·卡内基] 110.每天安静地坐十五分钟·倾听你的气息，感觉它，感觉你自己，并且试着什么都不想。――[艾瑞克·佛洛姆] 111.你知道何谓沮丧---就是你用一辈子工夫，在公司或任何领域里往上攀爬，却在抵达最高处的同时，发现自己爬错了墙头。－－[坎伯] 112.「伟大」这个名词未必非出现在规模很大的事情不可；生活中微小之处，照样可以伟大。――[布鲁克斯] 113.人生的目的有二：先是获得你想要的；然后是享受你所获得的。只有最明智的人类做到第二点。――[罗根·皮沙尔·史密斯] 114.要经常听.时常想.时时学习，才是真正的生活方式。对任何事既不抱希望，也不肯学习的人，没有生存的资格。