白血病免疫分型测定
急性白血病免疫学分型
（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。
前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。
见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。
急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。
白血病免疫分型测定
b.使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
操作-样本制备：
细胞膜表面抗原
1．首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
6．各管中加入透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
8．各管中加入4mlPBS，振荡混匀。
9．300g离心5分钟后，弃去上清液。
10．各管中加入PBS500ul，振荡混匀。11 Nhomakorabea上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，腰穿采骨髓。
采集部位腰穿采骨髓
抗凝剂肝素抗凝
要求1．样本量至少3ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本或已固定的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
4：鞘液液体20L室温
5：清洗液液体5L室温
白血病免疫分型初筛方案
白血病免疫分型初筛方案白血病免疫分型初筛方案白血病是一种由于造血干细胞异常增殖引起的恶性血液病，其临床表现及预后差异较大。
对于白血病患者的治疗和预后判断，准确的分型至关重要。
近年来，随着免疫学研究的进展，白血病的免疫分型成为了一个重要且具有指导意义的方面。
本文将介绍白血病免疫分型的初筛方案，以及其对临床的意义和应用。
一、什么是白血病免疫分型？白血病免疫分型是通过检测白血病患者的免疫表型，即细胞上表达的抗原和细胞表面标记物，来确定白血病的类型和亚型。
目前，常见的白血病免疫分型方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫电镜等。
二、为什么需要白血病免疫分型？白血病患者的治疗和预后与其分型紧密相关。
不同类型的白血病具有不同的临床表现、生物学特点和预后，准确的分型对于指导个体化治疗非常重要。
免疫分型不仅可以帮助医生确定病情严重程度、制定个体化治疗方案，还可以对患者的预后做出评估。
对于一些疑难病例，免疫分型还有助于确定病理诊断和鉴别诊断，减少误诊和漏诊的发生。
三、白血病免疫分型的初筛方案目前，国际上广泛应用的白血病免疫分型初筛方案主要是基于流式细胞术。
这一方法具有快速、准确、多参数检测的特点，使得它成为了白血病免疫分型的首选工具。
白血病免疫分型的初筛方案通常包括以下几个方面的内容：1. 纵向免疫分型纵向免疫分型主要是通过检测白血病细胞表面的免疫表型，确定白血病的类型和亚型。
对于怀疑白血病的患者，医生通常会进行一系列免疫标记物的检测，如CD45、CD34、CD13、CD33、CD14、CD15等。
这些标记物可以帮助医生确定白血病患者的分型，指导后续的治疗和预后评估。
2. 横向免疫分型横向免疫分型则是通过比较不同类型的白血病细胞表面的免疫表型，辅助鉴别白血病的类型和亚型。
在横向免疫分型中，医生通常会检测同一类别不同亚型的白血病患者的共同抗原和独特抗原，以确定其具体的亚型。
3. 免疫细胞化学分析免疫细胞化学分析是一种通过检测白血病细胞内特定抗原的染色反应，来确定白血病的类型和亚型的方法。
白血病免疫分型
正常人血液白细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：单核细胞 R3：中性粒细胞 R4：嗜酸性粒细胞 R5：原始细胞
正常人骨髓有核细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：粒系细胞 R3：单核细胞 R4：原始细胞 R5：幼红细胞
白血病细胞的特性
白血病细胞的异常表现在： 抗原系列异常和时间异常
CD15
CD1a
CD64
2008年WHO细胞系别确定标准
髓系：MPO（流式细胞术、免疫组化或者细胞化 学） 或单核系分化（非特异性酯酶弥漫性阳性， 或者CD11c、CD14、CD36、CD64、溶酶体， 两个及以上阳性） T系：胞浆CD3（流式使用抗CD3ε链的抗体；免 疫组化使用的多克隆抗体会检测到非T细胞特异性 的CD3ζ链） 或胞膜CD3（MPAL中比较罕见） B系：CD19强表达加下述标志中至少一个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10 或CD19弱表达加下述标志中至少两个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10
髓片
POX染色
AML-M0
AML-M1
AML-M2
AML-M3
AML-M3v
AML-M4EO
AML-M4b
AML-M5b
AML-M6
AML-M7
AML免疫分型总结
192例AML病例中免疫分型结果示髓系抗原CD13、CD33、 MPO最常见，其次CD117也是髓系比较敏感的指标，在 原始细胞百分比高的AML亚型中有较高的阳性率。
白血病免疫分型---CD45-SSC设门
CD45是白细胞的共同抗原成分,所有人类白细胞均表达CD45，包括 淋巴细胞、单核细胞、多形核细胞、嗜酸、嗜碱性细胞、胸腺细胞、 脾细胞、扁桃腺细胞以及骨髓前体细胞。 造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高低紧密相关，即分化 程 度 高 的 细 胞 CD45 表 达 量 高 ， 分 化 程 度 低 的 细 胞 CD45 表 达 量 低 （淋 巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞，在红细胞中不表 达。 SSC是侧向角参数，反应细胞的颗粒度（成熟粒细胞>单核细胞>原 幼 细 胞 > 淋 巴 细 胞 ） 。 目 前 ， 国 际 上 采 用 CD45—SSC 设 门 （Gating），可将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分 型的准确性。
急性白血病免疫分型
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点
我国急性白血病免疫分型的四色方案
我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。
因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体，涉及多个造⾎系列的抗原。
但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。
⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性，有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案，供参考。
本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病（APL）1.3急性髓细胞⽩⾎病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红⽩⾎病（AML-M6）z急性巨核细胞⽩⾎病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病1.6 混合表型⽩⾎病1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查2.抗体的选择：根据检测的⽬的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病，可以根据CD45/SSC图型进⾏初步判断。
髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下⽅，且多数⽩⾎病细胞SSC较低（除去⼤颗粒APL 患者）。
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。
白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。
白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。
采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。
准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。
已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。
目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。
鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。
一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
白血病免疫分型
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
Side scatter
+
Common B-ALL
急性前B细胞白血病
+
Pre B-ALL
急性B细胞白血病
+
B-ALL
++ +/- + -/+ + --
- -+ -+ +- -/+ +
意义：Common B-ALL 预后相对较好，CD34+B-ALL比CD34预后好，但CD34+患者伴Ph1+预后差。B-ALL预后相对 差，但随化疗方案改进，预后有所改善。
(二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期
CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8
I期 ： + + + +
-/+
II期： + + + - + -/+
III期： + + + - + +/+ + +
Ⅳ期： + + + - -
+/+ +/- +/-
泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8
我国急性白血病免疫分型的四色方案
中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性白血病的重要依据之一。
因准确的诊断需要选择一定数量的抗体，涉及多个造血系列的抗原。
但目前国内甚至国际上没有规范化的方案可以借鉴。
而国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案，供参考。
本方案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性白血病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞白血病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进行鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),皮质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞白血病（APL）1.3急性髓细胞白血病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红白血病（AML-M6）z急性巨核细胞白血病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥大细胞白血病1.6 混合表型白血病1.7 对上诉急性白血病治疗后检测MRD的标志进行筛查2.抗体的选择：根据检测的目的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性白血病:对于急性髓细胞白血病，可以根据CD45/SSC图型进行初步判断。
髓系白血病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下方，且多数白血病细胞SSC较低（除去大颗粒APL患者）。
再根据CD34、CD117、CD38、HLA-DR、CD123的表达进行判断。
急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型
三、急性白血病系别诊断标准
• EGIL诊断标准缺点： • （1）关于阳性定义，因为影响因素众多，有时存在歧义； • （2）对于某些覆盖率低、特异性高的标志，给予分值低或者未纳入，如CD64、CD14； • （3）对某些常见伴系表达标志予以极低分值，如CD7，未考虑荧光强度的差异； • （4）对于相对特异、在某系别易于伴发的标志，未考虑差异对待，如cCD79a、CD10
三、急性白血病系别诊断标准
• 鉴于几乎没有任何标志是绝对敏感和特异的，做全标志有助于降低误诊风险，因此 在系别筛查时如果出现系别标志表达过多或者过少，或者伴系表达标志的强度超过 标本中残留的正常细胞时，首先应该做全两个诊断标准涉及的相关系别标志，必要 时甚至需要增加CD371等新的髓系标志。
• 在此过程中可以选择一步法或者两步法。选择一步法的实验室，以目前常用3激光8 色机型为例，可供参考的5管法见表3；选择两步法的实验室，第一步进行系别筛查， 包括髓系MPO（或者CD33）和CD117，T系CD7和cCD3、B系CD19和CD22，根据 采用仪器型号不同可能有差异，4色方案可以参考2015年4色流式细胞术中国专家共 识，3激光8色推荐方案见表3。
三、急性白血病系别诊断标准
三、急性白血病系别诊断标准
• 注意几个标志的FCM检测： • （1）MPO：使用克隆号8E6、MPO-7的抗体需要小心，因为均有在B-ALL表达的
报道；阳性阈值虽然大多数沿用10%，但是建议结合荧光强度，并且不典型病例应 该做全其他髓系标志，并结合细胞化学和免疫组化MPO检测结果；FCM破膜处理 可能会使粒细胞的侧向角光散射（side scatter，SSC）降低，从而影响CD45/SSC设 原始细胞门的精确度，导致假阳性结果，正确的方法应结合原始细胞标志修订设门。
白血病免疫分型的诊断标准
9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。
白血病淋巴瘤免疫分型
非肿瘤T淋巴 细胞表型
22
非肿瘤B淋巴 细胞表型
23
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
24
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
25
白血病免疫分型
• 根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
亚型
CD7 CD1a CD2 TdT FAB分型
早前T-ALL + — —
+
L1,L2
胸腺皮质T-ALL +
+
+
+
L1,L2
T-ALL
+—+
+
L1,L2
44
T-ALL
45
T-ALL
46
HAL（T/M双克隆）
47
48
白血病免疫分型的价值
确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和 ALL的分化阶段。 鉴定AML的特征。 对形态学上未分化的急性白血病有助于 鉴定细胞类型。 诊断一些少见类型的白血病。如：M6、 M7、M0等。
15
细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.
16
Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
淋巴细胞
M3、CML M4、M5
早前B-ALL + —
+
免疫分型 基础介绍
近年来白血病得免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少得重要标准之一、早年曾用过得荧光显微镜或APAAＰ方法基本被废弃。
国际上公认得通用得方法就是流式细胞术(FCM)。
流式细胞术白血病免疫分型就是利用荧光素标记得单克隆抗体(McAb)作分子探针,多参数分析白血病细胞得细胞膜与细胞浆或细胞核得免疫表型,由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
ﻫ1、流式细胞仪诊断白血病得依据⑴FＣM能快速,多参数,客观得定性又定量测定细胞膜、浆、核得抗原表达ﻫ⑵至今尚未发现白血病得特异抗原。
ﻫ⑶能用正常血细胞得单抗来进行免疫分型就是基于白血病形成得分化阻断学说。
即白血病细胞基因异常,分化受阻于某阶段形成不同亚型得白血病、这群细胞充盈于骨髓。
正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞得过程中,细胞膜、细胞浆或胞核抗原得出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞得分化发育阶段密切相关,而且表现出与细胞系列及其分化程度相关得特异性。
因此,这些抗原得表达与否可作为鉴别与分类血细胞得基础。
白血病就是造血系统得恶性肿瘤,在形态上变化虽相当大,但仍能表达正常血细胞所具有得抗原,因而仍可依据其抗原得表达谱对白血病进行免疫分型。
2、流式细胞仪诊断白血病得意义ﻫ⑴骨髓血细胞就是形态学分型得基础,FCＭ白血病免疫分型就是对形态学分型得重要补充与进一步深化,国际白血病MIＣ分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都就是必不可少得,对下列情况意义更大:①用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源得白血病。
②形态学为急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
③混合性白血病。
④部分髓系白血病。
目前,免疫分型对粒细胞与单核细胞白血病得鉴别尚有一定困难。
⑤慢性淋巴细胞白血病。
⑥微小残留白血病、⑵临床预测;可根据抗原得表达情况预测病情得预后:如白血病患者有ＣD7+与CＤ3４+共表达,预后不好。
⑶疾病监测:可监测病程得发展,疗效,可进行微小残留白血病得检测。
白血病骨髓检验鉴定标准
白血病骨髓检验鉴定标准
白血病是一种常见的恶性肿瘤，其主要特征是骨髓内异常增生的白细胞。
鉴定白血病的确诊需要进行骨髓检验，而骨髓检验的鉴定标准是非常关键的。
下面将介绍白血病骨髓检验鉴定标准的相关内容。
首先，白血病骨髓检验的鉴定标准主要包括骨髓细胞形态学、骨髓免疫学、骨髓细胞遗传学等方面的内容。
在骨髓细胞形态学方面，主要是通过显微镜观察骨髓中的白血细胞、红血细胞和血小板的形态，以确定是否存在异常细胞的存在。
白血病的骨髓细胞通常呈现出异常的形态，如细胞过度增生、大小不规则、核分裂活跃等特征。
其次，骨髓免疫学是白血病鉴定的重要方法之一。
通过检测骨髓细胞的免疫表型，可以鉴定出白血病的亚型和分型。
不同类型的白血病细胞表面的抗原表达是不同的，通过免疫学检验可以帮助医生做出准确的鉴定。
例如，慢性髓性白血病的骨髓细胞表面会表达CD13和CD33等抗原。
最后，骨髓细胞遗传学是鉴定白血病的另一个重要方面。
白血病患者的骨髓细胞常常存在染色体的异常，如染色体缺失、易位、倒位等。
通过检测骨髓细胞的染色体结构，可以鉴定出白血病的染色体异常，帮助医生做出准确的诊断和鉴定。
综上所述，白血病骨髓检验的鉴定标准是一个综合的过程，需要结合骨髓细胞形态学、骨髓免疫学和骨髓细胞遗传学等多方面的检测结果，才能够做出准确的鉴定。
骨髓检验的鉴定标准的准确性和及时性对于白血病的治疗和预后至关重要，因此在进行骨髓检验时，医生需要严格按照标准操作，确保鉴定的准确性和可靠性。
只有通过科学的鉴定标准，才能够更好地指导临床的治疗方案，提高白血病患者的治疗效果和生存率。
急性白血病——免疫分型
细胞系列抗原的表达 ---B细胞系抗原
HLA-DR意义 在白血病分型中，HLA-DR特异性较差， 除B系外，HLA-DR在急非淋、成人T细胞白血
病亦表达，
但如DR+，加上CD5-、CD7-则99%为B系。90%B 系ALL表达CD10。
与AL预后有的抗原
1。CD34：
强表达者预后差，特别是复发时CD34增强是最有意义 的免疫学表型改变，CD34常与一些预后差的因素共存 时有相加的作用，与CD34与Pgp或DR共存的患者，比单 表达其中一个抗原的患者完全缓解率明显降低。
Pre-B4,B,T1,T2,T3 第三型：变异型-Pre-B1-4/My+,Pre-B1-
4/CD15+, PRE-B1-4/T+,T1-4/My+, T1-4/CD15+,T1-4/B+
第四型：多表型-Pre-B1-4/M+,T1-4/M, Pre-B+T,Pre-B+T+M.
ALL免疫分型
免疫学分型对ALL更重要。 免疫学与FAB分型可不一致。
细胞系列抗原的表达 ---B细胞系抗原
B细胞根据发育阶段可分为： B祖细胞 TdT、CD34、HLA-DR
前B细胞（可再分为前前B、前B）TdT、CD34、CD10、CD19、 CD24
未成熟B细胞 CD19、CD24、CD20、CyCD22
急性白血病的免疫分型急性白血病的免疫分型micmicmm分型细胞形态学细胞形态学包括细胞组化包括细胞组化为基础为基础细胞免疫学细胞免疫学免疫表型免疫表型为主体为主体细胞遗传学为辅助细胞遗传学为辅助分子生物学为补充的原则
急性白血病
免疫学分型
急性白血病的免疫分型
FAB分型,免疫分型和基因分型联合检测急性白血病
FAB分型、免疫分型和基因分型联合检测急性白血病①李 玲 王 蕊 钟 笛 温丙昭 王晓敏② 许建华③ 曲建华 陈 (新疆医科大学第一临床医学院,乌鲁木齐830054) 中国图书分类号 R73317 R44616 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2003)0320204202 近几十年来,由于白血病发病不断增加及科技的发展,使白血病的诊断技术不断进步,单凭传统的光镜形态学诊断技术和不统一的诊断与分型,已远远不能适应临床需要。
单克隆抗体(McAb)的广泛运用,使人们开始从造血细胞分化抗原表达的角度去研究急性白血病(A L),再加上基因分型,使A L诊断率提高至98%以上。
1 材料与方法111 病例来源 117例A L患者均为初治,男70例,女47例,年龄范围13～76岁,中位年龄32岁。
117例均按FAB分型诊断标准确诊,其中急淋白血病(A LL)29例,急性髓系白血病(AM L)83例,难分类A L(UA L)5例。
112 间接免疫荧光法 取肝素抗凝骨髓血常规分离单个核细胞。
然后进行荧光抗体试验。
其结果判定为:荧光阳性细胞百分数≥30%为阳性诊断指标。
113 链亲和素2胶体金细胞原位杂交法 参照文献1。
在显微镜下观察到胞浆为黑褐色颗粒的DNA2 mRNA杂交信号为阳性细胞,其结果判定为:每片计数200个细胞,其白血病细胞阳性率>5%为阳性,阴阳性对照见图1,2。
114 急性混合细胞性白血病(M A L) 参照文献2为标准,以国际通用的积分法诊断。
2 结果211 FAB分型 117例患者用形态学和细胞化学染色方法:按FAB分型A LL29例,其中L111例,L215例,L33例;其细胞化学染色为POX阳性率0～2%, NSE阴性,A LP阳性率平均为45%,积分平均91分。
AM L83例,其中M14例、M255例、M315例、M44例、M54例、M61例;其细胞化学染色为POX阳性率3%～98%,NSE在M4、M5亚型中其阳性率平均为①本课题受新疆科技厅自然科学基金项目资助(200121102)②新疆维吾尔自治区人民医院血液科,乌鲁木齐830000③乌鲁木齐铁路局总医院血液科,乌鲁木齐830011作者简介:李 玲,女,46岁,主要从事恶性血液病的实验诊断研究。
白血病免疫分型
白血病免疫分型白血病的免疫分型主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测，我们可以判断出白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型是诊断白血病的重要标准，对于白血病选择化疗药物以及估计预后是非常重要的。
白血病的免疫分型最早由欧洲提出来，它主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。
一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测从而判断出，白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。
此种白血病的分型即为免疫分型。
白血病免疫分型一般是对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测。
1、白血病的诊断需要骨髓穿刺、骨髓液免疫分型、染色体和基因检查以进一步诊断，骨髓细胞学诊断白血病的准确性仅为70%左右。
如果同时增加白血病的免疫分型，白血病的明确诊断准确率可以接近100%。
2、白血病免疫分型是指对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测，可以进一步区分急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病和慢性髓系白血病等类型。
同时还需要检查融合基因的染色体，以便对白血病诊断后的预后进行分层，并制定个性化的化疗方案。
建议平时多进行体育锻炼，增强自身免疫力。
急性白血病是造血干细胞的克隆性恶性疾病，发病时骨髓中异常的原始细胞大量增殖并浸润各种器官组织，正常造血受到抑制。
急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病，这两类还可分成多种亚型。
白血病的分型采用MIC分型，即形态学、免疫学和细胞遗传学结合的分型。
根据白血病细胞免疫学标志，不仅可将急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病进行区别，而且还可将T细胞和B细胞急性淋巴细胞白血病加以区别。
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临床意义
用于血液病的诊断和分型诊断
方案（Protocol）
2．首先每管中加入标本(骨髓或外周血)100ul(根据细胞的多少决定)，5ulCD45-PC5抗体。室温避光20分钟。
3．每管中加入固定液100ul，剧烈振荡混匀，室温避光15分钟。
4．各管中加入PBS4ml。
5．300g离心5分钟后，弃去上清液，振荡混匀。透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
采集部位骨髓采血
抗凝剂EDTA或肝素抗凝
要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
白血病免疫分型测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与细胞膜上或膜内相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到百分数。
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
5．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
8．各管中加入4mlPBS，振荡混匀。
9．300g离心5分钟后，弃去上清液。
10．各管中加入PBS500ul，振荡混匀。
11．上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
CD34+<5%MPO+<5%
b.使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
细胞浆和核抗原
1．准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体，其中一管是同型对照。
3：鞘液(No.8546859)液体20L室温
4：清洗液(No.8546930)液体5L室温
5：荧光微球(No.6605359)液体10ML2-8℃(Flow-Check)
仪器
BeckmanCoulterEPICSXL/FC500/Altra
操作-样本制备：
细胞膜表面抗原
1．首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体。
成分1：单克隆抗体液体2—8℃
(CD34No. IM1871CD45-PC5No.IM2653/IM2652
Flow-Count荧光微球No.7547053)
2：全血溶血试剂(Q-Prep)液体(No.7546946)
A：甲酸液体70ML室温
B：碳酸钠等液体32ML室温
C：多聚甲醛液体14ML室温
(OptilyseC No.IM1401)液体室温