小鼠骨髓染色体标本的制备.
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备实验目的：实验原理：
2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶 液、Giemsa染液等。
3．材料：小鼠
方法与步骤：
1.取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2.腹腔内注射秋水仙素3～4小时后，断头处死小鼠。 3.取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造
成骨髓细胞的流失。Fra bibliotek 4.滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等 组织清除干净。
5.加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹 打，使骨髓细胞全部释放出来。
6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml 左右，室温下静置20～30分钟，进行低渗。低渗结束后， 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定，轻轻混匀 后，离心。
15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
结果：
作业:
绘图表示动物染色体的典型形态。 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步
骤。
7. 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液，混匀 后，室温放置30分钟，再次离心去上清，重复固定一次， 离心后，向沉淀中加入1ml预冷的固定液，将细胞重悬。
8.取洁净冰水中预冷的载玻片，稍作倾斜，用吸管吸取一 滴上述细胞悬浮液，于载玻片上方适当高度滴在载玻片 上；
9.滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10～
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备
实验目的：
掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法，识别小鼠染 色体的数目及特点。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
内容与方法
1、动物预处理：取材前 3~4小时，腹腔注射 0.01%的秋水仙素。
2、取材：处死小白鼠，剥取股 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。
4、预固定：加1mlCarnoy 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。
3、低渗：37度恒温水浴30分钟 ➢在酒精灯火焰过火2~3次， ➢做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 染色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 各起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
目的与要求
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法；
2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
5、固定：弃上清，再加 Carnoy 固定液至6ml刻度， 悬浮，静置20分钟，离心 同上。
6、制片：去上清液,加少量固定液， 混匀，滴片，
7、染色：Giemsa染色10分钟
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml刻度的离心管 离心机 载 玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固 定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%柠檬酸 钠 改良石炭酸品红
实验步骤
预处理
绘制一张小鼠骨髓细胞中期染色体图
思考题
分析本实验中造成制片不佳的原因
低渗 染色
取股骨
离心 观察
冲洗骨髓
离心
离心
滴片
固定
实验步骤
1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重 注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙 素。 2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组 织，洗净 3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取 10ml 2%柠檬酸钠，注射 器针头插入股 骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到 10ml的离心管中
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本过程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验原理
制备方法包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的 形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色 体停留在赤道面处 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴 片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载 玻片上 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载 片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染 色体的显微图象
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察细胞 周围，没有离散单个或多个染色体存在，以免影 响计数。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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四、试验步骤(continued)
6.离心：1200rpm离心5分钟后弃去上清液， 7.固定：加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀，室温下静 置20分钟，每10分钟时吹打一次。 8.离心：1200rpm离心6分钟，弃上清液。
9.离心：加1.5mL固定液，吸管吹打成细胞悬液。
一、试验目标
1. 经过小白鼠骨髓细胞染色体制备，初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 方法 2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动 物染色体数目及特点
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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二、试验原理
骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞，从这些分裂细胞 中，可观察处处于分裂中期染色体，能对一个动物染色体 形态特征、数目进行准确观察和分析。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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几个动物染色体形态特征
动物名称 染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
பைடு நூலகம்
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体
体
，介于6～7号
，介于8～9号
40
全部为近端着丝粒染色体 大小介于5～6号 大小介于19～20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒 近端着丝粒染色体 近端着丝粒染色体
10.滴片：用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻 片上，室温晾干
11.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
小鼠骨髓染色体标本的制备.
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
一.小鼠骨髓染色体的制备
【实验目的】 n 学会小鼠骨髓染色体标本的制备
【实验原理】
n 处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了 纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此 时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
n 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活 性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分 裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、 滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞 染色体标本。
【仪器、材料和试剂】
n （一）仪器 光学显微镜,冰箱,恒温水浴锅。
n （二）材料 n 已制备好的小鼠骨髓染色体载玻片,染色缸,烧杯,镊子
等。 n （三）试剂 n 盐酸(0.2mol/l),5％Ba(OH)2(50℃预热),2×SSC溶液
(60-65℃预热),Giemsa染液
【实验步骤】
1.按上述小鼠骨髓染色体的制备步骤制备染色体
二.染色体C带的制备
【实验目的】 学会小鼠骨髓染色体C带的制备
【实验原理】
n 借助特殊的燃料及染色程序,使染色体的一定部 位呈现深浅不同的带纹,可用来鉴别染色体组, 单个染色体以及深入认识染色体的结构和功能。
n C带可使着丝粒区,端粒区的异染色质及其他染 色体区段的异染色质部分呈Giemsa深染,其他 部分呈淡染。
（三）试剂
n 1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％ 生理盐水中。
n 2．低渗液: 0.075mol/lKCl取5.59gKCl加 到1000mL蒸馏水中,在37℃下预热。
n 3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)
【实验步骤】
1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。54h后拉颈椎处死。 2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注 意不要将股骨剪断)。 3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌 肉,用棉花或 纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。 4.剥离股骨,并将股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入 骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。
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3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
相，数一数有几条。
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原理
小鼠骨髓细胞用秋水仙素积累分裂相， 用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。