生物试剂配制标准操作流程

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PMSF及常用试剂的配制方法

PMSF及常用试剂的配制方法

PMSF及常用试剂的配制方法PMSF,全名为苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride),是一种常用的蛋白质酶抑制剂。

它可以抑制蛋白质酶如胰蛋白酶、活化酶和血小板活化因子的活性。

PMSF的配制很简单,以下是一种常见的方法:1.准备材料-PMSF粉末(应提前称量好)-无水酒精(绝对醇)-磷酸缓冲液(可根据实验需求配制不同浓度的缓冲液)2.设计配制方法一般来说,PMSF的最终浓度为1mM,所以我们可以根据实验需要的最终体积和浓度来计算所需的PMSF量和酒精量。

根据以下公式计算所需量:所需PMSF量(mg)= 所需浓度(mmol/L)× 结果体积(L)÷ PMSF的摩尔质量(g/mol)所需酒精量(mL)= 所需体积(L)× (1-所需浓度(mmol/L))÷ 酒精的摩尔浓度(mol/L)3.配制3.1精确称量所需量的PMSF,放入一个干净的容器中。

3.2加入精确量的无水酒精,将PMSF溶解在酒精中。

建议使用磁力搅拌器和溶剂瓶来加速溶解过程。

3.3将溶液转移到含有磷酸缓冲液的容器中,并用缓冲液将溶液稀释至最终体积。

3.4用过滤膜滤过溶液以去除悬浮物和杂质。

通过以上操作,我们就可以制备出所需浓度的PMSF溶液。

常用试剂的配制方法包括以下几个方面:1.缓冲液的配制:缓冲液是实验中常用的试剂之一,可以用来稳定和调节试验的pH值。

常见的缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液等。

它们的配制方法一般为将相应浓度的缓冲液成分溶解在去离子水中,并调节pH至所需值。

2.标准溶液的配制:标准溶液常用于检测和分析中,以提供可靠的浓度和质量参考。

常见的标准溶液包括NaCl标准溶液、EDTA标准溶液、Tris标准溶液等。

它们的配制方法一般为将相应的标准溶质溶解在取定体积的溶剂中,经充分混合后即得到标准溶液。

确保在配制过程中注意各种反应条件的要求,例如温度、pH值等。

生物素测试剂盒操作流程

生物素测试剂盒操作流程

维生素B7(生物素)检测试剂盒实验操作流程一、实验前准备工作1、灭菌(在做实验前,至少提前两个小时以上灭菌)如果有一次性无菌注射器则不需要灭菌注射器没有枪头盒时用其他器皿装枪头一起灭菌(如烧杯,灭菌时放入枪头后用报纸把烧杯口封起来),同时带两把小镊子,做实验时取枪头用。

2、配制溶液(1)准备10mlHCL溶液:1.0mol/l(2)配制氢氧化钠溶液:1mol/la)称取0.4 g 氢氧化钠b)用10 ml双蒸水或去离子水充分溶解注:用带橡胶塞的玻璃瓶储存。

3、实验过程中需要的其他设备及器材:无菌工作台酶标仪(540nm或630nm)37℃黑暗条件下的培养箱95℃水浴锅(实验前需要提前加热到95℃)振荡器pH测量仪或pH试纸双蒸水0.2um无菌滤膜酒精棉二、样品处理1、称取1g奶粉样品至一个50ml无菌试管中,加入40ml无菌水摇匀,用HCL或NaOH调整pH值到8.0 +/- 0.2,充分混匀;2、在95℃水浴中提取30分钟,期间所有样品试管需每隔5分钟振荡一次,并一直保持试管塞紧闭3、迅速冷却至室温(即把样品试管放进水里,保证试管塞紧闭)从下面这一步开始需要在无菌工作台进行4、分别取1ml样品用0.2um无菌滤膜过滤至1.5~2.0ml无菌试管中5、根据样品中生物素含量用试剂盒中提供的无菌水进一步稀释样品,稀释后的样品即可用于检测。

样品稀释倍数计算如下:例如:固体样品标注浓度为80ug/100g用该浓度除以标准2计算: 80 μg ÷ 0.24 μg =333→ 结果为稀释倍数大约为300→ 1 :300 稀释稀释步骤:a) 1 :9(100ul样品提取溶液+ 900ul试剂盒中的无菌水),b) 1 :9(100ul a液+ 900ul试剂盒中的无菌水),c) 1 :2(200ul b液+ 400ul试剂盒中的无菌水)注:每一步稀释都需要充分混匀后再做下一步稀释,提取稀释液需立即使用。

分子生物学实验常用试剂配制

分子生物学实验常用试剂配制

分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液:一袋粉制PBS缓冲液(中杉有售)加1000ml蒸馏水。

0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。

(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液:一袋粉制枸橼酸盐缓冲液(中杉有售)加1000ml蒸馏水。

0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。

(3)1mol/L的TBS缓冲液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris碱,用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。

(4) 1‰DEPC水:1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中,剧烈震荡20分钟使充分混匀,37o C至少放置2h或过夜,HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC,4℃保存。

(5) 1%琼脂糖凝胶:取琼脂糖0.2g置烧杯中,加入20ml的1×TAE缓冲液,封闭锥形瓶口,放入微波炉内加热,不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液,待琼脂糖全部熔化后取出摇匀,冷却至60℃左右,加入10mg/ml溴化乙锭(EB)1μl,EB的终浓度为0.5μg/ ml,充分混匀。

将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中,厚度约为3-5mm,注意不要有气泡,将凝胶放置室温待其自然凝固。

凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。

(6)0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。

(7) 50×TAE缓冲液:Tris碱242g,17.4mol/L冰乙酸57.1ml,0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。

第三节、试剂的配制与使用

第三节、试剂的配制与使用
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(二)、酶、辅酶 酶和辅酶作为生物试剂,现已广泛应用于工农业生产、科学研究和 卫生事业的各个领域。在生物化学检验中,酶作为分析试剂具有专 一性高、反应条件温和、催化反应速度快、无毒害等优点。酶作为 分析试剂,能测定标本中用一般化学方法难于检测的物质。酶分析 方法至今已建立了二百多种。可测定一百多种临床生化检验项目, 商品试剂盒亦有五、六十种之多。 在分子生物学技术中,限制性核酸内切酶、聚合酶、DNA连接 酶等工具酶的发现 和应用,使人类重组DNA、探究基因的愿望得以 实现,为基因工程这样一门创造性科学提供了有效的工具。 酶是一种生物催化剂,其活性受许多因素的影响;要长期保存 而不失去活性是比较困难的。通常,结晶干燥的固体酶制剂比液态 酶易于保存,酶试剂最好用深色瓶盛装,置干燥器内,再将干燥器 放人低温冰箱,这样能做到低温、干燥、避光的保存要求。
离心机的种类很多,按其转速的不同,分普通离心机 (<6000rom)、高速离心机 (6000~25000rpm)和超高速离 心机(<30000rpm)。
四、实验试剂的配制和使用
(一)、试剂配制的一般原则
1.生物化学检验实验室配制试剂用水均应用蒸馏水或去离子水。 2.根据实验要求选用不同规格的试剂,一般情况下大多选用AR级, 一般溶液如无特殊要求,可选用CP级试剂。 3.正确合理的选用衡器和量器。配制标准液或缓冲液称重应选用1 /10 000的分析天平。量器应选用一等容量瓶和吸管。一般试剂如 显色剂、终止剂等无特殊要求的,则选用粗天平和量筒即可。 4.试剂开瓶后,如不能一次用完,应及时予以封闭保存,特别是 易吸潮试剂。对见光易变质的试剂,外面要用黑纸包裹。 5.称量或量取试剂用的器皿,取试剂用的药勺均应洁净干燥。试 剂一经取出(特别是液体试剂),不得放回原瓶,以免影响试剂纯度。 6.配制好的试剂,应贴标签,写上试剂名称、浓度、配制日期。

试剂配制与使用

试剂配制与使用

一、化学试剂的等级标准
根据国家标准(GB)或部颁标准(HG)规定,分以 下几种级别
级别 一级纯 二级纯 三级纯 名称 优级纯 分析纯 化学纯 符号 G.R A.R C.P L.R T.P 色标 绿色 红色 蓝色 黄色 说 明 纯度高,适用科研工作 纯度较高,适用定量定性分析 纯度低于二级,用途类似二级 纯度较差,用于一般定性分析 工业产品,也可用于一般的化 学实验
核苷酸
定义:一类由嘌呤碱或嘧啶碱基、核糖或脱氧核糖以及磷酸三 种物质组核苷酸成的化合物 分布:大多都以核苷酸的钠(钾、锂) 盐形式 存在 用途:制备核酸探针,广泛应用于基因 研
究和疾病的诊断
蛋白质
定义:蛋白质是由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链 经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质。 生理功能:构造人的身体 载体的运输 维持机体内的渗透压的平 衡 及体液平衡白蛋白 维持体液的酸碱平衡 抗体的免疫酶的催化 激素的调节 能源物质 应用:广泛应用于免疫诊断试剂和高效治疗用的靶向药物等
5.溶液的混合
当两种不同浓度的溶液混合时,混合后溶质的量应等于混合前两溶液的溶质 量之和。由此得计算式: C×(V1+V2)=C1V1+C2V2 C:所需溶液浓度 C1:浓溶度浓度 C2:稀容液浓度 V1:浓溶液体积 V2:稀溶液体积 例:现有5%(g/mL)葡萄糖溶液400mL,预配10%(g/mL)葡萄糖溶液供患者使用,应 取50%(g/mL)葡萄糖溶液多少毫升混合? 解:已知C=10% C1=50% C2=5% V2=400mL 求V1=? (10%-5%)×400 0.1-0.05×400 V1=―――――――――=―――――――――=50mL 50%-10% 0.4 即称取50%的葡萄糖溶液50mL加入浓度为5%的葡萄糖溶液400mL中混合均匀即称10%葡萄 糖溶液。

配方法的一般步骤

配方法的一般步骤

配方法的一般步骤介绍在化学、药学和生物学等领域,配方法(分析法)被广泛应用于测量、分析和确定化合物的成分和特性。

配方法的一般步骤是一个系统化的过程,旨在提高测量的准确性和可重复性。

本文将介绍配方法的一般步骤,包括样品准备、试剂配制、仪器校准、测量操作和结果分析等内容。

1. 样品准备样品准备是配方法的第一步,关键在于确保样品的代表性和一致性。

通常,样品需要进行称样、研磨、溶解、稀释等处理。

在样品准备过程中,应遵循标准操作规程和实验室内的安全操作规定。

2. 试剂配制试剂配制是配方法的关键步骤之一,目的是制备精确和准确的试剂溶液。

在试剂配制前,需要准确称取试剂,并按照预先确定的比例配制溶液。

为确保配制的试剂溶液质量,可使用标准溶液、内标物或者其他已知浓度的样品作为参考。

3. 仪器校准为确保测量结果的准确性和可靠性,配方法中的仪器校准是必不可少的一环。

仪器校准应首先对仪器进行零点校准,然后进行灵敏度校准。

校准的过程中,应使用标准样品或者标准物质进行验证,校准结果应记录并与标准曲线进行比较。

4. 测量操作测量操作是配方法的核心步骤,根据分析目的和仪器要求,选择合适的测量方法进行操作。

测量操作包括样品输入、仪器启动、参数设置、测量时间和数据采集等。

在测量操作中,应注意实验室内环境的稳定性,避免干扰物质的进入,确保测量结果的准确性。

5. 数据处理与结果分析数据处理和结果分析是配方法的最后一步,通过对测量数据进行处理和分析,得出最终结果。

数据处理包括数据校正、数据平滑、数据插值等步骤,以消除实验误差并提高数据的精确性和可重复性。

结果分析则根据实验目的进行,可以采用统计学方法、图像处理等对结果进行解释和评价。

总结配方法的一般步骤是一个系统化的过程,涵盖了样品准备、试剂配制、仪器校准、测量操作和结果分析等内容。

严格按照这些步骤进行操作,能够提高配方法的准确性和可重复性。

同时,在整个过程中,实验人员应严格遵守安全操作规程,确保实验室的安全。

生物化学实验常用试剂的配制方法

生物化学实验常用试剂的配制方法

生物化学实验常用试剂的配制方法1、0.5mol/L 氢氧化钠溶液 *组份浓度 0.5mol/L*配制量 2L*配置方法 1.准确称取氢氧化钠 40g。

2.用去离子水溶解并稀释至 2L。

2、0.5mol/L 盐酸溶液 *组份浓度 0.5mol/L*配制量 2L*配置方法 1.准确量取盐酸 83.4mL。

2.用去离子水稀释至 2L。

4、0.2%葡萄糖标准溶液 *组份浓度 0.2%*配制量 1L*配置方法 1.称取葡萄糖 2.5g 置于称量瓶中,在70℃干燥 2 小时。

2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。

3.准确称取葡萄糖 2.000g。

4.用去离子水溶解并定容至 1L5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清 *组份浓度 250μg/mL白蛋白标准液 *配制量 2L*配置方法 1.准确称取 250mg标准牛血清白蛋白。

2.用 0.03mol/LpH7.8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L。

3.4℃保存。

6、Folin 试剂甲*配置方法 1.称取 10g氢氧化钠溶于 400mL去离子水中,加入 50g 无水碳酸钠,溶解,待用。

2.称取 0.5g酒石酸钾钠,溶于 80mL去离子水中,加入 0.25g 硫酸铜.5水,溶解。

3.将 1:2:去离子水按 20:4:1的比例混合即可。

4. 4℃保存,可用一周。

7、Folin 试剂乙*配置方法1.在 500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠.2水 25.0359g,钼酸钠.2水6.2526g,去离子水 175mL,85%磷酸 12.5mL,浓盐酸 25mL,充分混合。

2.回流 10 小时,再加硫酸锂 37.5g,去离子水 12.5mL及数滴溴。

3.然后开口沸腾 15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到 250mL。

4.于棕色瓶中保存,可使用多年注意:上述制备地 Folin 试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol/L 左右,几种操作方案都是把 Folin 试剂乙稀释至 1mol/L 的浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释 18 倍,使之浓度为 0.1mol/L 略高。

生物类经常用的一些化学试剂的配制方法

生物类经常用的一些化学试剂的配制方法

生物类经常用的一些化学试剂的配制方法l.乳酸苯酚固定液乳酸10g, 结晶苯酚10g, 甘油20g, 蒸馏水10mL。

2. 1.6%溴甲酚紫溴甲酚紫1.6g溶于100mL乙醇中,贮存于棕色瓶中保存备用。

用作培养基指示剂时,每1000mL 培养基中加入lmL 1.6%溴甲酚紫即可。

3. V.P.试剂CuSO4 1g,蒸馏水l0mL,浓氨水40mL,10% NaOH 950mL。

先将CuSO4溶于蒸馏水中,然后加浓氨水,最后加入10%NaOH。

4. 0.02%甲基红试剂甲基红0.1g,95% 乙醇760mL,蒸馏水100mL。

5. 吲哚反应试剂对二甲基氨基苯甲醛8g, 95%乙醇760mL,浓HCl160mL。

6. Alsever’s血细胞保存液葡萄糖2.05g, 柠橡酸钠0.8g, NaCl 0.42g,蒸馏水l00mL。

以上成分混匀后,微加温使其溶解后,用柠檬酸调节pH 6.1,分装于三角瓶中(30~50mL/瓶), 113℃湿热灭菌15min,备用。

7. Hank’s液(l)贮存液A液:(I)NaCl80g, KCl4g, MgSO4·7H2O1g,MgCl2·6H2O1g,用双蒸馏水定容至450mL:(II)CaCl2 1.4g (或CaCl2·2H2O 1.85g) 用双蒸馏水定容至50mL。

将I和II液混合,加氯仿1mL即成A液。

(2)贮存液B液:Na2HPO4·12H2O 1.52g,KH2PO4 0.6g, 酚红0.2g, 葡萄糖10g,用双蒸馏水定容至500mL,然后加氯仿1mL,酚红应先置研钵内磨细,然后按配方顺序一一溶解。

(3)应用液:取上述贮存液的A和B液各25mL,加双蒸馏水定容至450mL,113℃湿热灭菌20min。

置4℃下保存。

使用前用无菌的3% NaHCO3调至所需pH。

注意:药品必须全部用A.R试剂,并按配方顺序加入,用适量双蒸馏水溶解,待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品,最后补足水到总量。

对于生物化学常用试剂配制

对于生物化学常用试剂配制

惯例试剂配制和测定方法一、溶液的配制1.Mandels 营养盐溶液( 1000 mL)名称重量( g)硫酸铵( (NH 4)24)14 SO磷酸二氢钾( KH 2PO4)20尿素(H2NCONH2)3硫酸镁( MgSO·)347H2O氯化钙( CaCl2· 2 )42H O注:用煮沸 10 min 后的蒸馏水配制。

2. Mandels 微量元素溶液( 1000 mL)名称氯化钴( CoCl2·6H2O)硫酸锌( ZnSO4·7H2O)硫酸锰( MnSO4·H2O)硫酸亚铁( FeSO4·7H2O)注:用煮沸 10 min 后的蒸馏水配制。

重量( g)3.71.41.65.03.DNS 试剂的配制(1000 mL)(1)取:3,5-二硝基水杨酸(C7H4N2O7)7.5 g氢氧化钠(NaOH )14.0 g充足溶解于 1000 mL 水中(水早先煮沸10 min)(2)加入:酒石酸钾钠(C4 4 6· 2)216.0 gH O K Na 4H O苯酚(在 50 ℃水浴中消融) 5.5 mL着重亚硫酸钠( Na2S2 O5) 6.0 g(3)充足溶解后盛于棕色瓶中,搁置 5 天后即可使用,平常盛一小瓶(250 mL) 使用,要放在冰箱中冷藏。

此溶液每个月配制一次。

注意:倒入瓶中时要尽量装满!!4.考马斯亮蓝 G-250 的配制(1000 mL)称考马斯亮蓝G-250 100 mg 即 0.1g 溶于50 mL95%乙醇中,加入100 mL 85 %磷酸,用蒸馏水稀释至1000 mL,滤纸过滤。

最后试剂中含0.01 %(w/v )考马斯亮蓝G-250,4.7 %(w/v )乙醇, 8.5 %(w/v )磷酸。

5. 1.0 M 柠檬酸缓冲溶液的配制(1000 mL)名称分子量 Mn重量 (g)柠檬酸( C6 87· 2O )210210H O HNaOH4074.5正确称取柠檬酸210 g,溶于约750 mL 煮沸(10 min)蒸馏水中,待柠檬酸充足溶解后加入氢氧化钠 74.5 g,完整溶解后将上述溶液转移到 1000 mL 容量瓶中,冷却后将容量瓶定容到 1000 mL(原始 pH4.45)。

生物制药实验操作作业指导书

生物制药实验操作作业指导书

生物制药实验操作作业指导书一、实验目的生物制药实验操作作业旨在使学生掌握生物制药相关实验操作技能,了解生物制药的基本原理和实践应用。

二、实验材料和仪器1. 材料:- 细菌培养基- 酵母- 细胞培养基- 抗生素- 溶液和缓冲液- 蛋白质纯化试剂盒- 电泳试剂- 试剂盒等2. 仪器设备:- 培养皿和培养皿架- 培养箱- 离心机- 超声波处理仪- 十分摄氏计- 离子交换层析仪- 高效液相色谱仪(HPLC)- 电泳仪等三、实验操作步骤1. 细菌培养实验a. 准备培养基:按照实验要求配制细菌培养基。

b. 接种细菌:使用无菌技术将待测的细菌接种到培养基中。

c. 培养细菌:将接种好的培养皿放入培养箱中,设置适当的温度和培养时间。

d. 观察细菌生长:根据培养后的结果进行观察和记录。

2. 酵母发酵实验a. 准备培养基:按照实验要求配制酵母培养基。

b. 接种酵母:使用无菌技术将待测的酵母接种到培养基中。

c. 培养酵母:将接种好的培养皿放入培养箱中,设置适当的温度和培养时间。

d. 观察酵母发酵:根据培养后的结果进行观察和记录。

3. 细胞培养实验a. 准备培养基:按照实验要求配制细胞培养基。

b. 接种细胞:使用无菌技术将待测的细胞接种到培养基中。

c. 培养细胞:将接种好的培养皿放入培养箱中,设置适当的温度、湿度和培养时间。

d. 观察细胞生长:根据培养后的结果进行观察和记录。

4. 抗生素敏感性实验a. 准备培养基:按照实验要求配制含有不同浓度抗生素的培养基。

b. 接种细菌:使用无菌技术将待测的细菌接种到培养基中。

c. 观察菌液浑浊度:根据培养后的结果观察菌液的浑浊程度,判断细菌对抗生素的敏感性。

5. 蛋白质纯化实验a. 细胞破碎:使用超声波处理仪等方法破碎细胞,释放目标蛋白质。

b. 离心分离:使用离心机将细胞碎片和其他杂质分离出来,获得上清液。

c. 层析纯化:使用离子交换层析仪等方法对上清液进行纯化,得到目标蛋白质。

d. 浓缩和储存:使用适当的方法将目标蛋白质浓缩并储存,以便后续的研究或应用。

微生物试剂配制和灭菌标准

微生物试剂配制和灭菌标准

微生物试剂的配制和灭菌是在微生物实验室中非常重要的步骤,以确保实验的准确性和可重复性。

以下是一般的微生物试剂配制和灭菌标准:微生物试剂的配制:1. 培养基配制:-使用高质量的培养基成分,例如肉汤、酵母提取物、葡萄糖等。

-通过称量和混合来准确配制培养基,确保成分的准确性和一致性。

-使用蒸馏水或去离子水作为配制培养基的溶剂。

2. 试剂和缓冲液的配制:-使用高纯度的试剂,确保配制过程的精确性。

-采用标准的实验室操作程序,使用适当的实验室设备,如搅拌器、pH计等。

3. 灭菌步骤:-在配制之前,确保工作区域、仪器和培养器具已经经过适当的清洁和消毒。

-配制过程中,使用无菌技术,避免微生物污染。

微生物试剂的灭菌:1. 高压蒸气灭菌(常用于培养基、培养器具等):-使用高压蒸气灭菌器(例如,高压蒸汽灭菌器或自动压力蒸气灭菌器)。

-遵循制造商的使用指南和操作规程。

-通常,121摄氏度、15分钟是一个常见的高压蒸气灭菌条件。

2. 紫外线灭菌(常用于表面消毒):-将试剂瓶、培养皿等物品暴露在紫外线灯下,以进行表面消毒。

-通常需要较长时间的照射,同时确保灭菌面暴露在紫外线下。

3. 过滤灭菌(用于灭菌液体培养基等):-使用合适的微孔过滤器,选择合适的孔径,将液体通过过滤器。

-这种方法适用于温度敏感的试剂。

4. 酒精喷雾或浸泡(常用于实验台面等表面的消毒):-使用酒精(通常是70%的乙醇)进行喷雾或浸泡,以对实验台面等表面进行消毒。

在进行微生物试验时,遵循实验室安全操作规程和制定的消毒程序非常重要。

此外,对于每种试剂和培养基,应该查阅制造商提供的具体使用说明书,以确保正确的配制和灭菌。

国标版鲁格试剂配制SOP

国标版鲁格试剂配制SOP

鲁哥试剂的配制方法目的按照《淡水浮游生物调查技术规范SC/T 9402-2010》制订藻类显微镜镜检的标准操作规程,用于配置100ml鲁哥试液,用于藻类固定与保存。

参考文献[1] [1] 中华人民共和国农业部. 淡水浮游生物调查技术规范 SC/T 9402-2010.北京.中国农业出版社,2011.4.玻璃器皿制备中华人民共和国农业部在这个方法中使用的玻璃器皿,都需用无磷洗涤剂LiquiNox洗干净。

所有的玻璃器皿需通过一系列的去离子水冲洗。

实验器材和试剂清单试剂•I2•KI•去离子水器材•带塞锥形瓶•标签纸•磁力搅拌器•250ml棕色玻璃瓶•100ml量筒•50ml量筒•分析天平•冰箱个人安全保护及“三废”处理在所有过程中任何时候都需要穿上实验室大衣。

在使用时,需要穿上丁腈橡胶手套和带上安全眼镜。

鲁格试液是一种酸性溶液。

清理任何可能接触到的鲁格试液的材料。

鲁格试液废弃液可用冷水一起冲洗排到下水管中。

质量控制确保质量,样品重复频率为10%的样品量。

实验室重复包括重复计数:来自同一采集的样品的一个新的样本。

重复样的偏离标准百分数应小于20%。

如果标准差大于20%,样本将重新计数和实验室技术人员将接受再培训。

实验室管理人员将随机检查已确认的文件,如果一个随机识别检查失败,将重新计数样品和实验室技术人员将接受再培训。

实验程序1.0试剂的制备:1.1鲁格试液。

(注意:鲁格试液应该在阴暗处保存)1.1.1准备无菌水用100ml量筒分次准确量取100ml去离子水于烧杯中,备用。

1.1.2碘和碘化钾的称量1.1.2.1水平调节观察水平仪,如水平仪水泡偏移,需调整水平调节脚,使水泡位于水平仪中心。

1.1.2.2预热接通电源,预热至规定时间后,开启显示器进行操作。

开启显示器。

轻按ON键,显示器全亮,约2 s后,显示天平的型号,然后是称量模式0.0000 g。

读数时应关上天平门。

1.1.2.3开启显示器轻按ON键,显示器全亮,约2 s后,显示天平的型号,然后是称量模式0.0000 g。

生物工程配液方案模板

生物工程配液方案模板

生物工程配液方案模板一、实验目的本实验旨在通过配制合适的培养基,为生物工程实验提供所需的适宜环境,以满足细胞培养、发酵、基因表达等过程的需求。

二、实验材料1. 蒸馏水2. 葡萄糖3. 酵母粉4. 大豆蛋白胨5. 酵母提取物6. 胰蛋白酶7. 氰化钾8. 磷酸二氢钠9. 硫酸镁10. 不同种类的氮源:氨酸、尿素、硝酸铵等11. 不同种类的微量元素:铁盐、锌盐、锰盐等三、实验仪器1. 电子天平2. 反应釜3. 干燥箱4. 培养箱5. 恒温振荡器四、实验步骤1. 配制基础培养基a. 在1000ml蒸馏水中加入20g葡萄糖,搅拌均匀。

b. 加入10g酵母粉和5g大豆蛋白胨,继续搅拌至完全溶解。

c. 在溶液中加入氰化钾0.5g、磷酸二氢钠0.5g和硫酸镁0.5g,搅拌均匀。

2. 调整pH值a. 使用pH计测定溶液的pH值,一般调整到7.0左右。

b. 如果pH值偏高,可以添加少量盐酸或硫酸调节;如果pH值偏低,可以添加少量氢氧化钠或氢氧化钠调节。

3. 添加微量元素和氮源a. 根据实验需要,加入不同种类的氮源和微量元素。

b. 最常用的氮源是氨酸,需要根据实验需求调整添加量;微量元素一般以铁盐、锌盐、锰盐为主,也需要根据实验需求调整添加量。

4. 混合均匀并灭菌a. 将配制好的培养基溶液通过过滤器或高温高压的方法进行灭菌处理,确保培养基的无菌性。

b. 灭菌处理后,培养基可存放在4摄氏度冰箱中,待生物工程实验使用。

五、实验注意事项1. 配制培养基时要注意严格按照操作流程进行,确保培养基的质量和无菌性。

2. 在调整pH值时需小心操作,避免对人身体造成伤害。

3. 在添加氮源和微量元素时,根据实验需要合理调整添加量,避免过量或不足。

4. 灭菌处理时需使用专业设备,并严格按照操作规程进行。

六、实验结果通过本实验的配制,可获得适宜的培养基溶液,用于生物工程实验中的细胞培养、发酵、基因表达等过程,为实验提供所需的适宜环境。

七、实验结论本实验设计的培养基配液方案可以满足生物工程实验中的培养基需求,为后续实验提供了良好的基础条件。

微生物检测所需试剂配制方法(新)

微生物检测所需试剂配制方法(新)
c、沙黄复染液:
将0.25沙黄溶解于10ml95%乙醇中,然后用90 ml蒸镏水稀释。
微生物镜检用(革兰氏染色)
3
林格氏液
称取氯化钠9g,氯化钾0.12g,氯化钙0.24g,碳酸氢钠0.2g,用1000ml蒸镏水溶解,摇匀。
检测前需稀释液
4
稀释液
取林格氏液250ml,蒸镏水250ml,琼脂1g,加热溶解,每瓶分装225ml,121℃高压灭菌15分钟
奶油稀释液
5
焦性没食子酸
焦性没食子酸1g,10%NaOH1ml(焦性没食子酸与10% NaOH等量)混匀。
注:目的赶走空气,得到厌氧环境
厌氧菌培养的方法及所加药品
微生物检测所需试剂配制方法
1
乳酸苯酚
称取苯酚10g;乳酸10g;甘油20g;水10ml;
苯酚在水中加热溶解,加入
a、结晶紫染色液:
将1g结晶紫溶解于20ml95%乙醇中,然后与80ml1%草酸铵溶液混合。
b、革兰氏碘液
将1g碘,2g碘化钾进行混合,加入蒸镏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸镏水至300ml。

生物试剂配制标准操作流程

生物试剂配制标准操作流程

生物试剂配制标准化操作流程1.目的确保试剂配制准确、有效。

2.范围试剂研发部芯片组所用的生物试剂。

3. 器材与试剂3.1. 器材电子天平,称量匙,称量纸,移液枪,涡旋混合器,掌上离心机,磁力搅拌器,转子,玻璃棒,1L容量瓶,50ml容量瓶,100ml容量瓶,10ml容量瓶,1L烧杯,100ml烧杯,10ml烧杯,100ml量筒,10ml量筒,0.2μm孔径滤膜,1ml注射器,1.5ml离心管。

3.2. 试剂EDC:1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Hydrochloride,1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亚胺,(191.7),密封、干燥、-20℃避光密闭保存。

MES:2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid,2-(N-吗啉代)乙磺酸,(213.2),室温干燥密闭保存。

Formamide:甲酰胺,(45.041),4℃密闭保存。

10g/ml Salmon DNA:鲑鱼精DNA,室温干燥密闭保存。

SDS:dodecyl sulfate,十二烷基硫酸钠,(288),室温干燥密闭保存。

1mol/L NaOH:氢氧化钠,(40.01),室温密闭干燥保存。

柠檬酸三钠·2H2O:Trisodium citrate,dihydrate,(294.1),室温干燥密闭保存。

NaCl:氯化钠,(58.44),室温干燥密闭保存。

1mol/L HCl:盐酸,(36.5),室温密闭保存。

4. 程序4.1. MES(20mM,2×)配制:4.1.1. 配制0.1M MES母液4.1.1.1. 在干燥环境中用电子天平称取1.21524g MES于干净的100ml烧杯中。

4.1.1.2. 量取30ml蒸馏水溶解MES固体,加入数滴1mol/L NaOH调节pH至5.1。

4.1.1.3. 把溶液转移到已经检查过的50ml容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加蒸馏水定容至50ml。

试剂配制操作及注意事项PPT课件

试剂配制操作及注意事项PPT课件

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9
试剂的溶解度
易溶性的:像绝大多数的酸、碱、盐类试剂,都是易 溶性,且一般是水溶性的。有机溶剂。
难溶性的:有用DMSO来配的。
在配制难溶性物质的时候,有的可以加加热,有的可 以搅拌,有的可以用超声。
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10
天平
固体配制成试剂时,通常要用到天平。
每一个天平都有它的量程范围。超过或接近最大量程, 都是不妥的。
配制好的试剂应及时盛入试剂瓶,试剂瓶上必须有标明名 称、浓度和配制人,配制日期,复核人,复核日期的标签, 有效期限
溶液储存时应注意不要使溶液变质 配制硫酸、磷酸、硝酸、盐酸等溶液时,应把酸倒入水中
防护措施:不能用手直接接触腐蚀性及有剧毒的溶液,剧 毒废液应作解毒处理,不可直接倒入下水道
一忌用容量瓶进行溶解(体积不准确) 二忌直接往容量瓶倒液(洒到外面) 三忌加水超过刻度线(浓度偏低) 四忌读数仰视或俯视(仰视浓度偏低, 俯视浓度偏高) 五忌不洗涤玻璃棒和烧杯(浓度偏低) 六忌标准液存放于容量瓶(容量瓶是量器,不是容器)
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19
pH计的使用
有些对pH 要求比较精确的溶液是用要pH计来测定的 pH计的校准,标准液体的有效期。 按照SOP去操作。 要注意保护好电极。不用时多以氯化钾饱和溶液来保
放置天平的房间要控制温湿度,放置天平的台子要平。
水平仪在天平的正后方,视线要与其垂直,视水平仪 水泡置于正中之时,即可。要细心、耐心地调好。切 忌动作粗暴。
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11
天平
一是预先插电预热,至电子天平的屏幕显示稳定后再 称量。
二是配制时,除极少数特殊情况外,一般是从侧面加 入试剂原料。

分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制

分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制

1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配制方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl(pH8.8)□配制量1L□配制方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA(pH 7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配制方法1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500 mM EDTA(pH8.0)20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。

3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠(pH5.2)□配制量100mL□配制方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL 的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

【初中生物】初中生物实验之班氏试剂的配制

【初中生物】初中生物实验之班氏试剂的配制

【初中生物】初中生物实验之班氏试剂的配制【—初中之班氏试剂的配制】关于生物中班氏试剂的配制实验内容,同学们还记得吧,下面我们一起来演示操作哦。

班氏试剂的配制挑浓硫酸硫酸铜1.47g,溶100ml热水中,加热后吸收至150ml,挑柠檬酸钠173g,浓硫酸碳酸钠100g和600ml水共热,溶后加热并搅拌至850ml,再将加热的150ml硫酸铜流入即可。

鉴定糖尿的结果沸水浴冷却后的现象葡萄糖含量(g/dl)透明蓝色无冷却时并无变化,仅加热后存有少量结晶微量,约0.5以下加热1分钟后即出现少量黄绿色沉淀少量,约0.5-1冷却10-15秒后即为发生土黄色结晶中量,约1-2加热时很快出现多量砖红色沉淀大量,约2以上班氏试剂与斐林试剂比较:首先,两者的配方不一样。

斐林试剂主要由质量浓度为0.1gml-1的naoh溶液和质量浓度为0.05gml-1的cuso4溶液配制而成。

其中0初中物理.1gml-1的naoh溶液称为斐林试剂甲,0.05gml-1的cuso4溶液称为斐林试剂乙。

而班氏试剂的配方为:①400ml水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;②50ml加热的水中加入8.5g无水硫酸铜,制成cuo4溶液;③把cuso4溶液倒入柠檬酸钠na2co3溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。

其次,两者在反应原理上有所差别。

利用斐林试剂鉴别时,斐林试剂甲和斐林试剂乙轻易反应产生cu(oh)2,cu(oh)2和可溶性还原成糖反应产生砖红色结晶。

而班氏试剂中cu(oh)2的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生oh-,与柠檬酸钠na2co3溶液和cuso4溶液混合时,cu2+和oh-融合,分解成cu(oh)2,cu(oh)2与葡萄糖中的醛基反应产生砖红色结晶。

第三,两种试剂的保存方式不同。

斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈反应产生cu(oh)2,cu(oh)2很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠na2co3为一对缓冲物质,产生的oh-数量有限,与cuso4溶液混合后产生的cu(oh)2浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。

生物试剂配制标准操作流程

生物试剂配制标准操作流程

生物试剂配制标准化操作流程1.目的确保试剂配制准确、有效。

2.范围试剂研发部芯片组所用的生物试剂。

3. 器材与试剂3.1. 器材电子天平,称量匙,称量纸,移液枪,涡旋混合器,掌上离心机,磁力搅拌器,转子,玻璃棒,1L容量瓶,50ml容量瓶,100ml容量瓶,10ml容量瓶,1L烧杯,100ml烧杯,10ml烧杯,100ml量筒,10ml量筒,0.2μm孔径滤膜,1ml注射器,1.5ml离心管。

3.2. 试剂EDC:1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Hydrochloride,1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亚胺,(191.7),密封、干燥、-20℃避光密闭保存。

MES:2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid,2-(N-吗啉代)乙磺酸,(213.2),室温干燥密闭保存。

Formamide:甲酰胺,(45.041),4℃密闭保存。

10g/ml Salmon DNA:鲑鱼精DNA,室温干燥密闭保存。

SDS:dodecyl sulfate,十二烷基硫酸钠,(288),室温干燥密闭保存。

1mol/L NaOH:氢氧化钠,(40.01),室温密闭干燥保存。

柠檬酸三钠·2H2O:Trisodium citrate,dihydrate,(294.1),室温干燥密闭保存。

NaCl:氯化钠,(58.44),室温干燥密闭保存。

1mol/L HCl:盐酸,(36.5),室温密闭保存。

4. 程序4.1. MES(20mM,2×)配制:4.1.1. 配制0.1M MES母液4.1.1.1. 在干燥环境中用电子天平称取1.21524g MES于干净的100ml烧杯中。

4.1.1.2. 量取30ml蒸馏水溶解MES固体,加入数滴1mol/L NaOH调节pH至5.1。

4.1.1.3. 把溶液转移到已经检查过的50ml容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加蒸馏水定容至50ml。

标准磷酸盐溶液的配制

标准磷酸盐溶液的配制

标准磷酸盐溶液的配制磷酸盐溶液是实验室常用的一种溶液,在生物化学、分子生物学、细胞生物学等领域中有着广泛的应用。

它可以用于DNA/RNA的沉淀、蛋白质的沉淀、细胞的固定和染色等实验操作中。

在进行实验操作之前,我们需要准备好标准磷酸盐溶液,以确保实验的准确性和可重复性。

本文将介绍标准磷酸盐溶液的配制方法。

首先,我们需要准备好以下实验材料和试剂,磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二钠(Na2HPO4)、去离子水、PH计、电子天平、磁力搅拌器等。

接下来,我们按照以下步骤进行标准磷酸盐溶液的配制:1. 准备0.2 mol/L的磷酸二氢钾(KH2PO4)溶液。

首先,称取适量的磷酸二氢钾固体,并加入一定量的去离子水中,用磁力搅拌器充分搅拌,直至磷酸二氢钾完全溶解,得到所需浓度的磷酸二氢钾溶液。

2. 准备0.2 mol/L的磷酸二钠(Na2HPO4)溶液。

同样地,称取适量的磷酸二钠固体,并加入一定量的去离子水中,用磁力搅拌器充分搅拌,直至磷酸二钠完全溶解,得到所需浓度的磷酸二钠溶液。

3. 调节PH值。

将PH计插入已配制好的磷酸二氢钾溶液中,记录下PH值。

然后,向其中滴加适量的磷酸二钠溶液,同时用PH计监测PH值的变化,直至达到所需的PH值。

在调节PH值的过程中,需要缓慢搅拌,并且小心操作,以免PH 值超出范围。

4. 最后,用去离子水将溶液稀释至所需的体积,充分混合均匀。

通过以上步骤,我们就可以成功配制出标准磷酸盐溶液。

在实验操作中,我们可以根据需要调整磷酸二氢钾和磷酸二钠的比例,以得到不同浓度的磷酸盐溶液。

需要注意的是,在配制标准磷酸盐溶液的过程中,要注意实验操作的精准性和仪器的准确性。

另外,在调节PH值的过程中,要小心操作,避免PH值的突然变化。

配制好的标准磷酸盐溶液应保存在密封的容器中,并存放在阴凉干燥处,避免阳光直射。

总之,标准磷酸盐溶液的配制是实验操作中的重要环节,正确的配制方法和严格的操作流程可以确保实验结果的准确性和可重复性。

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生物试剂配制标准化操作流程
1.目的
确保试剂配制准确、有效。

2.范围
试剂研发部芯片组所用的生物试剂。

3. 器材与试剂
3.1. 器材
电子天平,称量匙,称量纸,移液枪,涡旋混合器,掌上离心机,磁力搅拌器,转子,玻璃棒,1L容量瓶,50ml容量瓶,100ml容量瓶,10ml容量瓶,1L烧杯,100ml烧杯,10ml烧杯,100ml量筒,10ml量筒,0.2μm孔径滤膜,1ml注射器,1.5ml离心管。

3.2. 试剂
EDC:1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Hydrochloride,1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亚胺,(191.7),密封、干燥、-20℃避光密闭保存。

MES:2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid,2-(N-吗啉代)乙磺酸,(213.2),室温干燥密闭保存。

Formamide:甲酰胺,(45.041),4℃密闭保存。

10g/ml Salmon DNA:鲑鱼精DNA,室温干燥密闭保存。

SDS:dodecyl sulfate,十二烷基硫酸钠,(288),室温干燥密闭保存。

1mol/L NaOH:氢氧化钠,(40.01),室温密闭干燥保存。

柠檬酸三钠·2H2O:Trisodium citrate,dihydrate,(294.1),室温干燥密闭保存。

NaCl:氯化钠,(58.44),室温干燥密闭保存。

1mol/L HCl:盐酸,(36.5),室温密闭保存。

4. 程序
4.1. MES(20mM,2×)配制:
4.1.1. 配制0.1M MES母液
4.1.1.1. 在干燥环境中用电子天平称取1.21524g MES于干净的100ml烧杯中。

4.1.1.2. 量取30ml蒸馏水溶解MES固体,加入数滴1mol/L NaOH调节pH至
5.1。

4.1.1.3. 把溶液转移到已经检查过的50ml容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加蒸馏水定容至50ml。

4.1.2. 配制20mM MES
4.1.2.1. 于无菌操作台内稀释0.1M MES母液至20mM(2ml 0.1M母液+8ml无菌水,即2×),分装至1.5ml离心管,全程无菌过滤,-20℃保存。

4.2. SSC洗液配制:
4.2.1. 20×SSC(1L)洗液配制:
4.2.1.1. 在干燥环境中用电子天平称取17
5.3g (3M) NaCl和88.2g (0.3M) 柠檬酸三钠·2H2O于1L的烧杯中。

4.2.1.2. 量取800ml去离子水溶解NaCl与柠檬酸三钠·2H2O,加入数滴1mol/L NaOH溶液调pH值至7.0。

4.2.1.3. 把溶液转移到已经检查过的1L容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至1L,分装后高压灭菌,室温密闭存放。

4.2.2. 10%SDS(100ml)配制:
4.2.2.1. 在干燥环境中用电子天平称取10g SDS。

4.2.2.2. 量取80ml去离子水加热溶解10g SDS。

4.2.2.3. 待溶液冷却至室温,加入数滴1mol/L HCl调pH至7.2。

4.2.2.4. 把溶液转移到已经检查过的100ml容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至100ml,室温密闭存放。

4.2.3. 2×SSC(1L)洗液配制:
4.2.3.2. 加入800ml去离子水加热溶解。

4.2.3.3. 待溶液冷却至室温,加入数滴1mol/L HCl调pH至7.0-7.2。

4.2.3.4. 把溶液转移到经检查过的1L容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至1L,室温密闭存放。

4.2.4. 0.2×SSC(1L)洗液配制:
4.2.4.1. 量取10ml 20×SSC与10ml 10% SDS于1L的烧杯中。

4.2.4.2. 加入800ml去离子水加热溶解。

4.2.4.3. 待溶液冷却至室温,加入数滴1mol/L HCl调pH至7.0-7.2。

4.2.3.4. 把溶液转移到经检查过的1L容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至1L,室温密闭存放。

4.3. EDC(10×)配制:
4.3.1. 在干燥环境中用电子天平精密称取适量的EDC粉末于离心管中。

4.3.2. 按EDC(mg):灭菌水(ml)=1:5的比例向装有EDC粉末的离心管中精确加入灭菌水。

4.3.3. 将装有EDC粉末和灭菌水的离心管竖直放置在涡旋混合器上混合均匀,然后于离心机上离心,室温放置(现用现配)。

4.4. HB(2×)配制:
4.4.1. 方法一:
4.4.1.1. 用适当规格的移液枪按以下体系依次准确移取试剂于离心管中。

20×SSC 2.5ml
10%SDS 200μl
Formamide 5ml
10 mg/ml Salmon DNA 100ul
灭菌水 2.2ml
4.4.1.2. 将装有样品的离心管竖直放置在涡旋混合器上混合均匀,然后于离心机上离心。

4.4.1.3. 于无菌操作台分装HB至1.5ml离心管中,-20℃保存备用。

4.4.2. 方法二:
4.4.2.1. 在干燥环境下用电子天平精确称取0.8765g NaCl和0.441g柠檬酸三钠·2H2O于10ml烧杯中,加入不超过5ml(约3ml)灭菌水,用玻璃棒搅拌,待溶解后调节PH至7.0。

4.4.2.2. 在干燥环境下用电子天平精确称取0.02g SDS和0.001g鲑鱼精DNA于烧杯中。

4.4.2.3. 用1000ul移液枪准确移取5ml Formimade于烧杯中,玻璃棒搅拌均匀。

4.4.2.4. 将烧杯中的液体转移至10ml容量瓶,用少量灭菌水洗涤烧杯和玻璃棒2~3次,洗涤液也转移至容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加灭菌水定容至10ml。

4.4.2.
5. 于无菌操作台分装HB至1.5ml离心管中,-20℃保存备用。

4.5. 模板点样液配制
4.5.1. 按以下体系移取试剂于离心管中。

EDC 1μl
MES 5μl
DNA(100μM)1μl
H2O 3μl
Total 10μl
DNA终浓度10μM。

4.5.2. 将装有样品的离心管竖直放置在涡旋混合器上混合均匀,然后于离心机上离心,室温放置待用。

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