粉针无菌分装机的清洁验证

粉针无菌分装机的清洁验证
在药品生产结束后，对生产设备进行清洁是防止药品污染和交叉污染的必要手段，清洁就是按规定的清洁消毒规程，将上一批次产品生产后、清洁过程产生的残留物除去，使残留物在设备中的量减少到不会影响下批产品的疗效、质量和安全性，对清洁的效果需进行验证。

本文对我公司粉针车间气流分装机进行清洁验证。

一. 试验仪器与材料
SPD-10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津)；
800B离心机(上海安亭)；
90×90 cm2 不锈钢板(与设备材质相同)；
灭菌棉签。

二. 方法与结果
1. 方法
用灭菌棉签在分装机表面直接擦拭取样﹝1,2﹞,用纯化水提取，检测。

检测方法参照中国药典﹝3﹞被检测物的含量测定方法检测药物残留，参照附录ⅪJ﹝3﹞检测微生物残留，结果与限量标准比较。

2. 清洁验证合格标准
根据可能存在的污染物确定检测对象，通常应包括上批药物残留物、清洁剂残留物、消毒剂残留物及微生物(细菌总数、霉菌数)。

因清洁消毒规程规定清洁剂为注射用水、消毒剂为75%乙醇，因此无需对其残留物进行检测，但需对上批药品残留物和微生物进行检测。

验证开始前，必需确定一个明确的残留物限量，达到或低于该限量时，可以认为设备的清洁消毒规程是可行的，设备是清洁的。

2.1. 药物残留限量
经该分装机分装的产品有注射用头孢唑林钠、注射用头孢呋辛钠、注射用头孢他啶三种，均可溶于水，对溶解度进行试验，見表1。

表 1 产品在水中溶解度试验结果(25℃)
清洁物质，因此在该清洁验证中将头孢呋辛钠确定为验证清洗对象。

参照有关资料﹝1﹞,药品每日最低剂量的0.1%为可接受的残留限量。

每支注射用头孢呋辛钠含头孢呋辛钠750mg，每日最低剂量1支× 3次 = 3支，共2250mg，即上批药物残留物(头孢呋辛钠)可接受的残留限量：≤ 2250μg。

2.2. 微生物限度
因为是无菌制剂，洁净室100级中与药粉接触的部分，不得长菌。

细菌总数限度： 0个/碟；霉菌数限度： 0个/碟。

3. 药品残留物分析方法的建立
检测方法：采用头孢呋辛钠含量检测方法对上清液进行检测。

参照中国药典规定﹝3﹞用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以PH 3.4醋酸-醋酸钠缓冲液(取0.1mol/L醋酸钠溶液50ml，加0.1mol/L醋酸溶液至1000ml)－乙腈(10:1)为流动相，检测波长为254nm。

取20μL上清液注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品适量，加水溶解并稀释成每1ml 中含50μg的溶液，同法测定。

3.1. 空白试验
对于取样用的棉签、设备表面，用纯化水提取进行空白试验。

取不锈钢板一块(约90×90cm2)，与设备材质相同，画线，使成若干个30×30 cm2方块，按无菌室分装机清洁消毒规程对试验材料进行清洁消毒，取三个方块，将3只棉签分别放入盛有10ml纯化水的离心管中湿润，分别擦拭方块，将棉签放回纯化水中洗涤，离心，取上清液检测，结果在254 nm波长处无吸收峰，表明试验材料对测定无干扰。

3.2. 线性关系和线性范围
精密称取对照品适量，加水溶解并稀释成2.5mg/ml的溶液，精密吸
取0.8、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0ml分别置100ml容量瓶中，加水至刻度，浓度分别为0.020mg/ml、0.025mg/ml、0.050mg/ml、0.100mg/ml、0.125mg/ml、0.150mg/ml，进样，峰面积与浓度的回归方程为：
Y = 1.23 × 104X －1.75 ×104,r = 0.9994，
即在0.020－0.150mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。

3.3. 精密度(重现性)
取上述浓度为0.050mg/ml对照品溶液连续进样5针，RSD为0.1%，小于预定值(RSD≤1%)，达到精密度试验要求。

3.4. 回收率
表面擦拭法引起的被检测物的损失主要是由棉签和设备表面的潴留引起的，我们提出被检测物的回收率限度≥70%，当回收率小于这个值时，方法应当修改。

最终检测结果将根据回收率的平均值进行调整，即检测结果将被平均回收率除，以补偿棉签和设备表面的潴留引起的损失。

在空白试验中的不锈钢板上选择9块面积为30×30 cm2方块，取浓度为0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.00mg/ml的头孢呋辛钠对照品溶液1ml 各3份，每1ml溶液均匀涂布于一块方块上，在环境温度下干燥过夜；每块方块取洁净脱脂棉签2支，经洁净纯化水(10ml/瓶)润湿后，沿垂直方向、水平方向擦拭整个表面，将棉签放回10ml纯化水的离管中洗涤、离心，取上清液检测，结果见表2
表2. 回收率试验结果
平均回收率大于70%，，表面回收率的RSD小于预定值(RSD≤5%)，达到回收率试验要求。

4. 残留物测定
生产注射用头孢呋辛钠后，按无菌分装机清洁消毒规程对分装机进行清洁消毒。

4.1. 药物残留───头孢呋辛钠
取洁净脱脂棉签4支，分别在2瓶清洁纯化水(10ml/瓶)中润湿，对设备上2块面积为30×30 cm2的表面进行均匀擦拭取样，将棉签放回10ml纯化水的离心管中洗涤、离心，取上清液检测。

每次设备生产、清洁后按上述方法检测1次，共作6次。

结果用回收率校正，见表3。

表3. 头孢呋辛钠残留测定结果
校正值 = 测定值平均回收率 = 测定值0.7317；设备接触药粉的内表面积为4200 cm2,因此设备残留量 = 校正值×(4200/900)。

结果药物残留量符合限度要求。

4.2. 微生物残留───细菌、霉菌
用无菌棉签8支,分别经8瓶无菌纯化水(1ml/瓶)润湿,对8块面积为15×15cm2的表面进行均匀擦拭取样,将棉签放回1ml/瓶无菌纯化水中洗涤,参照中国药典附录ⅪJ﹝3﹞检验,其中4瓶分别倒入普通琼脂培养基进行细菌的培养，4瓶分别倒入琥红培养基进行霉菌的培养。

每次设备生产、清洁后按上述方法检测1次，共作6次。

结果细菌总数、霉菌总数为0个/碟,符合微生物限度要求。

三. 讨论
粉针无菌分装机清洁消毒后,经验证,设备上残留物的量在可接受的限量范围內,验证结果合格,证明无菌分装机的清洁消毒规程用于粉针车间气流分装机的清洁消毒是有效的。

需要指出的是，当清洁消毒规程修改时,应重新制订清洁验证方案,开展新一轮的验证试验。

参考文献
1.邓海根：制药企业GMP管理实用指南﹝M﹞,北京中国计量出版社,2000：443-457。

2. 国家医药管理局修订GMP.GSP委员会.世界组织国家地区药品生产质量管理规范选编(一)﹝M﹞,北京中国医药科技出版社,1993：252。

3. 国家药典委员会编，中华人民共和国药典(二部)﹝M﹞,北京，化学工业出版社,2000：178-179、附录：92-102。