聚合酶链式反应实验报告
pcr实训报告
pcr实训报告
PCR实训报告
PCR（聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，用于扩增DNA 片段。
在本次实训中，我们学习了PCR的原理和操作方法，并进行了一系列实验，以加深对PCR技术的理解。
实验一：PCR反应体系的构建
在实验一中，我们构建了PCR反应体系，包括DNA模板、引物、dNTP、聚合酶、缓冲液和水。
通过反应体系的构建，我们了解了PCR反应体系中各个组分的作用，并掌握了反应体系的配制方法。
实验二：PCR扩增条件的优化
在实验二中，我们对PCR扩增条件进行了优化。
通过调整温度、引物浓度、模板浓度等参数，我们获得了最佳的PCR扩增效果，并得到了高品质的PCR产物。
在实验中，我们还学习了如何评估PCR 产物的质量和浓度。
实验三：PCR产物的检测和分析
在实验三中，我们对PCR产物进行了检测和分析。
通过凝胶电泳和文库测序技术，我们确定了PCR产物的大小和序列，并进行了序列比对和基因注释。
通过实验，我们深入了解了PCR产物的检测和分析方法，掌握了基本的生物信息学技能。
总结
通过本次实训，我们深入了解了PCR技术的原理和应用，掌握了PCR反应体系的构建和扩增条件的优化方法，学习了PCR产物的检测和分析技术。
本次实训为我们今后从事分子生物学研究奠定了基础，并为我们掌握更多高级技术和开展更深入的研究工作提供了重要的支持。
生化试验教材实验九：聚合酶链式反应
避免使用过期的试剂和仪器，以免影 响实验结果和造成安全隐患。
对于高温、高压、易燃、易爆、有毒 有害等危险品，应严格按照规定进行 管理和操作。
实验操作规范
01
在实验前应仔细阅读实 验步骤和注意事项，确 保对实验过程有充分的四种脱氧核苷酸， 即dATP、dCTP、dGTP和dTTP。
Taq DNA聚合酶
一种热稳定性的DNA聚合酶，负责 催化DNA的合成。
实验设备准备
01
02
03
04
PCR仪
提供PCR反应所需的温度循环 ，包括变性、退火、延伸等步 骤的温度设置和时间控制。
离心机
用于分离和纯化DNA、RNA 等生物分子。
结果验证与结论
结果验证
通过重复实验、使用不同引物或对 PCR产物进行测序等方法，验证结果 的可靠性和准确性。
得出结论
根据实验结果，可以得出关于基因表 达、变异或物种鉴定的结论。同时， 应注意结果的适用范围和局限性，以 及与文献报道的比较。
05 注意事项与安全
实验安全注意事项
实验前应穿戴实验服和防护眼镜，确 保个人防护措施到位。
移液器
精确移取和混合各种试剂。
显微镜
观察细胞和组织样本，以及 PCR扩增产物的大小和形态。
实验试剂准备
01
02
03
Buffer
一种化学试剂，用于维持 溶液的酸碱度和离子浓度， 以稳定酶的活性和促进酶 促反应的进行。
MgCl2
提供PCR反应所需的镁离 子，镁离子是Taq DNA聚 合酶的激活剂。
去离子水
环境和人体造成危害。
聚合酶链式反应pcr实验报告 -回复
聚合酶链式反应pcr实验报告-回复聚合酶链式反应(PCR)实验报告引言：PCR，全称为聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，是一种用于迅速扩增DNA序列的技术，由凯里穆利斯于1983年首次提出，并于1985年由Mullis和Faloona首次报道。
PCR具有高灵敏度、高特异性、高效率等优点，广泛应用于基因组学、医学诊断、法医学鉴定、分子进化等领域。
实验目的：本实验旨在通过PCR技术，对DNA序列进行扩增，并测试PCR反应的影响因素，如模板DNA浓度、引物浓度、反应体系中酶和核苷酸的用量等，以优化PCR反应条件。
实验材料和方法：1.实验材料：1.1 模板DNA：提供两个已知DNA序列的模板，标记为M1和M2。
1.2 引物：两对特异性引物，标记为F1/R1和F2/R2。
1.3 PCR试剂盒：包括酶、缓冲液、dNTPs等。
1.4 ddH2O：去离子水。
1.5 1.5琼脂糖凝胶：用于电泳分析。
2.实验操作：2.1 PCR反应体系的配制：- M1反应：加入4μL M1模板DNA、1μL F1引物（10μM）、1μL R1引物（10μM）、12.5μL PCR Master Mix和6.5μL ddH2O，总体积为25μL。
- M2反应：加入4μL M2模板DNA、1μL F2引物（10μM）、1μL R2引物（10μM）、12.5μL PCR Master Mix和6.5μL ddH2O，总体积为25μL。
2.2 PCR反应条件设置：- 初始变性：94，4分钟。
- 变性：94，30秒。
- 结合：56，30秒。
- 延伸：72，1分钟。
- 延伸终止：72，7分钟。
- 等待：4。
2.3 PCR扩增：连续重复步骤2.2中的变性、结合和延伸步骤30次。
2.4 电泳分析：将PCR产物与DNA量标Marker混合，用1.5琼脂糖凝胶电泳分析。
实验结果：1. PCR扩增结果：在实验过程中，通过PCR成功扩增了M1和M2的DNA序列。
聚合酶链反应实验报告.doc
聚合酶链反应实验报告.doc本实验的目的就是掌握聚合酶链反应（PCR）技术，了解PCR的重要性及应用范围，并能够进行PCR反应。
同时，还需要掌握DNA提取、纯化及定量的方法。
实验步骤如下：1、提取DNA样本。
收集细胞或组织样品，用细胞裂解液将样品细胞溶解后，按照DNA 纯化Kit说明书进行提取。
2、用琼脂糖凝胶电泳分析提取到的DNA。
分离出大小适中的DNA片段，然后进行提取和纯化。
3、用分光光度仪将提取到的DNA测定浓度。
根据文献报道，优选浓度为100ng/μL。
4、用PCR技术扩增目标DNA。
设计引物，设置PCR反应参数。
将PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，分离并图示PCR产物。
结果分析：分析分离出的DNA片段，指出PCR反应是否成功。
如果PCR反应成功，则可以扩增出目标DNA。
如果目标DNA被扩增，就在PCR反应所需时间内，将PCR反应产物进行凝胶电泳分析并使用紫外线摄影拍摄。
通过与标准品对照样品进行比较，可以确定PCR反应产物的大小。
如果PCR反应产物大小与目标DNA大小相符，则可以认为反应成功。
总结：PCR技术是现代生物技术中最具代表性的方法之一，不仅应用广泛，而且其原理简单易懂，容易操作。
在实验过程中，我们能够掌握PCR技术的基本原理及实验方法，并且了解了各种实验步骤的重要性。
在日常科研中，PCR技术被广泛应用于基因修饰、基因克隆、基因表达分析、基因家庭的鉴定等领域中。
由于PCR技术的高效性和可靠性，与其他技术相比，PCR技术具有独特的优势，被广泛认可。
聚合酶链式反应鉴定断裂基因实验报告
聚合酶链式反应鉴定断裂基因实验报告一、实验介绍聚合酶链式反应（PCR）是一种常用的分子生物学技术，能够在体外扩增DNA序列。
本实验旨在利用PCR技术鉴定断裂基因。
二、实验步骤1. DNA提取：从样本中提取DNA。
2. PCR反应：将DNA模板与引物、Taq聚合酶和dNTPs混合，进行PCR反应。
3. 凝胶电泳：将PCR产物进行凝胶电泳，观察结果。
三、实验材料和仪器1. 样本：含有待检测的断裂基因的组织或细胞。
2. DNA提取试剂盒：如TIANamp DNA纯化试剂盒。
3. PCR试剂盒：包含引物、Taq聚合酶和dNTPs等。
4. 凝胶电泳试剂盒：如TBE缓冲液、琼脂糖等。
5. 电泳仪：用于凝胶电泳。
四、实验结果经过PCR反应和凝胶电泳后，可以得到PCR产物带。
如果样品中存在目标基因，则可以在相应位置看到明显的带；如果不存在，则没有明显带出现。
根据带的大小还可以初步判断基因的大小。
五、实验注意事项1. 样品中的DNA应该纯度高，不能有杂质。
2. PCR反应条件要严格控制，包括反应温度、时间和引物浓度等。
3. 凝胶电泳时，电场强度不宜过大，以避免样品损伤。
六、实验意义PCR技术可以快速、准确地鉴定断裂基因，有助于诊断某些疾病。
此外，PCR技术还可以用于基因工程、遗传学研究等领域。
七、实验优化1. 引物设计：引物的选择和设计对PCR反应的成功与否至关重要。
合适的引物能够提高PCR反应的特异性和灵敏性。
2. PCR条件优化：反应温度、时间和引物浓度等条件都会影响PCR反应的结果。
通过不断调整这些条件，可以得到最佳的PCR产物。
3. 凝胶电泳优化：凝胶电泳时，电场强度和琼脂糖浓度也会影响结果。
根据需要进行相应调整即可。
八、总结本实验利用PCR技术鉴定断裂基因，通过DNA提取、PCR反应和凝胶电泳等步骤，得到PCR产物带。
实验过程中需要注意引物设计、PCR条件优化和凝胶电泳优化等方面。
PCR技术在生命科学研究中具有广泛的应用前景。
pcr技术实验报告
pcr技术实验报告PCR技术实验报告引言PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，它能够在短时间内扩增DNA片段，从而使得微量的DNA得以扩增至足够多的量进行进一步的分析和研究。
本实验旨在通过PCR技术扩增目标DNA片段，验证其在实验条件下的可行性和准确性。
实验方法1. 样品准备：从细胞或组织中提取DNA，并进行纯化处理。
2. PCR反应体系的准备：按照所需的PCR反应体系配制反应液。
3. PCR扩增：将DNA模板加入PCR反应管中，进行PCR扩增反应。
4. 扩增产物分析：将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
实验结果通过PCR技术扩增，成功获得了目标DNA片段，并在琼脂糖凝胶电泳中观察到了明显的扩增产物条带。
实验结果表明PCR技术在实验条件下具有较高的可行性和准确性，能够快速、高效地扩增目标DNA片段。
讨论本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的分子生物学研究提供了可靠的技术支持。
同时，本实验还表明PCR技术在分子诊断、基因克隆等领域具有重要的应用前景。
结论通过PCR技术实验，成功扩增了目标DNA片段，并验证了其在实验条件下的可行性和准确性。
PCR技术的高效、快速特点使其在分子生物学研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。
总结PCR技术作为一种重要的分子生物学技术，已经成为现代生命科学研究中不可或缺的工具。
本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的研究和应用提供了可靠的技术支持。
PCR技术的不断发展和完善，将为生命科学领域的研究和临床诊断带来更多的可能性和机遇。
pcr检测实验报告
pcr检测实验报告PCR检测实验报告引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种在分子生物学中广泛应用的技术，通过扩增目标DNA片段，使其数量增加到可以被检测的水平。
本实验旨在利用PCR技术对特定基因进行检测，并分析其在不同样本中的表达情况。
实验方法：1. 样本收集：从不同来源的细胞或组织中提取DNA。
本实验选择了人体血液样本，采用血液抽取器获取血液样本。
2. DNA提取：使用商业DNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行DNA提取。
通过离心和洗涤等步骤，获得高质量的DNA样本。
3. PCR反应体系准备：根据实验需要，制备PCR反应液。
反应液中包含DNA 模板、引物、酶和缓冲液等成分。
确保反应体系中各组分的浓度和比例正确。
4. PCR扩增：将PCR反应体系加入PCR仪器中，按照设定的温度和时间程序进行扩增。
PCR反应过程包括变性、退火和延伸等阶段，使目标DNA片段得到扩增。
5. PCR产物检测：将PCR产物进行凝胶电泳分析。
将PCR产物与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，通过电泳分离，观察PCR产物的大小和带电性。
使用紫外线照射，观察凝胶上的DNA条带。
实验结果：通过PCR反应和凝胶电泳分析，我们成功扩增了目标基因的DNA片段，并观察到了相应的DNA条带。
根据凝胶上的条带大小，我们可以初步判断目标基因在不同样本中的表达情况。
讨论：PCR技术在分子生物学研究中具有广泛的应用前景。
通过PCR扩增，可以快速、高效地获取目标基因的大量DNA片段，为后续的测序、克隆和表达研究提供了基础。
本实验中，我们选择了血液样本作为PCR反应的起始材料，这是因为血液中含有丰富的DNA，且采集较为方便。
然而，不同样本的DNA提取过程会存在一定的差异，可能会对PCR反应的结果产生影响。
因此，在实际应用中，需要根据具体样本的特点和实验目的，进行合适的DNA提取方法选择和优化。
此外，在PCR反应中，引物的选择也是至关重要的。
引物的设计应考虑目标基因的特异性，避免与其他非目标基因发生扩增。
聚合酶链式反应
实验9 聚合酶链式反应（PCR）技术【实验目的】掌握PCR反应的原理及操作技术。
【实验原理】PCR 技术实际上是在模板DNA、引物和4 种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于耐高温DNA 聚合酶的体外酶促合成反应。
PCR 技术的特异性取决于引物和模板DNA 结合的特异性。
反应分为三步：1 热变性：在高温条件下，DNA 双链解离形成单链DNA；2 退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链；3 延伸：在DNA 聚合酶、dNTPs 和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA 链延伸反应。
以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA 片段得到了大量复制，数量可达到10 6~7个拷贝。
【器材与试剂】1．器材DNA 扩增仪（PCR 仪）、台式离心机、微量取液器、硅烷化的PCR 小管、琼脂糖凝胶电泳系统2．材料模板DNA，单、双链DNA均可作为PCR的样品。
3．试剂(1) 10×PCR 缓冲液(2) MgCl2 15mmol/L(3) dNTP 混合物：每种2.5mmol/L(4) Taq DNA 聚合酶：5U/μl(5) 引物1和引物2：2 μmol/L(6) 琼脂糖凝胶电泳试剂【操作步骤】1. 在0.2ml Eppendorf 管内依次混匀下列试剂，配制20μl 反应体系。
ddH2O 7.8 μl10×PCR 缓冲液 2 μlMgCl2（15mmol/L） 2 μldNTP（2.5mmol/L） 2 μl引物1 (2μmol/L) 2 μl引物2 (2μmol/L) 2 μl模板DNA 2 μlTaq DNA 聚合酶（5U/μL）0.2 μl总体积20 μl2．按下述循环程序进行扩增程序阶段程序名称温度时间循环数1 预变性94℃ 3 min 1变性94℃30 sec2 退火52℃30 sec30延伸72℃30 sec3 保温4℃∞ 13．扩增结束后，取10μl 扩增产物进行电泳检测。
聚合酶链式反应 实验报告
聚合酶链式反应实验报告《聚合酶链式反应实验报告》摘要：本实验旨在利用聚合酶链式反应（PCR）技术，对特定DNA片段进行扩增，以验证PCR技术在分子生物学研究中的应用。
实验结果表明，PCR技术能够快速、准确地扩增特定DNA片段，为分子生物学研究提供了重要的技术支持。
引言：PCR技术是一种能够在体外扩增特定DNA片段的技术，它的应用领域非常广泛，包括基因克隆、基因检测、DNA指纹分析等。
PCR技术的核心是聚合酶链式反应，通过该反应可以在短时间内扩增目标DNA片段，为分子生物学研究提供了重要的技术手段。
材料与方法：1. 实验材料：PCR试剂盒、目标DNA模板、引物、Taq聚合酶等。
2. PCR反应条件：预变性步骤（95°C，5分钟），30个循环（95°C，30秒；55°C，30秒；72°C，1分钟），最终延伸步骤（72°C，10分钟）。
3. PCR产物分析：利用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行分析。
结果：经过PCR反应，我们成功地扩增出了目标DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳结果显示，在PCR反应后，出现了明显的目标DNA条带，证明了PCR技术的有效性和准确性。
讨论：本实验结果表明，PCR技术能够快速、准确地扩增特定DNA片段，为分子生物学研究提供了重要的技术支持。
通过PCR技术，我们可以在短时间内获得大量目标DNA片段，为基因克隆、基因检测等研究提供了便利。
同时，PCR技术还可以用于DNA指纹分析、疾病诊断等领域，具有广阔的应用前景。
结论：本实验验证了PCR技术在分子生物学研究中的重要应用，为进一步深入研究基因克隆、基因检测等领域提供了重要的技术支持。
PCR技术的快速、准确和高效特点，使其成为分子生物学研究中不可或缺的技术手段。
希望通过本实验的结果，能够更好地推动PCR技术在生物学领域的应用和发展。
pcr实习报告
pcr实习报告PCR 实习报告一、引言PCR（聚合酶链式反应，Polymerase Chain Reaction）是一种基因分子生物学技术，通过扩增目标DNA序列，以在研究、诊断和治疗等领域中发挥重要作用。
本报告旨在总结我在PCR实习过程中的经验和收获，以及对PCR技术的理解和应用。
二、实习背景1. 实习时间和地点我在2021年7月至8月期间，在XXX实验室进行了为期六周的PCR实习。
2. 实习目的通过实习，我旨在学习和掌握PCR技术的操作流程和实验方法，提高实验操作技巧，并对PCR技术的原理和应用进行深入了解。
三、实习内容1. PCR反应体系准备在实习的第一周，我了解了PCR反应的基本原理，并学会了准备PCR反应所需的体系。
我们根据实验的需要，合理调配了引物、模板DNA、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液等成分，并掌握了合适的反应体系比例和浓度。
2. PCR仪使用及参数设置在第二周实习中，我学习了PCR仪的基本使用方法，并掌握了合理设置PCR反应的温度和时间参数。
通过调整PCR反应体系的温度控制和循环程序，我们能够实现DNA的变性、退火和延伸等步骤，从而实现DNA序列的扩增。
3. PCR实验操作技巧在实习的后几周，我逐渐掌握了PCR反应的实验操作技巧。
比如，我学会了如何进行组装反应体系、合理分装试剂和样品、装填样品到PCR管或板中，并且注意实验操作的无菌技巧和杂交污染的防控。
4. PCR产物分析与检测实习的最后一周，我学习了PCR产物的分析和检测方法。
我们运用凝胶电泳技术，对PCR产物进行了分离和检测，并通过比对DNA分子量标准，进行PCR产物的大小测定和验证。
四、实习心得和收获1. 对PCR技术的深入理解通过本次实习，我对PCR技术的原理和应用有了更深入的理解。
我明白PCR技术的基本原理是通过反复循环的热变性、退火和延伸步骤，在体系中扩增目标DNA序列。
并且我了解到PCR技术在遗传学研究、分子诊断和基因工程等领域中的广泛应用。
聚合酶链反应实验报告
实验名称：聚合酶链反应（PCR）实验一、实验目的1. 了解聚合酶链反应（PCR）技术的原理和操作步骤；2. 掌握PCR实验的基本操作技巧；3. 学会使用PCR技术扩增目的DNA片段。
二、实验原理聚合酶链反应（PCR）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术。
其原理类似于DNA的天然复制过程，通过高温变性、低温退火和适宜温度下的延伸三个步骤，实现对目的DNA片段的指数级扩增。
1. 变性：将模板DNA加热至94℃左右，使DNA双链解离成单链；2. 退火：将温度降至55℃左右，使引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3. 延伸：将温度升至72℃左右，在Taq聚合酶的作用下，以dNTP为原料，按碱基互补配对原则，合成新的DNA链。
三、实验材料1. 模板DNA：含有目的DNA片段的基因组DNA或cDNA；2. 引物：针对目的DNA片段设计的一对特异性引物；3. dNTPs：四种脱氧核糖核苷酸（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）；4. Taq聚合酶：耐高温的DNA聚合酶；5. PCR反应缓冲液：含有Mg2+、K+、(NH4)2SO4等成分；6. 石蜡油：用于封闭PCR管口，防止水分蒸发；7. 水浴加热器：用于加热PCR反应体系；8. 紫外线灯：用于检测PCR产物。
四、实验步骤1. 配制PCR反应体系：根据实验设计，将模板DNA、引物、dNTPs、Taq聚合酶、PCR反应缓冲液等试剂加入PCR管中，总体积一般为50μl；2. 加热变性：将PCR管放入水浴加热器中，95℃加热5分钟，使模板DNA变性成单链；3. 退火：将温度降至55℃左右，加入引物，继续加热5分钟，使引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；4. 延伸：将温度升至72℃左右，加入Taq聚合酶，继续加热30秒，使DNA聚合酶在dNTPs的作用下，按碱基互补配对原则，合成新的DNA链；5. 循环：重复步骤2-4，进行30-40个循环；6. 最终延伸：将温度升至72℃左右，继续加热5分钟，使PCR产物完全合成。
聚合酶链式反应PCR实验报告
1、 实验原理 聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体 外快速扩增特异DNA片段的技术。它应用热稳定的聚合酶，通过双链 DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数 方式增加了百万倍。从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起 始，可产生ug量的PCR产物。
1．H2O 12μl 2．模板 1μl 3．引物T7 1μl 4．引物 sp6 1μl 5．2*PCRmix 15μl PCR仪的热循环反应 把离心管放入PCR仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模 板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链， 以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
2、 器材与试剂 1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波 炉，电子天平，紫外照色仪
2.试剂：引物，模板，Taq DNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与 Mg2+，H2O, 2*PCRmix溶液，DNA染料
3、 实验步骤 PCR反应体系的建立 取离心管，依次加入试剂混匀
2. 模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后， 温度降至56℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
3. 引物的延伸：经加热至72℃左右DNA模板--引物结合物在TaqDNA 聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基 互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的 半保留复制链。重复该循环30次，每次需要2-3分钟。
2. 变性温度低，变性时间短， 极有可能出现假阴性;退火 温度过低，可致非特异性扩 增而降低特异性扩增效率退 火温度过高影响引物与模板 的结合而降低PCR扩增效 率。
聚合酶链式反应实验报告
聚合酶链式反应实验报告篇一：PCR实验报告普通生物学实验报告实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉一、特异性目的片段DNA的扩增（一）实验原理聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，其基本原理为DNA的半保留复制。
PCR技术由①高温变性模板；②引物与模板退火；③引物沿模板延伸这3步反应组成一个循环，通过多次循环反应，目的DNA 得以迅速扩增。
其主要步骤是：将模板DNA置于高温下（通常为93℃-94℃），使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因的两条单链互补结合；热稳定DNA聚合酶（Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板按5’→ 3’的方向延伸，合成互补链。
本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。
以不同物种来源的动物DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现。
应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分。
（二）实验步骤按下表将各成分分别加入一做好标记的无菌PCR管中，配制50μl的PCR反应体系，注意酶要最后加，加完后将PCR管放置在冰上。
2.将上述混合液稍加离心，约10s左右。
取下后立即置于PCR仪中，盖紧热盖，定好PCR仪的反应程序，执行扩增程序。
反应程序为：预变性94℃ 5min变性94℃ 5s退火50℃ 5s延伸72℃ 20s后延伸72℃ 5min3.反应结束后，终止程序，将PCR管取出，放置于4℃，待电泳检测。
循环30次二、水平式琼脂糖凝胶电泳法鉴定PCR产物（一）实验原理核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液（pH 8.0-8.3)中，其碱基不解离，而磷酸集团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。
琼脂糖主要是从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子。
医学实验pcr检验实验报告
医学实验pcr检验实验报告标题：PCR检验实验报告引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学实验技术，用于扩增DNA片段，并能够在非常小的样本中检测RNA或DNA的存在。
本报告旨在介绍PCR 检验实验的原理、步骤和结果分析。
一、实验原理：PCR是通过不断重复三个步骤来扩增DNA片段的方法。
这三个步骤是变性、退火和延伸。
首先将待扩增的DNA样本变性，使其双链DNA分离为两个单链DNA。
然后，通过引物（primer）与DNA单链的互补序列结合，使引物与DNA序列配对。
最后，使用DNA聚合酶在引物的指导下合成新的DNA链。
通过不断重复这三个步骤，可以在很短的时间内扩增出大量的特定DNA片段。
二、实验步骤：1. DNA提取：从待检测的样本中提取DNA，常用的DNA提取方法包括酚/氯仿法、热沉淀法等。
2. 反应体系配置：根据实验需求，在试管中配置PCR反应体系，包括DNA模板、引物、酶、缓冲液等。
3. PCR反应：使用热循环仪进行PCR反应，设置好反应的温度和时间，常见的PCR程序一般包括初始变性、循环变性、退火和延伸等步骤。
4. 凝胶电泳：将PCR反应体系中的产物进行凝胶电泳分析，以确定扩增的DNA 片段大小和纯度。
三、实验结果分析：1. 扩增曲线分析：观察PCR反应的扩增曲线，根据曲线形状和峰值大小判断PCR反应的效果。
2. 凝胶电泳结果分析：通过凝胶电泳分析PCR产物，可以确定扩增的DNA片段的大小和数量。
3. 阳性对照和阴性对照：设置阳性对照和阴性对照可以判断PCR反应体系的可靠性和准确性。
结论：PCR是一种常用的分子生物学技术，可以迅速高效地扩增DNA片段。
通过实验原理的介绍和实验步骤的详细说明，我们可以掌握PCR实验的基本操作方法。
实验结果的分析和结论部分，可以根据实际实验情况进行详细的阐述，包括扩增曲线、凝胶电泳结果等。
实验报告的撰写应该科学准确、简明扼要，以便他人能够理解和重复实验。
pcr实验报告
pcr实验报告引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，被广泛应用于基因工程、疾病诊断、法医学鉴定等领域。
本文将对PCR实验进行详细介绍和分析，以及探讨其应用前景。
一、PCR实验的原理PCR实验的核心是ACGT四种碱基序列的扩增，通过逐温度调节反应体系中的DNA、聚合酶和引物，实现特定DNA片段的高效扩增。
PCR的步骤主要包括变性、退火和延伸。
二、PCR实验的操作步骤1.收集样本：根据实验目的，选择合适的样本进行收集。
可能是细胞、组织或者血液等。
2.样本处理：对采集的样本进行必要的处理，如DNA的提取和纯化等。
3.引物设计：根据扩增目标，设计适当的引物序列，确保引物的特异性和合适的长度。
4.实验准备：制作PCR反应体系，包括缓冲液、聚合酶、引物和模板DNA等。
5. PCR反应：按照预设的PCR程序进行反应，包括变性、退火和延伸等环节，反复循环多次。
6. PCR产物分析：使用凝胶电泳等方法，对PCR产物进行分析和验证。
三、PCR实验的应用PCR作为一种高效且快速的DNA扩增技术，广泛应用于生物医学领域。
以下是其中几个典型的应用：1.基因工程：PCR技术可以快速扩增目标基因序列，为基因克隆、基因表达等提供必要的材料。
2.疾病诊断：PCR在疾病的早期诊断方面发挥重要作用。
例如，可以通过PCR扩增确定感染病毒的存在，或者检测有无特定致病基因的突变。
3.法医学鉴定：PCR技术可以对微量的DNA进行扩增，为解决法医学鉴定中的亲子关系、个体识别等问题提供有力的手段。
4.环境监测：PCR技术可以用于环境样品中特定微生物的快速检测，例如水质监测、食品安全等领域。
四、PCR实验的优势和挑战PCR技术具有以下优势：1.高度特异性：通过合适的引物设计，可以针对性扩增目标DNA片段。
2.敏感性高：PCR对于微量DNA的识别和扩增能力非常强，且仅需少量的模板DNA。
3.速度快：PCR反应的时间通常在几个小时内完成。
聚合酶链式反应pcr实验报告
聚合酶链式反应pcr实验报告PCR实验报告引言：聚合酶链式反应（PCR）是一种常用的分子生物学技术，通过PCR可以在体外快速扩增DNA片段。
PCR技术的应用广泛，包括基因定量表达分析、基因突变鉴定、DNA遗传分析等。
本实验旨在通过PCR技术扩增目标DNA片段，并检测扩增产物，从而深入了解PCR的原理和操作步骤。
材料与方法：1. DNA提取试剂盒：包括裂解液、蛋白水解酶、去蛋白酶、洗涤缓冲液、洗涤试剂、洗涤溶液、洗涤瓶、洗涤纸、溶解液等。
2. PCR试剂盒：包括DNA模板、引物、酶、缓冲液、dNTPs等。
3. 扩增仪：用于PCR反应的温度控制与循环。
步骤：1. DNA提取和纯化：1. 将待提取的样品（如细胞、组织等）加入裂解液，并进行适当的荧光素酶处理，通过高速离心分离出DNA。
2. 添加去蛋白酶去除蛋白质，再加入洗涤缓冲液洗涤DNA沉淀物。
3. 使用洗涤试剂和洗涤溶液重复洗涤程序，最后用溶解液溶解DNA。
2. PCR扩增反应：1. 准备PCR反应体系，将DNA模板、引物、酶、缓冲液、dNTPs等按照一定比例混合在一起。
2. 将PCR反应管置于扩增仪中，设定合适的温度梯度和反应循环次数。
3. 进行PCR反应，通过温度梯度和循环过程使DNA扩增。
3. 扩增产物检测：1. 将PCR扩增产物取出，使用琼脂糖凝胶电泳进行分析。
2. 准备琼脂糖凝胶，将扩增产物与DNA分子量标准样品一同加载到琼脂糖凝胶槽中。
3. 开启电泳设备，进行电泳分离，根据扩增产物的大小和形态进行分析和鉴定。
结果与讨论：本实验成功地通过PCR技术扩增了目标DNA片段，并通过琼脂糖凝胶电泳分析了扩增产物。
PCR反应的条件对于扩增产物的准确性和效率起着关键作用。
合理设计和优化PCR反应的条件，包括引物浓度、DNA模板浓度、PCR循环温度参数等，可以提高扩增的产物质量和得率。
琼脂糖凝胶电泳分析结果显示，扩增产物的大小与预期的目标DNA片段大小相一致。
QPCR实验报告
QPCR实验报告一、实验目的本实验旨在通过实时荧光定量聚合酶链式反应（QPCR）技术，对特定基因的表达水平进行定量分析，以探究其在不同实验条件下的变化情况。
二、实验原理QPCR 是一种基于 PCR 技术的核酸定量方法。
在 PCR 反应体系中加入荧光染料或荧光标记的探针，随着 PCR 反应的进行，荧光信号不断累积。
通过检测荧光信号的强度变化，可以实时监测 PCR 反应的进程，并根据标准曲线对未知样品中的核酸浓度进行定量。
三、实验材料与设备1、实验材料提取的总 RNA 样品反转录试剂盒特异性引物QPCR 试剂盒2、实验设备实时荧光定量 PCR 仪离心机移液器微量核酸定量仪四、实验步骤1、 RNA 提取从细胞或组织中提取总 RNA，使用微量核酸定量仪测定 RNA 的浓度和纯度。
2、 cDNA 合成以提取的 RNA 为模板，使用反转录试剂盒合成 cDNA。
3、 QPCR 反应体系配制根据试剂盒说明书，配制 QPCR 反应体系，包括引物、cDNA 模板、PCR 反应液等。
4、 QPCR 反应将配制好的反应体系加入到 PCR 反应管中，放入实时荧光定量PCR 仪中进行反应。
反应条件通常为：95°C 预变性 30s，然后进行 40个循环，每个循环包括 95°C 变性 5s，60°C 退火/延伸 30s。
5、数据分析反应结束后，使用 PCR 仪自带的软件分析荧光数据，得到 Ct 值（Cycle threshold，循环阈值）。
根据标准曲线计算样品中目的基因的相对表达量。
五、实验结果1、标准曲线以不同浓度的标准品进行 QPCR 反应，绘制标准曲线。
标准曲线的线性关系良好，R²值大于 099，表明定量结果可靠。
2、样品检测结果实验样品中目的基因的 Ct 值如表 1 所示。
｜样品编号|目的基因 Ct 值|｜｜｜｜1|＿____|｜2|＿____|｜3|＿____|根据标准曲线和样品的 Ct 值，计算得到目的基因在不同样品中的相对表达量，结果如表 2 所示。
实验二PCR扩增(聚合酶链式反应)
实验二 PCR扩增（聚合酶链式反应）一、实验目的1.学习聚合酶链式反应概念及技术方法；2.掌握聚合酶链式反应操作过程。
二、实验原理（聚合酶链式反应）PCR是聚合酶链式反应，是以单链DNA为模板，4种dNTP为底物，在模板3’末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。
在微量离心管中，加入与待扩增的DNA片段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA膜板、四种dNTP溶液、耐热Taq DNA聚合酶、Mg2+等。
反应时先将上述溶液加热，使模板DNA在高温下变性，双链解开为单链状态；然后降低溶液温度，使合成引物在低温下与其靶序列配对，形成部分双链，称为退火；再将温度升至合适温度，在Taq DNA聚合酶的催化下，以dNTP为原料，引物沿5’→3’方向延伸，形成新的DNA片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此重复改变温度，由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期，反复循环，使目的基因得以迅速扩增。
因此PCR循环过程为三部分构成：模板变性、引物退火、热稳定DNA聚合酶在适当温度下催化DNA链延伸合成1．模板DNA的变性模板DNA加热到90-95℃时，双螺旋结构的氢键断裂，双链解开成为单链，称为DNA的变性，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。
变性温度与DNA中G-C含量有关，G-C间由三个氢键连接，而A-T间只有两个氢键相连，所以G-C含量较高的模板，其解链温度相对要高些。
故PCR中DNA变性需要的温度和时间与模板DNA的二级结构的复杂性、G-C含量高低等均有关。
对于高G-C含量的模板DNA在实验中需添加一定量二甲基亚砜（DMSO），并且在PCR循环中起始阶段热变性温度可以采用97℃，时间适当延长，即所谓的热启动。
2．模板DNA与引物的退火将反应混合物温度降低至37-65℃时，寡核苷酸引物与单链模板杂交，形成DNA模板-引物复合物。
PCR(聚合酶链式反应)实验报告
– 用量：25ml 大小的胶需要2.0 g的琼脂糖凝胶固体。 若目的DNA片段量过小可增加琼脂糖凝胶的浓度； 相反，若DNA片段过大，可降低琼脂糖凝胶的浓度
– 方法：配胶用单蒸水溶解，在微波炉中加热，放置 微烫手，再加入核酸染液约20微升，可倒入胶板中 等待凝固
• 加样
– 在一次性手套上将Loading Buffer 与样液混匀 （6×Loading Buffer为Loading Buffer：样液=1：5）
保种
• 保种液：
– 25%甘油：将菌液低转速（5000rpm）大约离 心2600ml 的菌液（2管离心管）
– 50%甘油：将菌液和保重液同体积混合
• 保种贮藏
– 加入600~700微升的保种液，放置在-80度中 （保种管、离心管）保存
生物膜的抑膜与解膜
• 抑膜与解膜的定义：抑膜是在细菌生长的同时 加入化合物是细菌不成膜；解膜是利用化合物 降解已存在的细胞膜。
– 实验设计：
• 对照：Msgg培养基+菌液 • 阴性对照：Msgg培养基+菌液+DMSO • 实验组：Msgg培养基+菌液+不同浓度梯度的化合物
– 实验、铜绿假单胞菌、金黄色 葡萄球菌均有抑制作用，且浓度越高抑制作用越强
– 延伸
• 温度：72度 • 过程：DNA酶催化DNA互补链的延伸
– 循环（大约循环20~30次）
• 3.反应成分
– 模板DNA、引物、dNTP、Mix 缓冲液（DNA 聚合酶、镁离子）、去离子水
• 4.方向：5’~3’ • 5.产生数量
• 反应初期以指数形式增加，之后进入平台期
聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验报告
2019.7.29~2019.9.1
聚合酶链式反应PCR实验报告
实验二聚合酶链式反应（PCR）（一）一、实验原理聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。
它应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数方式增加了百万倍。
从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始，可产生ug量的PCR产物。
二、器材与试剂1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪2.试剂：引物，模板，TaqDNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O, 2*PCRmix 溶液，DNA染料三、实验步骤PCR反应体系的建立取离心管，依次加入试剂混匀1．H2O 12μl2．模板1μl3．引物T7 1μl4．引物sp6 1μl5．2*PCRmix15μlPCR仪的热循环反应把离心管放入PCR仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成1.模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2.模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3.引物的延伸：经加热至72℃左右DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
重复该循环30次，每次需要2-3分钟。
电泳检测结果扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。
四、讨论1.Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
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聚合酶链式反应实验报告篇一：PCR实验报告普通生物学实验报告实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉一、特异性目的片段DNA的扩增（一）实验原理聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，其基本原理为DNA的半保留复制。
PCR技术由①高温变性模板；②引物与模板退火；③引物沿模板延伸这3步反应组成一个循环，通过多次循环反应，目的DNA 得以迅速扩增。
其主要步骤是：将模板DNA置于高温下（通常为93℃-94℃），使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因的两条单链互补结合；热稳定DNA聚合酶（Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板按5’→ 3’的方向延伸，合成互补链。
本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。
以不同物种来源的动物DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现。
应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分。
（二）实验步骤按下表将各成分分别加入一做好标记的无菌PCR管中，配制50μl的PCR反应体系，注意酶要最后加，加完后将PCR管放置在冰上。
2.将上述混合液稍加离心，约10s左右。
取下后立即置于PCR仪中，盖紧热盖，定好PCR仪的反应程序，执行扩增程序。
反应程序为：预变性94℃ 5min变性94℃ 5s退火50℃ 5s延伸72℃ 20s后延伸72℃ 5min3.反应结束后，终止程序，将PCR管取出，放置于4℃，待电泳检测。
循环30次二、水平式琼脂糖凝胶电泳法鉴定PCR产物（一）实验原理核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液（pH 8.0-8.3)中，其碱基不解离，而磷酸集团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。
琼脂糖主要是从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子。
使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。
（二）实验步骤称取2.4g琼脂糖，放入250ml的锥形瓶中，加入120ml1×TAE缓冲液，微波炉高火加热约40s直至沸腾，摇动，使琼脂糖分散，在重复煮沸2次，直至溶液澄清透明。
待琼脂糖温度降到60℃左右时，按1:200的浓度加入Golden View,混匀后倒入已插上合适齿孔梳子的模具中，静置，约30-45min后凝胶完全凝固。
轻轻的垂直拔出梳子，将凝胶取出，放入电泳槽中，添加1×TAE缓冲液至刚好没过凝胶（有样品孔的一端靠近负极）。
取15μlPCR产物与3μl的6×上样缓冲液混匀，加入到凝胶样品孔中。
每加完一个样品应更换一个吸头。
加样前，要记下加样的顺序。
在每排样品孔中留出一个位置加入5μl的marker。
加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压100V，样品由负极向正极移动。
当溴酚蓝移动到距离凝胶下缘约1/3时，停止电泳。
电泳完毕后，取出凝胶，采用凝胶成像系统拍照保存。
三、实验小结（一）实验结果PCR 产物电泳结果由上图可以看出，样品1和样品6出现了目的条带（大小约20bp），所以DNA模板1为猪肉DNA，DNA模板3为牛肉DNA,DNA模板2为兔肉DNA。
（二）实验讨论1.在加入Taq酶时，应始终保持酶在冰浴中，不可握在手中。
2.每加完一次酶，都应更换吸头。
因为在加酶时，吸头会插入液面以下，为防止污染，应更换吸头。
3.拔出梳子时，应两端一起用力，垂直，缓慢地拔出，以免破坏胶孔。
4.将样品与上样缓冲液混合时，要反复吸进，挤出溶液。
为防止出现较多气泡，在每次挤出溶液时，可在吸头中残留少量溶液。
5.在加样时，吸头要垂直于凝胶板且不要插入太深，以免破坏样品孔。
6.我们组的电泳图中，条带不是很明显，应该是加样时样品的量不够充足，以后应注意。
篇二：PCR实验报告pcr实验报告7月19日高遄实验目的：了解pcr技术原理，掌握最基础的pcr实验步骤。
实验试剂：模板dna，mg2+，buffer，dntps，taq dna聚合酶，引物，h2o，石蜡油。
实验原理：? pcr全称聚合酶链反应，是体外快速扩增特定基因或dna序列最常用的方法。
? 基本原理：首先将双链dna分子在临近沸点的温度下加热分离成2条单链dna分子，dna聚合酶以单链dna为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新的dna互补链。
pcr反应时，只要在试管内加入模板dna、pcr引物、四种核苷酸及适当浓度的mg2+，dna聚合酶就能在数小时内将目标序列扩增100万倍以上。
（1）双链模板dna分子首先在高温下解开成长的单链，短链引物分子立即与该模板dna两端的特定序列相结合，产生双链区。
（2） dna聚合酶从引物处开始复制其互补链，迅速产生与目标序列完全相同的复制品。
（3）在后续反应中，无论是起始模板dna还是经复制的杂合dna双链，都会在高温下解开成为单链，体系中的引物分子再次与其互补序列相结合，聚合酶也再度复制模板dna。
（4）由于在pcr反应中选用的一对引物，是按照与扩增区域两端序列彼此互补的原则设计的，因此每一条新生链的合成都是从引物的退火结合位点开始并朝反方向延伸的，每一条新合成的dna链上都有新的引物结合位点。
（5）整个pcr的反应全过程，即dna解链（变性）、引物与模板dna结合（退火）、dna合成（链的延伸）三步可以被不断重复。
经多次循环之后，反应混合物中所含有的双链dna分子数，即两条引物结合位点之间的dna区段的拷贝数，理论上的最高值应该是2^n，能进一步满足遗传分析的需要。
? 试剂作用：（1）引物：dna复制的起始点，针对复制dna片段的两端，有5’引物和3’引物（2） taq dna聚合酶：促进dntps与模板结合。
（3） buffer：tris-hcl反应缓冲液，taq dna聚合酶提供一个最适酶催反应条件。
（4） mg2+：对pcr扩增效率影响很大，浓度过高可降低pcr扩增的特异性，浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。
（5） dntps：底物，在引物引导下合成与模板互补的dna新链。
（6）石蜡油：防止pcr加热过程中dna蒸发。
? 试剂配置体积：（1）热启动：94℃，5~10min（2）变性：94℃，45~60s。
（3）退火：50~65℃，1min。
退火温度计算：tm-（5℃~10℃），tm（解链温度）=4（g+c）+2（a+t）。
（4）延伸：72℃，1~1.5min。
（5）步骤（2）~（4）热循环25~30个周期（6）保温：延伸72℃，10min? 产物检测：凝胶电泳。
实验步骤：（1）设计20μl体系各试剂配比：（2）按照预先设计的20μl体积配置6管试管量，实际加入量如下表（3）完成后分6管加入pcr管中，每管15μl体积，标注1-6号码。
（4）在前1-~4号pcr管中加入模板dna，在5号管中加入c3h模板作为阳性参照，6号中不加任何模板dna，作为阴性参照。
（5）在加完模板的6管试剂中各加入20μl石蜡油（6）将pcr管放入 pcr仪，按之前设定的加热温度与时间设置a．热启动：94℃，2min；80℃，1min；此时在各管中加入dntps 4μlb．变性：94℃，30s；c．退火：65℃，1.5min；d．延伸：72℃，2min步骤b~d循环40次e．保温：72℃，10min（7）完成后用3琼脂糖凝胶（60ml）电泳进行检测。
实验结果：pcr目标产物约为295bp琼脂糖凝胶电泳结果如下图所示1 2 3 4 5 6marker1、2号泳道为♂性小鼠dna模板的pcr产物 3、4号泳道为♀性小鼠dna模板的pcr产物 5号泳道为c3h阳性参照6号泳道为阴性参照由marker参照可知，pcr产物大小约为290~300bp篇二：聚合酶链式反应pcr实验报告实验二聚合酶链式反应（pcr）一、实验原理聚合酶链式反应（pcr）是利用dna片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异dna片段的技术。
它应用热稳定的聚合酶，通过双链dna模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，dna片段以指数方式增加了百万倍。
从非常微量的dna甚至单个细胞所含有的dna起始，可产生ug量的pcr产物。
二、器材与试剂1.器材：移液器，ep管，热盖pcr仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪2.试剂：引物，模板，taq dna聚合酶，原料（dntps），缓冲液与mg2+，h2o, 2pcrmi溶液，dna染料三、实验步骤pcr反应体系的建立取离心管，依次加入试剂混匀1．h2o 12μl2．模板1μl3．引物t7 1μl4．引物sp61μl5．2pcrmi15μlpcr仪的热循环反应把离心管放入pcr仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成1.模板dna的变性：模板dna经加热至94℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2.模板dna与引物的退火(复性)：模板dna经加热变性成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；3.引物的延伸：经加热至72℃左右dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
重复该循环30次，每次需要2-3分钟。
电泳检测结果扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。
四、讨论1.mg2+离子浓度对pcr扩增效率影响很大，浓度过高可降低pcr扩增的特异性浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。
2.变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低pcr扩增效率。
3.eb：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖中的dna，可与dna结合，用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。
4.溴酚蓝：电泳指示剂，相当于300bp的dna的电泳速度。
5.100bp dna markerⅰ是由单独的pcr扩增产物混合而成，已含有1loading buffer,可以直接电泳。
包括11条双链dna片断：100bp、20bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、1000bp和1500bp。