M蛋白的检测与鉴定(参考资料)

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智能识别鉴定M蛋白分型

智能识别鉴定M蛋白分型

6762 国际检验医学杂志2020年11月第41卷第21期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r2020,V o l.41,N o.21 论㊀㊀著智能识别鉴定M蛋白分型王仁浩1,谢㊀婧2,管仲斌1,谢松业1ә(1.上海兰卫医学检验所股份有限公司医学检验科,上海200335;2.澳大利亚阿德莱德大学,澳大利亚南澳大利亚州阿德莱德5005)㊀㊀摘㊀要:目的㊀计算机能做到与医学检验专家一样,智能快速准确地识别M蛋白的成分并鉴定出是哪一类型的M蛋白病.方法㊀采集免疫固定电泳后的样本图片,经电脑扫描后转换形成一维数据,为了便于智能化鉴定M蛋白成分,先在其中血清蛋白电泳中找到M蛋白带,再根据其他5个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.为了便于参数传递,将电泳峰值数据标准化纠正,以免不同因素引起偏差干扰.结果㊀如果待测患者的峰值(除清蛋白)比相应正常质控品峰值大,且峰高与峰宽之比大于4ʒ1即找到M蛋白带,根据是否有M蛋白带和健康人的免疫固定电泳6组的一维数据的峰高与峰宽的阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即患有M蛋白血症.结论㊀采用计算机编程可对免疫固定电泳图谱中血清蛋白电泳及各组分实现自动识别㊁分类㊁综合分析,给出正确鉴别结果,与传统方法比较无差异,可为临床医生鉴別诊断提供科学依据.关键词:智能;㊀M蛋白分型;㊀免疫固定电泳D O I:10.3969/j.i s s n.1673G4130.2020.21.027中图法分类号:R733.3;R730.45文章编号:1673G4130(2020)21G2676G05文献标识码:AI n t e l l i g e n t r e c o g n i t i o na n d i d e n t i f i c a t i o no fM p r o t e i n t y p i n gWA N GR e n h a o1,X I EJ i n g2,G U A N Z h o n g b i n1,X I ES o n g y e1ә(1.D e p a r t m e n t o f M e d i c a lL a b o r a t o r y,S h a n g h a iL a b w a y C l i n i c a lL a b o r a t o r y C o.,L t d.,S h a n g h a i200335,C h i n a;2.U n i v e r s i t y o f A d e l a i d e,A d e l a i d e,S o u t hA u s t r a l i a5005,A u s t r a l i a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀A s t h e s a m ew i t hm e d i c a l l a b o r a t o r y e x p e r t s,c o m p u t e r s c a n a l s o r e c o g n i z e t h e c o m p o n e n t s o fM p r o t e i n q u i c k l y a n d a c c u r a t e l y,a n d i d e n t i f y w h i c h t y p e o fM p r o t e i nh a d c a u s e dd i s e a s e.M e t h o d s㊀T h e s a m p l e p i c t u r e s o f i mm u n o f i x a t i o ne l e c t r o p h o r e s i sw e r e s c a n n e d a n d t r a n s f o r m e d i n t oo n eGd i m e n s i o n a l d a t a.I no r d e r t o f a c i l i t a t e t h e i n t e l l i g e n t i d e n t i f i c a t i o no fM p r o t e i n c o m p o n e n t s,t h e b a n do fM p r o t e i n i n t h e s e r u m p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i sw a s f o u n do u t f i r s t,a n d t h e n c o m p r e h e n s i v em a t c h i n gp r o c e s s i n g b a s e d o n t h e i m a g e i n f o r m aGt i o no f t h e5d i f f e r e n tc o m p o n e n t s f r o mt h e M p r o t e i n w a s p e r f o r m e d.I no r d e rt of a c i l i t a t et h e p a r a m e t e r t r a n s f e r,t h e e l e c t r o p h o r e t i c p e a kd a t aw e r es t a n d a r d i z e da n dc o r r e c t e dt oa v o i dt h e i n t e r f e r e n c eo fd i f f e r e n t f a c t o r s.R e s u l t s㊀I f t h e p e a k(e x c e p t a l b u m i n)o f t h e p a t i e n t u n d e r t e s tw a s l a r g e r t h a n t h e p e a ko f t h e c o r r eGs p o n d i n g n o r m a l q u a l i t y c o n t r o l,a n d t h e r a t i oo f t h e p e a kh e i g h t t o t h e p e a kw i d t hw a s g r e a t e r t h a n4ʒ1,i t w a s i n d i c a t e t h a t t h eM p r o t e i nb a n dw a s f o u n d o u t.A c c o r d i n g t o t h e t h r e s h o l d r a n g e o f p e a kh e i g h t a n d p e a k w i d t ho f6g r o u p s o f o n eGd i m e n s i o n a l d a t a o fM p r o t e i n a n d i mm u n o f i x a t i o n e l e c t r o p h o r e s i s o f h e a l t h y p e o p l e, i t c o u l d b e j u d g e dw h e t h e r t h e p e a k c h a r a c t e r i s t i c s o f a c o m p o n e n t i n s e r u mi mm u n o f i x a t i o n e l e c t r o p h o r e s i s o f p a t i e n t sw e r em e a n i n g f u l,t h a t i f t h e y h a dM p r o t e i n.C o n c l u s i o n㊀T h e c o r r e c t i d e n t i f i c a t i o n r e s u l t s c a n b e p r oGv i d e db y c o m p u t e r p r o g r a mm i n g t h r o u g ha u t o m a t i c a l l y i d e n t i f y i n g,c l a s s i f y i n g a n d c o m p r e h e n s i v e l y a n a l y z i n g t h e s e r u m p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i sm a p s.T h e r e i s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e c o m p a r e dw i t h t h e t r a d i t i o n a lm e t hGo d.T h eb a s e f o r c l i n i c a l d i f f e r e n t i a l d i a g n o s i s c a na l s ob e p r o v i d e db y t h i sm e t h o d.K e y w o r d s:i n t e l l i g e n t;㊀M p r o t e i n;㊀t y p i n g;㊀i mm u n o f i x a t i o ne l e c t r o p h o r e s i s㊀㊀M蛋白分型种类多,诊断方法除流式细胞外[1G2],血清蛋白电泳及免疫学方法已成为确诊M蛋白血症作者简介:王仁浩,男,主管技师,主要从事临床免疫和生化方法学研究.㊀ә㊀通信作者,EGm a i l:13671692739@139.c o m.本文引用格式:王仁浩,谢婧,管仲斌,等.智能识别鉴定M蛋白分型[J].国际检验医学杂志,2020,41(21):2676G2679.的重要手段[3G4],其中血清免疫固定电泳对多发性骨髓癌(MM)患者血清中的单克隆免疫球蛋白(I g)进行分型鉴定具有高特异性和高灵敏性[5].虽然免疫固定电泳图谱简单,但在目前临床医学检验中对M蛋白的分型㊁判断㊁识别均是通过人工肉眼观察,易产生主观判断误差及漏判.本文釆用计算机智能鉴定免疫固定电泳M蛋白成分主要的思考方法是先找到M 蛋白带,再根据其他5个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.根据健康人的免疫固定电泳6组的一维数据的峰高与峰宽的阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即患有M 蛋白血症.最后,鉴别出不同类型的M蛋白,并给出结果.这样大大提高了M蛋白血症的筛查效率,减少了人为误差,为临床诊治和预后提供了科学依据.1㊀资料与方法1.1㊀一般资料㊀标本采集:15例免疫固定电泳(书)示范图片[6],35例M蛋白血症标本中包括20例不同类型M蛋白血症患者和15例健康人.标本由上海交通大学附属第一人民医院实验室提供.1.2㊀仪器与试剂㊀(1)试剂:美国H e l e n a公司提供,试剂批号:3415和3416和3417;(2)仪器设备:全自动快速电泳分析仪由美国H e l e n a公司提供,为S P I F E3000型或S P I F E4000型;(3)参数设置和操作步骤:详见R E P电泳仪操作规程;(4)扫描仪:C a n o n K EW36823.1.3㊀方法1.3.1㊀免疫固定电泳测定㊀方法学原理:免疫固定电泳将血清或其他标本在琼脂(醋酸纤维素)平板上做区带电泳,然后在其上加入已知相应单价抗血清,当抗体与其区带中的单克隆I g结合后,便形成抗原抗体复合物沉淀(固定)下来.通过漂洗和染色,呈现浓而狭窄的着色区带,即可判断单克隆I g的轻链和重链类型.一般免疫固定电泳鉴定M蛋白成分主要由6个组分组成:(1)蛋白电泳;(2)I g G;(3)I g A;(4) I g M;(5)免疫球蛋白κ链;(6)免疫球蛋白λ链.第1组分为总的血清蛋白成分,第2~4组分为 重链 (其实免疫球蛋白是由2条重链和2条轻链组成),第5~6组分为轻链,共由6个组分的电泳带组成.健康人免疫固定电泳中的蛋白电泳只出现清蛋白等5种蛋白成分,不出现M蛋白成分区带,且I g G㊁I g A㊁I g M 及κ链和λ链电泳带颜色较浅,扫描后一般峰宽大于峰高.采用不同的颜色把3幅峰形电泳图合并为一张电泳图,便于直观显示给医生,为诊断疾病提供合理的依据.1.3.2㊀设计思路㊀首先,把6幅图像经过扫描转换成数据信息.其次,将二维数据转换成一维数据,为了便于智能化鉴定M蛋白成分,采用不同的颜色把6幅电泳图数据信息绘制成一张电泳图,先在其中血清蛋白电泳中找到M蛋白带,再根据其他5个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.为了便于参数传递,根据健康人的免疫固定电泳6组的一维数据的峰高与峰宽阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即是否患有M蛋白血症.最后鉴别出不同类型的M蛋白,并给出结果.免疫固定电泳智能化鉴定M蛋白成分的电泳流程见图1.智能化鉴定免疫固定电泳M蛋白成分电泳特点,(1)正常:若蛋白电泳没有找到M蛋白带,而且重链和轻链峰值特征全部无意义输出正常;(2)正常?建议复做:仅仅蛋白电泳峰值有意义其余峰值无意义输出 正常?建议复做 ;(3)游离κ㊁λ型轻链病:若蛋白电泳出现M蛋白,重链峰值特征无意义且κ和λ型轻链同时有特征性意义时输出游离κ㊁λ型轻链病;(4)游离κ型合并κ型I g A单克隆免疫球蛋白病:当κ或λ有2个有意义峰值a和b时,若I g A有一个有意义的峰值c,a与c横坐标相同,b与c坐标不同,则输出游离κ型合并κ型I g A单克隆免疫球蛋白病;(5)游离κ型轻链病:若κ或λ有特征意义峰值,并且重链峰值全部无特征意义,则输出 游离κ型轻链病 ;(6)κ型I g A单克隆免疫球蛋白病:若蛋白电泳出现M蛋白带,κ或λ峰值有价值,同时存在有价值的I g A或I g M 或I g G,并且前一组峰值横坐标与后一组峰值横坐标相符,则输出κ型I g A单克隆免疫球蛋白病;(7)κ型I g A单克隆免疫球蛋白病(?):若蛋白电泳出现M蛋白带,κ或λ有价值峰值,同时存在有价值的I g A或I g M或I g G,但前一组峰值横坐标与后一组峰值横坐标不相符,则输出κ型I g A单克隆免疫球蛋白病(?); (8)多克隆病:κ或λ有价值,同时I g A或I g M或I g G 为有价值宽峰(波高>100同时波宽>波高),其中峰值 有意义 指峰高大于峰宽4ʒ1.重链指I g G㊁I g A㊁I g M,轻链指κ型㊁λ型.1.3.3㊀实验过程㊀(1)利用按键精灵电脑软件把50幅免疫固定电泳图片按图中不同深浅的蓝色条带转化为数据信息,再将二维数据转化为一维数据.根据M蛋白与蛋白电泳对应的位置㊁区带深浅㊁宽窄的不同即峰值数据的位置和大小及左右峰谷的长度,确立峰高度与峰宽度的比例范围,血清M蛋白在蛋白电泳中可在α2至γ区形成浓度高的区带,扫描图中可见基底较窄,高而尖锐的峰,在γ区蛋白峰高大于峰宽,在β区和α2区也是如此,以此参数来判断M蛋白的真伪,大大减少了肉眼判断的误差,见图2.7762国际检验医学杂志2020年11月第41卷第21期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r2020,V o l.41,N o.211.4㊀统计学处理㊀采用S P S S 19.0统计软件进行数据分析处理.智能和传统两种方法鉴定M 蛋白成分的差异采用χ2检验进行比较,以P <0.05为差异有统计学意义.图1㊀㊀智能化鉴定M蛋白带流程图㊀㊀注:基线与I gM 重合.图2㊀㊀免疫固定电泳λ型I gG 单克隆免疫球蛋白病2㊀结㊀㊀果2.1㊀把图片生成的数据用自编软件的程序转化为直观的一个峰值图谱,储存在E x c e l 文档中.2.2㊀按免疫固定电泳的区带位置染色的深浅和峰高与峰宽的比例关系,采用计算机语言编程,智能化鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分,最后鉴别出不同类型的M 蛋白,并做出结果.2.2.1㊀采用免疫固定电泳法用S P I F E 3000或4000型全自动电泳仪获得血清标本的6张凝胶电泳图.2.2.2㊀扫描6张电泳图片,输入计算机.2.2.3㊀用按键精灵软件,将6张电泳图片扫描转换成一维数据储存在E x c e l 文档里.2.2.4㊀用自编软件打开步骤C 获得的E x c e l 文档数据,软件可以从中获得免疫固定电泳中蛋白电泳(D Y )㊁I g G ㊁I g A ㊁I gM ㊁κ型㊁λ型数据.获得各条线的参数,包括:峰值坐标㊁左波谷坐标㊁右波谷坐标㊁波宽是否大于波高峰值㊁各线峰值;然后根据患者蛋白电泳中ɑ至λ区域的峰值与标准峰值(健康人)同区域的数据比较大小.如果患者输出的峰值比标准峰值大,则这条线的峰还要进一步判断是否有价值,也就是根据左波谷坐标至右波谷坐标的峰宽是否大于峰高,如果峰高大于峰宽,判断为有价值(含M 蛋白带),然后进一步按流程鉴定为哪一类型的M 蛋白.2.2.5㊀输出鉴别结果㊀根据判断M 蛋白带的理论依据寻找属于哪一类单克隆免疫球蛋白病,并打印报告,包括κ和λ链的比值.κ和λ链的比值在采用传统免疫固定电泳方法肉眼判断时是无法辨别的,因为肉眼不能判断颜色的深浅确切值,而软件采取的是按键精灵的捕色软件,它可以测出κ和λ链的颜色深浅具体值,然而κ和λ链的比值在诊断多发性骨髓瘤是很有价值的.这个结果和免疫散射比浊法测定κ和λ链的比值具有良好相关性(n =38,r =0.889),经统计κ和λ链比值,健康人参考值为1.16ʃ0.2(n =32),所有M 蛋白血症患者中κ型患者κ和λ的比值明显大于1.36,而λ型患者κ和λ的比值明显小于0.96,这个软件可以同时测定κ和λ链,减少了患者再次测定κ和λ链所带来的麻烦.本文提供一种利用鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分的系统,该系统包括以下设备:A 步骤的设备为S P I F E 3000或4000型全自动电泳仪,获得血清标本的6张凝胶电泳图;B 步骤的设备为扫描仪:C a n o n K E W 36823,扫描6张电泳图片,输入计算机;C 步骤的设备为计算机用按键精灵软件,将6张电泳图片扫描转换成一维数据储存在E x c e l 文档中;D 步骤的设备为自编软件安装计算机,它可以直接打开步骤C 获得的E x c e l 文档数据,然后进一步按流程鉴定为哪一种类型的M 蛋白并输出鉴别结果及图像.见图3~5.图3㊀㊀κ型I gM 单克隆免疫球蛋白病2.3㊀实验的临床应用㊀由作者和临床免疫专家[6]选8762 国际检验医学杂志2020年11月第41卷第21期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r 2020,V o l .41,N o .21出50幅免疫固定电泳图像包含血清蛋白电泳图像.选择原则是既满足于常规检查的M 蛋白类型,又包括很少见的类型和书图谱上的特例图像,经扫描成图片后,用按键精灵电脑软件把图片转化为数据.采用计算机编程智能化鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分,通过对50幅免疫固定电泳图像和血清蛋白电泳图像的数据分析,评价自动扫描㊁鉴定的整体性能.图4㊀㊀游离λ型单克隆免疫球蛋白病图5㊀㊀κ、λ型I gG 单克隆免疫球蛋白病2.3.1㊀实验结果分析㊀采用联想电脑M 7150,C P U 256M 内存,完成资料标本50幅扫描㊁分析及鉴定,M 蛋白区带35,正确识别33(94.3%),其中M 蛋白I g G 区带κ型10,正确识别10(100%),λ型5,正确识别5(100%),κ㊁λ混合型2,正确识别2(100%);M 蛋白I gA 区带κ型3,正确识别3(100%),λ型+游离λ型1,正确识别1(100%);M 蛋白I gM 区带κ型3,正确识别3(100%),λ型1,正确识别1(100%),κ㊁λ混合型1,正确识别1(100%),混合型λ型I g M +κ型I g G1,正确识别1(100%),游离κ区带1,正确识别1(100%),游离λ区带7,正确识别7(100%).正常人区带15,正确识别15(100%).2.3.2㊀性能验证㊀智能和传统两种方法鉴定M 蛋白成分差异无统计学意义(P >0.05).智能化鉴定M 蛋白成分方法的正确度为96.0%,灵敏度为94.3%,特异度为100.0%,假阴性率(漏诊率)为4.0%,假阳性率(误诊率)为0.0%,阴性似然比为6,K a p p a 值为0.908,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为88.0%.3㊀讨㊀㊀论㊀㊀M 蛋白血症是一种浆细胞异常增生的恶性肿瘤,浸润骨髓和软组织产生M 球蛋白及多肽,引起骨骼破坏㊁肾脏病变和贫血,但该病起病缓慢,无症状期长短不定,短至几个月长达十余年,由于症状多样化及个体差异,出现的临床表现繁多和复杂,初发病常常不被发现而多被误诊.亚州人MM 发病率为0.5/100000~1.0/100000[7],70岁以上的老年人发生率为3%,通过骨髓涂片㊁组织活检㊁X 线片来诊断外,其他血清蛋白电泳及免疫学方法已成为确诊MM 的重要手段,其中血清免疫固定电泳是对MM 患者血清中的单克隆免疫球蛋白进行分型鉴定,具有高特异度和高灵敏度,也可以识别M 蛋白双克隆[8].目前缺乏标准化鉴别分型方法,临床医学检验中对M 蛋白的分型㊁判断㊁识别都是人工肉眼观察,易产生主观判断误差及漏判.应用计算机模式识别技术,能做到与医学检验专家一样,智能快速㊁准确地识别细胞[9]和D N A 凝胶电泳分子量测量[10],但未见智能鉴定M 蛋白的成分.本系统应用电脑扫描模式识别技术,采用可对血清蛋白电泳和免疫固定电泳图谱实现自动识别㊁分类㊁综合分析给出正确鉴别结果,该方法可以同时计算出κ和λ链,因为肉眼不能判断颜色的确切深浅值,然而κ和λ链的比值诊断MM 是很有价值的[11G12].这个软件可以同时测定κ和λ链比值,减少了患者再次测定κ和λ链所带来的麻烦.通过对50幅免疫固定电泳图像的数据分析,虽然合并游离轻链判断有漏检,但评价自动扫描整体性能的鉴定及临床应用准确度达96%,K a p p a 值达0.908,与传统方法比较差异无统计学意义(P >0.05).4㊀结㊀㊀论㊀㊀计算机能做到与医学检验专家一样,智能快速㊁准确地识别M 蛋白的成分,并鉴定出是哪一种类型的M 蛋白病,提高了检查效率,减少了人为误差,给临床实验室带来了极大的方便,也为临床医生鉴別诊治和预后提供了科学依据.参考文献[1]程薇,李玉龙,黄洲风,等.血清免疫固定电泳分型结合流式细胞术免疫表型分析在诊断多发性骨髓瘤中的作用[J ].广东医学,2018,39(2):265G267.(下转第2688页)9762 国际检验医学杂志2020年11月第41卷第21期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r 2020,V o l .41,N o .21[18]韩冰,吴翠萍,赵芯,等.数字P C R和荧光定量P C R诊断急性期布鲁菌病的灵敏度比较初步研究[J].传染病信息,2019,32(4):312G316.[19]宋能,谭杨,罗凤玲,等.微滴数字P C R定量检测全血样品中结核分枝杆菌特异C F P10基因[J].中国生化药物杂志,2016,36(2):10G15.[20]徐万洲,李娟,何晓云,等.血清2019新型冠状病毒I g M 和I g G抗体联合检测在新型冠状病毒感染中的诊断价值[J].中华检验医学杂志,2020,43(3):230G233.[21]MU D,Y A NL,T A N G H,e t a l.As e n s i t i v e a n da c c u r a t e q u a n t i f i c a t i o nm e t h o d f o r t h ed e t e c t i o no fh e p a t i t i sBv iGr u s c o v a l e n t l y c l o s e d c i r c u l a rD N Ab y t h e a p p l i c a t i o n o f ad r o p le td i g i t a l p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n a m p l if i c a t i o n s y s t e m[J].B i o t e c h n o l L e t t,2015,37(10):2063G2073.[22]A B A C H I N E,C O N V E R SS,F A L Q U ES,e t a l.C o m p a r iGs o n o fr e v e r s eGt r a n s c r i p t a s e q P C R a n d d r o p l e t d ig i t a l P C Rf o rth e q u a n ti f i c a t i o no fd e n g u ev i r u sn u c l e i ca c i d [J].B i o l o g i c a l s,2018,52(1):49G54.[23]李晓燕,朱丛中,郭丽茹,等.嵌合人偏肺病毒(h M P V)表位的重组流感病毒免疫保护效果[J].中华微生物学和免疫学杂志,2020,40(1):11G18.[24]W E E R A K O O N K G,G O R D O NC A,W I L L I AM SG M, e t a l.D r o p l e td i g i t a lP C Rd i a g n o s i so fh u m a ns c h i s t o s oGm i a s i s:p a r a s i t e c e l lGf r e eD N Ad e t e c t i o n i 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far e v e r s et r a n s c r i p t a s ed r o p l e td i g i t a lP C R(R TGd d P C R)f o r s e n s i t i v e a n d r a p i d d e t e c t i o n o f J a p a n e s e e n c e p h a l i t i s v i r u s[J].JV i r o lM e t h o d s,2017,248(1):166G171.[30]P H O L W A T S,S T R O U PS,F O O N G L A D D AS,e t a l.D i g i t a l P C Rt o d e t e c t a n d q u a n t i f y h e t e r o r e s i s t a n c e i nd r u g r e s i s t a n t m y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J].P L o S O n e,2017,8(2): e57238.[31]WHA L E A S,B U S H E L L C A,G R A N T P R,e t a l.D eGt e c t i o no f r a r ed r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n sb y d i g i t a lP C R i nah u m a ni n f l u e n z aav i r u s m o d e ls y s t e m a n dc l i n i c a l s a m p l e s[J].JC l i n M i c r o b i o l,2016,54(2):392G400.[32]D O B N I KD,D E M S A RT,HU B E R I,e t a l.I n t e rGl a b o r a t oGr y a n a l y s i s o f s e l e c t e d g e n e t i c a l l y m o d i f i e d p l a n t r e f e r e n c e m a t e r i 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免疫球蛋白M(IgM)测定标准操作程序SOP文件

免疫球蛋白M(IgM)测定标准操作程序SOP文件
Roche
mg/dl
g/l
mg/dl
g/l
40-230
0.4-2.3
男性:
50-320
女性:
60-370
0.5-3.2
0.6-3.7
8线性范围
本法线性范围为30-490mg/dl,不准确度允许范围 ±3SD,不精密度CV=2.9%,灵敏度为5mg/dl。
9注意事项
9.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
10.4乳糜:甘油三酯的浓度在1200mg/dl以下不会受到明显干扰。
10.5 IgM的浓度低于10000mg/dl时不会有HOOK效应。
10.6 IgA,IgG,IgM之间没有交叉反应。
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-45
免疫球蛋白M(IgM)测定
版序:ABCD
页码:第3页,共3页
9.2换算公式:mg/dl×0.01=g/l
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力:
10.1标准:回收率在90%-110%之间。
10.2黄疸:黄胆指数达到63时不会有明显干扰。(直接和间接胆红素浓度约为63mg/dl)
10.3溶血:溶血指数达到1000时不会有明显干扰。(血红素浓度约1000mg/dl)
ABCD医院
生化实验室
文件编号:
ABCD-SOP-04-45
免疫球蛋白M(IgM)测定
版序:ABCD
页码:第1页,共3页
1测定方法
免疫比浊法。
2测定原理
抗IgM抗体与标本中的IgM抗原发生反应形成抗原-抗体复合物,为颗粒状,浊度变化与IgM的量成比例,因此,检测浊度可测得IgM的含量。

M蛋白的鉴别诊断

M蛋白的鉴别诊断

MM皮肤表现-坏疽性脓皮病
F61, 发现M蛋白5年,皮肤破溃 2.5年
合并高血压,糖尿病 2009年:IgAλ+, IgA 20.1g/L 2011年:皮肤破溃,活检提示坏
疽性脓皮病 BM:10.5%为成熟浆细胞,偶见
双核浆细胞。 无CRAB M蛋白稳定无治疗 应用Thal+Dex后皮损好转
– 慢性病贫血 – 造血空间抑制 – 肾性贫血
MM继发淀粉样变
约20%发生 不影响生存 心脏淀粉样变,NT-BNP对疾病
预后有影响
MM合并淀粉样变-病例1
M45, 活动后气喘1年余,腹痛伴黑便11月,呕血1天 IgGλ型,BM 5%异常浆细胞 受累器官
✓ 骨髓:刚果红阳性 ✓ 反复消化道出血,FX 6.9% ✓ 心衰:LVEF 70%,室壁厚度15mm ✓ 肝大,肝酶升高
皮肤改变-皮肤松弛症
F32, IgGk型 反复水肿8年,皮肤松弛6年,喘
憋1年
面容苍老,皮肤松弛,吸气三凹 征
BM: 14~26%骨髓瘤细胞 FISH:14q32(IGH)易位率71.5% 肾病综合征:肾穿刺刚果红(-) 胸部HRCT:肺气肿,闭塞性细支
气管炎
无骨质破坏
Thal+Dex+克拉霉素
Normal bone remodeling
MM骨病MyΒιβλιοθήκη lomaCell1
Tumour
4
Derived
Factors
Tumour
2
3 Growth
Factors
Osteoclast
• 表现:
– 骨痛 – 病理性骨折 – 脊柱压缩
• 机制:
– 破骨细胞活性增加 – 成骨细胞活性降低

第一部分免疫球蛋白测定一、IgG、IgA、IgM的测定1、单向

第一部分免疫球蛋白测定一、IgG、IgA、IgM的测定1、单向

三、M蛋白测定:——免疫电泳
M蛋白: 浆细胞或B淋巴细胞单克隆增殖产生的结构均 一的多无活性的单克隆免疫球蛋白。 方法步骤:血清蛋白电泳加抗体于琼脂槽内扩 散、沉淀 结果判断:在α2-γ区附近形成致密弓形沉淀弧 临床意义:主要见于多发性骨髓瘤(multiple myeloma),也可见于巨球蛋白血症 mactoglobulinemia)、恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)和重链病
2、变应原特异性IgE检测:放射变应原吸附 试验(radioallergosorbent test,RAST) 步骤:变应原交联载体 加待检血清或正常 对照血清加 125I-抗人IgE 洗去未结合 125I-抗人IgE γ计数器测放射值 结果判定:以大于正常人3.5倍为阳性 临床意义: (1) 参见血清总IgE测定 (2) 确定变应原
散射比浊法
参考值:IgG:12.87±1.35g/L IgA:2.53±0.34g/L IgM:1.08±0.24g/L 临床意义: 1、低Ig血症: 先天性 — 体液免疫缺陷、联合免疫缺陷病 获得性 — 淋巴肉瘤、肾病综合征等 2、高Ig血症: 慢性感染、自身免疫病(类风湿性关节炎等)
二、IgE测定 1、血清总IgE测定:-ELISA法 方法:抗IgE包被反应板 IgE标准品或待 测血清 酶标记抗IgE 底物显色 测吸光度 做标准曲线求待测IgE含 量 参考值:男:631±128 IU/ml 女:337±60 IU/ml 临床意义: 含量增高:特应性皮肤病、枯草热、哮喘、 过敏性休克等
其实,世上最温暖的语言,“ 不是我爱你,而是在一起。” 所以懂得才是最美的相遇!只有彼此以诚相待,彼此尊重, 相互包容,相互懂得,才能走的更远。 相遇是缘,相守是爱。缘是多么的妙不可言,而懂得又是多么的难能可贵。否则就会错过一时,错过一世! 择一人深爱,陪一人到老。一路相扶相持,一路心手相牵,一路笑对风雨。在平凡的世界,不求爱的轰轰烈烈;不求誓 言多么美丽;唯愿简单的相处,真心地付出,平淡地相守,才不负最美的人生;不负善良的自己。 人海茫茫,不求人人都能刻骨铭心,但求对人对己问心无愧,无怨无悔足矣。大千世界,与万千人中遇见,只是相识的 开始,只有彼此真心付出,以心交心,以情换情,相知相惜,才能相伴美好的一生,一路同行。 然而,生活不仅是诗和远方,更要面对现实。如果曾经的拥有,不能天长地久,那么就要学会华丽地转身,学会忘记。 忘记该忘记的人,忘记该忘记的事儿,忘记苦乐年华的悲喜交集。 人有悲欢离合,月有阴晴圆缺。对于离开的人,不必折磨自己脆弱的生命,虚度了美好的朝夕;不必让心灵痛苦不堪, 弄丢了快乐的自己。擦汗眼泪,告诉自己,日子还得继续,谁都不是谁的唯一,相信最美的风景一直在路上。 人生,就是一场修行。你路过我,我忘记你;你有情,他无意。谁都希望在正确的时间遇见对的人,然而事与愿违时, 你越渴望的东西,也许越是无情无义地弃你而去。所以美好的愿望,就会像肥皂泡一样破灭,只能在错误的时间遇到错的人。 岁月匆匆像一阵风,有多少故事留下感动。愿曾经的相遇,无论是锦上添花,还是追悔莫及;无论是青涩年华的懵懂赏 识,还是成长岁月无法躲避的经历……愿曾经的过往,依然如花芬芳四溢,永远无悔岁月赐予的美好相遇。 其实,人生之路的每一段相遇,都是一笔财富,尤其亲情、友情和爱情。在漫长的旅途上,他们都会丰富你的生命,使 你的生命更充实,更真实;丰盈你的内心,使你的内心更慈悲,更善良。所以生活的美好,缘于一颗善良的心,愿我们都能 善待自己和他人。 一路走来,愿相亲相爱的人,相濡以沫,同甘共苦,百年好合。愿有情有意的人,不离不弃,相惜相守,共度人生的每 一个朝夕……直到老得哪也去不了,依然是彼此手心里的宝,感恩一路有你!

M蛋白的鉴定及实验分析

M蛋白的鉴定及实验分析

M蛋白的鉴定及实验分析【关键词】 M蛋白;免疫球蛋白;分析Identify and Experimental Analysis of M ProteinKey words:M protein; Immune globin; AnalysisM蛋白(骨髓瘤蛋白)细胞大量增殖产生的具有相同氨基酸顺序和蛋白质结构的免疫球蛋白(Ig)分子或其片段,临床上常见于多发性骨髓瘤(MM)、原发性巨球蛋白血症、重链病、原发性淀粉样变性、意义未明的单克隆丙种球蛋白血症等淋巴细胞或浆细胞克隆增殖性疾病[1]。

M蛋白是单克隆免疫球蛋白的缩写,也称副蛋白、骨髓瘤蛋白、M成份。

对此病只有采取较好实验室方式与正确实验分析相结合,才能为临床提供靠得住依据。

1 血清区带电泳技术是临床实验室对蛋白质进行的一种剖析技术。

它能够对血清或其他体液中异样蛋白质进行挑选。

它是以区带电泳为基础在一种适合的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。

血清蛋白质在给定的pH条件下要紧依照其所带电荷数将其分离成各类片段。

正常人血清的区带电泳结果和扫描图像从左至右的5个区带依次为白蛋白及α一、α二、β和γ球蛋白区。

有时在慢电泳时β球蛋白可分为β1球蛋白和β2球蛋白。

白蛋白区的成份包括白蛋白、前白蛋白和部份α1脂蛋白;α1区包括α1抗胰酶蛋白、α1脂蛋白、Gc球蛋白;α2区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白等;β1区包括转铁蛋白、补体C3c、IgA、血结素等;β2区包括C3b、IgA;γ区包括IgG、IgM、CRP等。

多克隆免疫球蛋白增殖性疾病各类Ig均增加,相应的其他区带会减少,多见于肝硬化、慢性肝炎和系统性红斑狼疮等,由于β和γ区大量增殖,致使两区之间的间隙消失,成为γβ桥,亦称γβ联,扫描时β消失,显现一高而宽的γ峰。

免疫缺点症时会显现无γ峰或低β峰。

M蛋白血症特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖,基底部窄,在γ区高与宽的比例≥2,β区那么≥1(正常时小于此比例),其他区带明显减少。

M蛋白参考值

M蛋白参考值

M蛋白参考值的意义与检验方法M蛋白是指人类机体内一种名为Myeloma Protein的蛋白质,通常是由浆细胞癌引起的一种异常免疫球蛋白。

测定M蛋白的值,可以在很大程度上帮助医生进行诊断和治疗方案的制定。

下面,我们将从的意义及检验方法两个方面展开阐述。

一、的意义M蛋白的参考值是适用于临床医学中对于人类机体内M蛋白浓度的正常范围。

一般来说,的测定主要用于白血病、淋巴瘤等血液肿瘤的诊断,以及多发性骨髓瘤和其他类似疾病的监测。

在很多情况下,M蛋白对于诊断肿瘤和血液疾病的种类,以及判断疾病程度等方面起着关键作用。

对于白血病和淋巴瘤等血液肿瘤的诊断来说,M蛋白的检测可以帮助医生进行初步筛查,具有早期诊断的重要作用,同时还可以辅助医生制定更精准的治疗方案。

另外,对于多发性骨髓瘤等疾病的患者来说,M蛋白的参考值还可以帮助医生进行疾病的监测。

这种疾病通常会导致机体内M蛋白浓度超过常规的范围,因此通过长期的M蛋白检测,可以帮助医生了解患者的病情,及时制定治疗方案。

二、M蛋白的检验方法常规的M蛋白测定分为三种常见的方法,分别是免疫电泳、Immuno Turbidimetric Assay和Fluorescence In SituHybridization(FISH)技术。

1、免疫电泳免疫电泳指利用电场将蛋白质分离为不同的条带,从而测定M蛋白的浓度。

这种方法具有灵敏度和准确性高,分析结果精确等优点,但是需要复杂的实验操作和高端仪器支持,因此在日常检测过程中可以采用其他更为简便的方法。

2、Immuno Turbidimetric AssayImmuno Turbidimetric Assay是一种常用的M蛋白检测方法。

它可以在短时间内完成样本的分析,实验操作较简单,在实际检测过程中普及率较高。

该方法主要通过免疫反应将M蛋白识别并进行测定。

虽然灵敏度不及免疫电泳,但已经能够满足大多数临床检测的要求。

3、FISH技术FISH技术是指采用荧光染色技术对测定的细胞进行染色,并通过显微镜进行显示。

M蛋白实验室检测及临床应用

M蛋白实验室检测及临床应用
完整的单克隆免疫球蛋白 血清蛋白电泳
血清免疫固定电泳
单克隆游离轻链 尿免疫固定电泳 血清游离轻链
初 筛
血清蛋白电泳
血清蛋白电泳原理
毛细管血清蛋白区带电泳
炎症 肝病 肾病 浆细胞病
毛细管血清蛋白电泳图谱
M蛋白的筛查
• 血清蛋白电泳是筛查M蛋白的最佳方法
在区出现异常峰 (M蛋白?)
正常血清
单克隆 Ig
高浓度M蛋白
微量的M蛋白
M蛋白出现在β1区
M蛋白出现在β2区
IgA*
多个M蛋白
中华检验医学杂志, 2013, 36:1150-1153
单克隆球蛋白血症发生率
• 22193 例标本筛查 • 354 例血清蛋白电泳异常(1.6%) • 206 例免疫固定电泳阳性(0.92%)
研究结果
序号
renal significance, MGRS )* • 华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom Macroglobulinemia, WM/LPL) • 原发性淀粉样变性(Primary Amyloidosis, pAL) • 轻链沉积病(Light Chain Deposition Disease, LCDD) • 重链病( Heavy Chain Disease, HCD ) • 部分B细胞淋巴瘤(CLL/SLL;DLBCL) • ……
Bone lesions
M蛋白-重要线索
M蛋白
骨髓克隆性浆细胞 /浆细胞瘤
M蛋白筛查是关键
有症状MM

≥ 10%
ROTI √
无症状MM (冒烟型,SMM)

10-60%
意义未明M蛋白病
MGUS

< 10%

在骨髓瘤,血清中m蛋白的诊断标准

在骨髓瘤,血清中m蛋白的诊断标准

骨髓瘤是一种恶性肿瘤,它源自骨髓中的浆细胞并引起异常的免疫球蛋白的产生。

血清中的m蛋白是骨髓瘤的一个重要诊断标志,其浓度和特征可以帮助医生确定骨髓瘤的诊断和治疗方案。

本文将对血清中m蛋白的诊断标准进行详细介绍,帮助读者更深入地了解骨髓瘤的诊断过程和标准,为临床实践提供参考。

1. 血清中m蛋白的作用血清中m蛋白,也称为单克隆免疫球蛋白,是由浆细胞恶性增殖造成的,它是一种异常的免疫球蛋白,通常无法起到免疫功能,但却会对机体造成危害。

在骨髓瘤的诊断中,血清中m蛋白的浓度和特征可以帮助医生确定病情的严重程度和治疗方案。

2. 血清中m蛋白的检测方法对于骨髓瘤患者,血清中m蛋白的检测是非常重要的。

常见的检测方法包括蛋白电泳、免疫固定电泳和免疫荧光法等。

通过这些方法,可以确定血清中m蛋白的类型和浓度,以及其与其他蛋白的比例,为骨髓瘤的诊断提供重要依据。

3. 血清中m蛋白的诊断标准在骨髓瘤的诊断中,血清中m蛋白的浓度和特征是非常重要的。

通常情况下,根据血清中m蛋白的特征,可以将骨髓瘤分为IgG型、IgA型、IgM型、轻链型和非分泌型等。

根据其浓度和变化趋势,可以帮助医生确定病情的严重程度和治疗方案。

一般来说,诊断骨髓瘤需要满足以下条件:a. 血清中m蛋白浓度持续增高,或存在明显的蛋白电泳异常带。

b. 骨髓穿刺或骨髓活检显示存在异常浆细胞增殖。

c. 存在骨骼破坏、高钙血症、肾功能不全等伴发症状。

4. 血清中m蛋白的治疗监测血清中m蛋白的浓度和特征可以作为骨髓瘤治疗效果的监测指标。

在治疗过程中,医生可以通过定期检测血清中m蛋白的浓度和特征,来评估患者的病情变化和治疗效果。

通常情况下,对于骨髓瘤的治疗监测,需要满足以下条件:a. 血清中m蛋白浓度和特征能够稳定在正常范围内。

b. 骨髓活检显示异常浆细胞数量明显减少或消失。

c. 患者的临床症状得到明显改善。

通过以上的介绍,我们可以看到血清中m蛋白在骨髓瘤的诊断和治疗过程中起到了非常重要的作用。

M蛋白参考值

M蛋白参考值

M蛋白参考值M蛋白参考值是指血液中M蛋白的正常范围。

M蛋白是一种免疫球蛋白,它在人体免疫系统中起着重要的作用。

M蛋白参考值的测量可以帮助医生诊断和监测一些与免疫系统有关的疾病。

M蛋白是一种特殊的免疫球蛋白,它由浆细胞产生。

浆细胞是一种免疫细胞,主要存在于骨髓中。

当机体感染细菌、病毒或其他病原体时,浆细胞会产生M蛋白,以抵御病原体的侵袭。

M蛋白的参考值通常通过血液检查来确定。

正常情况下,M蛋白的浓度应该在一个特定的范围内。

这个范围可以根据性别、年龄和其他相关因素而有所不同。

通常情况下,M蛋白的正常参考值为0-3g/L。

M蛋白的参考值可以帮助医生判断疾病的严重程度和进展情况。

如果M蛋白的浓度超出正常范围,可能意味着机体存在某种疾病。

一些与M蛋白浓度异常相关的疾病包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤和Waldenstrom的巨球蛋白血症等。

多发性骨髓瘤是一种恶性肿瘤,它会导致骨髓中的浆细胞异常增生,并且产生大量的M蛋白。

当M蛋白的浓度超出正常范围时,可能是多发性骨髓瘤的一个指标。

此外,M蛋白的浓度也可以用于监测多发性骨髓瘤的治疗效果。

淋巴瘤是一种与淋巴细胞相关的恶性肿瘤。

在某些淋巴瘤患者中,M蛋白的浓度也会升高。

因此,M蛋白的参考值可以用于淋巴瘤的诊断和监测。

Waldenstrom的巨球蛋白血症是一种罕见的血液疾病,它会导致机体产生过多的M蛋白。

M蛋白的浓度可以用于诊断和监测这种疾病。

除了上述疾病外,M蛋白的参考值还可以用于其他一些与免疫系统有关的疾病的诊断和监测。

例如,类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和肝炎等疾病在一定程度上与M蛋白的浓度异常相关。

M蛋白参考值是衡量免疫系统相关疾病的一个重要指标。

通过血液检查可以确定M蛋白的浓度是否超出正常范围,从而帮助医生进行诊断和治疗。

然而,需要注意的是,M蛋白参考值只是一个指标,不能单独确定诊断结果,还需要结合其他临床表现和检查结果综合判断。

如果有任何疑问或需要进一步的诊断,请及时咨询医生。

M蛋白参考值

M蛋白参考值

M蛋白参考值引言M蛋白,也称为单克隆免疫球蛋白(Monoclonal gammopathy),是一种由单个淋巴细胞克隆产生的异常免疫球蛋白。

在正常情况下,人体产生多克隆免疫球蛋白,而M蛋白是一种异常的现象。

M蛋白的异常产生可以与多种疾病相关,因此对M蛋白的参考值进行研究和了解具有重要的临床意义。

M蛋白及其相关疾病什么是M蛋白M蛋白是一种由淋巴细胞克隆产生的免疫球蛋白。

它通常是由浆细胞(一种免疫细胞)产生的单克隆免疫球蛋白。

M蛋白可以存在于血液、尿液和其他生体液中。

M蛋白的相关疾病M蛋白的异常产生与多种疾病相关。

其中最常见的是多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma)和Waldenstrom macroglobulinemia(一种罕见的血液病)。

这些疾病通常会导致M蛋白的大量产生,从而引发一系列的临床症状。

M蛋白的检测与诊断M蛋白的检测方法检测M蛋白通常使用电泳技术,特别是蛋白电泳。

蛋白电泳是通过在电场中将蛋白质沿着凝胶迁移,从而区分不同的蛋白组分。

M蛋白通常显示为一个或多个峰值,其数量和形态可以提供关于疾病类型和严重程度的信息。

M蛋白的参考值M蛋白的参考值受到多种因素的影响,包括患者的年龄、性别和病史等。

通常情况下,M蛋白的参考值可以通过与特定人群进行比较来确定。

不同实验室可能有略微不同的参考范围,但一般来说,M蛋白的参考值应在正常范围内。

M蛋白异常与疾病进展M蛋白异常的检测对于疾病的诊断和监测非常重要。

以下是一些常见的M蛋白异常及其与疾病进展的关系:单克隆M蛋白异常单克隆M蛋白异常是指只有一种M蛋白克隆存在的情况。

这种异常通常与多发性骨髓瘤和Waldenstrom macroglobulinemia等恶性疾病相关。

单克隆M蛋白异常的存在可能意味着这些疾病的发展和进展。

多克隆M蛋白异常多克隆M蛋白异常是指存在多种M蛋白克隆的情况。

这种异常可能与慢性淋巴细胞白血病(Chronic Lymphocytic Leukemia, CLL)和其他免疫疾病相关。

医学检验·检查项目:抗链球菌型M蛋白抗体_课件模板

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简介:
血性链球菌(GAS)致风湿热型菌株和致肾 炎型菌株之间的基因模式不同,致风湿热 型的GAS几乎全是A、B、C基因模式;而致 肾炎型GAS几乎全是D、E基因模式。目前 已发现M蛋白含有3个重复序列,分为A、B、 C 3个区,不同M型别的A、B区高度变异, 而C区则高度保守,因而认为M蛋白的C区
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正常值: 抗M蛋白C区抗体为<1.5μg/mL。
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相关检查: 抗凝血活性试验、抗透明质酸酶、抗链球 菌激酶试验、抗溶血性链球菌“O”试验、 血常规。
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相关症状: 全头痛、咳嗽伴胸痛、咳嗽、高颅压综合 征、发热、黏液脓性痰。
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相关疾病:
化脓性脑膜炎、链球菌中毒性休克综合征、 B链球菌群感染、肺炎链球菌性肺炎、肺 炎链球菌败血症、肺炎球菌肺炎、链球菌 感染后的急性肾小球肾炎、链球菌性咽炎、 溶血性链球菌性坏疽。
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简介:
A组溶血性链球菌1、3、5、9、19、 24型的细胞壁含有较多的M蛋白,有抗吞 噬细胞作用,可致强免疫反应,链球菌细 胞壁上的M蛋白与人体心肌组织具有交叉 抗原性,在人体感染A组溶血性链球菌后 可刺激机体产生抗链球菌壁M蛋白抗体, 此抗体作用于心肌组织可引起风湿性心脏 炎。研究发现,A组溶

M蛋白的鉴定及实验分析

M蛋白的鉴定及实验分析
疗 动 物 实 验 已获 成 功 。 综 上所述 : 目前在治疗高血压 时尽管存在许多 问题 , 是 但 只有我们 有信心和决 心 , 随着上 述策 略的实施 、 药物 的应用 , 人类攻克 、 战胜 、 征服 高血压必将指 日可待。
参考文献 : [ ] 屈引贤, 小丽 , 商智. 1 赵 邓 氯沙坦 治疗 高血 压并 发左 室肥厚 5 7 例 疗效观察 [ ] 陕西 医学杂志,0 59 J. 2 0 :. [ ] 王晓燕. 沙坦对原发性 高血压伴左心室肥厚的逆转作 用[ ] 2 氯 J. 中华现代 内科 学杂志 ,0 6,:. 20 37 ( 稿 日期 :0 70 -9 收 20 - 0 ) 6
维普资讯
实 用 医 技 杂 志 20 07年 9月 第 1 4卷 第 2 7期 ( 刊 ) JMT, etmbr 0 7, o.4,o 2 I udE eyT nD y) 旬 P S pe e.20 V 11 N 8
因此 , 应用 A I TI受体 拈抗剂 具有 明显 的 肾脏保 护效 应 , 特别 是 对糖尿病性 肾病 的恶化有逆转 作用 。抑 制 A 可使 肾小 TI I 球 出球 小动脉松弛 , 降低 肾小球毛细血管压力 , 减低蛋 白尿而 延缓 肾脏病 进展 。在没有蛋 白尿 的高血压 患者 中, 服用氯 沙 坦后新 发生 蛋 白尿患者仅 为阿替洛 尔组 的一半 , 也证实氯 沙 坦延缓 了肾脏病 变的发展。 所 以说 , 氯沙坦除了具有降压的作用外 , 还有 明显保护靶 器官作用 。这也正符合抗 高血 压治疗 的最终公共 卫生 目标 : 降低心脑血管疾病和 肾脏疾病 的发病率和病死率 。 3 4 发病机制 高血压病 的发病机制与基 因有关 , . 因此基 因 治疗是 治愈高血压病 的根本性措施 。现在高血压病的基因治

ISO15189S免疫球蛋白M(IgM)测定(免疫比浊法)

ISO15189S免疫球蛋白M(IgM)测定(免疫比浊法)
1.原理
分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中,经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。
2.标本采集:
2.1标本采集前病人准备:受检者空腹
2.2标本种类:血清或血浆
2.3标本要求:取被检者静脉血2ml,室温放置不超过4小时,分离血清备用。
6.4 试剂盒组成:
缓冲液30ml
空白缓冲液 30ml
抗血清试剂 0.5m1仪器名称:Orion TurboxRplus特定蛋白分析仪
7.2仪器厂家:芬兰Orion集团公司
7.3仪器型号:Turbox plus
8.操作步骤:
8.1试剂配制:
8.1.1抗血清应用液准备:吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中,轻轻混匀,应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液:液体待用。
8.1.3定标液:用0.9%NaCL进行1:51稀释。定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
8.2收集与处理样品:样品用0.9%Nacl进行1:51稀释。
8.3为每一份样本测定准备一份样品空白,同样,为定标液另外准备一份定标液空白。
8.4准备两份定标液测定(定标完成后,标准曲线数据存储在磁卡内。下次检测如使用同批试剂,可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息)。
15.2当要丢弃包括所有的实验材料和试剂时,须经121℃一个小时的高压灭菌。
15.3定标液中的含有来源于人血清的材料,已经测定HCV、HBsAg和HIV抗体阴性,应仍然视为传染源。
15.4骨髓瘤的病变蛋白会干扰免疫球蛋白的测定,这时候建议用免疫电泳法进行校正。
3.标本储存:待测标本在2-8℃存放不超过24小时,-20℃不超过三个月,-70℃长期保存。避免反复冻融。
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M蛋白的检测与鉴定
一、M蛋白的基础知识
M蛋白是浆细胞或B 淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白,其氨基酸组成及排列顺序十分均一,空间构象、电泳特征也完全相同,本质为免疫球蛋白或其片段(轻链、重链等)。

由于它产生于单一克隆(monoclone),又常出现于多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、巨球蛋白血症(macroglobulinemia)、恶性淋巴瘤(malignantlym phoma)病人的血或尿中,故称M 蛋白。

这些M 蛋白大多无抗体活性,所以又称为副蛋白(paraprotein)。

M 蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。

恶性M 蛋白血症多见于多发性骨髓瘤(包括轻链病)、巨球蛋白血症、重链病、7SIg M 病(Solomen -Konkel 病)、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病(C 端基因缺陷)等。

意义不明的M 蛋白血症(monoclonal gammopathyof undetermined significance ,M G US)又分为两种,一种是与其他恶性肿瘤(如恶性淋巴瘤)伴发者,另一种即所谓良性M 蛋白血症。

M 蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。

二、M蛋白的鉴定
1.多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M 蛋白检测和鉴定
(1)血清总蛋白定量。

90%的患者血清总蛋白含量升高(70%的患者>100g/L),约10%的患者正常或甚至偏低(如轻链病时)。

(2)血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。

M 蛋白在电泳时出现典型的单株峰(亦称M 区带),特点是区带窄而浓,扫描时呈现尖高峰,在γ区高比宽≥2,在β区≥1。

此M 区带可因Ig的不同而出现在在γ~α2的任何区域。

M蛋白增殖的另一特点是其他各区
带明显减少,显示图像较简单。

有时有的患者血中M蛋白并不高,这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。

这种病人的血清在电泳时M峰可不明显,易被其他蛋白掩盖,需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。

(3)血清Ig定量。

一般M蛋白所属Ig含量均显著增高,其他类Ig则正常或显著减低。

(4)免疫电泳。

①正常人血清免疫电泳结果:可分辨出20 多种蛋白成分。

在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。

通常Ig组分靠阴极端,最靠近加样孔者为Ig M,依次为IgA、IgG,三者成平滑的连续沉淀线。

②多发骨髓瘤:多发性骨髓瘤分IgG、IgA、Ig M、IgI)和IgE5 种,IgG 和IgA 又分亚类,所有Ig的轻链又分两个型。

因此,免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异,从慢γ~β2区皆可出现。

IgG 1 多出现在慢γ区,IgG 4 在β~α2区。

M 蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。

由于此种病人血清中Ig 含量甚高,免疫扩散时可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线,此时需稀释血清重做,往往可获得满意结果。

③巨球蛋白血症:由于IgM 分子大量增殖所致。

在免疫电泳时,常常出现以下特征:一是沉淀线明显变形。

正常情况下,IgM 形成短小沉淀线,不易看到变形。

当IgM大量出现时,则会使整个IgM沉淀线变形。

二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。

三是电泳时IgM组分无迁移,这多是Ig M 分子聚合,电泳不移动所致。

(5)尿本-周蛋白检测。

①定性检测:用热沉淀法和磺基水杨酸法。

②免疫电泳法:用待检尿浓缩后进行免疫电泳,大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者,仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。

本法60%~80%的骨髓瘤病人和几乎全部轻链病病人可检出尿本周蛋白。

③轻链白蛋白-戊二醛交联免疫电泳法:多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性,正常人阴性。

本法尿本周蛋白检出率为100%,假阳性4%,尿中含有200μg/ml 时即可出现阳性结果。

2.重链病时M 蛋白检测与鉴定
与多发性骨髓瘤相同,免疫电泳时由于重链分子较Ig 分子小,故迁移率快,电泳位置较靠阳极侧(β~α)。

但重链病一般需选择免疫电泳证实。

3.7SIg M 病时M 蛋白的检测与鉴定
一般Ig M 为五聚体,沉降系数为19S ,而7S IgM患者的IgM为单体,沉降系数为7S 。

证明7S IgM 有两种方法:一种是在测定Ig M 总量后,将被测血清1~2 ml 过Sepharose 6B柱,再根据洗脱峰图用面积仪测出7S Ig M占总IgM的百分比,与Ig M总量换算即得7S IgM的绝对值。

另一方法即为植物血凝素(PHA)选择电泳。

此法原理是五聚体Ig M可与PHA 结合形成沉淀,而单体IgM不与PHA结合。

在琼脂胶中加入PHA,后进行电泳,五聚体IgM 被P H A 所阻留,而7S Ig M 继续向阳极泳动,并可与随后加至抗体槽中的Ig M 抗血清反应,形成单一沉淀弧。

4.半分子病时M 蛋白检测与鉴定
所谓半分子病(half-molecule)是指此种M 蛋白由一条重键和一条轻链组成,分子量是正常Ig 分子的1/2 或<1/2(因半分子病肽链往往有部分缺失)。

至今报告过IgG 和IgA 的半分子病。

除上述检测方法外,尚须对“半分子”进行特殊鉴定。

方法有:
①免疫电泳法鉴定半分子M 蛋白的迁移率。

电泳时发现具有IgG 或IgA 的电泳特征而迁移率明显快于二者时(泳向正极可达α2 区),应注意有无本病的可能。

②十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳,推算M 蛋白的分子量。

③超速离心分析,测定M 蛋白的沉淀系数。

④Fc抗原决定簇的确定。

用相应抗重链血清对比患者与正常人相应Ig 的区别。

5.测定免疫球蛋白轻链型筛选M 蛋白
正常人有五类免疫球蛋白,其轻链有两种型,即κ型或λ型。

对于每个Ig分子而言,其轻链只有一种,不是κ就是λ。

但对一个体的Ig 分子而言,则有κ和λ两种链型,且其比例基本上是固定的,即κ/λ约为2∶1 。

任何原因引起的Ig 分子多克隆增殖,如慢性肝病,系统性红斑狼疮、某些恶性肿瘤时,其κ/λ值不变。

而M 蛋白发生时,是单克隆细胞的恶性增殖,所以在Ig 量明显增高的同时,其κ/λ比值必然发生改变,即一种轻链型的Ig 分子增多。

利用适当的方法,分别定量测定血清中κ、λ型Ig 分子的量,即可特异而简便地诊断M 蛋白病。

测定方法有两种,一是用浊度测定技术分别测定含κ或λ的Ig 的量,一种是用单相免疫扩散法测定κ型、λ型Ig 的含量及比值。

单扩法是在琼脂凝胶板上打孔,排列呈梅花型,中心孔注入抗κ、抗λ混合抗体,周围孔放正常人及患者待测血清,然后进行扩散。

正常血清与抗血清之间可见对称双线。

若患者的κ轻链Ig 升高,其沉淀线向内移,而λ线有不同程度向外移,双环间距增宽。

若λ轻链Ig 含量增高,则表现为环距减小、融合或跨环现象。

此外,该法对IgG、IgA、IgD 类型的轻链诊断准确率较高,而对Ig M型诊断不够理想,其原因是Ig M分子大,扩散迁移率小,同时五聚体立体结构也影响了抗轻链抗体与轻链结合。

若用二疏基乙醇处理将Ig M 解为单体,则阳性率大大提高。

6.良性M 蛋白血症
良性M 蛋白血症主要指那些血清中存在电泳均质的免疫球蛋白或其片段,但无临床症状,长期观察也未发现骨髓瘤或世球蛋白血症的病人。

老年人中发现良性M 蛋白血症者较多,应注意与多发性骨髓瘤相鉴别。

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