Lab2土壤细菌的分离与纯化
土壤细菌的分离及纯化(1)
土壤细菌的分离及纯化(1)土壤中存在着丰富的微生物群落，其中细菌是占主导地位的一类微生物。
分离和纯化这些细菌有助于深入了解它们的特性并有利于相关应用的开发。
下文将从分离和纯化的流程、常用方法以及注意事项等方面进行详细阐述。
一、分离和纯化细菌的流程1. 采集土样首先，需要采集土样，并将其认真分层剖析，取相对均匀的土样。
避免受到环境中其他微生物的干扰，有时要在合适的温度、溶液中将其处理，以杀死其他未被分离出的细菌，确保最终分离到的细菌属于所期望的种类。
2. 筛选方法可以通过筛选的方式来分离目标细菌。
在将土样处理后，可以将土壤中的颗粒筛选出来，将其悬浮于适宜的培养基中。
通过培养基选择，可以筛选出自然界中对常规培养基营养要求不高的菌株。
3. 纯化法基于筛选法筛选出的细菌群，要进一步分离单菌株。
这时候，可以通过分泌落细菌的方式进行分离。
分泌落法是在无菌条件下，用匀染映到平板上，供菌落生长孵育，培养出纯净菌株。
二、常用分离和纯化方法1. 发酵罐法发酵罐法是在无菌环境下，将土壤样本与特定的培养基混合，形成发酵液，供细菌发酵并产生代谢产物。
根据代谢产物对目标微生物的要求特点，可以从代谢产物中充分筛选出目标菌株并进行单克隆的分离培养。
2. 过滤法将土样过滤后，混合在无固定菌相的培养基中，通过筛选培养环境中的单菌孵育，纯化出其中的某一菌株。
3. 土盘法所收集的土样经过处理后，均匀地坚着到培养皿的表面。
将培养皿置于恰当的条件下，等待细菌的生长，进行单克隆的分离。
三、注意事项1. 待分离土样尽量温和，避免对土壤环境造成较大影响，减少细菌数量的变化。
2. 培养到疑似有目标菌株生长为止，这就需要经验较丰富的实验人员进行分离纯化操作。
3. 需要从其他细菌中筛选出目标菌株，可以加入抗生素等各种筛选方法。
总之，提高细菌的分离和纯化技术，是深入探索土壤生物多样性、探索新型约束细菌等领域的很重要的手段。
实验土壤中细菌的分离与纯化
实验土壤中细菌的分离与纯化
细菌是微生物中最常见和广泛分布的，它们对人类和自然界都起着重要的作用。
在研究不同类型的细菌时，需要从土壤样品中细菌的分离和纯化。
这可以通过多个步骤来完成。
第一步是样品的准备。
准备好样品是关键的第一步。
需要从所需的环境中收集样品，例如，在花园中收集土壤样品，神经外科手术时，需要收集体内的样品。
样品收集后，需要将其保存在适当的容器中，并避免过度处理。
第二步是制备培养基。
为了孵化细菌，需要准备不同种类的培养基，例如，对光和氧气敏感的厌氧菌需要使用厌氧培养基。
还需要选择颜色，形状和口感不同的特殊培养基，以区分不同种类的细菌。
第三步是分离和纯化细菌。
需要采取逐步流程来分离和纯化细菌。
首先，需要将土壤样品分散在培养基中，并容纳在瓶子或平板上。
然后，将样品暴露于光线和空气下，以让细菌开始生长。
细菌的生长取决于培养基的条件，例如，温度，pH，光线等。
为了获得单个细胞，需要通过挑选法或分离检查板来分离细菌。
挑选法是一种分离单个细菌的技术，其中使用草地绿和某些特定镜头。
经过一些练习和专业技能，可以使用这种方法分离出单个细菌。
为了区分不同种类的细菌，还可以在不同的特殊条件下进行培养。
最后，需要使用不同的方法来检验细菌的纯度。
例如，可以使用静电鉴别法来检测细菌的标记。
通过这种方法，细菌可以在电场的方向下移动，并根据它们的大小，形状，颜色等特征进行分类。
细菌的分离和纯化是细菌学研究的关键步骤。
通过这些方法，可以提取不同种类的细菌，进而进行更深入的研究。
实验二：土壤中微生物分离与纯化
了解并掌握微生物的生理生化特征， 如营养需求、代谢途径、酶活性等。
微生物纯化
在分离的基础上，进一步通过反复划 线培养或平板克隆培养，获得纯培养 的微生物。
熟悉微生物分离与纯化的实验操作流程
土壤样本采集
选择具有代表性的土壤样本， 采集时要避免污染，并记录采
样点的环境信息。
微生物的纯化
对分离得到的菌落进行纯化， 通过反复划线或平板克隆培养 ，获得纯培养的微生物。
菌落形态观察
观察纯化后的菌落形态，记录菌落 特征。
微生物的保存与鉴定
菌种保存
将纯化的菌株进行冷冻干燥或甘油保 藏，以备后续实验使用。
微生物鉴定
采用形态学、生理生化实验或分子生 物学方法对分离得到的菌株进行鉴定 。
04
CATALOGUE
实验结果与分析
微生物分离与纯化的结果观察
微生物分离
通过划线分离法，成功将土壤中的微生物分离到了培养基上，观察到菌落形态 各养基
根据目标微生物的特性， 选择适合的培养基。
培养
将土壤稀释液涂布或滴加 在培养基上，放入恒温培 养箱中培养。
观察与记录
观察微生物的生长情况， 记录菌落形态、颜色、大 小等特征。
微生物的纯化
挑选单菌落
从培养基上挑选单菌落，采用划 线法或稀释涂布法进行纯化。
纯化培养
将纯化的菌株进行多次划线培养或 传代培养，确保获得纯培养物。
01
微生物纯化的原理是利用微生物的单一特性进行分离，使同一种微生物在培养 基上形成单一菌落。
02
常用的微生物纯化方法包括划线分离法、稀释涂布平板法、显微操作法等。这 些方法可以根据不同微生物的特性选择使用，以获得纯培养。
03
实验八、土壤微生物的分离和 纯化
实验八、土壤微生物的分离和纯化土壤微生物是指生长在土壤中的微弱的、微小的生物体，包括细菌、真菌、放线菌、原生动物等。
土壤微生物是土壤的重要组成部分，对维持土壤生态系统的平衡和功能发挥起着关键作用。
因此，对土壤微生物的分离和纯化具有重要意义。
本实验就是针对土壤微生物的分离和纯化进行研究。
一、实验原理由于土壤微生物数量繁多而多样，分离出单一的菌落对于此实验来说非常的困难。
但是采用适宜的富培养基后能够轻松的促进土壤微生物菌群的生长。
富培养基包括有机和无机元素、维生素、氨基酸、碳源和氮源。
地衣素琼脂（ISP）是一种富含多种碳源和氮源的优质菌落培养基，是常用的微生物培养基。
本实验的基本原理就是在能够生长的环境中分离出单一的菌落，通过多次分离和鉴定获得纯种菌株。
二、实验器材和试剂1.地衣素琼脂培养基2.试管、移液器、移菌环、烧灼器、电热蚊子香、灭菌器3.已经壳霉菌疫苗接种的贵州悬钩子种子和土壤三、实验步骤1.准备工作。
用移液器将壳霉菌疫苗接种在新的地衣素琼脂培养基板上，将其灭菌，以备之后的使用。
2.准备土壤基质。
将土壤样品剪碎成非常小的颗粒，并放入烧灼的试管中，加入恰当的地衣素酵母素琼脂，变形后形成一个接种板。
在较大的容器中放置电热器设备，以保持环境的湿度和温度适宜。
接下来，将接种板和采样站放在单独的区域以免混淆。
3.接种。
从土壤中取一小部分，倒入试管中，并加入适量的地衣素琼脂培养基，并将其摇动均匀，使菌群溢出。
等到土壤均匀地分散在地衣素琼脂培养基中之后，用移菌环扭曲并切出一个菌落，并将其置于新的地衣素琼脂培养基板中。
重复此步骤至少三次，每次都要将新的分离土壤菌落剪出来。
4.孵育。
将地衣素琼脂培养基板置于电热器设备中，以使温度保持在合适的范围内，并等待菌落的生长。
当新的菌落形成后，即可重复上述步骤以获得更多的菌株。
5.纯化。
检查菌落后，需要进行纯化。
鉴定每个菌落，把每个菌落分别悬浮在新的地衣素琼脂培养基板中，并等待菌落的生长。
王--实验二 土壤中微生物的分离与纯化
王--实验二土壤中微生物的分离与纯化
土壤中是存在大量微生物的，包括细菌、真菌、放线菌等，在生态系统中起着重要作用。
微生物的分离与纯化是微生物学研究的重要方法之一，对于了解土壤微生物多样性、功能和应用具有重要意义。
本实验旨在通过土壤样品进行微生物分离和纯化，了解微生物分离技术和分离纯化菌株的方法。
一、实验方法
1.1 实验设备
实验室常用的分离纯化设备有平板计数器、减压灭菌器、烧杯、移液器、离心机等。
其中，平板计数器是精确测定细菌数量的仪器。
实验材料包括培养基、细菌液、土壤样品等。
1.3 分离纯化细菌的步骤
（1）将土壤样品放入离心管内。
（2）在土壤样品中加入生理盐水，摇晃离心管，使土壤样品和生理盐水充分混合。
（3）将混合物在烧杯内振荡。
（4）利用平板计数器精确测定细菌数量。
（5）从混合物中挑出单个菌落，进行菌株分离和纯化。
（6）将菌落移至培养基上，进行培养、观察和记录。
二、实验结果
通过本实验，我们共采集了5个不同土壤样品，进行菌落计数和菌株分离、纯化、培养等处理。
实验结果显示，不同土壤样品中微生物的数量和种类存在差异。
其中，含有腐殖质较多的土壤样品中微生物数量较多，且种类丰富。
2.2 结果分析
土壤微生物数量和种类的差异主要与土壤样品的营养含量及物理化学性质有关。
白灰土、黄土、红壤等含有较高营养含量和较优地理环境的土壤样品中微生物的数量和种类较多，而贫瘠荒芜的土壤样品中微生物数量和种类较少。
此外，氧分压、pH值、盐分等土壤环境因素的差异也会导致土壤中的微生物数量和种类存在差异。
实验二土壤中微生物的分离纯化及观察
实验结果
➢ 详细描述实验中各种微生物在斜面上、半固体和液体 培养基中的培养特征。
思考题
➢ 一个好氧的具周生鞭毛的菌株分别在斜面、半固体和 液体培养基中的培养特征。
➢ 用斜面检测微生物的培养特征接种时，为什么不要划 多条线或蛇形，而只要划一条直线？
➢ 接种环（针）接种前后灼烧的目的是什么？为什么在 接种前一定要将其冷却？如何判断灼烧过的接种环已 冷却？
法和步骤； ➢ 掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方
法。
培养基的种类
➢ 按成分不同分 天然培养基 合成培养基 半合成培养基
➢ 按培养基的物理状态分 固体培养基 半固体培养基 液体培养基
➢ 按培养基的用途分 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基
培养基的配制方法和步骤
➢ 称量：按照配方正确称取各种原料置于搪瓷杯中； ➢ 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解，补足水
（使样品中的微生物细胞充分分散，成单个细胞存 在），再取一定量的稀释液接种，使其均匀分布于培 养皿中特定的选择性培养基内，最后根据在平板上长 出的菌落数计算出每克或每毫升样品中的微生物数量。
实验器材 ➢ 土壤稀释液的三种不同培养基的培养平板 ➢ 菌种：大肠杆菌菌悬液 ➢ 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 ➢ 仪器或其他用具：1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有
灭菌
干热灭菌 ➢ 火焰灼烧法 ➢ 干热灭菌法（烘箱内热空气灭菌法） 湿热灭菌法 ➢ 加压蒸汽灭菌法 紫外线灭菌法 微孔滤膜过滤除菌
火焰灼烧法
直接在火焰上灼烧灭菌 主要用于实验室接种针(环)、试管口、三角瓶口和金属小 工具等的灭菌。
干热灭菌法
设备：电热烘箱 适用于耐高温器皿，160-170℃，维持2小时 注意事项：
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
实验目的
本次实验的目的是利用物理、化学和生物性等技术，从原始土壤样品中分离、筛选和纯化微生物株，并对分离出的微生物株进行形态学特征观察和分类鉴定。
实验材料
1. 原始土壤样品
2. 饱和淡盐水
3. 10% (v/v) 的平衡磷酸盐溶液
4. 0.85% (w/v) 的千顷盐溶液
5. 2% (w/v) 的体糖酸钠溶液
6. 氯仿
7. 板藻素
8. 无菌玻璃管
实验步骤
1. 将原始土壤样哮放入摇瓶内，加入淡盐水攪拌均匀，进行粗筛提取。
2. 将1ml混合液放入无菌玻璃管，8次补充磷酸盐溶液悬浮液进行细筛提取。
3. 将细筛提取的悬浮液转移到新的无菌容器中，加入盐溶液攪拌均匀。
4. 加入盐溶液之后，用氯仿消毒，然后加入体糖酸钠溶液留取微生物株悬浮液。
5. 使用板藻素进行单菌株筛选，筛选出单菌株。
6. 将筛选出的单菌株进行形态学特征观察和分类鉴定。
结果
本次实验中，经过物理、化学和生物性等技术操作，成功分离出一株微生物株，并对其进行形态学特征观察和分类鉴定，得出结果：该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
结论
本次实验成功分离纯化出一株微生物株，该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
土壤细菌的分离与纯化
土壤细菌的分离与纯化土壤细菌是一种普遍存在于土壤中的微生物，它们在土壤生态系统中发挥着重要的角色。
分离和纯化土壤细菌，不仅可以研究其基本特性、生物学功能和代谢途径等，还可以开发其潜在的应用价值，比如生物农药和生物化学制品的生产等。
本文将介绍土壤细菌的分离和纯化过程，以及影响土壤细菌分离的因素和纯化方法。
土壤细菌的分离是指从土壤中分离得到单个细菌菌落的过程。
一般分离方法有以下几种：（一）稀释涂布法该方法是将土壤分别用不同浓度的生理盐水进行稀释，然后将不同浓度的土壤悬液制成平板培养基并涂布在培养基上。
菌落形成后，可再次从菌落上接种单个细菌。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（二）膜过滤法该方法是将土壤和生理盐水混合后通过孔径为0.22μm的滤膜过滤出微生物体，然后将此滤膜放置于适宜的培养基上进行培养。
该方法适用于分离数量较多的细菌。
（四）毛细管沉淀法该方法是利用毛细管的吸力将土壤中的细菌沉淀到毛细管中，然后将毛细管插入含有适宜培养基的瓷片中，放置在恒温箱中进行分离和培养。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（五）选择性富集法该方法是通过添加选择性富集剂使特定种类的细菌生长，不同种类的细菌生长受到不同富集剂的影响。
该方法适用于富集数量稀少的特定种类细菌。
（一）单菌落分离法该方法是将分离得到的细菌菌落在新的培养基上进行二次分离和培养，直至获得单一的细菌菌落。
该方法适用于分离数量较多并且形态较为相似的细菌。
（三）挑选法该方法是利用显微镜观察细菌形态和形状，手工用铂丝挑选出单个细菌菌落。
该方法适用于菌落数量较少且形态差异较大的细菌。
该方法是利用滤纸将细菌菌液过筛，分离得到单个细菌颗粒。
该方法适用于分离数量较少的细菌。
土壤细菌的分离受到多种因素的影响，如土壤环境因素、培养基种类和培养方式等。
（一）土壤环境因素土壤的物理化学因素，如土壤温度、pH值、土壤含水量等对土壤细菌的生长有很大影响。
不同种类的土壤中细菌种群差异很大，所以适当选择适宜的土壤样品可以更好的分离得到目标细菌群落。
土壤细菌的分离及纯化
第三部分
分离菌株的鉴定
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一、目的要求
掌握常用的微生物鉴定方法。 掌握生理生化试验的原理与方法。 复习以前学过的各种染色方法
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二、实验原理
1、微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、 细菌特点及生理生化、分子生物学等方面进行鉴定。
2、各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。不同的细菌分 解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发 酵的类型和最终产物也不一样。不同细菌对营养的要求不 同也说明了它们有不同的合成能力。所有这些都反映了它 们是有不同的酶系统。 细菌的这种生化反应的多样性在自然界产生了两种结 果：第一、使自然界所有的有机分子都有可能得到分解； 第二、使不同细菌之间有了互相作用和互相依赖的基础， 例如，一种微生物能利用另一种微生物所分解的产物。另 一方面，微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据 之一,细菌的生化反应的多样性也被人们作为细菌的鉴定和 分类方法来利用，可以鉴别一些在形态和其它方面不易区 别的微生物。
常用的接种方法： 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种
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四、操作步骤（6）
斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞）平板划线法
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四、操作步骤（8）平板划线法
2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭 菌的操作方法.
3.进一步熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用 方法。
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二、实验原理（1）
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基 质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在 自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目 的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一 般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微 生物对 pH 要求不一样，霉菌和酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌的培养基的 pH 一般为中性或微碱性的 ( 嗜碱细菌和 嗜酸细菌例外 ) 。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将 培养基的 pH 调到合适的范围。
实验(二)土壤中微生物的分离纯化及观察
实验结果
(P３4 五、１.(２、３)
你所做的涂布平板法和划线法是否较好地得到了单菌 落？如果不是，请分析其原因。
在不同的平板上你分离得到了哪些类群的微生物？简 述它们的菌落特征。
思考题
如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实 验的主要步骤。(P３4 五.2.(1)) 如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温 蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方 案。
(二)、平板菌落计数法
目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
基本原理
通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，使
样品中的微生物细胞充分分散，成单个细胞存在，再取 一定量的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的 选择性培养基内。
统计数量时，根据稀释倍数与取样量、平板上长出的菌
落数计算出每克或每毫升样品中的微生物数（CFU）。
７、挑菌落 将培养出的单菌落进行斜面接种， 并分别置37℃和28℃温室中培养，此后镜 检是否为单一微生物。若有杂菌，继续分 离纯化。
二、平板划线分离法（个人完成）
1、倒平板：将３种培养基溶化后，各倒一皿。并用记
号笔标明培养基名称、样品编号、个人学号等。
2、划线：分别挑取土壤样品中10－1的土壤悬液一环， 在三种平板上划线，以分离细菌、放线菌、霉菌。
5.培养：37℃倒置培养48h。
６ .计数：选择每个平板上长有30~300个菌落数的 稀释度计算样品含菌量。
实验结果 P34表格
依据实验结果，分析本次数据是否可靠。 计算每毫升大肠杆菌菌悬液的含菌量。
思考题（ P34（3）（5）（6）(7)）
为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板？ 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告摘要本实验以镍离子作为纯化培养基，利用离子交换介质对细菌进行纯化，以筛选出较为纯化的细菌株。
本实验在4种离子强度（0.05M，0.1M，0.2M，0.3M）条件下，比较发酵性状态（游离镍离子浓度）下，测试样本的细菌含量。
结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。
1、引言土壤细菌是土壤中的重要微生物，可以改善土壤的生态环境，增强土壤的抗逆性，从而促进土壤的健康发展。
为了更好地研究土壤微生物的功能，有必要分离和纯化土壤中的细菌，以便进一步的研究。
本实验以镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。
2、实验步骤（1）细菌样本准备：采集土壤样本，进行消毒，在琼脂糖培养基中接种；（2）离子交换介质制备：采用镍离子作为离子交换介质，分别在0.05M，0.1M，0.2M，0.3M离子强度条件下制备离子交换介质；（3）离子交换：将离子介质加入土壤液液分离细菌，离子介质被细菌吸收，细菌的活性被浓缩，可以获得较纯的细菌株，（4）纯化细菌：将细菌纯化物放入培养瓶进行培养，经过重复接种，最终获得纯化细菌株；（5）细菌测定：采用镍离子浓度测定细菌含量，测试样本的细菌含量。
3、实验结果实验结果如表1所示：表 1 细菌含量测定结果游离镍离子浓度（M）t细菌含量0.05t 62.5%0.1t 40.0%0.2t 12.5%0.3t 6.3%4、实验讨论从实验结果可以看出，随着游离镍离子浓度的增加，细菌含量会减少，从而达到较高的纯度。
其原因是离子交换介质中的镍离子与细菌表面的酶活性位点结合，以抑制细菌的活性，使菌体停止生长和繁殖，最终达到纯化株的目的。
5、结论本实验使用镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。
实验结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。
土壤中细菌分离纯化和鉴定
土壤中细菌分离、纯化和鉴定摘要：在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。
为了研究某种微生物的特性，或者大量培养和利用某一种微生物，必须事先从有关的生态环境中分离出所需的菌株，获得纯培养。
获得纯培养的方法称为微生物的纯种分离法。
这一过程称为微生物的分离纯化。
本文将提取泥土中所包含的微生物，并且分离、纯化，最后对其微生物种类进行鉴定。
关键字：泥土细菌分离纯化鉴定1、实验材料：分离细菌的材料：样品：新鲜土样培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基（10mL）。
无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水的三角瓶、装有9mL无菌水的试管。
其他：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水泡锅。
试剂：5000U/mL链霉素液，%重铬酸钾液。
细菌纯化鉴定材料:染色剂：草酸铵结晶紫染色液、路哥氏碘液、95%酒精、番红染色液。
培养基：淀粉培养基、石蕊牛乳培养基、真菌培养基、试管斜面。
试剂：碘液。
其它：试管、三角瓶、移液管、接种针、接种环、培养皿。
2、实验步骤制备土壤稀释液：1、称取土壤5g，放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－1的土壤悬液。
2、另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。
取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。
同法依次连续稀释至10－4、10－5、10－6土壤稀释液。
平板划线法：1、取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。
2、凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－5或10－6）在平板上划线。
3、（1）连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。
完毕后，倒置于28～300C温室培养。
（2）分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。
土壤细菌的分离、纯化及微生物作画展开
土壤细菌的分离、纯化及微生物作画展开
土壤细菌的分离、纯化以及微生物作图展开是微生物学研究中的重要步骤。
下面是这一过程的详细展开：
1. 样品采集：从土壤中采集样品，可以根据需要选择不同的采样点和深度，以获取不同类型的土壤细菌。
2. 稀释平板涂布法：将采集的土壤样品按照适当的比例进行稀释，并将稀释液均匀涂布在富养基平板上。
使细菌能够在平板上生长并形成菌落。
3. 菌落分离：根据菌落形态的差异和颜色特征，通过放大菌落直接进行分离。
如果菌落数目较多，可以使用无菌鉗子将不同菌落分离到不同的富养基平板上。
4. 单菌落的纯化：从菌落分离得到的单个细菌落上刺取一小部分，并在无菌条件下移植到新的富养基平板上进行培养。
重复此过程直到获得纯种菌落。
5. 结构观察：对已纯化的细菌进行形态和结构观察，包括使用显微镜观察细菌的形态、大小、颜色等特征。
6. 细菌培养：为了获取足够的细菌菌体用于后续实验，可将已纯化的细菌进行大规模培养。
常见的培养方法包括液体培养和固体培养。
7. 抗生素敏感性测试：可以通过纸片扩散法或微量稀释法测试细菌对不同抗生素的敏感性，以了解细菌的抗生素耐药性。
8. 微生物作图：通过对已纯化的细菌进行染色、染色观察和图像采集，制作出微生物作图。
常见的染色方法包括革兰氏染色和荧光染色等。
以上步骤可以帮助研究者分离和纯化土壤细菌，并对其进行形态观察和抗生素敏感性测试，最终制作出微生物作图。
这些步骤在微生物学研究和应用中具有重要的意义，可以帮助科学家更好地了解土壤中的微生物多样性和功能。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物是土壤中最为丰富的生物群体之一，它们在土壤中扮演着重要的角色，如分解有机物质、固氮、矿物质转化等。
因此，对土壤微生物的研究具有重要的意义。
本文将介绍土壤微生物的分离和纯化实验。
一、实验目的
1.了解土壤微生物的分离和纯化方法；
2.掌握土壤微生物的培养技术；
3.观察土壤微生物的形态特征。
二、实验步骤
1.取一定量的土壤样品，加入适量的生理盐水中，摇匀后过滤；
2.将过滤液分别接种在不同的培养基上，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等；
3.将培养皿放置在恒温培养箱中，控制温度、湿度等条件；
4.观察培养皿中的微生物生长情况，挑选单一菌落进行分离和纯化；
5.将单一菌落接种在新的培养基上，重复以上步骤，直至获得纯种菌株。
三、实验结果
经过培养和观察，我们成功地分离出了多种土壤微生物，如放线菌、链霉菌、芽孢杆菌等。
其中，放线菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的线条；链霉菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的链条；芽孢杆菌的形态特征为菌落呈白色，表面有光滑的质地，形似细长的杆状物质。
四、实验结论
通过本次实验，我们了解了土壤微生物的分离和纯化方法，掌握了土壤微生物的培养技术，观察了土壤微生物的形态特征。
这些都为我们深入研究土壤微生物的生态学、生理学、遗传学等方面提供了基础。
同时，我们也认识到了土壤微生物在土壤生态系统中的重要作用，应该加强对其研究和保护。
王--实验二-土壤中微生物的分离与纯化
培养物 牛肉膏10-4
生长情况（+或-）
染菌情况（+或-）
牛肉膏10-5
……
2.绘出平板上出现的菌落的生长和分布情况。
3.观察与记录以下内容：
序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢物 种类
注意事项
1.无菌操作前需对超净工作台进行灭菌（紫外灯、 无菌风、酒精消毒） 2.接种环要灼烧灭菌，灭菌后放入菌液或要接触 菌体前要冷却，接种后要在火焰上将多余的菌种 烧死。 3. 实验操作时菌体不应和火焰太过接近，防止烧 死菌体和烧着棉塞。 4.培养时要倒置培养，防止染菌。 5.取单菌落时不要碰到其它的菌落。 6.本实验要严格的按照无菌操作进行。
实验二 土壤中微生物的 分离与纯化
实验目的
l．掌握常用的分离纯化微生物的方法。 2．了解微生物常用的接种和培养方法， 熟练掌握斜面接种的方法和技术 3．学习倒平板的方法，进一步掌握无菌 操作技术
实验原理
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株 微生物的过程称为微生物分离与纯化。
土壤中混杂着大量的微生物, 是微生物生活的大 本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极 其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所， 是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、 纯化得到许多有价值的菌株。
培养基部分，使其冷却， 以免烫死菌体，然后用环在菌苔上 轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢慢的从试管中抽 出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上划线（波浪或直线）， 使菌体沾附在培养基上。 7.将接种环抽出，灼烧管口。 8.塞上棉塞。 9.将接种环经火焰灼烧灭菌。
结果与观察：
1.检查接种后培养物的生长情况和染菌情况，将实 验结果填入下表
3.涂布：将上述每种培养基平板底面标 记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种 稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中 吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
Lab2土壤细菌的分离与纯化
•单细胞挑取法
简易单细胞挑取法
micromanipulator
•平板分离法 streak plate method
The most common way of separating bacterial cells on the agar surface to obtain isolated colonies is the streak plate method. It provides a simple and rapid method of diluting the sample by mechanical means. As the loop is streaked across the agar surface, more and more bacteria are rubbed off until individual separated organisms are deposited on the agar. After incubation, the area at the beginning of the streak pattern will show confluent growth, while the area near the end of the pattern should show discrete colonies.
•纯化（平板划线法）
倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养）
平板划线分离的方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
五 注意事项
制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀分散在 稀释液中。
注意无菌操作。
六 思考题
试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步骤。 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？
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4
spread plate method
The spin plate method involves diluting the bacterial sample in tubes of sterile water, saline, or broth. Small samples of the diluted bacteria are then pipetted onto the surface of agar plates. A sterile, bent-glass rod is then used to spread the bacteria evenly over the entire agar surface.
pour plate method
Another method of separating bacteria is the pour plate method. With the pour plate method, the bacteria are mixed with melted agar until evenly distributed and separated throughout the liquid. The melted agar is then poured into an empty plate and allowed to solidify. After incubation, discrete bacterial colonies can then be found growing both on the agar and in the agar.
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•移接斜面
常用的接种方法 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种
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斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
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•纯化（平板划线法）
倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养）
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平板划线分离的方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
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五 注意事项
制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀分散在 稀释液中。
注意无菌操作。
六 思考题
试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步骤。 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？
实验二 土壤细菌的分离与纯化
一 教学要求 通过从土壤中分离纯化细菌，初步掌握微
生物的分离纯化方法和无菌操作技术。 二 实验原理
- 常用的分离纯化方法
microorganisms exist in nature as mixed populations. However, to study microorganisms in the laboratory we must have them in the form of a pure culture, that is, one in which all organisms are descendants of the same organism.
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1
•单细胞挑取法
简易单细胞挑取法
micromanipulator
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2
•平板分离法 streak plate method
The most common way of separating bacterial cells on the agar surface to obtain isolated colonies is the streak plate method. It provides a simple and rapid method of diluting the sample by mechanical means. As the loop is streaked across the agar surface, more and more bacteria are rubbed off until individual separated organisms are deposited on the agar. After incubation, the area at the beginning of the streak pattern will show confluent growth, while the area near the end of the pattern shoul编d辑s课h件opptw discrete colonies. 3
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三 材料与器材
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus)和普通 变形菌(Proteus vulgaris)斜面菌种。
已灭菌的牛肉膏、高氏1号、土豆蔗糖培 养各1瓶，49.5 mL 无菌水（带玻璃珠）1 瓶、4.5 mL无菌水6 管、80%乙酸、10% 酚酸、95% 乙醇。
无菌培养皿12套、1 mL无菌移液管10 支、 土壤样品、天平等。
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四 操作步骤 • 制备土壤稀释液
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• 倾注平板
编辑课件ppt9•培养 Nhomakorabea编辑课件ppt
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• 挑菌落
接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7. 接种锄 8.小解剖刀
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isolation plate