兽医生物制品学第八章兽用疫苗生产与质量控制演示课件
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中华人民共和国《兽用生物制品规程》（常规疫苗） 转让单位（新兽药）
10
厂房、设施和仪器设备
• 《GMP》证书是疫苗生产的准入证， 疫苗生产必 需拥有与生产工艺相符合的生产线
• GMP 生产车间设计要求
功能区：抗原制备区、成品生产区、洗涤区、办公区。 各区域和功能间以洁净走廊相连，严格按人流物流分 开原则进行设计。
疫苗生产工艺介绍
1. 疫苗生产基本条件 2. 疫苗生产工艺流程 3. 生产中影响疫苗质量的关键环节 4. 疫苗抗原制造技术介绍 5. 疫苗检验 6. 疫苗保存
1
1、疫苗生产基本条件
➢ 产品批准文号 ➢ 菌（毒）种 ➢ 疫苗《制造及检验规程》 ➢ GMP厂房、设施和仪器设备
2
产品批准文号
• 农业部颁发批准文号 • GMP证书(具备该疫苗生产线) • 产品复核检验(具备生产该疫苗的能力) • 标签、说明书样稿审查(符合规程规定) • 省级文号？
• 冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等；
• 污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；
• 检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳
培养箱、生物安全柜、动物房等。
13
福州大北农公司总体布局图
大动物房 小动物房
主 厂房
质检楼
wk.baidu.com
锅炉房
脾林苗
污水 处理站
仓储
办公区 生活区
大门
14
15
16
疫苗生产工艺流程
菌（毒）种 培养物（培养基、动 物、禽胚或细胞等） 收获抗原（培养 液、含毒组织、胚液或细胞液等） 配苗
分装 冻干成活疫苗或灭活后制成灭 活疫苗。
17
细菌疫苗的制造流程
菌种
蛋白胨、肉浸液等原料
生产用种子
培养基
配制、灭菌
原料
配制、灭菌 灭活 灭活菌液
培养 菌液 菌苗原液
原料 配制、灭菌
灭活疫苗
20
影响疫苗质量的关键环节
• 活疫苗
➢ 生产用菌（毒）种的制备是否优良 ➢ 制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效 ➢ 冻干保护剂的选择和冻干曲线的制定是否合理
• 灭活疫苗
➢ 生产用菌（毒）种的制备是否优良 ➢ 制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效 ➢ 抗原灭活是否彻底 ➢ 乳化工艺是否先进
3
菌 （毒）种
• 菌（毒）种是疫苗生产必备的原材料，国 家对菌（毒）的保管和使用有严格的规定 和限制（生物安全问题）。
• 生产疫苗的菌（毒）种来源：中国兽医药 品监察所或新兽药转让单位。
• 菌（毒）种保管和使用：基础种毒由中国 兽医药品监察所或其委托的保管单位进行 生产、鉴定和保管，生产用种子批由企业 生产、鉴定和保管。
佐剂 配苗乳化
配苗
保护剂
分装、扎盖、帖签
分装冻干、扎盖帖签 检验
灭活疫苗
活疫苗
18
病毒性细胞疫苗的制造工艺流程
基础种毒
健康动物（或胚胎） 组织
细胞悬液
原料 细胞培养液
配制
配制 灭菌
生产用种毒 原料
保护剂
生长细胞 病毒液 配苗
传代细胞
培养收获 灭活病毒液
灭活
配苗（混匀、乳化）
原料 配制 灭菌
佐剂
分装冻干、扎盖帖签
4
菌 （毒）种分类
菌（毒）种分强毒和弱毒 • 强毒：通常指从得病动物体内分离到的致
病毒株，只能用于制造灭活疫苗和检验用 • 弱毒：通常是采用人工的方法用强毒致弱
而成，一般于制造活疫苗
5
菌 （毒）种质量标准
• 生物学特性明显、历史清楚：形态、培养特性、 生化特性及血清免疫学特性等明显，易于鉴别； 人工感染动物引起稳定一致的临床症状和病理变 化特征；原始细菌或病毒株的来源地区、动物品 种流行资料清楚；分离鉴定资料完整；传代、保 藏和生物学特性检查方法明确。
洁净度：按各功能间洁净度、压力、压差要求设计施 工。有10万级区、万级区和局部百级区。
六大系统：供电、供水、供汽、污水处理、净化、监 控。
11
厂房、设施和仪器设备
• 检验设施
质检室 检验动物舍（应配备有符合各类实验动物级别
饲养设施）
• 仓储设施
原辅材料库 半成品库 成品库
12
厂房、设施和仪器设备
• 毒力应在规定的范围以内：用于制造弱毒疫苗的 菌毒种，毒力应尽量弱一些；用于制造抗血清、 灭活疫苗和疫苗效力检测的菌（毒）种毒力应强， 且抗原性要尽量高
7
菌（毒）种的筛选程序和内容
病毒分离
纯粹性试验
致病性试验
抗原性试验
原动物 实验动物
鸡胚
细胞 反应原性 免疫原性
LD50 EID50 ELD50 TCID50 血清学实验 攻毒保护实验
• 灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；
• 净化设备：净化机组、无菌室、超净工作台等；
• 微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、 各种罐体、生化培养箱等；
• 乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；
• 冻干设备：冻干机；
• 灌装设备：洗烘连动线、自动灌装加塞联动机；
• 包装设备：扎盖机、帖标机；
分扎盖帖签装
活疫苗
检验
灭活疫苗
检验
19
病毒性组织疫苗的制造工艺流程
基础种毒 健康动物或SPF鸡胚等
生产用种毒
动物或SPF鸡胚等 健康动物或SPF鸡胚等
原料 保护剂
感染动物或胚胎
配制
收获感染组织或胚液 纯化配制成含毒悬液
配苗
分装冻干
检验
活疫苗
灭活 灭活病毒液
原料 配制
配苗、乳化
佐剂
分装、扎盖、贴签
检验
稳定性实验
筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗 用抗体或疫苗效力检验用
冻干、冷冻或冷藏保存
8
弱毒菌（毒）种的选育
弱毒菌（毒）种的选育
自然弱毒株的分离
人工诱变致弱
同源动物 （如NDV LaSota株）
异源动物 （HVT FC126株）
化学途径
物理途径 生物途径
亚硝基胍 醋酸坨 洗衣粉
高温 紫外线
适应非易感动物 或细胞 杂交减毒
9
疫苗《制造及检验规程》
• 任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是 国家法定标准。
• 疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行 生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料 证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新 《规程》才能进行生产。
• 《规程》来源
• 遗传学上相对纯一与稳定：菌毒种在传代增殖过 程中某些遗传形状会发生改变和分离，如形态特 征、毒力、反应原性、免疫原性等方面，因此要 求制造生物制品的菌（毒）种的这种改变和分离 越小越好，应经常进行挑选，纯化和克隆。
6
• 反应原性和免疫原性优良：反应原性高，即使微 量量的抗原物质进入机体内既能产生强烈的免疫 反应，血清学上会出现很高的特意性；优良的免 疫原性物质能使免疫动物产生完善的免疫应答， 从而获得坚强的免疫力
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厂房、设施和仪器设备
• 《GMP》证书是疫苗生产的准入证， 疫苗生产必 需拥有与生产工艺相符合的生产线
• GMP 生产车间设计要求
功能区：抗原制备区、成品生产区、洗涤区、办公区。 各区域和功能间以洁净走廊相连，严格按人流物流分 开原则进行设计。
疫苗生产工艺介绍
1. 疫苗生产基本条件 2. 疫苗生产工艺流程 3. 生产中影响疫苗质量的关键环节 4. 疫苗抗原制造技术介绍 5. 疫苗检验 6. 疫苗保存
1
1、疫苗生产基本条件
➢ 产品批准文号 ➢ 菌（毒）种 ➢ 疫苗《制造及检验规程》 ➢ GMP厂房、设施和仪器设备
2
产品批准文号
• 农业部颁发批准文号 • GMP证书(具备该疫苗生产线) • 产品复核检验(具备生产该疫苗的能力) • 标签、说明书样稿审查(符合规程规定) • 省级文号？
• 冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等；
• 污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；
• 检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳
培养箱、生物安全柜、动物房等。
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福州大北农公司总体布局图
大动物房 小动物房
主 厂房
质检楼
wk.baidu.com
锅炉房
脾林苗
污水 处理站
仓储
办公区 生活区
大门
14
15
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疫苗生产工艺流程
菌（毒）种 培养物（培养基、动 物、禽胚或细胞等） 收获抗原（培养 液、含毒组织、胚液或细胞液等） 配苗
分装 冻干成活疫苗或灭活后制成灭 活疫苗。
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细菌疫苗的制造流程
菌种
蛋白胨、肉浸液等原料
生产用种子
培养基
配制、灭菌
原料
配制、灭菌 灭活 灭活菌液
培养 菌液 菌苗原液
原料 配制、灭菌
灭活疫苗
20
影响疫苗质量的关键环节
• 活疫苗
➢ 生产用菌（毒）种的制备是否优良 ➢ 制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效 ➢ 冻干保护剂的选择和冻干曲线的制定是否合理
• 灭活疫苗
➢ 生产用菌（毒）种的制备是否优良 ➢ 制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效 ➢ 抗原灭活是否彻底 ➢ 乳化工艺是否先进
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菌 （毒）种
• 菌（毒）种是疫苗生产必备的原材料，国 家对菌（毒）的保管和使用有严格的规定 和限制（生物安全问题）。
• 生产疫苗的菌（毒）种来源：中国兽医药 品监察所或新兽药转让单位。
• 菌（毒）种保管和使用：基础种毒由中国 兽医药品监察所或其委托的保管单位进行 生产、鉴定和保管，生产用种子批由企业 生产、鉴定和保管。
佐剂 配苗乳化
配苗
保护剂
分装、扎盖、帖签
分装冻干、扎盖帖签 检验
灭活疫苗
活疫苗
18
病毒性细胞疫苗的制造工艺流程
基础种毒
健康动物（或胚胎） 组织
细胞悬液
原料 细胞培养液
配制
配制 灭菌
生产用种毒 原料
保护剂
生长细胞 病毒液 配苗
传代细胞
培养收获 灭活病毒液
灭活
配苗（混匀、乳化）
原料 配制 灭菌
佐剂
分装冻干、扎盖帖签
4
菌 （毒）种分类
菌（毒）种分强毒和弱毒 • 强毒：通常指从得病动物体内分离到的致
病毒株，只能用于制造灭活疫苗和检验用 • 弱毒：通常是采用人工的方法用强毒致弱
而成，一般于制造活疫苗
5
菌 （毒）种质量标准
• 生物学特性明显、历史清楚：形态、培养特性、 生化特性及血清免疫学特性等明显，易于鉴别； 人工感染动物引起稳定一致的临床症状和病理变 化特征；原始细菌或病毒株的来源地区、动物品 种流行资料清楚；分离鉴定资料完整；传代、保 藏和生物学特性检查方法明确。
洁净度：按各功能间洁净度、压力、压差要求设计施 工。有10万级区、万级区和局部百级区。
六大系统：供电、供水、供汽、污水处理、净化、监 控。
11
厂房、设施和仪器设备
• 检验设施
质检室 检验动物舍（应配备有符合各类实验动物级别
饲养设施）
• 仓储设施
原辅材料库 半成品库 成品库
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厂房、设施和仪器设备
• 毒力应在规定的范围以内：用于制造弱毒疫苗的 菌毒种，毒力应尽量弱一些；用于制造抗血清、 灭活疫苗和疫苗效力检测的菌（毒）种毒力应强， 且抗原性要尽量高
7
菌（毒）种的筛选程序和内容
病毒分离
纯粹性试验
致病性试验
抗原性试验
原动物 实验动物
鸡胚
细胞 反应原性 免疫原性
LD50 EID50 ELD50 TCID50 血清学实验 攻毒保护实验
• 灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；
• 净化设备：净化机组、无菌室、超净工作台等；
• 微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、 各种罐体、生化培养箱等；
• 乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；
• 冻干设备：冻干机；
• 灌装设备：洗烘连动线、自动灌装加塞联动机；
• 包装设备：扎盖机、帖标机；
分扎盖帖签装
活疫苗
检验
灭活疫苗
检验
19
病毒性组织疫苗的制造工艺流程
基础种毒 健康动物或SPF鸡胚等
生产用种毒
动物或SPF鸡胚等 健康动物或SPF鸡胚等
原料 保护剂
感染动物或胚胎
配制
收获感染组织或胚液 纯化配制成含毒悬液
配苗
分装冻干
检验
活疫苗
灭活 灭活病毒液
原料 配制
配苗、乳化
佐剂
分装、扎盖、贴签
检验
稳定性实验
筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗 用抗体或疫苗效力检验用
冻干、冷冻或冷藏保存
8
弱毒菌（毒）种的选育
弱毒菌（毒）种的选育
自然弱毒株的分离
人工诱变致弱
同源动物 （如NDV LaSota株）
异源动物 （HVT FC126株）
化学途径
物理途径 生物途径
亚硝基胍 醋酸坨 洗衣粉
高温 紫外线
适应非易感动物 或细胞 杂交减毒
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疫苗《制造及检验规程》
• 任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是 国家法定标准。
• 疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行 生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料 证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新 《规程》才能进行生产。
• 《规程》来源
• 遗传学上相对纯一与稳定：菌毒种在传代增殖过 程中某些遗传形状会发生改变和分离，如形态特 征、毒力、反应原性、免疫原性等方面，因此要 求制造生物制品的菌（毒）种的这种改变和分离 越小越好，应经常进行挑选，纯化和克隆。
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• 反应原性和免疫原性优良：反应原性高，即使微 量量的抗原物质进入机体内既能产生强烈的免疫 反应，血清学上会出现很高的特意性；优良的免 疫原性物质能使免疫动物产生完善的免疫应答， 从而获得坚强的免疫力