微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰染色实验报告
实验二：细菌的简单染色和革兰染色一、实验目的1.掌握细菌涂片的制备方法。
2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。
3.巩固显微镜油镜的使用方法。
4.学习无菌操作技术。
二、实验原理1、染色原理：细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。
2、革兰染色法原理：革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同，将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。
另外，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果。
如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。
三、实验仪器，材料和用具1、仪器及用具：显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签2、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S33、试剂：结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液（95%乙醇溶液）、番红染液四、实验步骤（1）简单染色1、载玻片的处理：用纱布将取出的载玻片擦干，把要涂菌的部位在火焰上烤一下，冷却待用。
2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。
3、干燥：涂片后待其自然干燥。
4、固定：将以干燥好的涂片标本朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次，要求载玻片温度不能超过60度，以手背触载片不烫为宜。
5、染色：滴加一滴结晶紫染液，染色1min。
实验二、细菌的简单染色与革兰氏染色
2、掌握好乙醇脱色时间。ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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葡萄球菌
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杆菌
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五、实验数据及处理结果
1、根据油镜观察结果，绘出普通变形杆菌和表皮 葡萄球菌的简单染色形态图。 2、列表简述普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的革兰 氏染色油镜观察结果（菌的形态、颜色、革兰氏染 色反应）。
G-菌：细胞壁薄，肽聚糖含量低，类脂含量高，肽聚糖 分子交松散，故经乙醇处理后，壁会出现较大的缝隙， 细胞透性增大，结晶紫－碘复合物易被洗脱出来，再经 番红复染后使细胞显红色。
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三、实验器材
1、菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌 2、染色剂：简单染色液(吕氏碱性美蓝染液)；革兰氏 染色液（草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、 番红染液） 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、接 种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等
细菌产酸使培养基pH下降时，细菌带正电荷增
加，可采用酸性染料。酸性染料有：伊红、酸性复
红、刚果红等。
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2、革兰氏染色
革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色， 初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。
G＋菌：细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，基本不含类脂， 肽聚糖分子交联度较紧密，故经乙醇处理后，肽聚糖网 孔因脱水而明显收缩，使壁的通透性降低保留着结晶紫 －碘复合物，所以复染液番红不能进入,细胞显紫色。
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四、操作步骤
1、简单染色
涂片
加热干燥固定
染色 1min 水洗
干燥
镜检
实验二 细菌单染色及革兰氏染色法
冯 新
实验三
细菌单染色及革兰氏染色法
一、实验目的
• 学习细菌的革兰氏染色原理和方法
• 了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜、鞭毛
二、实验原理
• 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。 • 复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等。
2）如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？ 如果加热温度过高、时间过长，又会怎样？
3）为什么要等制片完全干燥后才能用油镜观察？ 4）涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样？ 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？ 哪一步是关键？Why?
实验四
真菌染色技术
2．染色标本检查：
1）革兰氏染色：
4 操作步骤 水浸片观察 （1） 在载玻片上滴加一滴美兰染液，用接 种环以无菌操作方式挑取少许真菌，在染液 中充分混匀，盖上盖玻片。 （2） 镜检：先低倍镜观察，后换用高倍镜 观察细胞形态。 （3）绘出真菌形态特征图
实验步骤
操作步骤
无菌操作
涂片
干燥
染色
固定
水洗
干燥
镜检
革兰氏染色
• 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 • 细菌细胞壁的结构
革兰氏（Gram）染色法
1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：除去残水后，用稀碘液覆 盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约30－60秒，后立即 用流水冲洗。 5. 复染：滴加石碳酸复红染色液， 染30秒，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。
2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。
3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。
二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。
美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。
它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。
革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。
（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。
（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。
（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。
（5）干燥。
（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。
注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。
学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。
观察细菌个体形态与排列，绘图。
3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
微生物学实验-简单染色与革兰氏染色
（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3 次固定（以不烫手为宜）。
1 简单染色：
实验方法
2 革兰氏染色： （7）水洗：用水洗去碘液。 （8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色30 s
左右至流出液无色，立即水洗。
（9）复染：滴加蕃红复染2 min。 （10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。 （11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水
纸吸干。
（12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油 镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
实验器材
菌种： 苏云金芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌 液体培养12-16h的枯草芽胞杆菌和培养24h的大肠 杆菌
染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、蕃红、 美蓝、醇醚、香柏油
器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、 擦镜纸（脱脂棉）、显微镜
实验方法
1 简单染色： （1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片上滴2滴蒸馏
实验完毕后的处理
将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净： （1）先用脱脂棉将油镜头上的油擦去。 （2）用脱脂棉沾少许醇醚将镜头擦2—3次。 （3）再用干净的脱脂棉将镜头擦2—3次。 （4）注意擦镜头时向一个方向擦拭。
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度， 革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色 时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性 菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。
2 革兰氏染色： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 （2）晾干：与简单染色法相同。 （3）固定，与简单染色法相同 （4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，
实验细菌的简单染色和革兰氏染色
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
三、器材
1、菌种 大肠杆菌、四联球菌 12～18h营养琼脂斜面培养物；
2、染色剂 革兰氏染色液 3、仪器或其他用具 光学显微镜、酒精
灯、 载玻片、香柏油、二甲苯、 擦镜纸、牙签。
四、操作步骤
1、细菌的简单染色
用牙签挑取少许牙垢涂片、固定、干燥
染色1～2min
水洗、干燥、镜检。
六、预习
▪ 细菌鞭毛染色及其运动的观察
结语
谢谢大家！
ห้องสมุดไป่ตู้
实验细菌的简单染色和革兰氏染色
二、基本原理
革兰氏染色法是由丹麦医生于1884年发 明，是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初 染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然 后用乙醇脱色，最后用复染剂复染。各种 细菌经革兰氏染色法染色后，能区分成两 大类，一类最终染成紫色，称革兰氏阳性 细菌（G＋），另一类被染成红色，称革兰 氏阴性细菌（G－）。
2、细菌的革兰氏染色
在无菌操作下用接种环挑取少许细菌斜面
培养物涂片、固定、干燥、初染1分钟 媒染1分钟 脱色20～30s 复染1分钟、 水洗、干燥、镜检。
五、实验报告
1、绘图示你自己牙垢的细菌形态图； 2、说明染色观察各菌的形状、颜色和革兰
氏染色反应； 3、思考题 见实验教材（老）～31
第（1）、（4）和（6）题。
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2.固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4.涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
2. 显微镜下细菌放线菌酵母菌和霉菌的主要区别是什么？放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。
细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。
（部分杆菌还可形成芽孢）放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。
酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。
菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。
实验二细菌的简单染色与革兰氏染色
通过显微镜观察，判断细菌是否着色，从而初步判断细菌的种类。
了解革兰氏染色的原理和操作方法
了解革兰氏染色的原理
了解染色结果
通过使用两种不同的染料，使细菌呈 现不同的颜色，从而区分革兰氏阳性 菌和革兰氏阴性菌。
通过显微镜观察，判断细菌是否被染 色以及呈现的颜色，从而确定细菌的 革兰氏类型。
革兰氏染色的目的是区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，因为这两种类 型的细菌在染色结果上存在明显的差异。
03 实验材料
菌种察。
金黄色葡萄球菌
另一种常见的细菌样本，具有不 同的染色特性。
染色液
结晶紫染色液
用于细菌的简单染色。
革兰氏染色液
用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
简单染色的原理是利用染料对细菌的亲和力不同，将细菌染成不同的颜色，从而区 分不同类型的细菌。
简单染色方法简便、快速，但染色效果不如革兰氏染色。
革兰氏染色原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过使用结晶紫、碘液和酒精 等染料对细菌进行染色。
革兰氏染色的原理是利用结晶紫和碘液对细菌的亲和力不同，将细菌染 成紫色或红色，再通过脱色剂酒精将细菌脱色，最后用番红和碘液复染。
其他试剂和器材
显微镜
用于观察染色后的 细菌。
酒精灯和接种环
用于加热染色液和 接种细菌样本。
无菌水
用于清洗玻片和细 菌样本。
载玻片和盖玻片
用于放置和观察细 菌样本。
吸管和滴管
用于吸取染色液和 其他试剂。
04 实验步骤
细菌的简单染色
01
02
03
涂片制作
将细菌均匀涂在载玻片上， 晾干后进行染色。
染色
出细菌的细胞壁结构特点。
初中八年级(初二)生物 实验二细菌的简单染色、革兰氏染色
实验二细菌的简单染色、革兰氏染色虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构，但一般实验室常用的是普通光学显微镜。
由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。
当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。
而经过染色，就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态，亦即菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比，这样便可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形状和结构，而且还可以通过不同的染色反应来鉴别微生物的类型和区分死、活细菌等，因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。
本实验通过对细菌的染色观察，使同学们在掌握细菌染色技术的基础上，了解各种其他的染色制片技术；观察微生物的各种形态结构，以巩固课堂知识，增强感性认识。
一、目的要求1．学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
2．巩固显微镜的使用方法。
二、基本原理1.简单染色法：所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。
在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。
碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。
例如，美蓝（亚甲蓝）实际上是氯化亚甲蓝盐，它可被电离成正、负离子：带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。
常用的碱性染料除美蓝外，还有结晶紫（crystal violet）、碱性复红（basicfu-chsin）、番红（又称沙黄，safranine）等。
细菌体积小，较透明，如未经染色常不易识别，而经着色后，与背景形成鲜明的对比，使易于在显微镜下进行观察。
2.革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
实验二细菌单染与复染
精选ppt课件
1
一、目的要求
1．巩固油镜的使用பைடு நூலகம்法； 2．学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细
菌的简单染色法；
3．学习、掌握细菌的革兰氏染色法； 4．建立“无菌操作”的概念，学习其技术。
精选ppt课件
2
二、实验原理
简单染色法：是利用单一染料对细菌进行 染色的方法，常用碱性染料。只能观察微 生物的大小、形状、和细胞排列状况，但 不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。
2对一株未知菌进行革兰氏染色时，
怎样才能确证你的结论正确？
精选ppt课件
11
G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽 聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍 保留初染时的紫色。
精选ppt课件
5
三、实验材料
变形杆菌、表皮葡萄球菌 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲
苯、擦镜纸、吸水纸等。 革兰氏染色液一套
精选ppt课件
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四、实验步骤
1．简单染色 载玻片——中心加半滴水——无菌操作取菌——涂布于 水中使均匀并成薄膜状——干燥——火焰固定——染色 （1~2min）——水洗——干燥——镜检
2.革兰氏（Gram）染色 涂片——干燥——固定——结晶紫初染（1~2min） ——水洗——碘液媒染1min——水洗——95%酒精脱色
（约20－30秒）——立即水洗——番红复染约2分钟— —水洗——干燥——镜检
（混合涂片染色）
精选ppt课件
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精选ppt课件
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革兰氏染色结果及细菌分类
细菌细胞结构
革兰氏染 色阴性
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有：
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三、实验器材
1、菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌斜面 菌种。 2、显微镜、载玻片、擦镜纸、酒精灯、接 种环、吸水纸、盖玻片、试管、水浴锅。 3、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、 95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水、双层瓶 95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水、双层瓶 （香柏油和二甲苯）。
四、实验方法和步骤
二、实验原理---简单染色 实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀 染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀 死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其 对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定 两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形 两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形。 固定时尽量维持细胞原有的形。
细菌的简单染色 1、涂片：用1%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸 涂片： 1%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸 馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中，并充 分混匀涂成薄膜。 干燥： 2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 固定：涂面朝上，通过微火2 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 染色：待玻片泠却后加结晶紫1 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂 面染色1 面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的 水洗： 水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 干燥： 镜检： 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---革兰氏染色 实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌 G+）和 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和 革兰氏阳性菌（ 革兰氏阴性菌（ 革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色法 是细菌学中最重要的鉴别染色法。 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性 和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结 构和组成不同决定的。
附：油镜的使用
双目显微镜
单目显微镜
2.油镜的原理 2.油镜的原理
油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时， 油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时， 因介质折光率不同，光线将发生散射现象， 因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜 筒的光线很少，物象不清。 筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加 入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至 入与玻璃折射率相近的香柏油， 因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。 因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。
二、实验原理---革兰氏染色 实验原理---革兰氏染色
当用结晶紫初染 当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染 结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染 成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成 结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。 结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。 当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的 当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰 两类细菌的脱色效果是不同的。革兰 氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成， 壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮) 壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、 使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低， 使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶 碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其 细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时， 类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞 碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞 被染上复染剂的红色。。
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果大肠杆菌革兰氏染色结果染色结果金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数× 显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这一 步？ 2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
二、实验原理---革兰氏染色 实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结 革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结 晶紫进行初染，再用碘液媒染 碘液媒染，然后用乙醇 晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇 或丙酮)脱色，最后用复染剂 如番红)复染。 用复染剂( (或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。 经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色 经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的 蓝紫色的 细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被 脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色 脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红 复染剂的颜色( 色)，该菌属于革兰氏阴性菌。
实验二 细菌的简单染色和 革兰氏染色
林标声
球菌
杆菌
弧菌
实验二 细菌的简单染色和革兰氏染色
一、实验目的 1. 学习掌握单染色的操作技术和无菌操作技 术。 2. 了解革兰氏染色机理，并掌握其操作技术。
二、实验原理---简单染色 实验原理---简单染色
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别， 必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使 经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地 观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形 观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形 状和细菌排列的观察。 状和细菌排列的观察。 常用碱性染料 常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱 碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱 酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷 酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离 细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离 时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部 分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与 背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简 单染色的染料有美蓝 结晶紫、碱性复红等。当细菌分解 单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解 美蓝、 糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时 糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时 可用伊红 酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 伊红、
四、实验步骤
1、菌落形态观察：
滴加少量水 注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、 2、细菌简单染色：
3、细菌革兰氏染色。
干燥→镜检
挑取菌体 注意事项：
颜色、边缘是否规则等特征。 染色过程： 涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→
涂片 干燥
涂片：取菌量不能太大 干燥：自然干燥
固定 染色 水洗：水流不能直接冲在涂菌处 水洗 干燥
2. 革兰氏染色
1）、涂片：取清洁玻片一块，在玻片两端1/4 ）、涂片：取清洁玻片一块，在玻片两端1/4 处下面用记号笔分别标明S 处下面用记号笔分别标明S和E（见图示），并 滴一滴蒸馏水，分别将金黄色葡萄球菌和大肠 杆菌涂布在相应的区域内。
2. 革兰氏染色
2、干燥与固定：方法同（一）中2，3 、干燥与固定：方法同（一）中2 步骤 3、染色： 结晶紫染色1 分钟--水洗--碘液 结晶紫染色1-2分钟--水洗--碘液 媒染1 分钟--水洗--酒精脱色15媒染1-2分钟--水洗--酒精脱色15-20 秒--水洗--番红复染色2-3分钟--水洗 --水洗--番红复染色2 分钟--水洗 --干燥--镜检记录。 --干燥--镜检记录。
双层瓶
香柏油
二甲苯
下一个实验
实验三、学校公共环境微生物的分离与纯化